癌干细胞群及其制备方法与流程

技术特征：
1.癌干细胞群，所述癌干细胞群为实质上去除了没有癌形成能的细胞的癌干细胞群，具有再现癌组织等级结构的特征，其中所述癌干细胞群实质上为均质的，在极限稀释分析中癌干细胞的频率为1/10以上，所述癌干细胞群通过包括在无血清条件下贴壁培养包含癌干细胞的细胞群的步骤的方法制备，且所述癌干细胞来自由人大肠癌获得的人肿瘤组织。2.权利要求1所述的癌干细胞群，其特征在于，所述人肿瘤组织为来自上皮癌的肿瘤组织。3.权利要求1或2所述的癌干细胞群，其特征在于，所述癌干细胞群包含1x104个以上的癌干细胞。4.权利要求1所述的癌干细胞群，其特征在于，所述癌干细胞群通过包括下述（1）～（3）步骤的方法制备：（1）将包含癌干细胞的细胞群移植到属于相同或不同种的非人动物中，制备癌细胞团的步骤；（2）细分所制备的癌细胞团的步骤；以及（3）使用干细胞培养基对通过（2）的步骤获得的细胞群进行贴壁培养的步骤。5.权利要求4所述的癌干细胞群，其特征在于，所述非人动物为裸小鼠、SCID小鼠、NOD-SCID小鼠、NOG小鼠、或裸大鼠中的任一种。6.制备实质上去除了没有癌形成能的细胞的癌干细胞群的方法，所述方法包括在无血清条件下贴壁培养包含癌干细胞的细胞群的步骤，其中所述癌干细胞群实质上为均质的，在极限稀释分析中癌干细胞的频率为1/10以上，所述包含癌干细胞的细胞群再现癌组织等级结构，且所述癌干细胞为LgR5阳性的，且所述癌干细胞来自由人大肠癌获得的人肿瘤组织。7.权利要求6所述的方法，其特征在于，所述再现癌组织等级结构的细胞群为在非人动物中确立的癌细胞株、球形体、或选自癌干细胞标志物CD24、CD29、CD34、CD44、CD49f、CD56、CD90、CD117、CD133、CD135、CD166、CD184、CD271、CD326、Aldefluor、ABCG2、ABCG5、LGR5、和Msi1的至少一个以上的标志物为阳性的细胞。8.权利要求6或7所述的方法，其特征在于，在进行贴壁培养之前，使包含癌干细胞的细胞群增殖。9.权利要求8所述的方法，其特征在于，通过球形体培养使包含癌干细胞的细胞群增殖。10.权利要求8所述的方法，其特征在于，通过移植到非人动物中并进行传代而使细胞群增殖。11.权利要求6所述的方法，其特征在于，所述人肿瘤组织为来自上皮癌的肿瘤组织。12.权利要求7或10所述的方法，其特征在于，所述非人动物为裸小鼠、SCID小鼠、NOD-SCID小鼠、NOG小鼠、或裸大鼠中的任一种。13.药物的靶分子探索方法，其特征在于，在权利要求1～5中任一项的癌干细胞群在体外条件下的培养体系中，以由癌干细胞形成的等级结构、由癌干细胞开始的癌进展过程、或癌干细胞的生物学特性为指标进行评价。14.权利要求13所述的药物的靶分子探索方法，其特征在于，包括下述（1）～（3）所述的步骤：（1）将权利要求1～5中任一项所述的癌干细胞群在体外条件下培养，再现由癌干细胞开始的癌进展过程的特征结构、或癌干细胞的生物学特性的步骤；（2）研究再现了特征结构的培养细胞的DNA、RNA、蛋白质、肽或代谢产物的表达的步骤；和（3）鉴定培养细胞中依据由癌干细胞形成的等级结构、由癌干细胞开始的癌进展过程、或癌干细胞的生物学特性而改变的DNA、RNA、蛋白质、肽和代谢产物的步骤。15.权利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述药物为抗癌药。16.权利要求13所述的方法，其特征在于，所述靶分子为癌细胞标志物。17.药物的评价方法，其特征在于，在权利要求1～5中任一项的癌干细胞群在体外条件下的培养体系中，以由癌干细胞形成的等级结构、由癌干细胞开始的癌进展过程、或癌干细胞的生物学特性为指标进行评价。18.权利要求17所述的药物的评价方法，其特征在于，包括下述（1）～（4）所述的步骤：（1）将权利要求1～5中任一项所述的癌干细胞群在体外条件下培养，再现由癌干细胞开始的癌进展过程的特征结构、或癌干细胞的生物学特性的步骤；（2）利用被测物质处理（1）的培养细胞的步骤；（3）观察由癌干细胞形成的等级结构的改变、由癌干细胞开始的癌进展过程、或癌干细胞的生物学特性的步骤；和（4）鉴定由于被测物质而受抑制的由癌干细胞形成的等级结构、由癌干细胞开始的癌进展过程、或癌干细胞的生物学特性的步骤。19.药物的筛选方法，其特征在于，在权利要求1～5中任一项的癌干细胞群在体外条件下的培养体系中，以由癌干细胞形成的等级结构、由癌干细胞开始的癌进展过程、或癌干细胞的生物学特性为指标进行评价。20.权利要求19所述的药物的筛选方法，其特征在于，包括下述（1）～（4）所述的步骤：（1）将权利要求1～5中任一项所述的癌干细胞群在体外条件下培养，再现由癌干细胞开始的癌进展过程的特征结构、或癌干细胞的生物学特性的步骤；（2）利用被测物质处理（1）的培养细胞的步骤；（3）观察由癌干细胞形成的等级结构的改变、由癌干细胞开始的癌进展过程、或癌干细胞的生物学特性的步骤；和（4）鉴定被测物质的步骤，所述被测物质抑制由特定癌干细胞形成的等级结构形成、由癌干细胞开始的癌进展过程、或癌干细胞的生物学特性。21.权利要求17~20中任一项所述的方法，其特征在于，所述药物为抗癌药。22.权利要求13、15、17、18、19和20中任一项所述的方法，其特征在于，所述在体外条件下的培养体系为球形体培养。