针对流感血凝素的人抗体的制作方法

发明领域本发明涉及与流感血凝素(ha)特异性结合的人抗体及其抗原结合片段，包括这些抗体的组合物，以及使用这些抗体的治疗和诊断方法。序列表与本说明书同时提交了序列表的ascii兼容文本文件(37cfr§1.52(e)和37cfr§1.821)。文本文件的内容通过引用并入本申请。包含序列表的文本文件命名为“10119wo01_seqlisting”，于2015年11月18日创建，该文件有2.1mb。
背景技术：
：流感是一种高度传染性疾病，该疾病具有悠久的历史，其特征为一波接一波的传染、流行、复发和爆发。尽管每年进行疫苗接种工作，但是流感感染仍导致大量的发病和死亡。流感病毒由甲、乙、丙三种类型组成。而且，根据编码表面糖蛋白，血凝素(ha)和神经氨酸酶(na)的两个基因在其抗原区的等位基因变异情况，可以将甲型流感病毒分成亚型，所述表面糖蛋白是病毒附着至以及进入宿主细胞所需要的。血凝素是一种三聚体糖蛋白，其含有两个结构域，由受体结合位点组成的球状头部结构域(经常发生抗原漂移)和茎区(在各种流感病毒株之间更为保守)。ha蛋白被合成为前体(ha0)，经过蛋白水解加工以产生两个亚单位(ha1和ha2)，这两个亚单位彼此之间相结合以形成茎/球状头部结构。ha1肽负责将病毒附着至细胞表面。ha2肽形成介导病毒与细胞膜在内涵体中融合的茎状结构，其能够使核糖核蛋白复合物释放进入胞质。目前，根据甲型流感病毒的血凝素蛋白(h1-h18)定义的亚型有18种。这18种ha可分为两组。组1由h1、h2、h5、h6、h8、h9、h11、h12、h13、h16、h17和h18亚型组成，组2包括h3、h4、h7、h10、h14和h15亚型。由于一种被称为抗原漂移的现象，或者在ha或na分子中的突变产生新的不同表位，可能导致在相同亚型中出现新的毒株。这造成的后果是，每年必须针对预计要出现的病毒生产新疫苗，这一过程不仅成本较高且效率低下。尽管技术的进步已经使得能够更好地生产更好的流感抗原用于疫苗组合物，但是仍需要提供其他保护途径以应对新出现的流感亚型和毒株。使用包含目标抗原(例如ha和/或na)的疫苗组合物在患者中产生广泛的中和抗体的思路通常被认为是一种很好的方法，但是在某些患者人群中使用这种方法并不总是理想的。例如，在某些患者中，如在老年的、非常年轻的、免疫功能低下的患者中等等，包含目标抗原的疫苗组合物可能不总是有效的。在这些患者人群中或在不能发起有效免疫应答的任意患者中，提供已含有广泛中和的抗体的组合物可能是更加有益的，该抗体可靶向组1和/或组2的亚型中各种毒株的共有表位。迄今为止，在识别这种广泛中和或抑制流感病毒的抗体方面取得了有限的成功。okuno等用甲型流感okuda/57(h2n2)免疫小鼠并分离出一个命名为c179的抗体，该抗体与ha2中的保守构象型表位结合并且在体外和体内中和组1甲型流感病毒的h2、h1和h5亚型(okuno等，(1993)j.virol.67(5)：2552-2558)。throsby等从对组1亚型具有广泛活性的人b细胞中识别了13个单克隆抗体(throsby等，(2008)，plosone3(2)：e3942)。sui等识别了一种人单克隆抗体(f10)，其与h5和其他组1病毒结合(sui等，(2009)，nat.struct.mol.biol.16(3)：265-273)。然而，在这一领域中经过数十年的研究之后，目前仅有少数抗体在进行临床试验，以评估其中和不同亚型流感病毒的能力(参见，例如，正在由：crucellholland(us2012/0276115、us2014/0065156、us8470327、us2014/0120113、ep2731967、us8691223、us2013/0243792、us2014/0065165、wo2008/028946和wo2010/130636)；大阪大学(us2011/0319600、ep2380976、us2012/0058124、us2012/0058124)；celltrion(us2013/0004505、ep2545074、wo2014/158001)；范德堡大学(us2013/0289246)；sealane生物技术(us2012/0128671)；trellis生物科学公司(us2012/0020971、ep2582721)；visterra公司(us2013/0302349)；burnham研究所/danafarber(us2014/011982、ep2222701、wo2010/027818)；temasek(us8444986、us8574581、us8637644、us8637645、us8383121、us8540996、us8574830、us8540995)；humabs生物科学/生物医学研究所(us8871207)；medimmune(wo2015/051010)以及genentech(us2014/0161822)开发的抗体)，但是仍没有市售抗体可以广泛中和或抑制甲型流感病毒感染或减轻由该病毒的各种亚型引起的疾病。因此，本领域仍需要识别中和多种甲型流感病毒亚型的能够用于预防或治疗流感病毒感染的新型抗体。技术实现要素：本发明提供了与流感血凝素(ha)结合的抗体及其抗原结合片段。特别地，本发明的抗体用于抑制或中和流感ha的活性。在一些实施方式中，所述抗体用于阻断流感病毒附着至宿主细胞和/或防止流感病毒进入宿主细胞。在一些实施方式中，所述抗体通过抑制病毒的细胞间传递起作用。在某些实施方式中，所述抗体用于预防、治疗或改善在对象中流感病毒感染的至少一种症状。在某些实施方式中，可以预防性或治疗性地向已被流感病毒感染或处于受流感病毒感染风险中的对象施用所述抗体。在某些实施方式中，可以将含有至少一种本发明抗体的组合物施用给禁用疫苗的对象，或者疫苗效果较差的对象(例如老年患者、非常年轻的患者、可能对疫苗的任意一种或多种成分过敏的患者，或可能无法对疫苗中的免疫原产生应答的免疫功能低下的患者)。在某些实施方式中，可以在流感爆发期间，向医务人员、住院患者或疗养院居民或者其他高风险患者施用含有至少一种本发明抗体的组合物。在某些实施方式中，可以在每年的预测疫苗无效的情况下，或者在经历了重大抗原漂移的毒株大流行的情况下，将含有至少一种本发明抗体的组合物作为一线治疗向患者施用。本发明的抗体可以是全长的(例如igg1或igg4抗体)或者可以仅包含抗原结合部分(例如fab、f(ab’)2或scfv片段)，并且可以进行修饰以影响其功能，例如增加在宿主中的持续性或者增加效应器功能或消除残余的效应器功能(reddy等，2000，j.immunol.164：1925-1933)。在某些实施方式中，所述抗体可以是双特异性的。在第一个方面，本发明提供了与流感ha特异性结合的分离的重组单克隆抗体或其抗原结合片段。在一个实施方式中，本发明提供了一种与甲型流感血凝素(ha)特异性结合的分离的重组抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体具有两个或多个下述特征：(a)是全人单克隆抗体；(b)根据在基于实时生物层干涉仪的生物传感器中测定的(octethtx测定)，以小于10-9m的解离常数(kd)与流感ha结合；(c)表现出大于370分钟的解离半衰期(t1/2)；(d)表现出以小于130nm的ic50中和组1甲型流感病毒，所述组1甲型流感病毒选自h1n1、h5n1、h9n2、h13n6和h16n3；(e)表现出以小于66nm的ec50对流感病毒感染细胞进行补体介导的裂解；(f)表现出保护作用，由在病毒攻击之前或之后施用时，在流感病毒感染动物模型中的存活增加所测定；或者(g)其中所述抗体或其抗原结合片段包含在表1或表12中列出的任意一个重链可变区(hcvr)序列中所含的三个重链互补性决定区(cdr)(hcdr1、hcdr2和hcdr3)；以及在表1或表12中列出的任意一个轻链可变区(lcvr)序列中所含的三个轻链cdr(lcdr1、lcdr2和lcdr3)。在一个实施方式中，本发明的抗体表现出在猴中的解离半衰期是称为对照imab的比较抗体的约1.5倍，在小鼠中的解离半衰期是所述对照imab的约2倍。在某些实施方式中，当在感染后48小时或在感染后72小时施用时，与奥司他韦相比，本发明的抗体对流感病毒感染的哺乳动物表现出增加的保护作用。在一个相关的实施方式中，当皮下或静脉内施用时和/或当在被流感病毒感染前或感染后施用时，本发明的抗体在被流感病毒感染的哺乳动物中具有增加的保护作用。在一个实施方式中，当以约0.01mg/kg至约50mg/kg的剂量单次皮下或静脉内向被感染的哺乳动物施用时，与施用同种型(阴性)对照抗体的动物相比，本发明的抗体表现出增加的保护作用。在一个实施方式中，与以约5mg/kg至约25mg/kg的剂量连续5天每日两次口服施用奥司他韦相比，当以约15mg/kg的单次静脉内剂量向流感病毒感染的哺乳动物施用时，本发明的抗体表现出增加的保护作用。在一个实施方式中，当以约0.01mg/kg至约2mg/kg的单次皮下剂量预防性施用时，本发明的抗体在流感病毒感染的哺乳动物中表现出高于约20％的存活率。在一个实施方式中，当在感染后至少24小时以从约7mg/kg至约50mg/kg之间的单次静脉内剂量施用时，本发明的抗体在流感病毒感染的哺乳动物中表现出高于约30％的存活率。在一个实施方式中，当在感染后48小时以约7mg/kg至约50mg/kg的单次静脉内剂量施用时，本发明的抗体在流感病毒感染的哺乳动物中表现出约30％至约60％的存活率。在一个实施方式中，当在感染后48小时或之后以约15mg/kg至约30mg/kg的单次静脉内剂量施用时，本发明的抗体在流感病毒感染的哺乳动物中表现出等于或高于约60％的存活率。在一个实施方式中，当在感染后48小时或之后以约15mg/kg的单次静脉内剂量施用时，本发明的抗体在流感病毒感染的哺乳动物中表现约100％的存活率。在一个实施方式中，与当以约25mg/kg的剂量连续5天每日两次口服施用奥司他韦时观察到的存活率40％相比，当以约15mg/kg的单次剂量施用时，本发明的抗体在流感病毒感染的哺乳动物中表现出约100％的存活率。在一个实施方式中，当在感染后48小时之后与奥司他韦一起施用时，本发明的抗体在流感病毒感染的哺乳动物中提供了叠加的保护作用。在一个实施方式中，当在感染后72小时与奥司他韦一起施用时，本发明的抗体在流感病毒感染的哺乳动物中提供了叠加的保护作用。在一个实施方式中，当与奥司他韦联合使用时，本发明的抗体提供了叠加的保护作用，所述抗体以约7mg/kg至约15mg/kg的单次静脉内剂量向流感病毒感染的哺乳动物施用，以及所述奥司他韦以约25mg/kg的剂量连续5天每日两次口服施用。在一个相关的实施方式中，当在流感病毒感染后72小时与奥司他韦联合使用时，本发明的抗体提供了叠加的保护作用，其中所述抗体以约7mg/kg至约15mg/kg的单次静脉内剂量施用，以及所述奥司他韦以约25mg/kg的剂量连续5天每日两次口服施用。在一个实施方式中，本发明的抗体可以静脉内、鼻内、皮下、皮内或肌内施用，奥司他韦可以口服施用。在一个实施方式中，奥司他韦在本发明的抗体施用之前、同时或之后施用。在一个实施方式中，所述抗体和/或奥司他韦可以以单次剂量或多次剂量施用。本发明的示例性抗流感ha抗体列于本申请中的表1和2。表1列出了示例性抗-流感ha抗体的重链可变区(hcvr)、轻链可变区(lcvr)、重链互补性决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和轻链互补性决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)的氨基酸序列标识。表2列出了示例性抗-流感ha抗体的hcvr、lcvr、hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3的核酸序列标识。本发明的更多示例性抗-流感ha抗体列于本申请中的表12和13。表12列出了示例性抗-流感ha抗体的重链可变区(hcvr)、轻链可变区(lcvr)、重链互补性决定区(hcdr1、hcdr2和hcdr3)和轻链互补性决定区(lcdr1、lcdr2和lcdr3)的氨基酸序列标识。表13列出了示例性抗-流感ha抗体的hcvr、lcvr、hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3的核酸序列标识。本发明提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含hcvr或基本上与其相似的序列，所述hcvr包含选自表1或表12中列出的任意hcvr氨基酸序列的氨基酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。在一个实施方式中，本发明提供了与流感ha特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含hcvr，所述hcvr具有选自下组的氨基酸序列：seqidno：2、18、34、50、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、242、250、258、266、274、282和290。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含lcvr或基本上与其相似的序列，所述lcvr包含选自表1或表12中列出的任意lcvr氨基酸序列的氨基酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。在一个实施方式中，本发明提供了与流感ha特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含lcvr，所述lcvr具有选自下组的氨基酸序列：seqidno：10、26、42、58、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210和226。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含hcvr和lcvr氨基酸序列对(hcvr/lcvr)，所述hcvr和lcvr氨基酸序列对包含表1或表12中列出的任意hcvr氨基酸序列与表1或表12中列出的任意lcvr氨基酸序列的配对。根据某些实施方式，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含表1或表12中所列的任意示例性抗-流感ha抗体中所含的hcvr/lcvr氨基酸序列对。在一个实施方式中，所述与流感ha特异性结合的分离的抗体或抗原结合片段包含选自下组的hcvr/lcvr氨基酸序列对：seqidno：2/10、18/26、34/42、50/58、50/66、74/82、74/66、90/98、106/114、122/130、138/146、154/162、170/178、186/194、202/210、218/226、234/66、242/66、250/66、258/66、266/66、274/66、282/66和290/66。在某些实施方式中，所述hcvr/lcvr氨基酸序列对选自下组：seqidno：18/26(例如h1h11729p)、50/58(例如h1h11829n)、50/66(例如h1h11829n2)或106/114(例如h1h14571n)。在一个实施方式中，分离的抗体或抗原结合片段包含：(a)hcdr1结构域，所述hcdr1结构域具有选自下组的氨基酸序列：seqidno：4、20、36、52、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、244、252、260、268、276、284和292；(b)hcdr2结构域，所述hcdr2结构域具有选自下组的氨基酸序列：seqidno：6、22、38、54、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、246、254、262、270、278、286和294；(c)hcdr3结构域，所述hcdr3结构域具有选自下组的氨基酸序列：seqidno：8、24、40、56、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、248、256、264、272、280、288和296；(d)lcdr1结构域，所述lcdr1结构域具有选自下组的氨基酸序列：seqidno：12、28、44、60、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212和228；(e)lcdr2结构域，所述lcdr2结构域具有选自下组的氨基酸序列：seqidno：14、30、46、62、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214和230；以及(f)lcdr3结构域，所述lcdr3结构域具有选自下组的氨基酸序列：seqidno：16、32、48、64、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216和232。