本发明涉及肽的一般制备方法，尤其是一种蚕蛹蛋白肽粉的制备方法。
背景技术：
蚕蛹蛋白主要是球蛋白以及少量清蛋白和结合于外表皮的蛋白，蚕蛹蛋白由18种氨基酸组成，其中8种人体必需氨基酸齐全，其总量约为40%，比例适当，是一种营养价值极高的昆虫蛋白资源。我国是世界上最大的蚕丝生产国，全国的蚕丝产量约占世界的4/5。蚕蛹是缫丝过程中的主要副产物，一般每生产1Kg蚕丝就约有0.8Kg的干蚕蛹，因此，全国年产干蚕蛹达30万吨以上。目前，干蚕蛹除了一小部分被用于食用和药用，绝大部分被用于动物饲料，原因是干蚕蛹在缫丝过程中受到强烈的碱、热处理，蚕蛹蛋白会产生变性，并且因其富含脂肪而易产生腐败、分解，造成其无法长期保存。
近年来，多肽越来越受到重视，现代生物学实验已经证明，多肽与蛋白质和氨基酸相比具有更多优点：多肽在肠道中的吸收率最好，一些低肽如二肽、三肽的吸收速度比同一组成的氨基酸快；多肽具有低抗原、促进脂质代谢、降低胆固醇、促进矿物质吸收、降血压、抗氧化、强化机体免疫、促进人体新陈代谢等生理功能作用。因此，如何将蚕蛹制备成有利于人体吸收、附加值高的多肽产品是广大技术人员亟待解决的问题。
技术实现要素：
为了克服现有蚕蛹存在利用率及附加值低的不足，本发明提供一种工艺合理、操作简单可行、生产成本低、环境污染小、蚕蛹分离蛋白粉的得率及纯度高的蚕蛹蛋白肽粉的制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种蚕蛹蛋白肽粉的制备方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：
a、原料选取 选取无污染、无腐败变质的蚕蛹为原料；
b、原料处理 称量步骤a中所选取的蚕蛹，加入蚕蛹质量5～10倍的水浸泡3～4h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入蚕蛹质量3～5倍的水捣碎成浆状，得蚕蛹浆液；
c、溶解、提取 将步骤b中得到的蚕蛹浆液加入蚕蛹质量8～15倍的、浓度为0.5%～1.0%的氢氧化钠溶液，搅拌均匀，升温至75℃～85℃，保持3～5h，提取蚕蛹浆液中的蛋白质，得蚕蛹蛋白提取液；
d、分离 将步骤c中得到的蚕蛹蛋白质提取液降温至50℃以下，离心，收集清液，得蚕蛹蛋白清液；
e、脱脂 将步骤d中得到的蚕蛹蛋白清液继续冷却至30℃以下，分离出蚕蛹蛋白清液中的残余油脂，得脱脂的蚕蛹蛋白液；
f、沉淀、脱盐 将步骤e中得到的脱脂的蚕蛹蛋白液泵入沉淀罐中，用10%的硫酸溶液或盐酸溶液调节脱脂的蚕蛹蛋白液的pH值为4.0～4.2，静置沉淀10h以上，然后放出上清液，沉淀离心分离，得蚕蛹粗分离蛋白；将蚕蛹粗分离蛋白用其质量15～20倍、pH值为4.0～4.2的纯净水洗涤2～3次，同法静置，离心，得脱盐的蚕蛹分离蛋白；
g、水解 将步骤f中得到的脱盐的蚕蛹分离蛋白用纯净水分散成固形物浓度为15%～25%的溶液，用氢氧化钠溶液调节pH值为9.0～9.5，升温至温度50℃～55℃，加入脱盐的蚕蛹分离蛋白质量1%～4%的胰蛋白酶，搅拌保温水解40～60min，然后向水解液中再次加入木瓜蛋白酶，其加入量为脱盐的蚕蛹分离蛋白质量的0.5%～1%，保持温度50℃～55℃，继续酶解2～3h，得蚕蛹蛋白酶解液；
h、脱色 将步骤g中得到的蚕蛹蛋白酶解液加入其质量3%～5%的活性炭，升温料液温度至85℃～95℃，保持10min～15min，然后过滤，得脱色的蚕蛹蛋白酶解过滤液；
i、干燥 将步骤h中得到的脱色的蚕蛹蛋白酶解过滤液用氢氧化钠溶液调节pH值为5.5～6.0，然后送入真空干燥机内，控制干燥条件进行低温真空干燥，得蚕蛹蛋白肽粉。
所述的真空干燥机的干燥条件为：真空度控制为0.01～0.03 kpa，温度控制为35～60℃。
