大肠杆菌工程菌及其催化马来酸合成富马酸的方法与流程

技术特征：

1.一种可高产富马酸的大肠杆菌工程菌，其特征在于：所述工程菌通过敲除大肠杆菌的延胡索酸酶编码基因，并在所得的重组菌株中表达马来酸顺反异构酶基因得到。

2.根据权利要求1所述的可高产富马酸的大肠杆菌工程菌，其特征在于：所述延胡索酸酶编码基因为fumA和fumC。

3.根据权利要求1所述的可高产富马酸的大肠杆菌工程菌，其特征在于：所述马来酸顺反异构酶基因来源于粘质沙雷氏菌。

4.根据权利要求1所述的可高产富马酸的大肠杆菌工程菌，其特征在于：所述大肠杆菌为Escherichia coli BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、JM109、DH5α、TOP10、HB101、DH10B或野生型大肠杆菌。

5.根据权利要求1所述的可高产富马酸的大肠杆菌工程菌，其特征在于：所述马来酸顺反异构酶基因的表达载体为pET24a系列表达载体、pUC19系列载体、pBR322系列载体、pKK223-3系列载体、pPL451系列表达载体或pBV220载体。

6.一种如权利要求1所述的大肠杆菌工程菌催化马来酸合成富马酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

对大肠杆菌工程菌进行发酵培养，当OD₆₀₀达到40-80时对所述大肠杆菌工程菌进行高密度诱导表达，将得到的发酵液生化催化马来酸，得到富马酸。

7.根据权利要求6所述的大肠杆菌工程菌催化马来酸合成富马酸的方法，其特征在于：使用乳糖作为诱导剂进行高密度诱导表达。

8.根据权利要求6或7所述的大肠杆菌工程菌催化马来酸合成富马酸的方法，其特征在于，高密度诱导表达的条件为：温度为25℃-37℃，乳糖流加速度为0.15-0.25g/L h，pH 7.0-7.2。

9.根据权利要求6所述的大肠杆菌工程菌催化马来酸合成富马酸的方法，其特征在于，高密度诱导表达的条件为：溶氧20％-40％，通气量1.25-2vvm，比生长速率μ为0.15-0.25 1/h。

10.根据权利要求6所述的大肠杆菌工程菌催化马来酸合成富马酸的方法，其特征在于：发酵过程采用指数流加补料，指数流加补料使用的补料培养基包括以下重量的各组分：甘油200-600g/L，硫酸镁5-8g/L，蛋白胨2-4g/L，酵母膏2-4g/L。