低苦味阿胶低聚肽及其制备方法与应用与流程

本发明属于食品生物
技术领域：
，涉及一种低苦味阿胶低聚肽及其制备方法与应用。
背景技术：
：阿胶作为我国传统滋补类良药，已经有2000多年的生产和食用历史，在我国多部中药名著中均有记载，被誉为“补血圣药”、“滋补国宝”等，与人参、鹿茸一起誉为“中药三宝”。阿胶含有丰富的蛋白质、氨基酸和矿物质，具有明显的补气养血、滋阴润燥、化痰清肺、调经安胎、改善睡眠、强筋壮骨、延缓衰老、美容养颜、增强免疫力、提高耐缺氧、抗疲劳、抗休克、升高白细胞、抑制肿瘤等多重功效。但是阿胶中的胶原蛋白分子量较大(几万到十几万)，对于脾胃虚弱的人群，吸收较难，导致阿胶的功效无法得到充分发挥，通过酶水解技术得到阿胶低聚肽可以大幅提高产品的生物利用度，但是在实际生产过程中发现阿胶低聚肽产品具有较强的苦味，严重影响了消费者对产品的接受度。技术实现要素：本发明的目的是提供一种低苦味阿胶低聚肽及其制备方法与应用。本发明提供的制备阿胶低聚肽的方法，包括如下步骤：将阿胶酶解产生的酶解液进行柱层析，收集洗脱液得到所述阿胶低聚肽。上述方法的柱层析步骤中，所用洗脱剂为乙醇的水溶液；所述乙醇的水溶液的体积百分浓度具体为15-30％。所用柱层析填料为大孔吸附树脂；所述大孔吸附树脂具体为AB-8型、D101型或DA201-C型大孔吸附树脂；洗脱剂的用量为2-4倍的柱体积。所述柱层析步骤所用柱层析柱可按照各种常规方法在柱层析步骤之前以及在柱层析完成之后对其进行活化。如可按照如下方法进行活化：将柱层析柱用95％乙醇、水、2％HCl、水、2％NaOH、水依次进行洗脱，使色谱柱进行活化，活化后浸泡在95％乙醇中进行保存。所述酶解液为将阿胶利用复合蛋白酶酶解而得，具体为将阿胶用水配置成固形物的质量百分浓度为20-50％的溶液后，再利用复合蛋白酶酶解而得。所述复合蛋白酶选自菠萝蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶中的至少一种。所述复合蛋白酶所用酶不止一种时，所用酶之间的酶量比具体可为等比例；更具体的，所述复合蛋白酶可为由木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶组成的复合蛋白酶a或由木瓜蛋白酶与胃蛋白酶组成的复合蛋白酶b；其中，所述复合蛋白酶a和复合蛋白酶b中，各个酶之间的酶量比为等比例，也即：所述复合蛋白酶a中，木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶的酶量比为1:1:1:1；所述复合蛋白酶b中，木瓜蛋白酶与胃蛋白酶的酶量比为1:1；所述酶量均以U计；所述酶解步骤中，温度为30℃-55℃；pH值为5-8；时间为0.5-2h；所述菠萝蛋白酶的酶活为50-120万U/g，具体可为80万U/g；所述中性蛋白酶的酶活为5-20万U/g，具体可为15万U/g；所述胃蛋白酶的酶活为10-50万U/g；所述木瓜蛋白酶的酶活为40-100万U/g；所述阿胶与复合蛋白酶的用量比为1g：2500-5500U。所述方法还包括如下步骤：在所述酶解步骤之后，所述柱层析步骤之前，将所述酶解液灭酶；具体的，所述灭酶步骤中，温度为95-105℃，具体为100℃；时间为3-10min。另外，在所述灭酶步骤之后，所述柱层析步骤之前，还可对灭酶后的酶解液进行过滤，以除去酶解液中的颗粒性杂质。过滤的方式可为各种常用的过滤方法，如可通过板框压滤机进行过滤。所述方法还包括如下步骤：在所述柱层析步骤之后，将所得洗脱液进行浓缩和干燥；具体的，所述浓缩步骤中，浓缩的方式为真空浓缩；温度为75-95℃；浓缩后固形物的质量百分含量不小于65％；所述干燥步骤中，干燥的方式为真空干燥或喷雾干燥；干燥后产品中的水分含量不大于13％。上述方法中，所用阿胶为不含辅料的阿胶胶汁或阿胶块。另外，按照上述方法制备得到的阿胶低聚肽及含有该阿胶低聚肽的产品，也属于本发明的保护范围。其中，所述阿胶低聚肽的分子量具体为200-3000Da；所述产品具体为食品或保健品。本发明基于普通阿胶中的胶原蛋白分子量较大(几万到十几万)，对于脾胃虚弱的人群，吸收较难，导致阿胶的功效无法得到充分发挥，通过酶水解技术得到阿胶低聚肽可以大幅提高产品的生物利用度，但是又存在产品具有较强的苦味，严重影响了消费者对产品的接受度等问题的基础上，通过大量的多年研究和探索，采用复合酶酶解工艺并结合大孔吸附树脂柱层析分离去除阿胶低聚肽中苦味极强的成分，制得低苦味阿胶低聚肽，从而在提高产品的生物利用度的同时，显著降低了阿胶低聚肽的苦味，提高了消费者对产品的接受度，对阿胶低聚肽产品的开发具有十分重要的意义。本发明的优点在于，本发明通过应用复合蛋白酶对阿胶进行酶解，并将酶解液进行柱层析后，得到分子量主要分布介于200-3000Da的低苦味阿胶低聚肽，从而在提高产品的生物利用度的同时，显著降低了阿胶低聚肽的苦味，提高了消费者对产品的接受度，对阿胶低聚肽产品的开发具有十分重要的意义。