本发明涉及病毒防治领域，特别是指一种烟草抗黄瓜花叶病毒病的抗病性强弱的鉴定方法。
背景技术：
黄瓜花叶病毒(CMV)是一种非常严重的病毒病害，病毒可以到达除生长点以外的任何部位。黄瓜花叶病毒是寄主范围最多、分布最广、最具经济重要性的植物病毒之一。全世界所有烟草种植区均有该病毒的分布和危害，因此，如何有效的挑选出抗黄瓜花叶病毒病的抗病性强的烟草，是降低该病毒危害的重要方法，而在烟草抗黄瓜花叶病毒病的抗病性强弱的鉴定方法上，还没有非常统一有效的方法。
技术实现要素：
本发明提出一种烟草抗黄瓜花叶病毒病的抗病性强弱的鉴定方法，实现对烟草抗TMV抗病性强弱的鉴定，简单准确，便于推广使用。
本发明的技术方案是这样实现的：烟草抗黄瓜花叶病毒病的抗病性强弱的鉴定方法，包括以下步骤：
步骤1：制备接种体；
步骤2：接种病毒；
步骤3：调查与鉴定；
其中，步骤1中，接种体选用当地株系，接种到三生-NN上繁殖保存，为防止保存期病毒的致病性退化，在使用前15d转接到三生-NN烟上复壮一次，备用。
进一步，步骤2中，接种病毒的方法，采用在烟苗4-5片真叶时进行汁液摩擦接种，在第一片真叶上撒400-500目的金刚砂，然后用棉花蘸取病毒汁液，在叶片上摩擦；或采用喷枪接种，接种前在病毒汁液中加入1％金刚砂，高压喷射，喷口距接种物20cm，每株喷接0.5s；接种7d后，如未见发表则再回接1次，其中的金刚砂便于进行感染。
进一步，为保证鉴定的准确性，设3次重复，随机排列，每次重复不少于15株烟苗，烟株保持在25-28℃下生产，设置Ti245和铁把子为抗病对照、G28和亮黄烟为感病对照。
进一步，步骤3中，调查安排在接种后第7d、14d、21d全部烟株发病情况。
进一步，病害严重程度分级按照以下分级方式进行：
以株为单位分级：
0级：全株无病；
1级：心叶脉明或轻微花叶，病株无明显矮化；
3级：三分之一叶片花叶但不变形，或病株矮化为正常株高的四分之三以上；
5级：三分之一至二分之一叶片花叶，或少数叶片变形，或主脉变黑，或病株矮化为正常株高的三分之二或四分之三；
7级：二分之一至三分之二叶片花叶，或变形或主侧脉坏死，或病株矮化为正常株高的二分之一至三分之二；
9级：全株叶片花叶，严重变形或坏死，或病株矮化为正常株高的二分之一以上。
进一步，步骤三中，各次调查数据中以感病对照品种发病最先达到感病的调查数据为依据进行抗病性评价，感病对照的病情指数不低于60时，方可认为实验及评价有效。
进一步，品种抗病性标准如下：
高抗或免疫：病情指数为0；
抗病：病情指数为0.1-20；
中抗：病情指数为20.1-40；
中感：病情指数为40.1-60；
感病：病情指数为60.1-80；
高感：病情指数为80.1-100。
本发明的所述烟草抗黄瓜花叶病毒病的抗病性强弱的鉴定方法，结合当地的气候、植株等情况，进行植株抗TMV抗病性的鉴定，简单方便，适于推广。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
实施地区为广东
步骤1：制备接种体；
接种体选用当地优势株系(或者根据实验需要进行选取)，接种到“三生-NN”烟(Nicotiana tabacum var samsun NN))上繁殖保存，为防止保存期病毒的致病性退化，并在使用前15d转接到“三生-NN”烟上复壮一次，备用。
步骤2：接种病毒；
采用在烟苗4-5片真叶时进行汁液摩擦接种，在第一片真叶上撒400-500目的金刚砂，然后用棉花蘸取病毒汁液，在叶片上摩擦；烟苗数量较大的，则可以采用喷枪接种，接种前在病毒汁液中加入1％金刚砂，高压喷射(压力为68947.6-206842.8Pa)，喷口距接种物20cm，每株喷接0.5s；接种7d后，如未见发表则再回接1次，其中的金刚砂便于进行感染。
步骤3：调查与鉴定；
调查安排在接种后第7d、14d、21d全部烟株发病情况。
结果鉴定与抗病性评价。
实施例2
方法同实施例1，区别在于实施地区为黑龙江。
实施例3
方法同实施例1，区别在于实施地区为山东。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。