一种试卤灵葡萄糖醛酸苷的制备方法与流程

文档序号:11936899阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种试卤灵葡萄糖醛酸苷的制备方法,其特征在于:以试卤灵和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸(UDPGA)为原料,在镁离子存在的缓冲液体系下,试卤灵经葡萄糖醛酸转移酶(UGT酶)介导的酶促反应转化为其葡萄糖醛酸化产物,含有该产物的反应液经蛋白沉淀后,上清液通过固相萃取柱,借助差异性洗脱体系淋洗后获得试卤灵葡萄糖醛酸苷单体。

2.按照权利要求1所述试卤灵葡萄糖醛酸苷的制备方法,其特征在于:所述酶源为重组表达的葡萄糖醛酸转移酶,或含有葡萄糖醛酸转移酶的哺乳动物组织匀浆或微粒体。

3.按照权利要求1所述试卤灵葡萄糖醛酸苷的制备方法,其特征在于:所述生物转化反应的缓冲液体系的pH值为6.0-8.0,优选7.4的缓冲体系;反应温度为20-60℃,优选温度为37℃;反应时间为10-300分钟。

4.按照权利要求1所述试卤灵葡萄糖醛酸苷的制备方法,其特征在于:反应体系中试卤灵的摩尔浓度为0.1-1mM、UDPGA的摩尔浓度为1-10mM、镁离子的摩尔浓度为1-10mM、UGT酶的浓度0.1-1mg/ml。

5.按照权利要求1所述试卤灵葡萄糖醛酸苷的制备方法,其特征在于:反应液经蛋白沉淀后借助固相萃取的分离手段实现产物和底物、以及体系杂质的高效分离,所用填料为同时键合反相硅胶和阴离子交换色谱填料的复合填料或反相硅胶和阴离子交换色谱填料的混合填料。

6.按照权利要求5所述试卤灵葡萄糖醛酸苷的制备方法,其特征在于:所用填料中反相填料可选择C8、C18、苯基或其他反相键合填料;阴离子交换色谱填料选择常用的弱碱性阴离子交换树脂,如含伯、仲、叔胺基的聚丙烯、聚乙烯树脂;复合填料或混合填料中反相吸附中心与阴离子交换中心的摩尔比在1:10至10:1之间。

7.按照权利要求1所述试卤灵葡萄糖醛酸苷的制备方法,其特征还在于:淋洗流程如下,首先用甲醇和/或乙腈活化填料;其次用纯水淋洗色谱柱后将蛋白沉淀后的上清液加到萃取柱上;待样品完全吸附后用甲醇和/或乙腈淋洗1-2个柱体积;之后用酸化甲醇和/或酸化乙腈淋洗目标物试卤灵葡萄糖醛酸苷,最后用氮气吹干淋洗液后获得目标化合物单体,其中酸化溶剂的pH介于0.1-5.0之间,所用酸可选择甲酸、乙酸等有机酸或稀盐酸等无机酸。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1