一种b族链球菌鉴别培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种微生物培养基，尤其设及一种站矣链球菌选择性培养基。
【背景技术】
[0002] B族链球菌(GBS )，又称B群链球菌或无乳链球菌，属于革兰氏阳性菌，是栖息在人 体胃肠道和下生殖道的正常菌群，从20世纪70年代W来，GBS逐渐成为新生儿严重感染性疾 病的重要致病菌之一，已经引起全世界的广泛关注。GBS感染是引起围产期胎儿宫内感染、 新生儿肺炎、败血症、脑膜炎等严重感染的主要原因。可引发早产，胎儿发育迟缓(低出生体 重儿）、胎膜早破及晚期流产等严重后果，在围产期医学中占重要地位。
[0003] 目前，在对孕产妇是否携带GBS进行筛查的时候主要有两种方法，第一种是使用检 测试剂盒进行快速诊断。但是通过检测试剂盒进行快速诊断对操作的要求和成本均比较 高，限制了检测试剂盒的推广应用。第二种，也就是目前最常见的方法，是利用培养基对取 得的样品进行培养，然后通过直接观察法、革兰氏染色法、触酶试验、协同溶血(CAMP)试验 等判断是否感染GBS。但是孕妇生殖道和直肠有多种细菌存在，而目前的培养基不能有效抑 审化BSW外的其他菌的生长，运些细菌生长速度快，常使GBS菌生长受到抑制，造成GBS菌漏 检。为此，临床检测中使用现有的站矣链球菌鉴别培养基进行站矣链球菌鉴定时，需要先对取 样的菌株纯化增殖培养，然后才能进行鉴定，运样程序繁琐，且浪费时间和人力。目前临床 使用的梅里埃公司的站矣链球菌筛查培养基，其主要采用的是底物显色的方法，成本较高， 价格贵。
【发明内容】
[0004] 为了克服现有技术存在的问题，本发明提供了一种能够快速鉴定B族链球菌的培 养基。
[0005] 本发明所采用的技术方案为：
[0006] -种B族链球菌鉴别培养基，每IOOML水中包括W下质量的成分：月示蛋白腺3g， K也P〇4〇. 2g，化出P〇4〇. 4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑-屯、浸萃液态培养基0.2g， 马血清2g。
[0007] 进一步地，所述抗生素包括庆大霉素、糞晚酬酸和两性霉素 B。
[000引进一步地，所述抗生素在培养基中的的含量分别为:庆大霉素:8 X l0-4g/ml，糞晚 酬酸：10 X l(T4g/ml，两性霉素 B: 2 X l(T4g/ml。
[0009] 进一步地，所述粗制米粉为将糖米粉碎后制成。
[0010] 进一步地，所述培养基的制备方法包括W下步骤：（1)将配方量的粗制米粉、月示 蛋白腺、K也P〇4、化出P〇4、琼脂和脑-屯、浸萃液态培养基溶于IOOmL单蒸水，用lOmol/L氨氧化 钢矫正PH到7.2±0.2;(2)高溫高压灭菌、待冷却到60°C左右时移入生物安全柜中；（3)加入 抗生素和马血清摇匀，然后将上述液体培养基倾入无菌平皿内，凝固后包装，于4°C保存。
[0011] 本发明的有益效果为：
[0012] 本发明的站矣链球菌鉴别培养基使用粗制米粉而非市售深加工米粉。研究发现，粗 制米粉才能使B族链球菌显色。本发明的培养基可W利用采样的待检拭子直接进行划线检 测，相对现有技术需对纯种菌株进行鉴定，本发明的培养基提高了 B群链球菌的检测正确率 和检测效率，且本发明使用方法操作简单，不需要特殊的仪器设备。适合在医院，尤其是基 层医疗机构应用，方便了样品的采样工作，同时保证了 B群链球菌的检出效果。
[0013] 为了更好地理解和实施，下面详细说明本发明。
【具体实施方式】
[0014] 【实施例1化族链球菌鉴别培养基的配制
[0015] 本实施例中的站矣链球菌鉴别培养基，每IOOML水中包括W下质量的成分：月示蛋 白腺3g，K出P〇4〇. 2g，Na2HP〇4〇. 4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑-屯、浸萃液态培养 基0.2g，马血清2g。