在一个实施方式中，所述与流感ha特异性结合的分离的抗体或抗原结合片段包含：(a)seqidno：20所示的hcdr1；(b)seqidno：22所示的hcdr2；(c)seqidno：24所示的hcdr3；(d)seqidno：28所示的lcdr1；(e)seqidno：30所示的lcdr2以及(f)seqidno：32所示的lcdr3。在一个实施方式中，所述与流感ha特异性结合的分离的抗体或抗原结合片段包含：(a)seqidno：52所示的hcdr1；(b)seqidno：54所示的hcdr2；(c)seqidno：56所示的hcdr3；(d)seqidno：68所示的lcdr1；(e)seqidno：70所示的lcdr2以及(f)seqidno：72所示的lcdr3。在一个实施方式中，所述与流感ha特异性结合的分离的抗体或抗原结合片段包含：(a)seqidno：52所示的hcdr1；(b)seqidno：54所示的hcdr2；(c)seqidno：56所示的hcdr3；(d)seqidno：60所示的lcdr1；(e)seqidno：62所示的lcdr2以及(f)seqidno：64所示的lcdr3。在一个实施方式中，所述与流感ha特异性结合的分离的抗体或抗原结合片段包含：(a)seqidno：108所示的hcdr1；(b)seqidno：110所示的hcdr2；(c)seqidno：112所示的hcdr3；(d)seqidno：116所示的lcdr1；(e)seqidno：118所示的lcdr2以及(f)seqidno：120所示的lcdr3。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链cdr1(hcdr1)或基本上与其相似的序列，所述hcdr1包含选自表1或表12中列出的任意hcdr1氨基酸序列的氨基酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链cdr2(hcdr2)或基本上与其相似的序列，所述hcdr2包含选自表1或表12中列出的任意hcdr2氨基酸序列的氨基酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链cdr3(hcdr3)或基本上与其相似的序列，所述hcdr3包含选自表1或表12中列出的任意hcdr3氨基酸序列的氨基酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链cdr1(lcdr1)或基本上与其相似的序列，所述lcdr1包含选自表1或表12中列出的任意lcdr1氨基酸序列的氨基酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链cdr2(lcdr2)或基本上与其相似的序列，所述lcdr2包含选自表1或表12中列出的任意lcdr2氨基酸序列的氨基酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含轻链cdr3(lcdr3)或基本上与其相似的序列，所述lcdr3包含选自表1或表12中列出的任意lcdr3氨基酸序列的氨基酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含hcdr3和lcdr3氨基酸序列对(hcdr3/lcdr3)，所述hcdr3和lcdr3氨基酸序列对包含与表1或表12中列出的任意hcdr3氨基酸序列与表1或表12中列出的任意lcdr3氨基酸序列的配对。根据某些实施方式，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含表1或表12中所列的任意示例性抗-流感ha抗体中所含的hcdr3/lcdr3氨基酸序列对。在某些实施方式中，hcdr3/lcdr3氨基酸序列对选自下组：seqidno：24/32(例如h1h11729p)、56/64(例如h1h11829n)、56/72(例如h1h11829n2)和112/120(例如h1h14571n)。本发明还提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含表1或表12中所列的任意示例性抗-流感ha抗体中含有的一组6个cdr(即hcdr1-hcdr2-hcdr3-lcdr1-lcdr2-lcdr3)。在某些实施方式中，所述hcdr1-hcdr2-hcdr3-lcdr1-lcdr2-lcdr3氨基酸序列组选自下组：seqidno：20-22-24-28-30-32(例如h1h11729p)、52-54-56-60-62-64(例如h1h11829n)、52-54-56-68-70-72(例如h1h11829n2)和108-110-112-116-118-120(例如h1h14571n)。在一个相关的实施方式中，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段含有包含在如表1或表12中所列的任意示例性抗-流感ha抗体所定义的hcvr/lcvr氨基酸序列对中的一组6个cdr(即hcdr1-hcdr2-hcdr3-lcdr1-lcdr2-lcdr3)。例如，本发明包括抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段含有的hcdr1-hcdr2-hcdr3-lcdr1-lcdr2-lcdr3氨基酸序列组，其包含在选自下组的hcvr/lcvr氨基酸序列对中：seqidno：18/26(例如h1h11729p)、50/58(例如h1h11829n)、50/66(例如h1h11829n2)和106/114(例如h1h14571n)。本领域公知用于识别hcvr和lcvr氨基酸序列中的cdr的方法和技术，并且其能够用于识别本申请中公开的特定hcvr和/或lcvr氨基酸序列中的cdr。能够用于识别cdr边界的示例性的常规方法包括例如kabat定义、chothia定义和abm定义。一般而言，kabat定义基于序列的变异性，chothia定义基于结构环区域的位置，而abm定义是介于kabat和chothia方法之间的折中方法。参见例如kabat，“sequencesofproteinsofimmunologicalinterest”，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md.(1991)；al-lazikani等，j.mol.biol.273：927-948(1997)和martin等，proc.natl.acad.sci.usa86：9268-9272(1989)。也可以利用公共数据库来识别抗体中的cdr序列。本发明包括具有经修饰的糖基化模式的抗-流感ha抗体。在一些实施方式中，修饰以除去不需要的糖基化位点可能是有用的，或者例如使抗体缺少在寡糖链上存在的岩藻糖部分，以增加抗体依赖性细胞毒性(adcc)功能(参见shield等，(2002)jbc277：26733)。在其他应用中，可以进行半乳糖基化修饰以改变补体依赖性细胞毒性(cdc)。本发明还提供了与包含hcvr中的多个cdr以及lcvr中的多个cdr的抗体或抗原结合片段竞争与流感ha的特异性结合的抗体及其抗原结合片段，其中所述hcvr和所述lcvr均具有选自表1或表2中列出的hcvr和lcvr序列的氨基酸序列。本发明还提供了与包含hcvr中的多个cdr以及lcvr中的多个cdr的参照抗体或抗原结合片段交叉竞争与流感ha的结合，或结合至流感ha上的相同表位的抗体及其抗原结合片段，其中所述hcvr和所述lcvr均具有选自表1或表2中列出的hcvr和lcvr序列的氨基酸序列。本发明还提供了阻断流感ha附着至和/或进入宿主细胞的分离的抗体及其抗原结合片段。在某些实施方式中，本发明的抗体或抗原结合片段是双特异的，所述抗体或抗原结合片段包含针对流感ha中的第一表位的第一结合特异性和针对另一抗原的第二结合特异性。在第二个方面，本发明提供了一种编码抗-流感ha抗体或其部分的核酸分子。例如，本发明提供了编码表1或表12中列出的任意hcvr氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列或基本上与其相似的序列，所述多核苷酸序列选自表2或表13中列出的任意hcvr核酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了编码表1或表12中列出的任意lcvr氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列或基本上与其相似的序列，所述多核苷酸序列选自表2或表13中列出的任意lcvr核酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了编码表1或表12中列出的任意hcdr1氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列或基本上与其相似的序列，所述多核苷酸序列选自表2或表13中列出的任意hcdr1核酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了编码表1或表12中列出的任意hcdr2氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列或基本上与其相似的序列，所述多核苷酸序列选自表2或表13中列出的任意hcdr2核酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了编码表1或表12中列出的任意hcdr3氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列或基本上与其相似的序列，所述多核苷酸序列选自表2或表13中列出的任意hcdr3核酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了编码表1或表12中列出的任意lcdr1氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列或基本上与其相似的序列，所述多核苷酸序列选自表2或表13中列出的任意lcdr1核酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了编码表1或表12中列出的任意lcdr2氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列或基本上与其相似的序列，所述多核苷酸序列选自表2或表13中列出的任意lcdr2核酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了编码表1或表12中列出的任意lcdr3氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列或基本上与其相似的序列，所述多核苷酸序列选自表2或表13中列出的任意lcdr3核酸序列，所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性。本发明还提供了编码hcvr的核酸分子，其中所述hcvr包含一组3个cdr(即hcdr1-hcdr2-hcdr3)，其中所述hcdr1-hcdr2-hcdr3的氨基酸序列组如表1或表12中列出的任意示例性抗-流感ha抗体所定义。本发明还提供了编码lcvr的核酸分子，其中所述lcvr包含一组3个cdr(即lcdr1-lcdr2-lcdr3)，其中所述lcdr1-lcdr2-lcdr3的氨基酸序列组如表1或表12中列出的任意示例性抗-流感ha抗体所定义。本发明还提供了编码hcvr和lcvr的核酸分子，其中所述hcvr包含表1或表12中列出的任意hcvr氨基酸序列的氨基酸序列，以及其中所述lcvr包含表1或表12中列出的任意lcvr氨基酸序列的氨基酸序列。在某些实施方式中，核酸分子包含选自表2或表13中列出的任意hcvr核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性的基本上相似的序列，以及包含选自表2中列出的任意lcvr核酸序列的多核苷酸或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列同一性的基本上相似的序列。在根据本发明这一方面的某些实施方式中，核酸分子编码hcvr和lcvr，其中hcvr和lcvr均来自表1或表12中列出的同一抗-流感ha抗体。本发明提供了编码表1或表12中列出的任意重链氨基酸序列的核酸分子。本发明还提供了编码表1或表12中列出的任意轻链氨基酸序列的核酸分子。在一个相关的方面，本发明提供了能够表达包含抗-流感ha抗体重链或轻链可变区的多肽的重组表达载体。例如，本发明包括包含上文提及的任意核酸分子的重组表达载体，即编码表1或表12中所示的任意hcvr、lcvr和/或cdr序列的核酸分子。本发明的范围内还包括其中已经引入了此类载体的宿主细胞，以及生产抗体或其片段的方法，所述方法通过在允许抗体或其片段产生的条件下培养宿主细胞并且回收这样生产的抗体和抗体片段。在第三个方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的至少一种与流感ha特异性结合的重组单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体。在一个相关的方面，本发明描述了一种组合物的特征，所述组合物是抗-流感ha抗体与第二治疗剂的组合。在一个实施方式中，所述第二治疗剂是与抗-流感ha抗体可以有利联合的任意药剂。可与抗-流感ha抗体有利联合的示例性药剂包括但不限于结合和/或抑制流感ha活性的其他药剂(包括其他抗体或其抗原结合片段等)和/或不直接结合流感ha但仍能抑制病毒活性(包括宿主细胞感染性)的药剂。在某些实施方式中，本发明提供的药物组合物包含：(a)第一抗-流感ha抗体或其抗原结合片段；(b)第二抗-流感ha抗体或其抗原结合片段，其中第一抗体与流感ha上的第一表位结合，第二抗体与流感ha上的第二表位结合，其中第一和第二表位是不同的并且不重叠；以及(c)药学上可接受的载体或稀释剂。在某些实施方式中，本发明提供的药物组合物包含：(a)第一抗-流感ha抗体或其抗原结合片段；(b)第二抗-流感ha抗体或其抗原结合片段，其中第一抗体不与第二抗体交叉竞争与流感ha的结合；以及(c)药学上可接受的载体或稀释剂。在某些实施方式中，本发明提供的药物组合物包含：(a)第一抗-流感ha抗体或其抗原结合片段；(b)与不同的流感抗原相互作用的第二抗-流感抗体或其抗原结合片段，其中第一抗体结合至流感ha上的表位，第二抗体结合至不同流感抗原上的表位；以及(c)药学上可接受的载体或稀释剂。在某些实施方式中，本发明提供的药物组合物包含：(a)第一抗-流感ha抗体或其抗原结合片段；(b)与不同病毒(非流感)抗原相互作用的第二抗体或其抗原结合片段，其中第一抗体结合至流感ha上的表位，第二抗体结合至不同病毒(非流感)抗原上的表位；以及(c)药学上可接受的载体或稀释剂。在本申请的其他部分公开了包含本发明抗-流感ha抗体的其他联合疗法和共制剂。在第四个方面，本发明提供了使用本发明的抗-流感ha抗体或抗体的抗原结合部分，治疗与流感ha(如对象体内的病毒感染)相关的疾病或病症，或者与所述病毒感染相关的至少一种症状的治疗方法，其中所述治疗方法包含向有需要的对象施用治疗有效量的包含本发明的抗体或抗体的抗原结合片段的药物组合物。所治疗的病症是通过抑制流感ha的活性而改善、缓解、抑制或预防的任意疾病或病况。在某些实施方式中，本发明提供了预防、治疗或缓解甲型流感感染的至少一种症状的方法，所述方法包含向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的抗-流感ha抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，本发明提供了通过施用本发明的抗-流感ha抗体，缓解或减轻对象体内流感感染的至少一种症状的严重程度、持续时间或发生频率的方法，其中所述至少一种症状选自下组：头痛、发热、疼痛、流涕(鼻塞)、寒战、疲乏、虚弱、咽喉痛、咳嗽、气短、呕吐、腹泻、肺炎、支气管炎和死亡。在某些实施方式中，本发明提供了在对象中降低病毒载量的方法，该方法包括向对象施用有效量的本发明的抗体或其片段，所述抗体或其片段结合流感ha并且阻断流感ha结合和/或进入宿主细胞。在某些实施方式中，可以向已感染流感、或处于流感感染风险、或易于发生流感感染的对象，治疗性或预防性地施用所述抗体或其抗原结合片段。存在风险的对象包括但不限于免疫功能低下的人，例如由于自身免疫性疾病而免疫功能低下的人，或接受免疫抑制治疗的人(例如器官移植后)，或患有人类免疫缺陷综合征(hiv)或获得性免疫缺陷综合征(aids)的人，消耗或破坏白细胞的某些形式的贫血，接受放疗或化疗的人，或患有炎性疾病的人。