本发明涉及灰树花多糖提取工艺，特别是一种亚临界水提取灰树花多糖的方法。
背景技术：
灰树花(舞茸)多糖是灰树花中的一种提取物，由葡聚糖、葡萄糖、木糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、丰乳糖及少量蛋白质的异聚糖复合物组成。灰树花多糖中含有一种蛋白多糖，中文名叫舞茸地复仙（舞茸D-fraction）它的蛋白和多糖的比例是7：3平均分子量是100万。多糖部分由具有β-(1-3)侧链的β-(1-6)葡聚糖和具有β-(1-6)侧链的β-(1-3)葡聚糖组成。多糖成分中只有这种舞茸地复仙最有抗癌防癌的作用。
近年来，研究人员采用酶解提取法、超声波提取法、微波提取法和亚临界水萃取法等新兴技术，都在一定程度上提高了灰树花多糖的提取率。酶解提取法有着多糖提取率高、反应条件温和、对多糖结构破坏小的优点，但由于酶的价格较贵，生产成本相对较高，不适合应用于大批量的工业生产。超声波提取法和微波提取法可以提高多糖的提取率，缩短提取时间，但有时会造成多糖提取物的组分更加复杂，给后续的分离纯化工序带来一定的难度。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明公开了一种亚临界水提取灰树花多糖的方法。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是:
一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括以下步骤：
（1）烘干：取灰树花子实体，对其进行2次烘干，第一次烘干温度控制在70~80℃，烘干时长为5~8min，去除灰树花子实体中大部分水分，第二次烘干温度控制在55~65℃，烘干时长为10~20min，进一步缓慢去除灰树花子实体中剩余水分，直至灰树花子实体内水分降至5%~8%，得到灰树花子实体干品；
（2）粉碎：使用高速万能粉碎机对灰树花子实体干品进行粉碎处理，过45~90μm筛，得到灰树花子实体干粉；
（3）亚临界萃取：将灰树花子实体干粉和去离子水，按照料液比1:15~23 Kg/L，投入亚临界萃取釜，调整临界压力至14~21Mpa，液体温度100~155℃，提取20~60min，得到灰树花子实体萃取液；
（4）粗滤、保温：萃取完成后，打开萃取罐出液阀，将灰树花子实体萃取液过滤，并送入保温罐中保温，保温温度设定50~60℃；
（5）离心：将步骤（4）中粗滤并保温的灰树花子实体萃取液送入离心机中，并以3000~5000r/min离心10~15分钟，得上清液和一次离心沉淀物；
（6）浓缩：将上清液投入恒温水浴锅进行蒸发浓缩，恒温水浴锅的温度控制在55~70℃，直至上清液体积浓缩至原先的1/2，得到浓缩上清液；
（7）纯化：以Sevag法将正丁醇、氯仿混合溶液与浓缩上清液以5:1的体积比进行去蛋白3次，得纯化上清液；
（8）脱色：对纯化上清液进行水浴脱色，水浴温度控制在45~50℃，时长为4h，前2h以过氧化氢氧化法脱色，后2h以活性炭吸附法脱色；
（9）沉淀、干燥：向步骤（7）中得到的脱色后的纯化上清液中加入无水乙醇，静置10~12h，随后以5000r/min离心10~15分钟，得沉淀物，沉淀物即为灰树花多糖半成品；
（10）再洗涤、干燥：以无水乙醇对灰树花多糖半成品进行洗涤，洗涤2~3次，取沉淀物，干燥，得到灰树花多糖成品；
（11）二次提取：取一次离心沉淀物与去离子水以1:30~40的料液比（g/ml）充分混合，进行超声波破壁，得到灰树花子实体二次溶液，待灰树花子实体二次溶液累积足够，送入亚临界萃取釜，随后重复步骤（3）~步骤（10），得到灰树花多糖成品和二次离心沉淀物，二次离心沉淀物不再用于灰树花多糖的多次提取。
如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，所述正丁醇、氯仿混合溶液中，正丁醇和氯仿的体积比为1:4或1:5。
如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，步骤（11）中进行超声波破壁时，超声波功率设定于50~75W，破壁时长和温度分别为10~15min和45~55℃。
如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，步骤（6）中所述的恒温水浴锅为中温循环水浴锅，其型号为C3000，购置于西安夏溪电子科技有限公司。
本发明的有益效果为：
本发明公开的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括烘干、粉碎、亚临界萃取、粗滤、保温、离心、浓缩、纯化、脱色、沉淀、干燥、再洗涤、干燥、二次提取等步骤，利用亚临界水具有良好的渗透与溶解能力，使细胞壁多糖与亚临界水充分接触和溶出，以水浴法浓缩，并结合Sevag法，对灰树花多糖进行纯化，同时回收一次离心沉淀物，用于灰树花多糖在提取，不仅提高了灰树花多糖的提取量，也大大降低了原料浪费，与现有其他提取方法相比，本发明的设备成本和运行成本都相对较低，灰树花多糖的提取效率和纯度都有显著提高。
具体实施方式
实施例一
一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括以下步骤：
