一种厌氧生产脂肽表面活性剂的方法及发酵培养基与流程

文档序号:12167563阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种厌氧生产脂肽表面活性剂的方法,其特征在于:

1)配制含NaNO3为唯一氮源,含蔗糖、甘油或者可溶性淀粉中的一种或二种以上为碳源的发酵培养基;

2)将产脂肽表面活性剂的芽孢杆菌接种于发酵培养基中,厌氧培养,于厌氧发酵液中获得脂肽表面活性剂。

2.按照权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1)的发酵培养基中以NaNO3为唯一氮源,选择蔗糖、甘油或可溶性淀粉中的任何一种或二种以上作为碳源,能够满足一些芽孢杆菌厌氧生产脂肽;

发酵培养基按质量分数为:碳源2-5%,NaNO3 0.1-0.3%,K2HPO4·3H2O 0.3-0.5%,KH2PO4 0.2-0.4%,MgSO4·7H2O 0.03-0.05%,CaCl2 0.01-0.02%,余量为水;pH 6.5-7.0。

3.按照权利要求2所述的方法,其特征在于:选择蔗糖、甘油或可溶性淀粉中的任何一种作为碳源时,它们于发酵培养基中的质量分数为蔗糖2-4%、或甘油3-5%或可溶性淀粉2-4%。

4.按照权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤2)产脂肽表面活性剂的芽孢杆菌接种于发酵培养基中的过程为,

首先将产脂肽表面活性剂的芽孢杆菌接种至LB培养基中培养至对数生长后期,制备种子液;然后将上述种子液接种至含发酵培养基的厌氧培养体系(厌氧培养体系为厌氧瓶或厌氧发酵罐)中,在芽孢杆菌所需的培养温度下厌氧生产脂肽,培养结束后获得含脂肽表面活性剂的厌氧发酵液中。

5.按照权利要求4所述的方法,其特征在于:产脂肽的芽孢杆菌(产脂肽的芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis ATCC39307)的斜面菌种1-2接种环,接种到80-100ml的LB培养基中,在35-37℃、160-200rpm/min下,好氧培养8-12小时,至OD600值为0.5-0.8,即得到培养至对数生长后期的种子液。

6.按照权利要求1或4所述的方法,其特征在于:将产脂肽菌种的种子液接种至发酵培养基的厌氧培养体系(厌氧培养体系为厌氧瓶或厌氧发酵罐)中,在35-39℃下,厌氧培养10-15天,厌氧生产脂肽表面活性剂;种子液与发酵培养基的体积比为3-6:100。

7.按照权利要求1所述的方法,其特征在于:

产脂肽的芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis ATCC39307;将产脂肽表面活性剂的芽孢杆菌接种至发酵培养基中,在35-39℃下,厌氧培养10-15天,厌氧生产脂肽表面活性剂。

8.按照权利要求1、4或6所述的方法,其特征在于:厌氧发酵液中脂肽表面活性剂的分离方法,利用氯仿/甲醇(1-3:1,v/v)萃取法提取厌氧发酵液中的脂肽。

9.一种厌氧生产脂肽表面活性剂的发酵培养基,其特征在于:用于产脂肽的芽孢杆菌的厌氧发酵培养,以NaNO3为唯一氮源,以蔗糖、甘油或者可溶性淀粉中的一种或二种以上为碳源,按质量分数为:碳源2-5%,NaNO3 0.1-0.3%,K2HPO4·3H2O 0.3-0.5%,KH2PO40.2-0.4%,MgSO4·7H2O 0.03-0.05%,CaCl2 0.01-0.02%,余量为水;pH 6.5-7.0。

10.按照权利要求9所述的发酵培养基,其特征在于:选择蔗糖、甘油或可溶性淀粉中的任何一种作为碳源时,它们于发酵培养基中的质量分数为蔗糖2-4%、或甘油3-5%或可溶性淀粉2-4%。

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