存在被流感感染风险的其他对象包括老年人(年龄超过65岁)、2岁以下的儿童、医护人员以及具有原有的病况(例如肺部感染、心脏病或糖尿病)的人。此外，与受感染个体身体接触或密切接近的任何人均具有增加的发生流感病毒感染的风险。而且，对象会由于与疾病的爆发邻近(例如对象居住在人口稠密的城市，或紧邻已确诊或疑似感染流感病毒的对象)或者职业选择(例如医院员工、药物研究者、到感染地区的旅行者或常飞旅客)，而处于遭受流感感染的风险。在某些实施方式中，本发明的抗体或其抗原结合片段与第二治疗剂联合向有需要的对象施用。所述第二治疗剂可以选自下组：抗炎药(如皮质类固醇和非甾体抗炎药)、抗感染药、针对流感ha的不同抗体、针对不同流感抗原(例如神经氨酸酶)的抗体、抗病毒药、减充血剂、抗组胺药、流感疫苗、膳食补充剂(如抗氧剂)以及本领域公知的用于缓解流感感染的至少一种症状，或用于降低患者体内的病毒载量的任意其他药物或疗法。在某些实施方式中，所述第二治疗剂可以是有助于抵消或减少与本发明的抗体或其抗原结合片段相关的任何可能的副作用的药剂，如果此类副作用发生的话。抗体或其片段可以皮下、静脉内、皮内、腹腔内、口服、鼻内、肌内或颅内施用。在一个实施方式中，所述抗体可以单次静脉内输注施用，以使得抗体在对象血清中的浓度达到最大。抗体或其片段可以根据对象的体重，以约0.01mg/kg至约100mg/kg的剂量施用。在某些实施方式中，本发明的抗体可以以包含50mg至5000mg之间的一个或多个剂量施用。本发明还包括使用本发明的抗-流感ha抗体或其抗原结合片段治疗疾病或病症的用途，所述疾病或病症受益于对流感ha的结合和/或活性的阻断。本发明还包括使用本发明的抗-流感ha抗体或其抗原结合片段制备用于治疗疾病或病症的药物的用途，所述疾病或病症受益于对流感ha的结合和/或活性的阻断。通过阅读下文中随后的详细描述，其他实施方式将变得明显。附图说明图1：显示了单次剂量的h1h11729p在感染后48小时比奥司他韦在感染后48小时显示出对小鼠中严重甲型流感病毒感染治疗的更高的有效性。在感染后48小时，以15mg/kg的单次剂量给予h1h11729p(圆圈)，比从感染后第2天开始每日两次(bid)连续5天以25(倒三角)或5mg/kg(菱形)的剂量服用奥司他韦更有效。在第0天使用10xmld50的a/puertorico/08/1934(h1n1)对小鼠进行鼻内感染(in)。对照组包括未感染组(三角，虚线)和感染组(六边形)，感染组口服灌水和作为igg1同种型(阴性)对照的cr8020。图2：显示了当在感染后72小时用单次剂量的h1h11729p与奥司他韦联用治疗小鼠中的严重流感时，观察到了叠加的效果。在使用10xmld50的a/puertorico/08/1934(h1n1)鼻内感染(in)72h后，小鼠接受单次亚有效剂量的7(方块，虚线)或15mg/kg(圆圈，虚线)的h1h11729p，对照igg(三角)，每日两次连续5天的25mg/kg奥司他韦(菱形，虚线)或者单次剂量的7(方块，实线)或15mg/kg(圆圈，实线)h1h11729p与连续5天奥司他韦的联用。显示了三次独立实验的结果(每组n＝15)。图3：显示了称为h1h11729p的抗体的hcvr、hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcvr、lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列。图4：显示了称为h1h11829n2的抗体的hcvr、hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcvr、lcdr1、lcdr2和lcdr3的氨基酸序列。具体实施方式在对本发明进行描述前，应理解本发明不限于所描述的特定方法和实验条件，因为这些方法和条件可能发生变化。还应理解本申请中所使用的术语仅用于描述特定实施方式的目的，且并非旨在限制，因为本发明的范围将仅由所附的权利要求限制。除非另有定义，本申请中使用的所有技术和科学术语均与本发明所属领域普通技术人员的通常理解具有相同的含义。尽管与本申请中所描述的方法和材料类似或等效的任意方法和材料均能够用于实施或检验本发明，但是现在描述的是优选的方法和材料。定义术语“流感血凝素”，也称为“流感ha”，是在流感病毒粒子表面发现的三聚体糖蛋白，其介导病毒(通过ha1与α-2，3-和α-2，6-唾液酸结合)附着至并(通过构象变化)进入宿主细胞。ha由两个结构域组成：含有受体结合位点的球状头部结构域(频繁发生抗原突变)和茎区(在各种流感病毒株之间更为保守)。流感ha被合成为前体(ha0)，经过蛋白水解加工以产生两个亚单位(ha1和ha2)，这两个亚基彼此之间相结合以形成茎/球状头结构。病毒ha是病毒上变化最多的抗原(可以将18种亚型分成两个组)，但是茎(ha2)在每个组之内是高度保守的。全长流感ha的氨基酸序列以genbank中提供的流感分离株h1n1a/加利福尼亚/04/2009的氨基酸序列为例，其登记号为fj966082.1。术语“流感-ha”还包括从不同流感分离株(例如gq149237.1、nc_002017、km972981.1等)中分离的流感ha蛋白变体。术语“流感-ha”还包括重组流感ha或其片段。该术语还包括与例如组氨酸标签、小鼠或人fc或者信号序列偶联的流感ha或其片段。本申请中所用的术语“流感感染”也表征为“流行感冒”，是指由流感病毒引起的严重急性呼吸系统疾病。该术语包括呼吸道感染，且其症状包括高热、头痛、一般疼痛、疲乏和虚弱，在某些情况下包括极度衰竭、鼻塞、打喷嚏、咽喉痛、胸部不适、咳嗽、气短、支气管炎、肺炎，在严重的病例中出现死亡。本申请中所用的术语“抗体”旨在指免疫球蛋白分子以及其多聚体(例如igm)或其抗原结合片段，所述免疫球蛋白分子由四条多肽链组成，互相之间通过二硫键连接的两条重(h)链和两条轻(l)链(即“全长抗体分子”)。各条重链由重链可变区(“hcvr”或“vh”)和重链恒定区(由结构域ch1、ch2和ch3组成)组成。各条轻链由轻链可变区(“lcvr”或“vl”)和轻链恒定区(cl)组成。可以将vh和vl区进一步细分为高变区，称为互补决定区(cdr)，其散布在较为保守的称为框架区(fr)的区域中。各个vh和vl由三个cdr和四个fr组成，其从氨基末端到羧基末端以下述顺序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。在本发明某些的实施方式中，抗体(或其抗原结合片段)的fr可以与人源种系序列是相同的，或者可以是天然的或人工修饰的。可以基于对两个或多个cdr的并行分析(side-by-sideanalysis)定义氨基酸的共有序列。一个或多个cdr残基的取代或者一个或多个cdr的省略也是可能的。在科学文献中已描述了一些抗体，其中的一个或两个cdr对于结合而言是可以去掉的。padlan等(1995fasebj.9：133-139)基于已发表的晶体结构对抗体与其抗原之间的接触区域进行了分析，并且得到结论为仅有约五分之一至三分之一的cdr残基实际接触了所述抗原。padlan还发现很多抗体的一个或两个cdr中没有氨基酸与抗原接触(亦参见vajdos等，2002jmolbiol320：415-428)。通过分子建模和/或经验，可以基于此前的研究从位于chothiacdr以外的kabatcdr区识别不接触抗原的cdr残基(例如在cdrh2中的残基h60-h65通常是不需要的)。如果省略掉了cdr或其残基，其通常被取代为在另一条人抗体序列或此类序列的共有序列中占据相应位置的氨基酸。在cdr中取代的位置和取代成的氨基酸也可凭经验选择。经验性的取代可以是保守的或非保守的取代。本申请公开的全人抗-流感ha单克隆抗体与相应的种系序列相比，可以在重链和轻链可变结构域的框架和/或cdr区中包含一个或多个氨基酸的取代、插入和/或缺失。通过将本申请公开的氨基酸序列与能够从例如公共抗体序列数据库中获得的种系序列进行比较，能够容易地确定此类突变。本发明包括来源于本申请公开的任意氨基酸序列的抗体及其抗原结合片段，其中在一个或多个框架和/或cdr区内的一个或多个氨基酸突变为抗体源自的种系序列的相应残基，或突变为另一人源种系序列的相应残基，或突变为相应的种系残基的保守性氨基酸取代(在本申请中将此类序列变化统称为“种系突变”)。本领域的普通技术人员从本申请公开的重链和轻链可变区序列起始，能够容易地生产多种抗体和抗原结合片段，所述抗体和抗原结合片段包含一种或多种单独的种系突变或其组合。在某些实施方式中，在vh和/或vl结构域中的所有框架和/或cdr残基均突变回抗体源自的原始种系序列中存在的残基。在其他实施方式中，只有某些残基突变回原始种系序列，例如只有在fr1的前8个氨基酸之中的或在fr4的后8个氨基酸之中的突变残基，或者只有在cdr1、cdr2或cdr3中的突变残基。在其他实施方式中，一个或多个框架和/或cdr残基突变为不同种系序列(即与抗体最初源自的种系序列不同的种系序列)的相应残基。而且，本发明的抗体可以含有在框架和/或cdr区中的两个或多个种系突变的任意组合，例如，其中某些个别残基突变为特定种系序列的相应残基，而某些不同于原始种系序列的其他残基保持不变或突变为不同种系序列的相应残基。含有一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段一旦获得，就可以很容易地检测一种或多种所需的性质，如改善的结合特异性、增加的结合亲和性、改善的或增加的拮抗或激动的生物学性质(视情况而定)、降低的免疫原性等。根据这种一般方法获得的抗体和抗原结合片段包括在本发明中。本发明还包括全人抗-流感-ha单克隆抗体，所述全人抗-流感-ha单克隆抗体包含本申请公开的任意hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列的具有一个或多个保守性取代的变体。例如，本发明包括的抗-流感-ha抗体具有相对于本申请公开的任意hcvr、lcvr和/或cdr的氨基酸序列，有例如10个或更少的、8个或更少的、6个或更少的、4个或更少的，等等，保守性氨基酸取代的hcvr、lcvr和/或cdr氨基酸序列。如本申请中所使用的，术语“人抗体”旨在包括具有来源于人源种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区的抗体。本发明的人mab可以包括例如在cdr中，特别是cdr3中的并非由人源种系免疫球蛋白序列所编码的氨基酸残基(例如，通过体外的随机或位点特异性诱变，或通过体内的体细胞突变引入的突变)。然而，本申请中所用的术语“人源抗体”并非旨在包括其中在人fr序列上接有来源于另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的cdr序列的mab。该术语包括在非人哺乳动物或者在非人哺乳动物细胞中重组生产的抗体。该术语并非旨在包括从人类对象中分离或产生的抗体。本申请中所用的术语“重组”指通过本领域公知认为属于重组dna技术的技术或方法(包括例如dna剪接和转基因表达)形成、表达、分离或获得的本发明的抗体或其抗原结合片段。该术语指在非人哺乳动物(包括转基因非人哺乳动物，例如转基因小鼠)或细胞(例如cho细胞)表达系统中表达的，或者从重组的组合人抗体文库中分离的抗体。术语“特异性结合”或“特异性结合于”或者类似术语指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。特异性的结合可以以至少约1x10-8m或更低的平衡解离常数来表征(例如kd越小表明结合越紧密)。确定两个分子是否特异性结合的方法是本领域技术人员熟知的，并且包括例如平衡透析法、表面等离子体共振等。如本申请所述，已通过在htx生物传感器上进行的实时、无标记的生物层干涉仪测定，识别特异性结合至流感ha的抗体。而且，与流感-ha中的一个结构域以及一个或多个其他抗原结合的多特异性抗体，或者与流感-ha的两个不同区域结合的双特异性抗体，也认为是本申请中所述的“特异性结合”的抗体。术语“高亲和性”抗体指根据由实时、无标记的生物层干涉仪测定(例如htx生物传感器)或由表面等离子体共振(例如biacoretm)或由溶液-亲和性elisa测定，与流感-ha的结合亲和性(以kd表示)至少为10-8m；优选地为10-9m；更优选地为10-10m；再更优选地为10-11m；再更优选地为10-12m的mab。术语“缓慢解离速率”、“koff”或“kd”指的是，根据由实时、无标记的生物层干涉仪测定(例如htx生物传感器)，或由表面等离子体共振(例如blacoretm)确定的，抗体以1x10-3s-1或更低，优选地为1x10-4s-1或更低的速率常数，从流感-ha上解离。本申请中所用的术语：抗体的“抗原结合部分”或抗体的“抗原结合片段”等，包括任何天然形成的、可酶促获取的、合成的或经基因改造的特异性结合抗原以形成复合物的多肽或糖蛋白。本申请中所用的术语：抗体的“抗原结合片段”或“抗体片段”，指保留与流感ha结合能力的抗体的一个或多个片段。在特定的实施方式中，本发明的抗体或抗体片段可以与诸如配体或治疗性部分等部分缀合(“免疫缀合”)，治疗性部分如抗病毒药物、另一个抗-流感抗体或用于治疗由流感-ha导致的感染的任意其他治疗性部分。本申请中所述的“分离的抗体”旨在指一种抗体，其基本上不含具有不同的抗原特异性的其他抗体(ab)(例如，一种与流感-ha特异性结合的分离的抗体或其片段，基本上不含与流感-ha以外的抗原特异性结合的抗体)。如在本申请中所述的“阻断抗体”或“中和抗体”(或“中和流感-ha活性的抗体”或“拮抗抗体”)旨在指与流感-ha的结合导致抑制流感-ha的至少一种生物活性的抗体。例如，本发明的抗体可以防止或阻断流感附着至或进入宿主细胞。此外，“中和抗体”是能够中和(即预防、抑制、减少、阻碍或干扰病原体启动和/或持续在宿主中感染的能力)的抗体。术语“中和抗体(neutralizingantibody)”和“中和抗体(anantibodythatneutralizes)”或“中和抗体(antibodiesthatneutralize)”在本申请中可互换使用。这些抗体可以单独或联合，在经适当制剂后与其他抗病毒剂一起用作预防剂或治疗剂，或结合活性疫苗使用，或用作诊断工具。术语“表面等离子体共振”指通过例如使用blacoretm系统(pharmaciabiosensorab，瑞典乌普萨拉和新泽西皮斯卡塔韦)检测在生物传感器基质中蛋白浓度的改变，实现实时生物分子相互作用分析的光学现象。生物层干涉是一种用于测量生物分子的相互作用的无标记技术。这是一种分析反射自两个表面(在生物传感器尖端上的固化蛋白层和内参层)的白光的干涉图样的光学分析技术。与生物传感器尖端结合的分子数量的任何变化均导致干涉图样中可实时测量的偏移(abdiche，y.n.等，analyticalbiochemistry，(2008)，377(2)，209-217)。在本发明的某些实施方式中，使用“基于实时生物层干涉仪的生物传感器(octethtx测定)”评估某些抗-流感ha抗体的结合特征。本申请中所用的术语“kd”旨在指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。术语“表位”指抗原决定簇，所述抗原决定簇与在抗体分子的可变区中被称为补位的特异性抗原结合位点相互作用。单一的抗原可以具有一个以上的表位。因此，不同抗体可以与抗原上的不同区域结合并且可以具有不同的生物效应。术语“表位”也指抗原上使b和/或t细胞产生应答的位点。也指抗原上与抗体结合的区域。表位可以定义为结构性的或功能性的。功能性表位通常是结构性表位的子集并且具有直接促进相互作用的亲和性的残基。表位还可以是构象型的，也就是说由非线性氨基酸组成。在某些实施方式中，表位可以包括为对分子的具有化学活性的表面集群的决定簇，如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且在某些实施方式中，表位可以具有特异性的三维结构特征和/或特异性的电荷特征。本申请中所用的术语“交叉竞争”指抗体或其抗原结合片段结合至抗原并抑制或阻断另一抗体或其抗原结合片段的结合。该术语还包括两个抗体之间在两个方向上的竞争，即第一抗体结合并阻断第二抗体结合，反之亦然。在某些实施方式中，第一抗体和第二抗体可以结合至相同表位。或者，第一和第二抗体可以结合至不同但重叠的表位，使得一个抗体的结合抑制或阻断另一个抗体的结合，例如通过空间位阻。可以通过本领域公知的方法测量抗体之间的交叉竞争，例如通过实时、无标记的生物层干涉测定。两个抗体之间的交叉竞争可以表示为第二抗体的结合，其小于由自身结合所产生的背景信号(其中第一和第二抗体是相同抗体)。两个抗体之间的交叉竞争可以表示为，例如小于基准自身背景结合的第二抗体结合的百分比(其中第一和第二抗体是相同抗体)。术语“基本上的同一性”或“基本上相同”在指核酸或其片段时，表示在将适当的核苷酸插入或缺失与其他核酸(或其互补链)进行优化比对时，根据如下文所讨论的本领域熟知的任意序列同一性算法(如fasta、blast或gap)测定，至少约90％、更优选地至少约95％、96％、97％、98％或99％的核苷酸碱基有核苷酸序列同一性。