本发明是选取无污染、无腐败变质的蚕蛹为原料，经捣碎后加入氢氧化钠溶液，将原料中的蚕蛹蛋白充分地溶解于氢氧化钠溶液中；再经过滤去除蚕蛹粕残渣等杂质，清液脱脂后送入沉淀罐中加入盐酸溶液或硫酸溶液进行沉淀，沉淀经水洗去除可溶性杂质，以提高其纯度，然后控制条件加入胰蛋白酶进行一次水解，然后加入木瓜蛋白酶，进行两次水解；酶解液加入活性炭进行脱色，低温真空干燥后得蚕蛹蛋白肽粉。经实验测定：采用本发明的工艺制得蚕蛹蛋白肽粉的纯度可达85%以上，蚕蛹蛋白肽粉的提取率为55%以上。本发明工艺合理，操作简单可行，生产成本低，采用蛋白酶进行二次水解对环境污染小，蚕蛹蛋白肽粉的得率及纯度高，大大提高蚕蛹的附加值，为蚕蛹的利用提供了一个新途径。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种蚕蛹蛋白肽粉的制备方法，其经过下列工艺步骤：
a、原料选取 选取无污染、无腐败变质的蚕蛹为原料；
b、原料处理 称量步骤a中所选取的蚕蛹，加入蚕蛹质量8倍的水浸泡3.5h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入蚕蛹质量4倍的水捣碎成浆状，得蚕蛹浆液；
c、溶解、提取 将步骤b中得到的蚕蛹浆液加入蚕蛹质量10倍的、浓度为0.6%的氢氧化钠溶液，搅拌均匀，升温至80℃，保持4h，提取蚕蛹浆液中的蛋白质，得蚕蛹蛋白提取液；
d、分离 将步骤c中得到的蚕蛹蛋白质提取液降温至45℃，用卧式螺旋离心机以3000r/min进行离心处理，分离出蚕蛹蛋白液和蚕蛹粕残渣，收集清液，得蚕蛹蛋白清液；
e、脱脂 将步骤d中得到的蚕蛹蛋白清液继续冷却至25℃，送入蝶式分离机分离出蚕蛹蛋白清液中的残余油脂，得脱脂的蚕蛹蛋白液；
f、沉淀、脱盐 将步骤e中得到的脱脂的蚕蛹蛋白液泵入沉淀罐中，用10%的硫酸溶液调节脱脂的蚕蛹蛋白液的pH值为4.1，静置沉淀12h，然后放出上清液，沉淀用卧式螺旋离心机3000r/min进行离心处理，分离获得蚕蛹粗分离蛋白；将蚕蛹粗分离蛋白用其质量18倍、pH值为4.1的纯净水洗涤3次，同法静置，离心，得脱盐的蚕蛹分离蛋白；
g、水解 将步骤f中得到的脱盐的蚕蛹分离蛋白用纯净水分散成固形物浓度为20%的溶液，用氢氧化钠溶液调节pH值为9.2，升温至温度52℃，加入脱盐的蚕蛹分离蛋白质量3%的胰蛋白酶，搅拌保温水解50min，然后向水解液中再次加入木瓜蛋白酶，其加入量为脱盐的蚕蛹分离蛋白质量的0.8%，保持温度52℃，继续酶解2.5h，得蚕蛹蛋白酶解液；
h、脱色 将步骤g中得到的蚕蛹蛋白酶解液加入其质量4%的活性炭，升温料液温度至90℃，保持12min，然后用真空过滤机过滤，得脱色的蚕蛹蛋白酶解过滤液；
i、干燥 将步骤h中得到的脱色的蚕蛹蛋白酶解过滤液用氢氧化钠溶液调节pH值为5.8，然后送入真空干燥机内，控制真空干燥机的干燥条件为：真空度0.02kpa，温度控制为50℃，进行低温真空干燥，得蚕蛹蛋白肽粉。
本实施例所提供的蚕蛹蛋白肽粉的制备方法，其工艺合理，操作简单可行，生产成本低，采用蛋白酶进行两次水解对环境污染小，蚕蛹蛋白肽粉的得率及纯度高，经测定：制得蚕蛹蛋白肽粉的纯度可达88%，蚕蛹蛋白肽粉的提取率为59%，大大提高蚕蛹的附加值和利用率。
实施例2
一种蚕蛹蛋白肽粉的制备方法，其经过下列工艺步骤：
a、原料选取 选取无污染、无腐败变质的蚕蛹为原料；
b、原料处理 称量步骤a中所选取的蚕蛹，加入蚕蛹质量10倍的水浸泡3h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入蚕蛹质量3倍的水捣碎成浆状，得蚕蛹浆液；
c、溶解、提取 将步骤b中得到的蚕蛹浆液加入蚕蛹质量15倍的、浓度为0.5%的氢氧化钠溶液，搅拌均匀，升温至75℃，保持5h，提取蚕蛹浆液中的蛋白质，得蚕蛹蛋白提取液；
d、分离 将步骤c中得到的蚕蛹蛋白质提取液降温至40℃，用卧式螺旋离心机以4000r/min进行离心处理，分离出蚕蛹蛋白液和蚕蛹粕残渣，收集清液，得蚕蛹蛋白清液；
e、脱脂 将步骤d中得到的蚕蛹蛋白清液继续冷却至20℃，送入蝶式分离机分离出蚕蛹蛋白清液中的残余油脂，得脱脂的蚕蛹蛋白液；
