一种猪流行性腹泻病毒及其应用的制作方法

文档序号:11145091阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种猪流行性腹泻病毒毒株PEDV-KB2013-4株,其微生物保藏编号为CGMCC No.12663;分类命名:猪流行性腹泻病毒 Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV;保藏时间是2016年08月23日;保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所。

2.权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒毒株PEDV-KB2013-4株在制备预防或治疗猪流行性腹泻病毒感染药物中的应用。

3.权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒毒株PEDV-KB2013-4株在制备预防猪流行性腹泻的疫苗中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述疫苗为灭活疫苗,其由佐剂和灭活的PEDV-KB2013-4株疫苗原液制备而成。

5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述的佐剂由以质量百分含量计的5%角鲨烷、1%油酸、1%吐温60、93% 0.005M柠檬酸钠组成。

6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述疫苗经由以下方法制备得到:

a. 按照常规方法制备Vero细胞,生长液为含10%新生牛血清的DMEM,培养至细胞长成单层时接种PEDV-KB2013-4病毒;

b. 取含量为5×105TCID50/ml 的PEDV-KB2013-4毒株按1%接种长势良好的Vero单层细胞,置37℃吸附1小时,弃去吸附液,补加含有10 μg/mL胰蛋白酶的 DMEM作为维持液继续培养;

c. 接毒后,每日观察2次,记录细胞病变情况,细胞病变达80%以上时收获病毒,将收获的病毒在-80℃,反复冻融三次,6000 rpm离心20 min,收集上清液,即为病毒液;

d. 病毒液经20倍浓缩后,加入0.2%甲醛37℃灭活24小时得到PEDV-KB2013-4疫苗原液;

e. 配制佐剂,所述佐剂的配方含5%角鲨烷、1%油酸、1%吐温60、93% 0.005M柠檬酸钠,其配制方法为:将处方量的吐温80与柠檬酸钠缓冲液搅拌混匀,再加入处方量的油酸、角鲨烷,高压均质机1200bar,进行5个循环,然后收集料液,0.22 μm PTFE膜过滤除菌;

f. 将PEDV-KB2013-4株疫苗原液和佐剂按1.5:1的体积比,无菌环境中,搅拌混合均匀,即制得所述疫苗。

7.权利要求6所制备得到的疫苗用于预防猪流行性腹泻病毒感染,其特征在于,通过肌肉注射的方式使用。

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