在某些情况下，与对照核酸分子具有基本上的同一性的核酸分子可以编码与所述对照核酸分子编码的多肽具有相同或基本上相似的氨基酸序列的多肽。在用于多肽时，术语“基本上的相似性”或“基本上相似”指在将两条多肽序列进行优化比对时，如通过使用缺省缺口权重的程序gap或bestfit，具有至少90％的序列同一性，再更优选地具有至少95％、98％或99％的序列同一性。优选地，不相同的残基位置的差别为保守性氨基酸取代。“保守性氨基酸取代”是指氨基酸残基被带有化学性质相似(例如电荷或疏水性)的侧链(r基团)的另一个氨基酸取代。在通常情况下，保守性氨基酸取代将不会实质性地改变蛋白的功能性性质。在两个或多个氨基酸序列彼此之间的差别为保守性取代的情况下，可以对相似性的百分比或程度进行上调以校正所述取代的保守性性质。用于进行这种调整的方法是本领域技术人员熟知的。(参见例如pearson(1994)methodsmol.biol.24：307-331)。具有化学性质相似的侧链的氨基酸基团的示例包括1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；2)羟基脂肪族侧链：丝氨酸和苏氨酸；3)含有酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸；和7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守性氨基酸取代基团是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。或者，保守性的替代是在gonnet等(1992)science256：1443-45所公开的pam250对数似然矩阵中具有正值的任意改变。“适度保守性的”替代是在所述pam250对数似然矩阵中具有非负值的任意改变。多肽的序列相似性通常使用序列分析软件测定。蛋白分析软件利用分配给包括保守性氨基酸取代在内的各种取代、缺失和其他修饰的相似性的测定参数，来匹配相类似的序列。例如，gcg软件含有如gap和bestfit等程序，可以采用缺省参数，用于确定密切相关的多肽之间，例如来自不同物种生物体的同源性多肽之间，或者野生型蛋白与其突变蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见例如gcg6.1版。也可以采用缺省或推荐参数，使用gcg6.1版中的程序fasta对多肽序列进行比较。fasta(例如fasta2和fasta3)提供查询和检索序列之间最佳重叠区域的比对和序列同一性百分率(pearson(2000)，如上所述)。当将本发明的序列与包含来自不同生物体的大量序列的数据库进行比较时，另一种优选的算法是计算机程序blast，特别是使用缺省参数的blastp或tblastn。参见例如altschul等，(1990)j.mol.biol.215：403-410和altschul等，(1997)nucleicacidsres.25：3389-3402。“治疗有效量”这一表述指产生所需效应的施用量。精确的量将取决于治疗目的并且将由本领域技术人员使用公知的技术确定(参见例如lloyd(1999)theart，scienceandtechnologyofpharmaceuticalcompounding)。本申请中所用的术语“对象”指需要缓解、预防和/或治疗疾病或病症(如病毒感染)的动物，优选哺乳动物，更优选人。对象可能已感染流感或易于发生流感病毒感染。“易于发生流感病毒感染”的对象或者“可能处于增加的遭受流感病毒感染的风险的”对象是由于自身免疫性疾病而免疫系统功能低下的对象，接受免疫抑制治疗的人(例如器官移植后)，患有人类免疫缺陷综合征(hiv)或获得性免疫缺陷综合征(aids)、消耗或破坏白细胞的某些形式的贫血的人，接受放疗或化疗的人，或患有炎性疾病的人。此外，年龄极小或极老的对象所处的风险增加。与受感染个体身体接触或密切接近的任何人均具有增加的发生流感病毒感染的风险。而且，对象会由于与疾病的爆发邻近(例如对象居住在人口稠密的城市，或紧邻已确诊或疑似感染流感病毒的对象)或者职业选择(例如医院员工、药物研究者、到感染地区的旅行者或常飞旅客)，而处于遭受流感感染的风险。本申请中所用的术语“治疗(treat、treating或treatment)”指由于向有需要的对象施用治疗剂(如本发明的抗体)而减轻或缓解流感感染的至少一种症状或适应症的严重程度。该术语包括抑制病情发展或感染恶化。该术语还包括对疾病的积极预后，即在施用治疗剂(如本发明的抗体)后，对象可以免于感染，或者对象具有病毒滴度可以降低或消除。可以以治疗剂量向对象施用治疗剂。术语“预防(prevent、preventing或prevention)”指在施用本发明的抗体后抑制流感感染的出现或者流感感染的任何症状或适应症。该术语包括在暴露于病毒或处于流感感染风险的对象中预防感染的传播。本申请中所述的“保护性作用”可以通过本领域公知的任意标准流程来证实，以确定药剂(如抗病毒剂)或抗体(如本发明的抗-流感-ha抗体)是否能够显示出任意一种或多种下述作用：例如，暴露于感染剂后的存活增加、病毒载量降低，或者改善与感染剂相关的至少一种症状。本申请中所用的术语“抗病毒药”指用于在对象中治疗、预防或改善病毒感染的任意抗感染药或疗法。术语“抗病毒药”包括但不限于(奥司他韦)、(扎那米韦)、利巴韦林或干扰素-α2b。在本发明中，所治疗的感染由流感病毒引起。一般性描述流感是由正粘病毒科的rna病毒(流感病毒)引起的感染性疾病。根据核心蛋白将流感病毒分为甲、乙和丙三种类型，并进一步分为由病毒包膜糖蛋白的血凝素(ha)和神经氨酸酶(na)所决定的亚型。甲型流感病毒感染一系列哺乳动物和禽类物种，而乙型和丙型感染主要限于人类。仅甲型和乙型引起值得关注的人类疾病。流感病毒的高突变率和频繁的基因重配使ha和na抗原具有极大的变异性。导致较小变化的微小点突变(“抗原漂移”)相对频繁地发生。抗原漂移使病毒能够逃避免疫识别，从而导致在大流行爆发之间的年份中多次发生流感爆发。ha抗原中的主要变化(“抗原漂移”)是由来自不同甲型流感亚型的遗传物质重配导致的。导致产生新的大流行毒株的抗原漂移是罕见事件，其通过在动物和人的亚型之间(例如在共感染的猪中)重配而发生。对甲型流感病毒的中和抗体应答通常对给定的病毒亚型具有特异性。根据其血凝素(“ha”)蛋白定义了18种甲型流感亚型。可以将18种ha(h1-h18)分成两种类型。组1由h1、h2、h5、h6、h8、h9、h11、h12、h13、h16、h17和h18亚型组成，组2包括h3、h4、h7、h10、h14和h15亚型。出于这些原因，非常需要诱导广泛中和抗体的疫苗，所述广泛中和抗体能够中和所有甲型流感病毒亚型及其每年的变体。此外，具有广泛中和作用的异亚型抗体可以作为用于预防或治疗甲型流感感染的药物施用。ha被合成为同源三聚体前体多肽ha0。每个单体能够在翻译后独立裂解形成通过单一二硫键连接的两个多肽ha1和ha2。较大的n-末端片段(hal320-330个氨基酸)形成膜-远端球状结构域，该结构域含有受体结合位点和病毒中和抗体识别的大部分决定簇。ha的ha1多肽负责使病毒附着至细胞表面。较小的c-末端部分(ha2，约180个氨基酸)形成茎样结构，该茎样结构将球状结构域锚定于细胞或病毒膜。ha2多肽介导病毒与细胞膜在内含体中融合，以使得核糖核蛋白复合体释放进入胞质。在识别中和一种以上甲型流感病毒亚型的抗体方面仅取得了有限的成功。而且，目前识别到的抗体的中和范围较窄且其效力较低。okuno等用甲型流感病毒/okuda/57(h2n2)免疫小鼠并分离出与ha2的保守构象型表位结合的单克隆抗体(c179)，该抗体在动物模型中在体外和体内中和组1中h2、h1和h5亚型的甲型流感病毒(okuno等，j.virol.67：2552-8，1993)。尽管经过了数十年研究，但是仍没有市售抗体可以广泛中和或抑制甲型流感病毒感染，或减轻由甲型流感病毒引起的疾病。因此，需要识别可以中和甲型流感病毒的多种亚型、并且能够作为用于预防或治疗甲型流感感染的药物的新型抗体。用于预防或治疗感染性疾病的被动免疫疗法已经使用了一个多世纪，其形式通常是含有高滴度中和抗体的恢复期人血清(good等，1991；cancer68：1415-1421)。如今，多种纯化的单克隆抗体目前正处于临床前和临床研发中，以用作抗微生物剂(marasco等，2007；naturebiotechnology25：1421-1434)。发明人在本申请中描述了特异性结合流感血凝素并且调节流感病毒与宿主细胞相互作用的全人抗体及其抗原结合片段。该抗-流感ha抗体可以以较高的亲和性结合至流感病毒ha。在某些实施方式中，本发明的抗体是阻断抗体，其中该抗体可以结合至流感ha并阻断病毒附着至和/或进入宿主细胞。在一些实施方式中，本发明的阻断抗体可以阻断流感病毒结合至细胞，并且这样可以抑制或中和宿主细胞的病毒感染性。在一些实施方式中，所述阻断抗体可以用于治疗遭受流感病毒感染的对象。当向有需要的对象施用所述抗体时可以减少病毒(如流感)在对象体内的感染。可以将其用于降低对象体内的病毒载量。这些抗体可以单独用于，或与本领域公知的其他治疗部分或方式一起，作为辅助疗法用于治疗病毒感染。在某些实施方式中，这些抗体可以结合至病毒ha茎区中的表位。识别到的抗体还可以预防性地(在感染前)用于保护哺乳动物免受感染，或者可以治疗性地(在已确立感染后)用于改善此前已确立的感染或改善与感染相关的至少一种症状。示例性的流感ha的全长氨基酸序列如genbank中登记号hc483324.1所示(参见pct公开号wo2010/027818中的seqidno：62)。在某些实施方式中，本发明的抗体获取自经免疫的小鼠，这些小鼠使用初级免疫原(如全长流感ha)或用重组形式的流感ha或其片段免疫，随后用次级免疫原或用流感ha的免疫原活性片段免疫。在某些实施方式中，抗体获取自用流感疫苗组合物免疫，随后用一种或多种重组生产的ha肽加强免疫的小鼠。免疫原可以是流感ha的生物活性和/或免疫原性片段，或编码其活性片段的dna。该片段可以来源于ha蛋白的茎区。(参见sui等，naturestruct.andmol.biol.网络公开日期2009年2月22日；第1-9页)。可以对肽进行修饰以包括某些残基的加入或取代，以用于标记或用于与载体分子(如klh)缀合的目的。例如，可以在肽的n末端或c末端加入半胱氨酸，或者可以加入接头序列，以制备用于与例如klh缀合以用于免疫的肽。由体外或体内测定确定，本发明的某些抗-流感-ha抗体能够结合至并中和流感-ha的活性。可以使用本领域技术人员公知的任何标准方法(包括如本申请所述的结合测定或活性测定)检测本发明的抗体结合至并中和流感-ha的活性，并因而中和病毒附着至和/或进入宿主细胞而随后引发病毒感染的活性的能力。本申请中的实施例3描述了用于检测结合活性的非限制性、示例性的体外测定。在实施例3中，通过基于实时生物层干涉仪的生物传感器(octethtx测定)确定了抗-流感-ha抗体针对流感-ha的结合亲和性和解离常数。在实施例4和5中，使用中和测定确定了不同的流感病毒组1毒株的感染性。在实施例6中，显示出某些抗体在体外介导病毒感染细胞的补体依赖性细胞毒性(cdc)。实施例7和10表明，本发明的某些抗体在预防性或治疗性施用时能够在体内中和甲型流感感染。特异性针对流感-ha的抗体可以不含有附加的标记或部分，或者可以含有n-末端或c-末端的标记或部分。在一个实施方式中，所述标记或部分是生物素。在结合测定中，标记的位置(如果有的话)可以确定肽相对于其所结合表面所处的方向。例如，如果表面由抗生物素蛋白包被，则含有n-末端生物素的肽将处于使得该肽的c-末端部分远离表面的方向。在一个实施方式中，标记可以是放射性核素、荧光染料或mri-可检测标记。在某些实施方式中，可以将此类标记抗体用于包括成像测定在内的诊断测定。抗体的抗原结合片段除非另有特别明示，本申请中所用的术语“抗体”应理解为包括含有两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链的抗体分子(即“全抗体分子”)及其抗原结合片段。本申请中所用的术语：抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括任意天然形成的、可酶促获取的、合成的或经基因改造的特异性结合抗原以形成复合物的多肽或糖蛋白。本申请中所用的术语：抗体的“抗原结合片段”或“抗体片段”指保留特异性结合流感ha的能力的抗体的一个或多个片段。抗体片段可以包括fab片段、f(ab′)2片段、fv片段、dab片段、含有cdr的片段或者分离的cdr。在某些实施方式中，术语“抗原结合片段”指多特异性抗原结合分子的多肽片段。抗体的抗原结合片段可以使用任意适宜的标准技术，如蛋白水解消化或涉及对编码抗体可变和恒定(可选)结构域的dna的操控和表达的重组基因工程技术，取自例如全抗分子。这种dna是已知的和/或易于从例如商业来源、dna文库(包括例如噬菌体-抗体文库)获得，或者能够被合成。可以化学地或使用分子生物学技术对dna进行测序和操控，例如将一个或多个可变和/或恒定结构域排布成适宜的构型，或者引入密码子、形成半胱氨酸残基、修饰、加入或删除氨基酸等。抗原结合片段的非限制性示例包括：(i)fab片段；(ii)f(ab′)2片段；(iii)fd片段；(iv)fv片段；(v)单链fv(scfv)分子；(vi)dab片段以及(vii)由模拟抗体高变区(例如分离的互补性决定区(cdr)，如cdr3肽)的氨基酸残基或受限制的fr3-cdr3-fr4肽组成的最小识别单元。其他改造的分子，如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、cdr移植抗体、双体、三体、四体、微型抗体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块化免疫药物(smip)和鲨鱼可变ignar结构域，也包括在本申请所用的表述“抗原结合片段”中。抗体的抗原结合片段通常将包含至少一个可变结构域。所述可变结构域的尺寸或氨基酸结构可任意，并且通常将包含至少一个cdr，其与一个或多个框架序列邻近或处于同一框架中。在具有与vl结构域结合的vh结构域的抗原结合片段中，可以安排所述vh和vl结构域处于任意相对于彼此的适宜位置。例如，所述可变区可以是二聚的并且含有vh-vh，vh-vl或vl-vl二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可以含有单体的vh或l结构域。在某些实施方式中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以见于本发明抗体的抗原结合片段中的非限制性的、示例性的可变和恒定结构域构型包括：(i)vh-ch1；(ii)vh-ch2；(iii)vh-ch3；(iv)vh-ch1-ch2；(v)vh-ch1-ch2-ch3；(vi)vh-ch2-ch3；(vii)vh-cl；(viii)vl-ch1；(ix)vl-ch2；(x)vl-ch3；(xi)vl-ch1-ch2；(xii)vl-ch1-ch2-ch3；(xiii)vl-ch2-ch3和(xiv)vl-cl。在任意可变和恒定结构域的任意构型中，包括上文列出的任意示例性构型，所述可变和恒定结构域可以直接彼此间连接，或者通过全长或部分铰链或接头区连接。铰链区可以由至少2个(例如5、10、15、20、40、60个或更多个)氨基酸组成，其在单一多肽分子中相邻的可变和/或恒定结构域之间形成柔性或半柔性的连接。而且，本发明抗体的抗原结合片段可以包含在彼此之间和/或与一个或多个单体vh或vl结构域的非共价结合的(例如通过二硫键)上文列出的任意可变和恒定结构域构型的同源二聚体或异源二聚体(或其他多聚体)。与全抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常包括至少两个不同的可变结构域，其中各可变结构域能够与单独的抗原或同一抗原上不同的表位特异性结合。任意多特异性抗体形式，包括本申请公开的示例性双特异性抗体形式，使用本领域可用的常规技术，可以适用于本发明抗体的抗原结合片段的背景。人抗体的制备在转基因小鼠中产生人抗体的方法是本领域公知的方法。任意的上述公知方法均可以用于本发明的背景下以制备特异性结合流感ha的人抗体。可以使用包含下述中的任意一种的免疫原产生针对流感ha的抗体。在某些实施方式中，本发明的抗体获取自用全长的天然流感ha(参见例如genbank登记号fj966082.1)，或用减毒活病毒或灭活病毒，或用编码蛋白或其片段的dna免疫的小鼠。或者，可以使用标准的生物学技术生产流感-ha蛋白或其片段，并经修饰后用作免疫原。在一个实施方式中，免疫原是重组生产的流感-ha蛋白或其片段。在本发明的某些实施方式中，免疫原可以是流感病毒疫苗。在某些实施方式中，可以给予一次或多次加强注射。在某些实施方式中，加强注射可以包含一种或多种流感病毒株，或来源于这些病毒株的血凝素，例如参见proteinsciencesh1a/新喀里多尼亚/20/1999、h5a/印度尼西亚/05/2005、h3a/维多利亚/361/2011、h7a/荷兰/219/2003或h9a/香港/1073/1988。