f、沉淀、脱盐 将步骤e中得到的脱脂的蚕蛹蛋白液泵入沉淀罐中，用10%的盐酸溶液调节脱脂的蚕蛹蛋白液的pH值为4.2，静置沉淀10h，然后放出上清液，沉淀用卧式螺旋离心机5000r/min进行离心处理，分离获得蚕蛹粗分离蛋白，得蚕蛹粗分离蛋白；将蚕蛹粗分离蛋白用其质量20倍、pH值为4.2的纯净水洗涤2次，同法静置，离心，得脱盐的蚕蛹分离蛋白；
g、水解 将步骤f中得到的脱盐的蚕蛹分离蛋白用纯净水分散成固形物浓度为15%的溶液，用氢氧化钠溶液调节pH值为9.0，升温至温度50℃，加入脱盐的蚕蛹分离蛋白质量1%的胰蛋白酶，搅拌保温水解60min，然后向水解液中再次加入木瓜蛋白酶，其加入量为脱盐的蚕蛹分离蛋白质量的1%，保持温度50℃，继续酶解2h，得蚕蛹蛋白酶解液；
h、脱色 将步骤g中得到的蚕蛹蛋白酶解液加入其质量5%的活性炭，升温料液温度至85℃，保持15min，然后用真空过滤机过滤，得脱色的蚕蛹蛋白酶解过滤液；
i、干燥将步骤h中得到的脱色的蚕蛹蛋白酶解过滤液用氢氧化钠溶液调节pH值为6.0，然后送入真空干燥机内，控制真空干燥机的干燥条件为：真空度控制为0.03 kpa，温度控制为35℃，进行低温真空干燥，得蚕蛹蛋白肽粉。
本实施例所提供的蚕蛹蛋白肽粉的制备方法，其工艺合理，操作简单可行，生产成本低，采用蛋白酶进行两次水解对环境污染小，蚕蛹蛋白肽粉的得率及纯度高，大大提高蚕蛹的附加值和利用率。
实施例3
一种蚕蛹蛋白肽粉的制备方法，其经过下列工艺步骤：
a、原料选取 选取无污染、无腐败变质的蚕蛹为原料；
b、原料处理 称量步骤a中所选取的蚕蛹，加入蚕蛹质量5倍的水浸泡4h，再采用清水冲洗干净，然后送入组织捣碎机加入蚕蛹质量5倍的水捣碎成浆状，得蚕蛹浆液；
c、溶解、提取 将步骤b中得到的蚕蛹浆液加入蚕蛹质量8倍的、浓度为1.0%的氢氧化钠溶液，搅拌均匀，升温至85℃，保持3h，提取蚕蛹浆液中的蛋白质，得蚕蛹蛋白提取液；
d、分离 将步骤c中得到的蚕蛹蛋白质提取液降温至50℃，用卧式螺旋离心机以3000r/min进行离心处理，分离出蚕蛹蛋白液和蚕蛹粕残渣，收集清液，得蚕蛹蛋白清液；
e、脱脂 将步骤d中得到的蚕蛹蛋白清液继续冷却至30℃，送入蝶式分离机分离出蚕蛹蛋白清液中的残余油脂，得脱脂的蚕蛹蛋白液；
f、沉淀、脱盐 将步骤e中得到的脱脂的蚕蛹蛋白液泵入沉淀罐中，用10%的盐酸溶液调节脱脂的蚕蛹蛋白液的pH值为4.0，静置沉淀15h，然后放出上清液，沉淀用卧式螺旋离心机3500r/min进行离心处理，分离获得蚕蛹粗分离蛋白，得蚕蛹粗分离蛋白；将蚕蛹粗分离蛋白用其质量15倍、pH值为4.0的纯净水洗涤2次，同法静置，离心，得脱盐的蚕蛹分离蛋白；
g、水解 将步骤f中得到的脱盐的蚕蛹分离蛋白用纯净水分散成固形物浓度为25%的溶液，用氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，升温至温度55℃，加入脱盐的蚕蛹分离蛋白质量4%的胰蛋白酶，搅拌保温水解40min，然后向水解液中再次加入木瓜蛋白酶，其加入量为脱盐的蚕蛹分离蛋白质量的0.5%，保持温度55℃，继续酶解3h，得蚕蛹蛋白酶解液；
h、脱色 将步骤g中得到的蚕蛹蛋白酶解液加入其质量3%的活性炭，升温料液温度至95℃，保持10min，然后用真空过滤机过滤，得脱色的蚕蛹蛋白酶解过滤液；
i、干燥 将步骤h中得到的脱色的蚕蛹蛋白酶解过滤液用氢氧化钠溶液调节pH值为5.5，然后送入真空干燥机内，控制真空干燥机的干燥条件为：真空度控制为0.01kpa，温度控制为60℃，进行低温真空干燥，得蚕蛹蛋白肽粉。
本实施例所提供的蚕蛹蛋白肽粉的制备方法，其工艺合理，操作简单可行，生产成本低，采用蛋白酶进行两次水解对环境污染小，蚕蛹蛋白肽粉的得率及纯度高，经测定：制得蚕蛹蛋白肽粉的纯度可达85%，蚕蛹蛋白肽粉的提取率为57%，大大提高蚕蛹的附加值和利用率。