（1）烘干：取灰树花子实体，对其进行2次烘干，第一次烘干温度控制在75℃，烘干时长为6min，去除灰树花子实体中大部分水分，第二次烘干温度控制在57℃，烘干时长为13min，进一步缓慢去除灰树花子实体中剩余水分，直至灰树花子实体内水分降至5%~8%，得到灰树花子实体干品；
（2）粉碎：使用高速万能粉碎机对灰树花子实体干品进行粉碎处理，过55筛，得到灰树花子实体干粉；
（3）亚临界萃取：将灰树花子实体干粉和去离子水，按照料液比1:22 Kg/L，投入亚临界萃取釜，调整临界压力至18Mpa，液体温度122℃，提取35min，得到灰树花子实体萃取液；
（4）粗滤、保温：萃取完成后，打开萃取罐出液阀，将灰树花子实体萃取液过滤，并送入保温罐中保温，保温温度设定54℃；
（5）离心：将步骤（4）中粗滤并保温的灰树花子实体萃取液送入离心机中，并以4200r/min离心10~15分钟，得上清液和一次离心沉淀物；
（6）浓缩：将上清液投入恒温水浴锅进行蒸发浓缩，恒温水浴锅的温度控制在62℃，直至上清液体积浓缩至原先的1/2，得到浓缩上清液；
（7）纯化：以Sevag法将正丁醇、氯仿混合溶液与浓缩上清液以5:1的体积比进行去蛋白3次，得纯化上清液；
（8）脱色：对纯化上清液进行水浴脱色，水浴温度控制在47℃，时长为4h，前2h以过氧化氢氧化法脱色，后2h以活性炭吸附法脱色；
（9）沉淀、干燥：向步骤（7）中得到的脱色后的纯化上清液中加入无水乙醇，静置11h，随后以5000r/min离心12分钟，得沉淀物，沉淀物即为灰树花多糖半成品；
（10）再洗涤、干燥：以无水乙醇对灰树花多糖半成品进行洗涤，洗涤2次，取沉淀物，干燥，得到灰树花多糖成品；
（11）二次提取：取一次离心沉淀物与去离子水以1:36的料液比（g/ml）充分混合，进行超声波破壁，得到灰树花子实体二次溶液，待灰树花子实体二次溶液累积足够，送入亚临界萃取釜，随后重复步骤（3）~步骤（10），得到灰树花多糖成品和二次离心沉淀物，二次离心沉淀物不再用于灰树花多糖的多次提取。
如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，所述正丁醇、氯仿混合溶液中，正丁醇和氯仿的体积比为1:4。
如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，步骤（11）中进行超声波破壁时，超声波功率设定于65W，破壁时长和温度分别为12min和52℃。
如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，步骤（6）中所述的恒温水浴锅为中温循环水浴锅，其型号为C3000，购置于西安夏溪电子科技有限公司。
实施例二
一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，包括以下步骤：
（1）烘干：取灰树花子实体，对其进行2次烘干，第一次烘干温度控制在76℃，烘干时长为6min，去除灰树花子实体中大部分水分，第二次烘干温度控制在61℃，烘干时长为14min，进一步缓慢去除灰树花子实体中剩余水分，直至灰树花子实体内水分降至5%~8%，得到灰树花子实体干品；
（2）粉碎：使用高速万能粉碎机对灰树花子实体干品进行粉碎处理，过45~90μm筛，得到灰树花子实体干粉；
（3）亚临界萃取：将灰树花子实体干粉和去离子水，按照料液比1:19 Kg/L，投入亚临界萃取釜，调整临界压力至17Mpa，液体温度110℃，提取25min，得到灰树花子实体萃取液；
（4）粗滤、保温：萃取完成后，打开萃取罐出液阀，将灰树花子实体萃取液过滤，并送入保温罐中保温，保温温度设定55℃；
（5）离心：将步骤（4）中粗滤并保温的灰树花子实体萃取液送入离心机中，并以3800r/min离心12分钟，得上清液和一次离心沉淀物；
（6）浓缩：将上清液投入恒温水浴锅进行蒸发浓缩，恒温水浴锅的温度控制在62℃，直至上清液体积浓缩至原先的1/2，得到浓缩上清液；
（7）纯化：以Sevag法将正丁醇、氯仿混合溶液与浓缩上清液以5:1的体积比进行去蛋白3次，得纯化上清液；
（8）脱色：对纯化上清液进行水浴脱色，水浴温度控制在47℃，时长为4h，前2h以过氧化氢氧化法脱色，后2h以活性炭吸附法脱色；
（9）沉淀、干燥：向步骤（7）中得到的脱色后的纯化上清液中加入无水乙醇，静置12h，随后以5000r/min离心12分钟，得沉淀物，沉淀物即为灰树花多糖半成品；
（10）再洗涤、干燥：以无水乙醇对灰树花多糖半成品进行洗涤，洗涤3次，取沉淀物，干燥，得到灰树花多糖成品；
（11）二次提取：取一次离心沉淀物与去离子水以1: 40的料液比（g/ml）充分混合，进行超声波破壁，得到灰树花子实体二次溶液，待灰树花子实体二次溶液累积足够，送入亚临界萃取釜，随后重复步骤（3）~步骤（10），得到灰树花多糖成品和二次离心沉淀物，二次离心沉淀物不再用于灰树花多糖的多次提取。
如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，所述正丁醇、氯仿混合溶液中，正丁醇和氯仿的体积比为1:5。
如权利要求权利要求1所述的一种亚临界水提取灰树花多糖的方法，其特征在于，步骤（11）中进行超声波破壁时，超声波功率设定于59W，破壁时长和温度分别为12min和49℃。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。