在某些实施方式中，加强注射可以含有流感毒株的1∶1混合物，或来源于这些毒株的血凝素的1∶1混合物。在某些实施方式中，免疫原可以是在大肠杆菌或者在任意其他真核或哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢(cho)细胞或流感病毒本身)中表达的重组流感ha。使用技术(参见例如us6,596,541，瑞恩泽制药公司，)或用于产生单克隆抗体的任意其他公知的方法，首先分离出具有人可变区和小鼠恒定区的针对流感-ha的高亲和性嵌合抗体。技术涉及转基因小鼠的产生，所述小鼠具有包含可操作地连接至内源性小鼠恒定区基因座的人重链和轻链可变区的基因组，使得所述小鼠响应抗原的刺激产生包含人可变区和小鼠恒定区的抗体。分离编码所述抗体的重链和轻链可变区的dna，并将其可操作地连接至编码人重链和轻链恒定区的dna。然后在能够表达全人抗体的细胞中表达所述dna。在通常情况下，使用目标抗原攻击小鼠，并且从表达抗体的小鼠中回收淋巴细胞(如b细胞)。可以将所述淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生化的杂交瘤细胞系，并且对此类杂交瘤细胞系进行筛选和选择，以识别产生特异于目标抗原的抗体的杂交瘤细胞系。可以分离编码所述重链和轻链可变区的dna并将其连接至所述重链和轻链的所需的同种型恒定区。可以在细胞(如cho细胞)中生产此类抗体蛋白。或者，可以直接从抗原特异性淋巴细胞中分离编码所述抗原特异性嵌合抗体，或所述轻链和重链可变结构域的dna。首先，分离出具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和性嵌合抗体。如在下文的实验章节中所述，对抗体进行表征并根据所需的特征进行选择，包括亲和性、选择性、表位等。用所需的人恒定区取代小鼠恒定区以生成本发明的全人抗体，例如野生型或经修饰的igg1或igg4。尽管根据不同的特定用途，所选择的恒定区可以不同，但高亲和性抗原结合和靶点特异性的特征均存在于可变区中。生物等价物本发明的抗-流感ha抗体和抗体片段包含氨基酸序列不同于本申请所述抗体、但仍保留了流感ha结合能力的蛋白。与母体序列相比，此类变体抗体和抗体片段包含一个或多个氨基酸加入、缺失或取代，但是显示出基本上与所述抗体等价的生物活性。同样地，本发明的编码抗体的dna序列包括，与所公开的序列相比包含一个或多个核苷酸加入、缺失或取代，但编码与本发明的抗体或抗体片段在生物学上基本等价的抗体或抗体片段的序列。如果两种抗原结合蛋白或抗体，例如在药学上等价或在药学上可互相替代，即在类似的实验条件下单剂量或多剂量施用相同摩尔剂量时，两者的吸收速率和程度未显示出显著差异，则认为这两者是生物等价物。一些在吸收程度上等价而在吸收速率上不等价的抗体，仍可以认为等价或在药学上可互相替代，并且也可以认为其是生物等价物，因为这种在吸收速率上的差异是有意的并且已经反映在标签中，其对例如长期使用时达到有效的机体药物浓度不是必要的，并且认为其针对所研究的特定药品在医学上不重要。在一个实施方式中，如果两种抗原结合蛋白在安全性、纯度或效能方面不存在具有临床意义的差异，则认为它们是生物等价物。在一个实施方式中，如果患者能够在对照产品和生物产品之间进行一次或多次的转换而在不良反应的风险方面无预期的增加，则认为这两种抗原结合蛋白是生物等价物，所述不良反应包括与无这种转换的连续疗法相比，免疫原性出现具有临床意义的改变，或有效性降低。在一个实施方式中，如果两种抗原结合蛋白针对使用的状况通过共同的作用机制发挥作用，并且此类作用机制在公知的范围内，则认为它们是生物等价物。生物等效性可以通过体内和/或体外方法证明。生物等效性的测定包括，例如(a)在人或其他哺乳动物中的体内检测，测定抗体或其代谢产物在血液、血浆、血清或其他生物液体中的浓度对时间的函数；(b)体外检测，其已经相关联于并且能合理预测人体内的生物利用度数据；(c)在人或其他哺乳动物中的体内检测，测定适当的抗体(或其靶点)的急性药理学作用对时间的函数；和(d)在有严格对照的临床试验中确定抗体的安全性、有效性或者生物利用度或生物等效性。可以通过例如对残基或序列进行各种取代，或者删除生物活性不需要的末端或内部的残基或序列，来构建本发明抗体的生物等价变体。例如，可以删除或用其它氨基酸取代不为生物活性所必须的半胱氨酸残基，以防止在复性时形成不必要的或不正确的分子内二硫键桥。在其他情况下，生物等价抗体可以包括包含有氨基酸改变的抗体变体，其对抗体的糖基化特征进行修饰，例如消除或除去糖基化的突变。包含fc变体的抗-流感-ha抗体根据本发明的某些实施方式，提供了包含fc结构域的抗-流感-ha抗体，所述fc结构域含有一个或多个突变，使抗体与fcrn受体的结合例如在酸性ph时比中性ph时增强或减弱。例如，本发明包括抗-流感-ha抗体，所述抗体在fc结构域的ch2或ch3区包含突变，其中所述突变在酸性环境中(例如，在ph范围为约5.5至约6.0的内含体中)增强fc结构域与fcrn的亲和性。此类突变可以导致抗体向动物施用时血清半衰期的增加。此类fc修饰的非限制性实例包括例如在位置250(例如e或q)；250和428(例如l或f)；252(例如l/y/f/w或t)、254(例如s或t)和256(例如s/r/q/e/d或t)的修饰；或者在位置428和/或433(例如h/l/r/s/p/q或k)和/或434(例如a、w、h、f或y[n434a、n434w、n434h、n434f或n434y]的修饰；或者在位置250和/或428的修饰；或者在位置307或308(例如308f、v308f)和434的修饰。在一个实施方式中，所述修饰包含428l(例如m428l)和434s(例如n434s)的修饰；428l、259i(例如v259i)和308f(例如v308f)的修饰；433k(例如h433k)和434(例如434y)的修饰；252、254和256(例如252y、254t和256e)的修饰；250q和428l(例如t250q和m428l)的修饰；以及307和/或308(例如308f或308p)的修饰。在又一个实施方式中，所述修饰包含265a(例如d265a)和/或297a(例如n297a)的修饰。例如，本发明包括包含fc结构域的抗-流感-ha抗体，所述fc结构域包含选自下组的一对或多对，或一组或多组的突变：250q和248l(例如t250q和m248l)；252y、254t和256e(例如m252y、s254t和t256e)；428l和434s(例如m428l和n434s)；257i和311i(例如p257i和q311i)；257i和434h(例如p257i和n434h)；376v和434h(例如d376v和n434h)；307a、380a和434a(例如t307a、e380a和n434a)；以及433k和434f(例如h433k和n434f)。在本申请公开的抗体可变结构域中的前述fc结构域突变和其他突变的所有可能的组合均包括在本发明的范围内。本发明还包括包含嵌合的重链恒定(ch)区的抗-流感-ha抗体，其中所述嵌合的ch区包含来源于一个以上免疫球蛋白同种型的ch区的区段。例如，本发明的抗体可以包含嵌合的ch区，所述嵌合的ch区包含来源于人igg1、人igg2或人igg4分子的部分或全部的ch2结构域，连同来源于人igg1、人igg2或人igg4分子的部分或全部的ch3结构域。根据某些实施方式，本发明的抗体包含具有嵌合的铰链区的嵌合的ch区。例如，嵌合的铰链可以包含来源于人igg1、人igg2或人igg4铰链区的“上部铰链”氨基酸序列(来自根据eu编号的位置216至227的氨基酸残基)，连同来源于人igg1、人igg2或人igg4铰链区的“下部铰链”序列(来自根据eu编号的位置228至236的氨基酸残基)。根据某些实施方式，所述嵌合的铰链区包含来源于人igg1或人igg4上部铰链的氨基酸残基和来源于人igg2下部铰链的氨基酸残基。在某些实施方式中，如本申请所述的包含嵌合的ch区的抗体显示出改善的fc效应器功能且对抗体的治疗或药代动力学性质未产生不利影响。(参见例如2013年2月1日提交的美国临时申请号61/759,578)。抗体的生物学特性在通常情况下，本发明的抗体通过结合至流感ha发挥功能。例如，本发明包括抗体和抗体的抗原结合片段，所述抗体和抗体的抗原结合片段根据基于实时生物层干涉仪的生物传感器(octethtx测定)或表面等离子体共振测定，以小于10nm的kd结合流感ha(例如在25℃或37℃下)。在某些实施方式中，根据表面等离子体共振测定，例如使用本申请所述的测定形式或基本上类似测定，所述抗体或其抗原结合片段以小于约5nm、小于约2nm、小于约1nm、小于约500pm、小于250pm或小于100pm的kd结合流感ha。本发明还包括抗体及其抗原结合片段，所述抗体及其抗原结合片段根据在25℃下进行的表面等离子体共振(例如使用本申请所定义的测定形式)或基本上类似的测定所测，以大于约100分钟的解离半衰期(t1/2)结合流感ha。在某些实施方式中，根据在25℃下进行的表面等离子体共振(例如使用本申请所述的测定形式(例如mab-捕获或抗原-捕获形式))或基本上类似的测定所测，本发明的抗体或其抗原结合片段以大于约200分钟、大于约300分钟、大于约400分钟、大于约500分钟、大于约600分钟、大于约700分钟、大于约800分钟、大于约900分钟或大于约1000分钟的t1/2结合流感ha。在一个实施方式中，本发明的抗体和抗原结合片段以大于300分钟的解离半衰期(t1/2)结合流感ha。在一个实施方式中，在猴和小鼠中进行测试时，与称为对照imab的对照抗体相比，本发明抗体的解离半衰期增加约1.5至2倍。本发明还包括中和流感病毒对其宿主细胞的感染性的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗体在微量中和测定(例如如实施例4和5中所示)或基本上类似的测定中，以范围为约1.6nm至约130nm的ic50，显示出针对多种代表性的组1流感病毒的中和效力(h1n1a/波多黎各/08/1934；h5n1a/越南/1203/2004；h1n1a/加利福尼亚/07/2009；h1n1a/威斯康辛/1933；h1n1a/布里斯班/59/1997；h9n2a香港/33982/2009；h13n6a/鸥/马里兰/704/1977和h16n3a/滨鸟/特拉华/172/2006)。在一个实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段以小于130nm的ic50中和流感病毒对其宿主细胞感染性。本发明还包括以范围为约20nm至约66nm的ec50介导被感染细胞的补体依赖性细胞毒性的抗体或其抗原结合片段(参见实施例6)。在一个实施方式中，抗体或其抗原结合片段以小于66nm的ec50介导感染细胞的补体依赖性细胞毒性。本发明还包括在体内显示出对甲型流感的保护作用增加或有效中和的抗-甲型流感ha抗体。某些抗体在预防性(感染前)或治疗性(感染后；参见实施例7)施用时显示出有效中和。在某些实施方式中，当以1mg/kg的单一剂量预防性施用时，一些抗体(h1h11729p和h1h11829n2)表现出小鼠100％存活。某些抗体在以如下剂量预防性施用时表现出小鼠的显著存活：低至0.5mg/kg的称为h1h11729p的抗体(100％存活)、0.1mg/kg的h1h11729p(40％存活)或0.05mg/kg的h1h11829n2(20％存活)。当在感染后以15或30mg/kg的剂量施用某些示例性抗体(h1h11829n2和h1h11729p)时，也观察到显著存活。在一个实施方式中，在与抗病毒药物奥司他韦联用时，本发明的抗体在流感感染的哺乳动物中表现出叠加的保护作用。在一个实施方式中，本发明提供了一种分离的重组抗体或其抗原结合片段，所述分离的重组抗体或其抗原结合片段与流感ha特异性结合，其中所述抗体或其片段具有两个或多个下述特征：(a)是全人单克隆抗体；(b)根据在表面等离子体共振测定中测得的，以小于10-9m的解离常数(kd)与流感ha结合；(c)表现出范围为约370分钟至大于1000分钟的解离半衰期(t1/2)；(d)表现出以范围为约1.6nm至约130nm的ic50中和组1甲型流感病毒，所述组1甲型流感病毒选自h1n1、h5n1、h9n2、h13n6和h16n3；(e)表现出以约20nm至约66nm的ec50对流感病毒感染细胞进行补体介导的裂解；或者(f)表现出保护作用，由在病毒攻击之前或之后施用时，在流感病毒感染动物模型中的存活增加所测定。本发明的抗体可以具有两种或多种上述生物学特征或其任意组合。通过阅读包括本申请的可行实施例在内的本公开，本发明抗体的其他生物学特征对了本领域普通技术人员而言将变得明显。表位定位和相关技术本发明包括与流感ha分子的一个或多个结构域中存在的一个或多个氨基酸相互作用的抗-流感-ha病毒抗体。与抗体结合的表位可以由位于流感ha分子内的3个或更多个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个)氨基酸的单一连续序列组成(例如在结构域中的线形表位)。或者，表位可以由位于流感ha分子内的多个不连续的氨基酸(或氨基酸序列)组成(例如构象型表位)。可以采用本领域的普通技术人员公知的多种技术确定抗体是否与多肽或蛋白中的“一个或多个氨基酸相互作用”。示例性的技术包括例如常规的交叉阻断测定，如antibodies，harlow和lane(coldspringharborpress，纽约冷泉港)中所描述。其他方法包括丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析(reineke(2004)methodsmolbiol248：443-463)、肽裂解分析晶体学研究和nmr分析。此外，可以使用如抗原的表位删除、表位提取和化学修饰的方法(tomer，2000，prot.sci.9：487-496)。另一种能够用于识别多肽中与抗体相互作用的氨基酸的方法是通过质谱检测的氢/氘交换。一般而言，所述氢/氘交换的方法涉及用氘标记目标蛋白，并随后将所述抗体与氘标记的蛋白结合。接下来，将该蛋白/抗体复合物转移至水中，氨基酸中受到抗体复合物保护的可交换质子进行氘至氢的返交换，其速率慢于氨基酸中未作为界面一部分的可交换质子。结果，形成蛋白/抗体界面一部分的氨基酸可以保留氘，并且因此与未包括于界面中的氨基酸相比显示出更高的质量。在抗体解离后，对靶蛋白进行蛋白酶裂解和质谱分析，从而揭示对应于同抗体相互作用的特定氨基酸的氘标记残基。参见例如ehring(1999)analyticalbiochemistry267(2)：252-259；engen和smith(2001)anal.chem.73：256a-265a。术语“表位”指抗原上使b和/或t细胞产生应答的位点。b细胞表位可以由连续的氨基酸，或在蛋白三级折叠同时形成的不连续的氨基酸形成。暴露于变性溶剂后，由连续的氨基酸形成的表位通常仍保留，而由三次折叠形成的表位，则通常在使用变性溶剂处理后丧失。表位通常包括独特空间构象中的至少3个，以及更通常地至少5或8-10个氨基酸。修饰辅助特征分析(map)也称为基于抗原结构的抗体特征分析(asap)是一种根据各抗体与化学或酶修饰的抗原表面结合特征的相似性，对针对相同抗原的大量的单克隆抗体(mab)进行分类的方法(参见us2004/0101920)。各类别能够反映与另一分类所表示的表位明显不同或部分重叠的独特的表位。这种技术能够迅速滤除基因相同的抗体，以使得表征能够集中于基因不同的抗体。当应用于杂交瘤筛选时，map可有助于识别产生具有所需特性的mab的稀有杂交瘤克隆。map可以用于将本发明的抗体分类至结合不同表位的抗体组。在某些实施方式中，流感病毒-ha抗体或其抗原结合片段结合流感ha中示例性的任意一个或多个区域中的表位或其片段，所述表位是天然形态的或重组生产的。本发明包括结合至相同表位或相同表位的一部分的抗-流感-ha抗体。同样地，本发明还包括与本申请所述的任意特定示例性抗体竞争与流感ha或其片段的结合的抗-流感-ha抗体。例如，本发明包括与获取自表1和表12中所述抗体中的一个或多个抗体交叉竞争与流感ha的结合的抗-流感-ha抗体。通过使用本领域公知的常规方法，能够容易地确定抗体与对照抗-流感-ha抗体结合至相同表位，还是与之竞争结合。例如，为确定待测抗体是否与本发明的对照抗-流感-ha抗体结合至相同表位，在饱和条件下将对照抗体与流感ha或肽结合。接下来，评估待测抗体结合至流感ha分子的能力。如果待测抗体能够结合至与对照抗-流感-ha抗体饱和结合的流感病毒ha，则能够推断出得出所述待测抗体与对照抗-流感-ha抗体结合至不同的表位。另一方面，如果待测抗体不能结合至与对照抗-流感-ha抗体饱和结合的流感ha，则所述待测抗体可能结合至与本发明的对照抗-流感-ha抗体所结合的表位相同的表位。为确定抗体是否与对照抗-流感-ha抗体竞争结合，在两个方向上进行上文所述的结合方法：在第一个方向上，在饱和条件下将对照抗体与流感ha结合，随后评估待测抗体与流感-ha分子的结合。在第二个方向上，在饱和条件下将待测抗体与流感-ha分子结合，随后评估对照抗体与流感-ha分子的结合。