包含邻近氨基酸端的志贺毒素A亚基效应子区和细胞靶向性免疫球蛋白型结合区的蛋白的制作方法

文档序号:11141233阅读:来源:国知局

技术特征:

1.包含下述的蛋白:

a)免疫球蛋白型结合区,其包含一个或多个多肽并且能够特异性结合至少一种细胞外靶标生物分子,和

b)志贺毒素效应子区,其包含来源于志贺毒素家族至少一个成员的A亚基的氨基酸序列的多肽,所述多肽具有氨基端;

其中所述免疫球蛋白型结合区和所述志贺毒素效应子区在所述蛋白内物理定向,使得所述免疫球蛋白型结合区不邻近所述志贺毒素效应子区的氨基端。

2.权利要求1的蛋白,其中所述免疫球蛋白型结合区包含选自由下述组成的组的多肽:

单结构域抗体片段,单链可变片段,抗体可变片段,互补决定区3片段,受限的FR3-CDR3-FR4多肽,Fd片段,抗原结合片段,纤维连接蛋白来源的第10个纤连蛋白III型结构域,生腱蛋白III型结构域,锚蛋白重复基序结构域,低密度脂蛋白受体来源的A-结构域,脂质运载蛋白,Kunitz结构域,蛋白-A-来源的Z结构域,γ-B结晶-来源的结构域,泛蛋白-来源的结构域,Sac7d-来源的多肽,Fyn-来源的SH2结构域,小蛋白,C-型凝集素-样结构域支架,经工程改造的抗体模拟物,以及前述任一项的保留结合功能性的任何遗传操作的对应物。

3.权利要求1-2中任一项的蛋白,其中将所述蛋白施用给与所述蛋白的免疫球蛋白型结合区的细胞外靶标生物分子物理连接的细胞,所述蛋白能够引起所述细胞的死亡。

4.权利要求3的蛋白,其中当将所述蛋白施用给第一细胞群体和第二细胞群体时,所述蛋白针对所述第一细胞群体的成员的细胞毒性作用是相对于所述第二细胞群体的成员的至少3倍大,所述第一细胞群体的成员与所述蛋白的免疫球蛋白型结合区的细胞外靶标生物分子物理连接,所述第二细胞群体的成员不与所述免疫球蛋白型结合区的细胞外靶标生物分子物理连接。

5.权利要求1-4中任一项的蛋白,其中所述免疫球蛋白型结合区能够结合选自由下述组成的组的细胞外靶标生物分子:

CD20,CD22,CD40,CD74,CD79,CD25,CD30,HER2/neu/ErbB2,EGFR,EpCAM,EphB2,前列腺特异性的膜抗原,Cripto,CDCP1,内皮糖蛋白,成纤维细胞活化的蛋白,Lewis-Y,CD19,CD21,CS1/SLAMF7,CD33,CD52,CD133,EpCAM,CEA,gpA33,粘蛋白,TAG-72,酪氨酸-蛋白激酶跨膜受体,碳酸酐酶IX,叶酸结合蛋白,神经节苷脂GD2,神经节苷脂GD3,神经节苷脂GM2,神经节苷脂Lewis-Y2,VEGFR,αVβ3,α5β1,ErbB1/EGFR,Erb3,c-MET,IGF1R,EphA3,TRAIL-R1,TRAIL-R2,RANK,FAP,生腱蛋白,CD64,间皮素,BRCA1,MART-1/MelanA,gp100,酪氨酸酶,TRP-1,TRP-2,MAGE-1,MAGE-3,GAGE-1/2,BAGE,RAGE,NY-ESO-1,CDK-4,β-联蛋白,MUM-1,胱天蛋白酶-8,KIAA0205,HPVE6,SART-1,PRAME,癌胚抗原,前列腺特异性抗原,前列腺干细胞抗原,人天冬氨酰基(天冬酰胺酰基)β-羟化酶EphA2,HER3/ErbB-3,MUC1,MART-1/MelanA,gp100,酪氨酸酶相关的抗原,HPV-E7,EB病毒抗原,Bcr-Abl,甲胎蛋白抗原,17-A1,膀胱肿瘤抗原,CD38,CD15,CD23,CD53,CD88,CD129,CD183,CD191,CD193,CD244,CD294,CD305;C3AR,FceRIa,半乳凝集素-9,mrp-14,PD-L1,siglec-8,siglec-10,CD49d,CD13,CD44,CD54,CD63,CD69,CD123,CD193,TLR4,FceRIa,IgE,CD107a,CD203c,CD14,CD15,CD33,CD64,CD68,CD80,CD86,CD105,CD115,F4/80,ILT-3,半乳凝集素-3,CD11a-c,GITRL,I类MHC分子,II类MHC分子,CD284-TLR4,CD107-Mac3,CD195-CCR5,HLA-DR,CD16/32,CD282-TLR2,CD11c,CD123,以及前述任一种的任意免疫原性片段。