附图说明图1为标准样品分子量与保留时间的关系图。图2为实施例1和2所得低苦味阿胶低聚肽的色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。本发明具体实施例中所涉及的实验材料来源：1、阿胶购置东阿阿胶股份有限公司；2、所用中性蛋白酶的酶活为15万U/g；菠萝蛋白酶的酶活为80万U/g，均购自广西南宁庞博生物工程有限公司；木瓜蛋白酶的酶活为100万U/g，胃蛋白酶的酶活为50万U/g，均购自山海柯原实业有限公司。实施例1、(1)将不含辅料的阿胶块溶解后配置成固形物的质量百分浓度为20％，温度30℃，pH控制在5。(2)将包括木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶按照酶量(以U计)等量混合得到复合蛋白酶后，按阿胶与复合蛋白酶的用量比为1g：2500U的比例加入阿胶胶汁中进行水解2h后100℃保持3-10min灭酶，得到阿胶低聚肽酶解液。(3)将阿胶低聚肽酶解液通过板框压滤机进行过滤，除去酶解液中的颗粒性杂质。(4)将过滤后的阿胶低聚肽酶解液应用DA201-C型大孔吸附树脂进行吸附和洗脱，洗脱溶剂为体积百分浓度为15％的乙醇水溶液，洗脱剂用量为2倍柱体积，收集洗脱液即得到低苦味阿胶低聚肽组分。(5)低苦味阿胶低聚肽组分通过真空浓缩装置进行浓缩，所用温度为75℃，浓缩至固形物含量≥65％。(6)浓缩后低苦味阿胶低聚肽组分采用真空干燥设备进行干燥，使产品最终水分含量≤13％，粉碎后得到本发明提供的低苦味阿胶低聚肽产品。实施例2、(1)将不含辅料的阿胶胶汁或阿胶块溶解后配置成固形物浓度50％，温度55℃，pH控制在8。(2)将木瓜蛋白酶与胃蛋白酶按照酶量(以U计)等量混合得到复合蛋白酶后，按照阿胶与复合蛋白酶的用量比为1g：5500U，加入阿胶胶汁中进行水解2h后100℃保持10min灭酶，得到阿胶低聚肽酶解液。(3)将阿胶低聚肽酶解液通过板框压滤机进行过滤，除去酶解液中的颗粒性杂质。(4)将过滤后的阿胶低聚肽酶解液应用AB-8型大孔吸附树脂进行吸附和洗脱，洗脱溶剂为体积百分浓度为30％的乙醇水溶液，洗脱剂用量为4倍柱体积，收集洗脱液即得到低苦味阿胶低聚肽组分。(5)低苦味阿胶低聚肽组分通过真空浓缩装置进行浓缩，所用温度为95℃，浓缩至固形物含量≥65％。(6)浓缩后低苦味阿胶低聚肽组分采用真空干燥或喷雾干燥设备进行干燥，使产品最终水分含量≤13％，粉碎后得到本发明提供的低苦味阿胶低聚肽产品。实施例3、低苦味阿胶低聚肽的分子量测定对实施例1和2所得低苦味阿胶低聚肽产品的分子量分布按照GB/T22492-2008大豆肽粉中肽相对分子量的分布的测定方法进行测定。具体方法如下：色谱柱：TSKgel2000SWXL，流动相：乙腈：水：三氟乙酸＝45:55:0.1(v/v/v)，检测波长：220nm，流速：0.5ml/min，柱温30℃，进样量：10μL，检测时间：30min，分别以乙胺酸-乙胺酸-乙胺酸(Mw＝189)、乙胺酸-乙胺酸-酪氨酸-精氨酸(Mw＝451)、杆菌酶(Mw＝1450)、抑肽酶(Mw＝6500)、细胞色素C(Mw＝12500)5种样品为标准品，测定各自标准品的出峰时间计算相对分子质量。图1为标准样品分子量与保留时间的关系图。图2为实施例1和2所得低苦味阿胶低聚肽的色谱图。由图可知，实施例1和2所得低苦味阿胶低聚肽的分子量为200-3000Da。实施例4、低苦味阿胶低聚肽的苦味评价对实施例1和2所得阿胶低聚肽的苦味评价采用苦味值法和阈值法进行评价：选取20名评价者(男、女各10名)，将不同实施例的阿胶低聚肽配置成同样浓度的溶液，评定员用蒸馏水漱口之后，取待评定液10ml置于口中，10s后吐出，描述样品的苦味强弱及其对应的评分值，例如：0.无苦味，2.略有苦味，4.苦味较弱，6.苦味一般，8.苦味较重，10.苦味极重。根据此评分标准，对实施例1和2所得阿胶低聚肽的苦味进行评分，用最后得出的平均值表示苦味程度。阈值法是将不同实施例的阿胶低聚肽配置成不同浓度溶液，确定刚刚能够感觉出苦味的阿胶低聚肽的浓度即为其苦味阈值浓度。所得结果如表1所示。表1、低苦味阿胶低聚肽苦味评价结果评价指标普通阿胶低聚肽实施例1实施例2苦味值822阈值浓度1.0％1.8％1.9％表1中，普通阿胶低聚肽为东阿阿胶有限公司生产的真颜牌小分子阿胶。由表1可知，本发明实施例1和实施例2制备的阿胶低聚肽相对于普通阿胶低聚肽，在同等浓度下苦味值有感官评价得分8(苦味较重)降低至感官评价得分2(略有苦味)；而且对本发明实施例1和实施例2制备的阿胶低聚肽的苦味阈值浓度均比普通阿胶低聚肽高，说明感知其苦味需要更高的浓度。当前第1页1 2 3