如果在这两个方向上都只有第一(饱和的)抗体能够与流感-ha分子结合，则推断出待测抗体和对照抗体竞争与流感-ha的结合。本领域普通技术人员将会理解，与对照抗体竞争结合的抗体并不一定与对照抗体结合至相同表位，而可能通过结合重叠或邻近表位，在空间上阻断对照抗体的结合。如果两个抗体各自竞争性地抑制(阻断)彼此与抗原的结合，则这两个抗体结合至相同的或重叠的表位。也就是说，根据竞争性结合测定的结果，1、5、10、20或100倍过量的一个抗体对另一个结合的抑制为至少50％，但优选地为75％、90％或甚至99％(参见例如junghans等，cancerres.199050：1495-1502)。或者，如果抗原中降低或消除一个抗体的结合的基本上所有氨基酸的突变都降低或消除另一个抗体的结合，则两个抗体具有相同的表位。如果降低或消除一个抗体结合的一部分氨基酸的突变降低或消除另一个的结合，则两个抗体具有重叠的表位。然后可以进行附加的常规实验(例如肽突变和结合分析)以确证所观察到的待测抗体结合的缺乏是否事实上是由于与对照抗体结合相同的表位导致的，或者是否是空间位阻(或另外的现象)导致了所观察到的结合缺乏。可以使用elisa、ria、表面等离子体共振、流式细胞术或本领域中任意其他定量或定性的抗体结合测定，来进行这种类型的实验。免疫缀合物本发明包括与治疗性部分缀合的人抗-流感-ha单克隆抗体(“免疫缀合物”)，如治疗流感病毒感染的毒素或抗病毒药。本申请中所用的术语“免疫缀合物”指与放射活性剂、细胞因子、干扰素、靶点或报告部分、酶、肽或蛋白或者治疗剂化学或生物学连接的抗体。抗体可以在分子上能够结合其靶点的任意位置与放射活性剂、细胞因子、干扰素、靶点或报告部分、酶、肽或治疗剂连接。免疫缀合物的实例包括抗体药物缀合物和抗体-毒素融合蛋白。在一个实施方式中，药剂可以是第二种不同的流感-ha的抗体。在某些实施方式中，抗体可以与特异于病毒感染的细胞的药剂缀合。可以与抗-流感-ha抗体缀合的治疗性部分的类型将考虑待治疗的病况和待达到的所需的治疗效果。用于形成免疫缀合物的适宜药剂的示例是本领域所公知的，参见例如wo05/103081。多特异性抗体本发明的抗体可以是单特异性的、双特异性的或多特异性的。多特异性抗体可以特异于一个靶多肽的不同表位，或者可以含有特异于一个以上的靶多肽具的抗原结合结构域。参见例如tutt等，1991，j.immunol.147：60-69；kufer等，2004，trendsbiotechnol.22：238-244。可以采用本领域的普通技术人员公知的标准分子生物学技术(例如重组dna和蛋白表达技术)构建本发明的任意多特异性抗原结合分子或其变体。在一些实施方式中，以双特异性形式(“双特异性抗体”)产生流感-ha-特异性抗体，其中与流感ha的不同结构域结合的可变区连接在一起，以使得单一结合分子中具有双结构域特异性。合理设计的双特异性抗体可以通过增加特异性和结合亲和力，来增强对流感-ha-蛋白的总体抑制性作用。特异于单独的结构域(例如n-末端结构域的区段)或能够结合至一个结构域中的不同区域的可变区在结构支架上配对，所述结构支架能够使得各区域同时与独立的表位或一个结构域中的不同区域结合。在关于双特异性抗体的一个实例中，来自对一个结构域具有特异性的结合子的重链可变区(vh)与来自对第二个结构域具有特异性的一系列结合子的轻链可变区(vl)重组，以识别能够与原始vh配对但不会破坏对该vh的原始特异性的非同源vl伴侣。使用这种方法，可以将单一vl区段(例如vl1)与两个不同的vh结构域(例如vh1和vh2)结合，以产生由两个结合“臂”(vh1-vl1和vh2-vl1)组成的双特异性抗体。使用单一vl区段降低了系统的复杂性，从而使产生双特异性抗体所用到的克隆、表达和纯化过程得到简化和效率增加(参见例如ussn13/022759和us2010/0331527)。或者，可以使用本申请所述的技术或本领域技术人员公知的其他技术，将与一个以上结构域和第二靶点(例如但不限于如第二种不同的抗-流感-ha抗体)结合的抗体制成双特异性形式。与不同区域结合的抗体可变区和与例如流感病毒上的相关位点结合的可变区可以连接在一起，以使得单一的结合分子中具有双抗原特异性。合理设计的此种性质的双特异性抗体具有双重功能。对胞外域具有特异性的可变区与对胞外域以外具有特异性的可变区组合并在结构支架上配对，所述结构支架能够使得每个可变区均能够与独立的抗原结合。能够用于本发明背景下的示例性双特异性抗体形式涉及使用第一免疫球蛋白(ig)ch3结构域和第二igch3结构域，其中所述第一和第二igch3结构域彼此间存在至少一个氨基酸的差异，并且其中与不存在所述氨基酸差异的双特异性抗体相比，至少一个氨基酸的差异降低了双特异性抗体与蛋白a的结合。在一个实施方式中，第一igch3结构域结合蛋白a，并且第二igch3结构域含有减少或消除与蛋白a的结合的突变，如h95r修饰(根据imgt外显子编号；根据eu编号为h435r)。第二ch3还可以包含y96f修饰(根据imgt；根据eu为y436f)。可见于第二ch3中的进一步的修饰包括：在igg1抗体的情况下d16e、l18m、n44s、k52n、v57m和v82i(根据imgt；根据eu为d356e、l358m、n384s、k392n、v397m和v422i)；在igg2抗体的情况下n44s、k52n和v82i(imgt；根据eu为n384s、k392n和v422i)；以及在igg4抗体的情况下q15r、n44s、k52n、v57m、r69k、e79q和v82i(根据imgt；根据eu为q355r、n384s、k392n、v397m、r409k、e419q和v422i)。上文所述的双特异性抗体形式的变体包括在本发明的范围内。能够用于本发明背景下的其他示例性的双特异性形式包括但不限于，例如基于scfv的或双体双特异性形式、igg-scfv融合、双可变结构域(dvd)-ig、四源杂交瘤、凸起-进入-孔洞(knob-into-hole)、共有轻链(例如具有凸起-进入-孔洞等的共有轻链)、crossmab、crossfab、(seed)体、亮氨酸拉链、duobody、igg1/igg2、双作用fab(daf)-igg和mab2双特异性形式(对前述形式的综述参见例如klein等，2012，mabs4：6，1-11，以及其中引用的参考文献)。也可以使用肽/核酸缀合构建双特异性抗体，例如其中将具有正交化学反应性的非天然氨基酸用于生成位点特异性抗体-寡核苷酸缀合物，随后所述缀合物自组装成具有所定义的组分、价态和几何形状的多聚体复合物(参见例如kazane等，j.am.chem.soc.[epub：dec.4，2012])。治疗性施用和处方本发明提供了包含本发明的抗-流感-ha抗体或其抗原结合片段的治疗性组合物。根据本发明所述的治疗性组合物将与包含于处方中的适宜的载体、赋形剂和其他试剂一起施用，以提供更好的转移、递送和耐受性等。大量适宜的处方能够在所有药物化学家公知的处方集中找到：remington′spharmaceuticalsciences，mackpublishingcompany，宾夕法尼亚伊斯顿。这些处方包括例如粉剂、糊剂、软膏、凝胶、蜡、油、脂质、含有(阳离子或阴离子)脂质的囊泡(如lipofectintm)、dna缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳剂、乳状碳蜡(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有半固体混合物的碳蜡。亦参见powell等，″compendiumofexcipientsforparenteralformulations″pda(1998)jpharmscitechnol52：238-311。可以根据被施用对象的年龄和身材、目标疾病、病况、施用途径等改变抗体的剂量。本发明的抗体用于治疗成人患者中的疾病或病症，或者用于预防此类疾病时，正常地以约0.1至约60mg/kg体重，更优选地约5至约60、约10至约50或者约20至约50mg/kg体重的单次剂量施用本发明的抗体是有利的。根据病况的严重程度，可以对治疗的频率和持续时间进行调整。在某些实施方式中，可以以至少约0.1mg至约5000mg，约1至约2000mg，约5至约1000mg，或者约10至约500mg、至约100mg或至约50mg的初始剂量施用本发明的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，初始剂量之后可以以与初始剂量大致相同或少于初始剂量的量施用第二个或多个随后剂量的抗体或其抗原结合片段，其中随后的剂量间隔至少1天至3天；至少1周；至少2周；至少3周；至少4周；至少5周；至少6周；至少7周；至少8周；至少9周；至少10周；至少12周或至少14周。多种递送系统是公知的并且能够用于施用本发明的药物组合物，例如包封在脂质体中、微粒、微囊、能够表达突变病毒的重组细胞、受体介导的内吞作用(参见例如wu等，(1987)j.biol.chem.262：4429-4432)。引入的方法包括但不限于皮内、经皮内、肌内、腹腔内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。可以通过任意方便的途径施用所述组合物，例如通过输注或推注，通过上皮或粘膜皮肤内层(例如口腔粘膜、直肠和小肠粘膜等)吸收，并且可以与其他生物活性剂一起施用。施用可以是全身的或局部的。还可以在囊泡特别是脂质体中递送所述药物组合物(参见例如langer(1990)science249：1527-1533)。在本申请中还涉及使用纳米颗粒递送本发明的抗体。与抗体缀合的纳米颗粒可用于治疗和诊断应用。arruebo，m.等，2009(“antibody-conjugatednanoparticlesforbiomedicalapplications”inj.nanomat.第2009卷，文章id439389，24页，doi：10.1155/2009/439389)详细描述了与抗体缀合的纳米颗粒及其制备方法和用途，其通过引用并入本申请。可以对纳米颗粒进行研发并将其与药物组合物中包含的抗体缀合以靶向病毒感染的细胞。已在例如us8257740或us8246995中描述了用于药物递送的纳米颗粒，其均整体并入本申请。在某些情况下，可以在控释系统中递送药物组合物。在一个实施方式中，可以使用泵。在另一个实施方式中，可以使用聚合材料。在又一个实施方式中，控释系统可以置于所述组合物的靶点附近，这样仅需要全身剂量的一部分。可注射的制剂可以包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射，点滴输注等的剂型。可以采用公知的方法制备这些可注射剂型。例如，可以通过例如将上文所述的抗体或其盐溶解、混悬或乳化于常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中，制备可注射制剂。用于注射的水性介质有，例如生理盐水、含有葡萄糖和其他辅助剂等的等渗溶液，可以将其与适宜的增溶剂联用，如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、hco-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等。作为油性介质使用的有，例如芝麻油、豆油等，其可以与如苯甲酸苄酯、苄醇等的助溶剂联用。优选将由此制备的注射剂填充入适宜的安瓿中。可以用标准针头和注射器皮下或静脉内递送本发明的药物组合物。此外，对于皮下递送，钢笔式递送装置易于应用于递送本发明的药物组合物。这种钢笔式递送装置可以是可重复使用或一次性的。可重复使用的钢笔式递送装置通常使用含有药物组合物的可替换的芯。一旦所述芯中的药物组合物全部被施用并且所述芯被排空，则能够容易地弃去空芯并替换成含有所述药物组合物的新芯。然后便可重新使用所述钢笔式递送装置。在一次性的笔递送装置中，无可替换的芯。相反，一次性笔递送装置已预充好药物组合物，贮存在该装置内的容器中。一旦所述容器中的药物组合物被排空，则弃去整个装置。多种可重复使用的钢笔式的和自动注射的递送装置已应用于本发明药物组合物的皮下递送中。示例包括但当然不限于，仅举几个来说：autopentm(owenmumford，inc.，英国伍德斯托克)，disetronictm笔(disetronicmedicalsystems，瑞士布格多夫)，humalogmix75/25tm笔，humalogtm笔，humalin70/30tm笔(elilillyandco.，印第安纳印第安纳波利斯)，novopentmi、ii和iii(novonordisk，丹麦哥本哈根)，novopenjuniortm(novonordisk，丹麦哥本哈根)，bdtm笔(bectondickinson，新泽西富兰克林湖)，optipentm，optipenprotm，optipenstarlettm和opticliktm(sanofi-aventis，德国法兰克福)。应用于皮下递送本发明药物组合物的一次性钢笔式递送装置的示例包括但当然不限于，仅举几个来说：solostartm笔(sanofi-aventis)，flexpentm(novonordisk)和kwikpentm(elililly)，sureclicktm自动注射器(amgen，加利福尼亚千橡市)，penlettm(haselmeier，德国斯图加特)，epipen(dey，l.p.)和humiratm笔(abbottlabs，伊利诺伊雅培公园)。有利地，将上文所述的用于口服或胃肠外的药物组合物制成适于活性成分剂量的合适单位剂量的剂型。这种单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊、注射剂(安瓿)、栓剂等。所含的上述抗体的量通常为约5至约5000mg每单位剂量剂型；特别是在注射剂的形式中，所含的上述抗体优选地为约5至约500mg，而对于其他剂型为约10至约250mg。抗体的治疗性用途本发明的抗体用于治疗和/或预防与流感病毒感染相关的疾病或病症或病况和/或用于改善与此类疾病、病症或病况相关的至少一种症状。在某些实施方式中，本发明的抗体用于治疗患有由流感病毒引起的严重和急性呼吸道感染的对象。在一些实施方式中，本发明的抗体用于在宿主体内降低病毒滴度或减少病毒载量。在一个实施方式中，可以以治疗性剂量向流感病毒感染的患者施用本发明的抗体或其抗原结合片段。可以施用一种或多种本发明的抗体以缓解或预防或减轻所述疾病或病症的一种或多种症状或病况的严重程度。所述抗体可以用于改善或减轻流感病毒感染的至少一种症状的严重程度，包括但不限于：发热、咳嗽、咽喉痛、头痛、身体疼痛、疲乏、极度衰竭、气短、支气管炎、肺炎和死亡。本发明还涉及将一种或多种本发明的抗体预防性地用于处于发生流感病毒感染风险的对象，如免疫功能低下的个体、老年人(年龄超过65岁)、2岁以下的儿童、医护人员、与流感病毒感染患者密切接近的家庭成员，以及具有医疗史(例如肺部感染、心脏病或糖尿病风险增加)的患者。在本发明的一个进一步的实施方式中，本抗体用于制备用于治疗流感病毒感染患者的药物组合物。在本发明的另一个实施方式中，本抗体作为辅助疗法，与任意其他药剂或本领域技术人员公知的任意其他疗法，一同用于治疗或改善流感病毒感染。联合疗法联合疗法可以包括本发明的抗-流感-ha抗体，和可以有利地与本发明的抗体或与本发明的抗体的生物活性片段联用的任意其他治疗剂。本发明的抗体可以协同地与一种或多种药物或药剂(例如抗病毒剂)联用以治疗流感病毒。例如，示例性的抗病毒剂包括例如疫苗、神经氨酸酶抑制剂或核苷类似物。可以用于与本发明的抗体联用的其他示例性的抗病毒剂可以包括，例如齐多夫定、更昔洛韦、阿糖腺苷、碘苷、三氟尿苷、膦甲酸、阿昔洛韦、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、α-干扰素和其他干扰素、神经氨酸酶抑制剂(例如扎那米韦、奥司他韦、拉尼米韦、帕拉米韦)或金刚乙胺。其他示例性的抗病毒药包括但不限于ha抑制剂、唾液酸抑制剂和m2离子通道抑制剂。在一个实施方式中，m2离子通道抑制剂是金刚烷胺或金刚乙胺。在一些实施方式中，本发明的抗体可以与第二治疗剂联用以降低流感病毒感染患者体内的病毒负荷，或以改善感染的一种或多种症状。本发明的抗体可以与抗炎药(例如皮质类固醇和非甾体抗炎药)、减充血剂、抗组胺药、抗感染药物、针对流感病毒的不同抗体、抗病毒药物、流感病毒疫苗(如或)、膳食补充剂(如抗氧剂)或任意其他姑息疗法联用以治疗流感病毒感染。在某些实施方式中，第二治疗剂是针对流感的另一种抗体。在某些实施方式中，第二治疗剂是针对流感血凝素的另一种抗体。在某些实施方式中，第二治疗剂是针对不同流感蛋白的另一种抗体，如神经氨酸酶或基质蛋白2的四聚体胞外域(m2e蛋白)。在某些实施方式中，第二治疗剂是针对不同蛋白的抗体，如宿主跨膜蛋白酶，丝氨酸2(tmprss2)。第二抗体可以特异于来自不同病毒亚型或毒株的一种或多种不同的流感病毒蛋白。本申请涉及使用针对流感病毒具有广泛的中和或抑制活性的抗体的组合(“鸡尾酒”)。在一些实施方式中，可以将非竞争性抗体组合并向有需要的对象施用，以降低流感病毒由于选择压力导致的快速突变而逃逸的能力。