[0016] 其配制方法为:在锥形瓶中将配方量的粗制米粉、月示蛋白腺、K此P〇4、Na抽P〇4、琼 脂和脑-屯、浸萃液态培养基溶于IOOmL单蒸水，用lOmol/L氨氧化钢矫正PH到7.2±0.2;。包 扎好放12rC高压锅灭菌20min，待冷却到60°C左右时将锥形瓶移入生物安全柜中。加入抗 生素和马血清摇匀，然后将上述液体培养基倾入内径9cm的无菌平皿内，培养基高度约为 0.5cm。待凝固后包装，于4 °C保存。
[0017] 【实施例2化族链球菌鉴另赠养基的应用
[0018] 试验步骤:待检拭子采用分区划线法接种该培养基。第一区直接用拭子进行划线， 第二、=、四区用接种环进行划线;37°C培养18h~24h观察结果。
[0019] 结果判定:典型B族链球菌为澄色菌落，检测时平板上有典型菌落即可报告检出B 族链球菌。
[0020] B族链球菌快速鉴定培养基结果判定表
[0021]
[0022] 【实施例3化族链球菌鉴别培养基对其他菌类的抑制作用
[0023] 在本发明的培养基平板上接种各种类的细菌和真菌，观察其生长情况如下 「00241
[0025] 菌种未生长用(-)表示;菌种有生长用(+ )表示
[0026] 其中，丙型链球菌生长，菌落显白色，不影响观察结果。
[0027] 【实施例4】临床试验
[0028] 于南华大学附属第一医院随机选择19-65岁女性183例，用普通棉拭子采集生殖道 的分泌物标本，分别使用本发明的B族链球菌鉴别培养基和梅里埃(上海)生物制品有限公 司生产的站矣链球菌筛查培养基进行检测，对于结果不同组，再使用第=方试剂进行检测。
[0029] 检测结果，本发明检出率19.13% (35/183)，对比试剂检测率为21.88% (40/183) 的站矣链球菌鉴别培养基检出率92%，假阳性率0%。
[0030] 本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变形不脱离本发明 的精神和范围，倘若运些改动和变形属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发 明也意图包含运些改动和变形。
【主权项】
1. 一种B族链球菌鉴别培养基，其特征在于，每100ML水中包括以下质量的成分：月示蛋 白胨3g，KH2P〇4 0.2g，Na2HP〇4 0.4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑-心浸萃液态培 养基0.2g，马血清2g。2. 根据权利要求1所述的B族链球菌鉴别培养基，其特征在于，所述抗生素包括庆大霉 素、萘啶酮酸和两性霉素 B。3. 权利要求2所述的的B族链球菌鉴别培养基，其特征在于，所述抗生素在培养基中的 的含量分别为:庆大霉素:8 X l(T4g/ml，萘啶酮酸：10 X l(T4g/ml，两性霉素 B: 2 X l(T4g/ml。4. 根据权利要求1所述的B族链球菌鉴别培养基，其特征在于，所述粗制米粉为将糙米 粉碎后制成。5. 权利要求1所述的B族链球菌鉴别培养基的制备方法，包括以下步骤：（1)将配方量的 粗制米粉、月示蛋白胨、KH2P〇4、Na 2HP〇4、琼脂和脑-心浸萃液态培养基溶于100mL单蒸水，用 10m〇l/L氢氧化钠矫正PH到7.2 ± 0.2; (2)高温高压灭菌、待冷却到60°C左右时移入生物安 全柜中；（3)加入抗生素和马血清摇匀，然后将上述液体培养基倾入无菌平皿内，凝固后包 装，于4°C保存。
【专利摘要】一种B族链球菌鉴别培养基，每100ML水中包括以下质量的成分：月示蛋白胨3g，KH2PO40.2g，Na2HPO40.4g，粗制米粉4g，琼脂1.3g，抗生素0.2g，脑-心浸萃液态培养基0.2g，马血清2g。本发明的培养基可以利用采样的待检拭子直接进行划线检测，相对现有技术需对纯种菌株进行鉴定，本发明的培养基提高了B群链球菌的检测正确率和检测效率，且本发明使用方法操作简单，不需要特殊的仪器设备。适合在医院，尤其是基层医疗机构应用，方便了样品的采样工作，同时保证了B群链球菌的检出效果。
【IPC分类】C12R1/46, C12Q1/14
【公开号】CN105713955
【申请号】CN201610178973
【发明人】赖小敏, 李有生
【申请人】广州瑞辉生物科技股份有限公司