6.权利要求1-5中任一项的蛋白,其中所述志贺毒素效应子区包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸75-251或基本上由其组成。

7.权利要求1-5中任一项的蛋白,其中所述志贺毒素效应子区包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸1-241或基本上由其组成。

8.权利要求7的蛋白,其中所述志贺毒素效应子区包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸1-251或基本上由其组成。

9.权利要求8的蛋白,其中所述志贺毒素效应子区包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的氨基酸1-261或基本上由其组成。

10.权利要求5的蛋白,其中所述免疫球蛋白型结合区包含SEQ ID NOs:4、8、12、16中任一项的氨基酸269-508或基本上由其组成。

11.权利要求6-9中任一项的蛋白,其中所述免疫球蛋白型结合区包含SEQ ID NOs:4、8、12、16中任一项的氨基酸269-508或基本上由其组成。

12.权利要求5的蛋白,其包含SEQ ID NOs:4-31中任一项所示的多肽或基本上由其组成。

13.权利要求1-12中任一项的蛋白,其中所述志贺毒素效应子区包含相对于志贺毒素家族成员的天然存在的A亚基的突变,所述突变改变所述志贺毒素效应子区的酶活性,所述突变选自至少一个氨基酸残基缺失、插入或置换。

14.权利要求13的蛋白,其中所述突变减少或消除所述志贺毒素效应子区的细胞毒性。

15.一种药物组合物,其包含权利要求1-14中任一项的蛋白和至少一种药用赋型剂或载体。

16.一种诊断组合物,其包含:

权利要求1-14中任一项的蛋白,和

检测促进剂。

17.能够编码权利要求1-14中任一项的蛋白的多核苷酸、或其互补物或前述任一项的片段。

18.一种表达载体,其包含权利要求17的多核苷酸。

19.包含权利要求17-18的多核苷酸或表达载体中任一项的宿主细胞。

20.用于赋予蛋白改善的细胞毒性的系统,所述蛋白包含:

a)免疫球蛋白型结合区,其包含一个或多个多肽并且能够特异性结合至少一种细胞外靶标生物分子,和

b)志贺毒素效应子区,其包含来源于志贺毒素家族至少一个成员的A亚基的氨基酸序列的多肽,所述多肽具有羧基端;

所述系统包括使所述免疫球蛋白型结合区在所述蛋白内邻近所述志贺毒素效应子区的羧基端排列的步骤。

21.一种杀伤细胞的方法,所述方法包括使所述细胞与权利要求1-14中任一项的蛋白或权利要求15的药物组合物接触的步骤。

22.权利要求20的方法,其中所述接触发生在体外。

23.权利要求20的方法,其中所述接触发生在体内。

24.一种治疗患者中的疾病、病症或病患的方法,所述方法包括向有此需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-14中任一项的蛋白或权利要求15的药物组合物的步骤。

25.权利要求24的方法,其中所述疾病、病症或病患选自由下述组成的组:癌症,肿瘤,免疫病症,以及微生物感染。

26.权利要求25的方法,其中所述癌症选自由下述组成的组:

骨癌,乳腺癌,中枢/周围神经系统癌症,胃肠癌,生殖细胞癌,腺癌,头颈癌,血液癌症,肾-尿道癌,肝癌,肺/胸膜癌,前列腺癌,肉瘤,皮肤癌,和子宫癌。

27.权利要求25的方法,其中所述免疫病症与选自由下述组成的组的疾病相关:

淀粉样变性、强直性脊柱炎、哮喘、克罗恩病、糖尿病、移植排斥、移植物抗宿主病、桥本甲状腺炎、溶血性尿毒性综合征、HIV相关的疾病、红斑狼疮、多发性硬化、结节性多发性动脉炎、多关节炎、银屑病、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、硬皮病、脓毒性休克、舍格伦综合征、溃疡性结肠炎和血管炎。

28.权利要求1-19中任一项的物质的组合物,其用于治疗或预防癌症、肿瘤、免疫病症或微生物感染。

29.权利要求1-19中任一项的物质的组合物在制备用于治疗或预防癌症、肿瘤、免疫病症或微生物感染的药物中的应用。

30.收集关于与本发明的蛋白的免疫球蛋白型结合区的细胞外靶标物理连接的细胞的存在的信息的方法,所述方法包括下述步骤:

使细胞与权利要求16的诊断组合物接触,并且

检测所述诊断剂的存在。

31.权利要求30的方法,其中所述接触发生在体内。

32.权利要求30的方法,其中所述检测发生在体内。

33.一种试剂盒,其包括权利要求1-19中任一项的物质的组合物和另外的试剂和/或药物递送装置。

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