在一些实施方式中，包含该组合的抗体结合至ha蛋白上不同的非重叠表位。包含该组合的抗体可以阻断病毒附着至和/或进入和/或与宿主细胞融合。抗体可以与血凝素相互作用，所述血凝素选自包括h1、h2、h5、h6、h8、h9、h11、h12、h13、h16、h17或h18的组1甲型流感亚型的任意一种或多种，并且在单独使用或与任意一种或多种上文提到的药剂联用时，可以中和任意一种或多种包括但不限于h1n1、h5n1、h9n2、h13n6和h16n3的组1流感亚型。本申请还涉及使用本发明的抗-流感-ha抗体的组合，其中该组合包含无交叉竞争的一种或多种抗体；在一些实施方式中，该组合包含具有广泛中和活性的第一抗体，与活性所针对的分离株范围较窄，且与第一抗体无交叉竞争的第二抗体。本申请中所用的术语“联合”指其他治疗活性成分可以在本发明的抗-流感-ha抗体施用之前、同时或之后施用。术语“联用”还包括抗-流感-ha抗体与第二治疗剂依次或同时施用。可以在本发明的抗-流感-ha抗体施用前，向对象施用其他治疗活性成分。例如，如果第一成分在第二成分施用前1周、72小时、60小时、48小时、36小时、24小时、12小时、6小时、4小时、3小时、2小时、1小时、30分钟、15分钟、10分钟、5分钟或小于1分钟施用，则可以视为第一成分在第二成分“之前”施用。在其他实施方式中，可以在本发明的抗-流感-ha抗体施用后向对象施用其他治疗活性成分。例如，如果第一成分在第二成分施用后1分钟、5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、60小时、72小时施用，则可以视为第一成分在第二成分“之后”施用。在其他实施方式中，其他治疗活性成分与本发明的抗-流感-ha抗体可以同时向对象施用。对于本发明的目的而言，“同时”施用包括例如，将抗-流感-ha抗体和其他治疗活性成分以单一剂型向对象施用，或者相隔约30分钟或以内，以两个独立的剂型向对象施用。如果在独立剂型中施用，可以通过相同途径施用各剂型(例如抗-流感-ha抗体和其他治疗活性成分均可以静脉内施用等)；或者，可以通过不同途径施用各剂型(例如，抗-流感-ha抗体可以静脉内施用，而其他治疗活性成分可以口服施用)。在任何情况下，对于本公开的目的而言，通过相同途径以单一剂型和以两个独立剂型中，或者通过不同途径以独立剂型施用所述成分均认为是“同时施用”。对于本发明的目的而言，抗-流感-ha抗体在施用其他治疗活性成分“之前”、“同时”或“之后”(如本申请上文对这些术语的定义)施用，均认为是抗-流感-ha抗体与其他治疗活性成分“联合”施用。本发明包括将本发明的抗-流感-ha抗体与如本申请其他部分所述的一种或多种其他治疗活性成分共同制剂得到的药物组合物。施用方案根据某些实施方式，可以向有需要的对象施用单一剂量的本发明的抗-流感-ha抗体(或包含抗-流感-ha抗体与本申请所提到的任意其他治疗活性剂的组合的药物组合物)。根据本发明的某些实施方式，可以在预定的时间过程中向对象施用多个剂量的抗-流感-ha抗体(或包含抗-流感-ha抗体与本申请所提到的任意其他治疗活性剂的组合的药物组合物)。根据本发明这一方面所述的方法包括向对象顺序施用多个剂量的本发明的抗-流感-ha抗体。本申请中所述的“依次施用”指各剂抗-流感-ha抗体在不同的时间点向对象施用，例如在由预定的间隔(例如小时、天、周或月)分隔的不同日。本发明包括包含向患者依次施用单一初始剂量的抗-流感-ha抗体，随后的一个或多个第二剂量的抗-流感-ha抗体，以及随后可选的一个或多个第三剂量的抗-流感-ha抗体的方法。术语“初始剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”指施用本发明的抗-流感-ha抗体的时间顺序。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时施用的剂量(也称为“基线剂量”)；“第二剂量”是在初始剂量之后施用的剂量；而“第三剂量”是在第二剂量之后施用的剂量。初始、第二和第三剂量可以均含有相同量的抗-流感-ha抗体，但是彼此之间通常在施用频率方面可以存在差异。但在某些实施方式中，在治疗过程中，初始、第二和/或第三剂量中抗-流感-ha抗体的含量相对于彼此之间有所改变(例如适当地上调或下调)。在某些实施方式中，在治疗方案开始时施用两个或多个(例如2、3、4或5个)剂量作为“负荷剂量”，随后以较降低频率施用后续剂量(例如“维持剂量”)。在本发明的某些示例性实施方式中，第二和/或第三剂量各自在上一个剂量施用后的1至48(例如1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、41/2、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2、11、111/2、12、121/2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、161/2、17、171/2、18、181/2、19、191/2、20、201/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2或更多)小时施用。本申请所用的“上一个剂量”这一表述，指在依次施用的多个剂量中，在顺次的下一个剂量施用前向患者施用的抗-流感-ha抗体的剂量，中间无插入剂量。根据本发明这一方面的方法可以包括向患者施用任意数量的第二和/或第三剂量的抗-流感-ha抗体。例如，在某些实施方式中，仅向患者施用单一的第二剂量。在其他实施方式中，向患者施用两个或多个(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)第二剂量。同样地，在某些实施方式中，仅向患者施用单一的第三剂量。在其他实施方式中，向患者施用两个或多个(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)第三剂量。在本发明的某些实施方式中，向患者施用的第二和/或第三剂量的频率可以在治疗方案的过程中变化。在治疗过程中还可以由医师根据临床检查后各患者的需要调整施用频率。抗体的诊断用途本发明的抗-流感-ha抗体可以用于检测和/或测定样品中的流感-ha，例如用于诊断目的。一些实施方式涉及在测定中使用一种或多种本发明的抗体检测疾病或病症(如病毒感染)。针对流感-ha的示例性诊断测定可以包括例如将来自患者的样品与本发明的抗-流感-ha抗体接触，其中所述抗-流感-ha抗体用可检测标签或报告分子标记，或者用作捕获配体以从患者的样品中选择性分离流感-ha。或者，在诊断应用中可以将未标记的抗-流感-ha抗体与其自身具有可检测标签的第二抗体联用。所述可检测标签或报告分子可以是放射性同位素，如3h、14c、32p、35s或125i：荧光或化学发光部分，如荧光素异硫氰酸酯或罗丹明；或酶，如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶或荧光素酶。能够用于检测或测定样品中的流感-ha的具体的示例性测定包括酶联免疫吸附测定(elisa)、放射性免疫测定(ria)和荧光活化细胞分选(facs)。能够用于根据本发明的流感-ha诊断测定的样品包括来自患者的任意组织或液体样品，在正常或病理状况下其含有可检测量的流感-ha或其片段。通常会先测定获取自健康患者(例如未患有与流感相关的疾病的患者)的特定样品中的流感-ha的水平以建立基线或标准流感-ha水平。然后可以将流感-ha的该基线水平，与在获取自疑似患有与流感-ha相关的病况或与这种病况相关的症状的个体的样品中测得的流感-ha的水平进行比较。特异性针对流感ha的抗体可以不含其他标记或部分，或者可以含有n-末端或c-末端标记或部分。在一个实施方式中，所述标记或部分是生物素。在结合测定中，标记的位置(如果有的话)可以确定肽相对于其所结合表面所处的方向。例如，如果表面由抗生物素蛋白包被，则含有n-末端生物素的肽将处于使得该肽的c-末端部分远离表面的方向。实施例提出了下述实施例，以便向本领域普通技术人员提供关于如何制备和使用本发明的方法和组合物的完整公开和描述，并且其并非旨在对发明人所认为的其发明的范围做出限制。已经努力确保所用数字(例如数量、温度等)的准确性，但是也应对一些实验失误和偏差予以考虑。除非另外指出，份数是按重量的份数、分子量是平均分子量、温度单位是摄氏度，室温为约25℃，以及压力处于或接近大气压。实施例1：针对流感-ha的人抗体的产生在包含编码人免疫球蛋白重链和κ轻链可变区dna的小鼠中产生针对流感ha的人抗体。用流感疫苗组合物免疫小鼠，随后用包含比例各为1∶1的五种不同重组血凝素蛋白混合物的强化剂量免疫小鼠。强化剂量中包括的五种重组血凝素蛋白来自h1a/新喀里多尼亚/20/1999、h5a/印度尼西亚/05/2005、h3a/维多利亚/361/2011、h7a/荷兰/219/2003和h9a/香港/1073/1988(proteinsciences，目录号3006)。通过甲型流感ha特异性免疫测定监测抗体的免疫应答。当达到所需的免疫应答时，收集脾细胞并与小鼠骨髓瘤细胞融合以保持其活力并且形成杂交瘤细胞系。筛选和选择所述杂交瘤细胞系以识别产生流感ha-特异性抗体的细胞系。使用这种技术和上文所述的多种免疫原，得到若干嵌合抗体(即具有人可变结构域和小鼠恒定结构域的抗体)；将由这种方法产生的示例性抗体命名为h1h11820n、h1h11829n、h1h11829n2、h2m11830n、h1h11830n2、h1h11903n和h1h14571n。还可以直接从未与骨髓瘤细胞融合的抗原阳性小鼠b细胞中分离出抗-流感ha抗体，如美国专利号7582298中所述。使用这种方法，得到了若干全人抗-流感ha抗体(即具有人可变结构域和人恒定结构域的抗体)；将由这种方法产生的示例性抗体命名如下：h1h11723p、h1h11729p、h1h11704p、h1h11711p、h1h11714p、h1h11717p、h1h11724p、h1h11727p、h1h11730p、h1h11731p2、h1h11734p2、h1h11736p2、h1h11742p2、h1h11744p2、h1h11745p2、h1h11747p2、h1h11748p2。在下述的实施例中详细描述了根据本实施例的方法产生的示例性抗体的某些生物学性质。实施例2：重链和轻链可变区的氨基酸和核酸序列表1中列出了所选定的本发明的抗-流感-ha抗体的重链和轻链可变区以及cdr的氨基酸序列标识。相应的核酸序列标识如表2中所示。表1：氨基酸序列标识表2：核酸序列标识本申请中的抗体通常根据下述命名法命名：fc前缀(例如“h1h”、“h2m”等)，随后为数字标识(例如“11723”、“11830”等，如表1或2中所示)，随后为“p”、“p2”、“n”、“n2”或“b”后缀。根据这种命名法，抗体可以因而在本申请中称为例如“h1h11723p”、“h2m11830n”等。在本申请中使用的抗体命名中的h1h和h2m前缀表示抗体的特定fc区同种型。例如，“h1m”抗体具有小鼠igg1fc，“h2m”抗体具有小鼠igg2fc(a或b亚型)(抗体名称中的第一个“h”表示所有可变区都是全人的)。本领域的普通技术人员将理解，具有特定fc同种型的抗体可以转换为具有不同fc同种型的抗体(例如具有小鼠igg1fc的抗体可以转换为具有人igg4的抗体等等)，但是无论如何，表1、2、12或13中显示的数字标识所指示的可变结构域(包括cdr)将保持不变，并且无论fc结构域的性质如何，预计其与抗原结合的性质相同或基本上相似。抗体比较为了比较的目的，一些下述的实施例中包括了抗-流感-ha抗体的对照。实施例中还使用了同种型匹配的阴性对照。在本申请中的一个抗-流感ha对照抗体被命名为“对照imab”，它是重链(hc)和轻链(lc)氨基酸序列如wo2008/028946中seqidno：65(hc)和seqidno：91(lc)所示的抗-流感ha抗体，也称为cr6261。如wo2008/028946中所示，该cr6261抗体具有分别如seqidno：1、2和3所示的重链互补性决定区(hcdr)氨基酸序列(hcdr1、2和3)，以及分别如seqidno：13、14和15所示的轻链互补性决定区(lcdr)氨基酸序列(lcdr1、2和3)。实施例3：单克隆的抗-流感ha抗体的octet结合亲和性和动力学常数通过基于实时生物层干涉仪的生物传感器(octethtx)测定，确定了流感血凝素(ha)与选定的经纯化的抗-ha单克隆抗体结合的平衡解离常数(kd值)。使用由抗-小鼠fc(amc)或抗-人fc(ahc)捕获包被的octet生物传感器，捕获分别由小鼠fc(abpid前缀为h1m、h2am、h2bm)或人igg1fc(abpid前缀为h1h)表达的抗-ha单克隆抗体。所有的结合研究均在hbs-etoctet动力学缓冲液(10mmhepesph7.4、0.15mnacl、3mmedta、0.05％v/v表面活性剂吐温-20，1mg/mlbsa)中，在25℃下以1000rpm的速度摇晃的板上进行。将捕获了抗体的octet生物传感器浸入含有不同浓度(300nm至11.11nm)的不同ha毒株的孔中7分钟，随后在octet动力学缓冲液中使与抗体结合的ha蛋白解离10分钟。在不同步骤之间，始终在octet动力学缓冲液中洗涤生物传感器。通过使用scrubber2.0c曲线拟合软件，将数据处理并拟合为1∶1结合模型，以确定动力学结合(ka)和解离(kd)速率常数。结合解离平衡常数(kd)和解离半衰期(t1/2)由动力学速率常数计算为：和表3中列出了不同的抗-ha单克隆抗体与不同的组1ha毒株结合的结合动力学参数。此外，确定了相同抗体与组2血凝素结合的结合参数，但是与组2ha没有结合(数据未显示)。表3：在25℃下，单克隆抗体与不同的组1ha毒株结合的结合动力学参数实施例4：haoctet交叉竞争在htx生物传感器(fortebio，pall生命科学分部)上使用实时、无标签的生物层干涉仪测定，确定一组不同的抗-流感ha单克隆抗体之间的结合竞争。整个实验在25℃下在0.01mhepesph7.4，0.15mnacl，0.05％v/v表面活性剂吐温-20和1mg/mlbsa(hbs-etoctet缓冲液)中，以1000rpm的速度摇板进行。为了评估两种抗体是否能够彼此竞争结合其各自在ha上的表位，采用了预混合测定形式。使用一种组1ha蛋白毒株(加利福尼亚)研究不同抗-ha单克隆抗体之间的交叉竞争。为了达到这个目的，在进行结合竞争测定之前，先将100nmha试剂(proteinsciences)与浓度为1μm的不同的抗-ha单克隆抗体(下文中称为mab-2)预混合至少2小时。将抗-小鼠fc多克隆抗体(pallfortebiocorp.，#18-5088；下文中称为amc)或抗-人fc多克隆抗体(pallfortebiocorp.，#18-5060；下文中称为ahc)包被的octet生物传感器先浸入含有浓度为20μg/ml的各抗-ha单克隆抗体的孔中3分钟，以捕获分别表达有小鼠fc或人fc的抗-ha单克隆抗体(下文中称为mab-1)。捕获步骤之后，通过浸入含有1μm表达有不同fc(人igg1、小鼠igg2a和小鼠igg2b)的无关的单克隆抗体的混合溶液物中3分钟，使octet传感器上未被占据的抗-小鼠fc多克隆抗体和抗-人fc多克隆抗体饱和。最后，将octet生物传感器浸入含有100nmha和浓度为1μm的mab-2的预混合样品的孔中5分钟。在每个循环结束时，通过交替进行3次蘸入20mmh3po4中20秒、随后浸入hbs-etoctet缓冲液中的操作，使所捕获的抗-ha单克隆抗体连同结合的ha和mab-2预复合物再生。在每个实验步骤之间，在hbs-etoctet缓冲液中洗涤生物传感器。在整个实验过程中监测实时结合应答，并且记录在每个步骤结束时的结合应答。在分析过程中，从整列中减去由于抗-ha单克隆抗体与未被占据的捕获表面之间的非特异性结合导致的自身背景结合信号(mab-1＝mab-2时)，并生成交叉竞争表格(表4)。对mab-1结合至ha和mab-2预复合物的应答进行了比较，并确定了不同的抗-ha单克隆抗体的竞争/非竞争行为。如表4中所示，左列显示了使用ahcoctet生物传感器捕获的mab1抗体，右列表示与mab1抗体交叉竞争的抗体(mab2)。表4：一组不同的抗-ha单克隆抗体之间对与ha的h1n1加利福尼亚na株的结合的交叉竞争实施例4：所选定的组1特异性甲型流感血凝素单克隆抗体在体外在不同的组型毒株中显示出较强的甲型流感中和作用细胞活力微中和测定在微中和测定中对单克隆抗体进行了测试以评估其作用范围和效力。简言之，以6.0x103个细胞/孔的密度将madin-darby犬肾(mdck)细胞接种于96孔板中。在背景对照孔中仅加入病毒稀释剂。在37℃下5％co2中孵育细胞4至5小时。将单克隆抗体稀释为病毒稀释剂中最终浓度的4倍。将抗体按照1∶3的比例稀释两份。将病毒在冰上解冻并稀释至预先确定的浓度。将稀释的病毒加入稀释的单克隆抗体中。将单克隆抗体-病毒混合物立即转移至mdck细胞并在37℃下5％co2中孵育72h。还包括病毒对照和未感染细胞对照孔。在第4天，将培养板以1200rpm离心3分钟。使用100μlceltiter-glo底物裂解细胞并使用发光法(victorx3，perkinelmer)测定atp释放。确定相对于未感染对照的活力百分率。使用非线性4pl回归分析活力值以确定ic50值(graphpadprism)。这些单克隆抗体对广泛的组1甲型流感病毒显示出效力(表5)，包括各种h1n1、h5n1、h9n2、h13n6和h16n3毒株。对h2am11829n和h1h11729p的ic50值范围分别为1.68nm至48nm和2.47nm至129.5nm。表5：针对各种典型组1流感毒株的中和效力(显示了3至5次运行的平均值)实施例5：所选定的组1特异性甲型流感血凝素单克隆抗体在体外对甲型流感显示出较强的中和作用选择示例性的单克隆抗体(mab)h1h11829n2和h1h11729p进行体外微中和测定。简言之，接种madin-darby犬肾(mdck)细胞并孵育过夜以便在次日达到80-100％汇合。单克隆抗体在病毒感染培养基(vim)中稀释至50μg/ml并且按照1∶2的比例稀释三份或四份。在vim中稀释h5n1a/越南/1203/2004或h1n1a/加利福尼亚/07/2009并加入至经稀释的抗体中，孵育1h。然后将样品转移至mdck中并孵育48h。孵育后，将50μl上清液转移至新96孔板中。将经稀释的火鸡或马红细胞加入上清液中并在室温下孵育30或60min。将完全抑制血凝素的末次稀释的倒数记录为血凝素的滴度。示例性的抗体h1h11829n2和h1h11729p对h5n1a/越南/1203/2004andh1n1a/加利福尼亚/07/2009显示出较强的中和作用(表6)。对h5n1a/越南/1203/2004中和时，示例性抗体h1h11829n2和h1h11729p的平均ic90值(分别)为62.50nm和26.05nm。表6：对含选定的组1血凝素特异性抗体的h5n1a/越南/1203/2004和h1n1a/加利福尼亚/07/2009进行微中和测定后的血凝素滴度。所示为ic90值(nm)。实施例6：在体外使用甲型流感特异性单克隆抗体测得的流感感染细胞的补体依赖性细胞毒性选择示例性的单克隆抗体(mab)h1h11829n2和h1h11729p用于体外补体依赖性细胞毒性(cdc)测定。简言之，在用h1n1a/波多黎各/08/1934以moi为3感染的24小时之前，接种madin-darby犬肾(mdck)细胞。孵育20至25小时后，收集细胞并以1x106个细胞/ml的浓度重悬于cdc测定培养基中。将经稀释的靶细胞(20μl)加入384孔板的各孔中。将单克隆抗体稀释为cdc测定培养基中最终初始浓度的3倍，然后按照1∶2的比例稀释三份或四份。在未加入mab的各孔中加入cdc测定培养基。以～500rpm的速度在室温下摇板～2min。以cdc测定培养基中最终浓度的3倍(15％)制备正常人血清补体(nhsc)并且在各孔中均加入20μl。将培养板在室温下孵育2h，并在此时将裂解试剂、缓冲剂和底物置于室温下。通过将毛地黄皂苷稀释至cdc测定培养基制备裂解试剂，并将5μl该试剂加入最大裂解对照孔中以建立最大信号对照。将底物和缓冲剂混合，在所有孔中加入20μl并在室温下孵育10min。在酶标仪(victorx3，perkinelmer)上对信号进行检测。根据((mab+nhsc裂解)-(仅nhsc裂解))/((毛地黄皂苷最大裂解)-(仅nhsc裂解))x100计算特异性裂解百分率。通过在8点应答曲线上进行四参数非线性回归(graphpadprism)完成分析。针对各次试验±标准偏差绘制数据，数据以所有试验的平均值±平均值的标准误差表示。示例性抗体h1h11829n2和h1h11729p显示出对感染细胞较强的补体介导的裂解。在表7中显示了三个随机选择的试验。示例性抗体h1h11829n2和h1h11729p平均的ec50值分别为41.88nm(±13.08sem)和43.25nm(±3.83sem)。表7：组1血凝素特异性抗体对h1n1a/波多黎各/08/1934感染的靶细胞的特异性裂解百分率。显示了三次重复每次的ec50值(nm)。实施例7：所选定的组1特异性甲型流感血凝素单克隆抗体在体内对甲型流感显示出较强的中和作用单剂量预防小鼠模型选择示例性的单克隆抗体h2am11829n、h1h11729p和h2a14571n用于使用balb/c小鼠进行的体内保护研究。简言之，在第-1天向约6周龄的雌性小鼠(约17.5±0.5g)皮下(sc)注射1mg/kg的h2am11829n、h1h11729p、h2a14571n或者小鼠或人同种型(阴性对照)抗体。每次实验每组有5只小鼠。注射后24小时(第0天)，使用20μl生理盐水中的10xmld50(800个噬菌斑形成单位；pfu)的h1n1a/波多黎各/08/1934对小鼠进行鼻内(in)攻击。每日对小鼠称重并且当其失去初始重量的20％以上时将其处死。1mg/kg示例性的抗体h2am11829n、h1h11729p和h2a14571n在体内对甲型流感感染显示出较强的中和作用。剂量应答预防小鼠模型选择示例性的单克隆抗体h1h11829n2和h1h11729p用于使用balb/c小鼠进行的体内预防性保护研究。简言之，在第-1天向约6周龄的雌性小鼠(约17.5±0.5g)sc注射1、0.5、0.1或0.05mg/kg或2、0.5、0.2或0.05mg/kg的h1h11829n2、h1h11729p抗体。每次实验每组有5只小鼠。以1mg/ml将载体蛋白(higg1无关mab)加入各剂量的mab中。注射后24小时(第0天)，使用20μl生理盐水中的10xmld50(800个噬菌斑形成单位；pfu)的h1n1a/波多黎各/08/1934或使用在20μl生理盐水中的5xmld50(5,000pfu)的h1n1a/加利福尼亚/04/2009对小鼠进行鼻内攻击。每日对小鼠称重并且当其失去初始重量的20％以上时将其处死。用h1_pr34攻击时，1mg/kg示例性的抗体h1h11829n2和h1h11729p在体内对甲型流感感染显示出较强的中和作用。在0.5和0.1mg/kg时，h1h11729p分别显示出100％和40％的存活(表8、9和10)。用h1_ca09攻击时，2、0.5和0.2mg/kg的示例性的抗体h1h11829n2和h1h11729p在体内对甲型流感感染显示出较强的中和作用，并且在0.05mg/kg时显示出60％的存活(表8、9和10)。表8：实验1中，在用10xmld50的h1n1a/波多黎各/08/1934感染前1天预防性地sc施用1mg/kg组1血凝素特异性抗体后，小鼠的存活百分率表9：实验2中，在用10xmld50的h1n1a/波多黎各/08/1934感染前1天预防性地sc施用1mg/kg组1血凝素特异性抗体后，小鼠的存活百分率表10：在用10xmld50的h1n1a/波多黎各/08/1934感染前1天预防性地sc施用1、0.5、0.1或0.05mg/kg组1血凝素特异性抗体后，或在用5xmld50的h1n1a/加利福尼亚/04/2009感染前1天预防性地sc施用2、0.5、0.2或0.05mg/kg组1血凝素特异性抗体后，小鼠的存活百分率剂量应答治疗性小鼠模型选择示例性的单克隆抗体h1h11829n2和h1h11729p用于使用balb/c小鼠进行的体内治疗性保护研究。简言之，使用20μl生理盐水中的10xmld50(800个噬菌斑形成单位；pfu)的h1n1a/波多黎各/08/1934或20μl生理盐水中的5xmld50(5,000pfu)的h1n1a/加利福尼亚/04/2009鼻内感染6周龄的雌性小鼠(约17.5±0.5g)。感染后3、4或5天(对于h1_pr34)或者1、2或3天(对于h1_ca09)向各组的5只小鼠注射15mg/kg或30mg/kg的h1h11829n2或h1h11729p抗体。每日对小鼠称重并且当其失去初始重量的20％以上时将其处死。用历史上的和当前的h1n1毒株攻击时，示例性的抗体h1h11829n2和h1h11729p在体内对甲型流感感染均显示出较强的中和作用(表11)。表11：在感染的治疗模型中小鼠的存活百分率。在第0天使用10xmld50的h1n1a/波多黎各/08/1934或5xmld50的h1n1a/加利福尼亚/04/2009感染小鼠。在第3、4或5天(针对h1n1a/波多黎各/08/1934)或者第1、2或3天(针对h1n1a/加利福尼亚/04/2009)，施用15或30mg/kg的小鼠抗体。实施例8：用h5免疫原免疫接种后产生所选定的组1特异性甲型流感血凝素单克隆抗体在包含编码人免疫球蛋白重链和κ轻链可变区dna的小鼠中另产生针对甲型流感ha的人抗体。将初始小鼠分成四组。第1组和第2组用三价流感疫苗(tiv)2013-2014制剂(ndc3332-110-10)免疫接种。留下第3组和第4组不进行免疫接种。约4周后，向第1组和第3组肌内注射50μgh5dna(编码h5a/印度尼西亚/05/2005的vrc9123)(参见ledgerwood等，(2011)lancetinfect.dis.11：916-924；khurana等，(2013)j.infect.dis.208：413-417；ledgerwood等，(2013)j.infect.dis.208：418-422)，并向第2组和第4组肌内注射5μgh5单价流感疫苗(miv；含有h5a/印度尼西亚/05/2005的vrc310)(参见ledgerwood等，(2011)lancetinfect.dis.11：916-924；khurana等，(2013)j.infect.dis.208：413-417；ledgerwood等，(2013)j.infect.dis.208：418-422)。约4周后，用5μg的h5单价流感疫苗(miv；含有h5a/印度尼西亚/05/2005的vrc310)免疫所有4组。如美国专利7582298中所述，抗-甲型流感ha抗体直接分离自受体结合位点(rbs)突变的、对avi标记的含有来自t4噬菌体纤维蛋白(折叠)的羧基末端三聚结构域的h5a/印度尼西亚/05/2005和/或h1a/新喀里多尼亚/20/1999呈阳性的小鼠b细胞，其且未与骨髓瘤细胞融合。使用这种方法，获得了若干其他全人抗-甲型流感-ha抗体(即具有人可变结构域和人恒定结构域的抗体)；使用这种方法产生的示例性抗体可以参见下表12(氨基酸序列标识)和13(核酸序列标识)。对样品通过luminex与受体结合位点(rbs)突变的、折叠子、avi标记的h5和h1的结合进行了评估。与预期一致，除了16个样品以外，所有样品均与h5蛋白以大于15,000的平均荧光强度(mfi)结合。然而，在大多数情况下，与h1蛋白也结合的样品与h5具有较高结合(即大于15,000mfi)。观察到两组单克隆抗体；一组以大于15,000mfi与h1结合(20个样品)，另一组以大于5000mfi与h5结合(44个样品)。表12：氨基酸序列标识表13：核酸序列标识实施例9：与对照抗体(对照imab)相比，h1h11729p在小鼠和非人灵长类(nhp)中具有优异的药代动力学性质进行了一项将h1h11729p与对照抗体在小鼠和非人灵长类中的药代动力学性质进行比较的研究。在本申请中称为对照imab的抗-流感ha对照抗体是一种具有wo2008/028946中的seqidno：65(hc)和seqidno：91(lc)所示的重链(hc)和轻链(lc)氨基酸序列的抗-流感ha抗体，在wo2008/028946中也称为cr6261。对于小鼠和nhppk实验而言，通过使用elisa免疫测定对总人抗体进行分析确定循环药物水平。简言之，在96孔板上包被山羊抗-人igg多克隆抗体以捕获血清中待测的人抗体，然后使用与辣根tmb底物偶联的山羊抗-人igg多克隆抗体检测与板结合的抗体。对血清样品进行6个剂量的系列稀释，并且对各抗体的对照标准品进行12个剂量的系列稀释。根据使用graphpadprism软件产生的对照标准曲线计算血清中的药物抗体浓度。a.小鼠研究在野生型(wt)c57bl/6小鼠中进行了h1h11729p的药代动力学评估。向各组的5只小鼠各以1mg/kg的剂量sc施用h1h11729p和对照imab。在抗体注射前1天采血(预采血)，并且在注射后6h，1、2、3、4、7、11、14、22和30天采血。分离血液中的血清成分并且在-80℃下冻存直至进行分析。结果：如表14所示，h1h11729p在wt小鼠中的半衰期为11.1天，而对照imab的半衰期为5.67天，表明h1h11729p与对照抗体相比具有更加有利的性质。表14：h1h11729p和对照imab在未感染野生型小鼠中的药代动力学性质概述药物t1/2(d)cmax(μ/ml)auc(d＊μ/ml)h1h11729p11.1±0.812.0±0.9147±3.4对照imab5.67±0.610.4±0.693.8±4.8b.食蟹猴nhp在3-5岁的雌性食蟹猴中进行了h1h11729p和对照imab的药代动力学清除率评估。针对甲型和乙型流感抗体对猴进行了预筛选，结果表明为阴性。在3只动物中对抗体进行了检测并且以3mg/kg的剂量皮下施用(体积为2ml/kg和1.5mg/ml)。给药前和注射后1h、4h、8h以及第1、2、3、4、5、10、14、18、21、24、28、35、42、49、56、63、70、84和98天收集血样。从全血中分离血清并且在-80℃下冻存直至进行分析。通过使用elisa免疫测定对总人抗体进行分析确定循环药物浓度。根据使用graphpadprism软件产生的对照标准曲线计算血清中的药物抗体浓度。结果：如表15所示，h1h11729p在猴中的半衰期为13.4天，而对照imab的半衰期为8.05天，表明h1h11729p与对照抗体相比具有更加有利的性质。表15：h1h11729p和对照imab在食蟹猴中的药代动力学性质概述药物t1/2(d)cmax(μg/ml)auc(d＊μg/ml)h1h11729p13.4±1.4641.3±7.84863±145对照imab8.05±2.1724.9±1.87320±70.1实施例10：h1h11729p在小鼠中有效治疗致死性流感病毒感染对改进治疗或预防人流感病毒感染的标准护理疗法的需求基本上尚未被满足。目前，仅有两类药物可用：金刚烷胺类和神经氨酸酶抑制剂(nai)。金刚烷胺类(金刚烷胺和金刚乙胺)与耐药株的迅速出现相关并且不再推荐用于治疗流感。nai如奥司他韦是治疗和预防流感的一线药物，然而，其效能窗是有限的：如果在开始出现症状48小时内给予抗病毒药物，则在该治疗环境下nai显示出将发热和疾病症状的持续时间缩短约1天，如果在48小时后施用，则几乎没有临床有效性证据。为了评估h1h11729p在治疗重度流感中的体内效能，进行了具有下述目标的实验：研究1：评估单剂量h1h11729p对比临床标准护理方案连续5天每日两次给予奥司他韦的效能。研究2：确定h1h11729p与奥司他韦联合施用的效能。在这些研究中使用的毒株包括历史上的[a/波多黎各/08/1934(h1n1)]甲型流感病毒组1分离株。所有实验均在6周龄野生型(balb/c)雌性小鼠中进行。用相当于800个噬菌斑形成单位(pfu)的10x小鼠ld50(mld50)的a/波多黎各/08/1934(h1n1)攻击小鼠。在治疗模型中，在感染后(p.i.)第0天鼻内(in)攻击小鼠并且在感染后特定天数(例如第1、2、3、4或5天)静脉内(iv)给予固定剂量的mab。根据生产厂商的说明书将奥司他韦重悬并且向小鼠连续5天每12h(即每日两次；bid)通过灌胃给药1次，在感染后第2天或第3天施用首次剂量。每日对小鼠称重并且进行观察直至p.i.第14天，当其失去初始体重的20％时，将其处死。以存活百分率报告结果。在第一项实验中，对单剂量h1h11729p(15mg/kg)或者从感染后48小时开始bid(5天方案)施用的25或5mg/kg奥司他韦(即治疗性施用)的效能进行了研究，以评估其在该时间点在小鼠模型中的作用。到第6天时给予5mg/kg奥司他韦的所有小鼠死亡，而25mg/kg的剂量将存活增至40％；相比之下，给予h1h11729p的所有小鼠均存活(图1和表16)。在下一项试验中，从感染后72小时开始，对h1h11729p与奥司他韦联用进行了测试。尽管用25mg/kg奥司他韦治疗的小鼠仅有约20％存活，但是15mg/kg和7mg/kg单次剂量的h1h11729p使得分别有60％和36％的小鼠存活。当进行联合治疗时观察到了叠加作用：7mg/kg单次剂量的h1h11729p与奥司他韦方案联用显示出了60％的存活，而15mg/kg单次剂量的h1h11729p与奥司他韦方案联用带来了87％的存活(图2和表17)。总而言之，h1h11729p在治疗被历史上的流感毒株严重感染的小鼠方面具有强健的效能，并且事实上，其显示出比在感染后48小时施用奥司他韦具有更高的效能。而且，当与奥司他韦联合施用时，h1h11729p显示出叠加的效能。表16：研究1的结果：在48hrp.i.施用单次剂量的h1h11729p比在48hrp.i.施用奥司他韦在治疗小鼠甲型流感病毒严重感染中显示出了更高的效能表17：研究2的结果：单剂量h1h11729p与奥司他韦在72hrp.i.联用以治疗小鼠中的严重流感时，观察到了叠加的效能。当前第1页12