本发明涉及植物病害防治
技术领域：
，具体涉及一种荧光假单胞菌在植物白粉病防治中的应用。
背景技术：
：随着植物种类的不断增多，植物栽培方式的不断多样化，植物病害日趋严重，而传统的化学防治方法存在着许多弊端，比如：化学农药的大量使用引起了严重的环境污染，农产品的农药残留也越来越严重，病菌抗药性产生速度也越来越快等一系列对人民生活有害的影响。在当今倡导低碳经济、环保节约型社会中，寻求能保护人类生活又可增产的新技术十分适应当今社会的发展。生物防治是利用一种生物或其产物对付另外一种生物的方法，分为以虫治虫、以菌治虫、以菌治菌三大类。它利用了生物物种间的相互关系，以一种或一类生物或其产物抑制另一种或另一类生物。生物防治的方法有很多，微生物防治就是其中一种。微生物防治主要是利用有益的微生物，通过生物间的竞争作用、抗生作用、寄生作用、溶菌作用及诱导抗性等，来抑制某些病原物的存活和活动，其优越性在于资源丰富、选择性强、无残留、无污染、成本低，兼防兼治、增产增收、保持生态平衡，起到长效的作用。生防菌的种类繁多，生产上广泛应用的主要是真菌和细菌。生防真菌主要包括木霉菌、毛壳菌、青霉菌、厚壁孢子轮枝菌及菌根真菌、盾壳霉、粘帚霉等，已知的木霉菌至少可寄生18属29种植物病原菌，如核盘菌属、长孺孢属、镰刀菌属、蜜环菌属、炭疽菌属、丝核菌属、轮枝孢属、黑星菌属；毛壳菌具有降解纤维素、有机质特性，鉴于此，其广泛应用于植物病原菌的生物防治方面，其中，球毛壳菌、角毛壳菌均可以较好地预防甘蔗猝倒病，以及较好地防治番茄枯萎病和苹果斑点病的发生，对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌有抑制作用，此外，球毛壳菌还可以较好地保护谷物、燕麦和大麦免受由雪腐镰刀菌和禾旋孢霉引起的幼苗枯萎。生防细菌一般包括芽孢杆菌属、游动放线菌属、假单孢菌属、黄单孢菌属、链霉菌属、土壤杆菌属、产碱菌属、节杆菌属、固氮菌属、欧文氏菌属、黄杆菌属、小单孢菌属和根瘤菌属。其中枯草芽孢杆菌C-22对棉花炭疽病菌、枯萎病菌、立枯病菌、黄萎病菌、棉花疫霉病菌和棉花叶斑病菌均有较好的抑制作用；枯草芽孢杆菌XG-1对西瓜枯萎病菌菌丝生长具有较强的抑制作用，同时，枯草芽孢杆菌Henu11对禾谷丝核菌具有较好的抑制作用。目前，生防菌在植物病害防治中存在自然条件下定殖能力差、抗药能力弱及防治效果不稳定等问题，因此进一步筛选性能优良、稳定性好的微生物菌种用于防治植物病害，是目前本领域内的研究重点。技术实现要素：本发明为解决现有技术问题，提供了一种防治植物病害的方法。所述方法是通过在植物叶面施用含荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）的微生物制剂，有效抑制恶苗病和白粉病，效果显著。本发明一方面提供了一种微生物制剂，是通过将荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）进行发酵制备得到的。所述荧光假单胞菌优选荧光假单胞菌HF-3（PseudomonasfluorescensHF-3），已于2014年6月24日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO:M2014274。所述微生物制剂的制备方法，包括如下步骤：将荧光假单胞菌接种至摇瓶中的LB液体培养基中，28～30℃、转速为150rpm条件下培养18h，获得液体发酵种子；将液体发酵种子接种到装有液体发酵培养基的发酵罐中，28～30℃、接种量5～10％，发酵罐搅拌速度130～180rpm，通气量5～10％的条件下，发酵24～48h，即得到含荧光假单胞菌的微生物制剂。所述液体发酵培养基中各组分及其含量分别为：麦芽糖30g/L，葡萄糖3g/L，酵母膏5g/L，硫酸铵4.5g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4.7H2O0.05g/L，CaCl20.02g/L，NaCl0.15g/L。本发明一方面提供了一种防治植物病害的方法，是通过在植物叶面施用上述包含荧光假单胞菌的微生物制剂实现的。所述植物病害为白粉病。所述微生物制剂为液体制剂。所述微生物制剂中荧光假单胞菌的活菌数超过109CFU/mL。所述防治植物病害的方法，具体为：将上述包含荧光假单胞菌的微生物制剂稀释0-900倍，按10-15mL/m2的用量将含荧光假单胞菌的微生物制剂均匀喷洒在植物叶面上；7-10天后再按相同用量喷洒一遍；连用3-5次。本发明提供的含荧光假单胞菌微生物制剂对尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、白腐垫壳孢菌和粉红单端孢菌的抑制效果不明显，但其对单丝壳白粉菌的抑制效果特别显著，抑菌圈直径达到28mm，能有效防治植物白粉病。所述微生物制剂稀释100倍后，对黄瓜白粉病的防治效率高达95.8%；稀释至900倍时，对草莓白粉病的防治效率仍能高于85%，效果非常显著；稀释300倍后，对烟草白粉病的防治效率超过80%，与化学药物对照组的防治效率相当，取得了意料不到的技术效果。本发明提供的含荧光假单胞菌微生物制剂可开发成生物农药，专门用于植物白粉病的防治，应用前景广阔。具体实施方式本发明实施例中所述荧光假单胞菌选用荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）HF-3，已于2014年6月24日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCCNO:M2014274。该菌株筛选自烟台东方海洋集团三文鱼循环水养殖废水处理塔内的水样中。现有研究发现该菌株能高效降解养殖废水中的亚硝态氮，具有净化水体的功效。申请人在本发明中进一步发现该菌株在植物病害防治方面也有显著的应用效果。下面结合具体实施例进一步阐述本发明。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。实施例1含荧光假单胞菌微生物制剂的制备方法1、种子液制备将荧光假单胞菌HF-3接种至摇瓶中的LB液体培养基中，28～30℃、转速为150rpm条件下培养18h，获得液体发酵种子；2、发酵方法：将液体发酵种子按5～10％的接种量接种到装有液体发酵培养基（培养基中各组分及其含量分别为：麦芽糖30g/L，葡萄糖3g/L，酵母膏5g/L，硫酸铵4.5g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO4.7H2O0.05g/L，CaCl20.02g/L，NaCl0.15g/L）的发酵罐中，28～30℃，130～180rpm，通气量5～10％的条件下，发酵24～48h，即得到含荧光假单胞菌的微生物制剂。其中，荧光假单胞菌的活菌量约为109CFU/mL。实施例2抑菌实验（1）病原菌制备：将尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、白腐垫壳孢菌、粉红单端孢菌和单丝壳白粉菌（由青岛农业大学赠送）的菌块（Φ7mm）分别接于PDA固体培养基中央，30℃培养7d；（2）打孔扩散法筛选：将灭菌后的PDA培养基温度保持在55℃，然后用无菌水轻轻冲洗上述病原菌的斜面获得病原菌孢子悬液，并取适量分别加入PDA培养基中，混匀后倒平板。待凝固后，即制得病原菌含量约为107cfu/ml的PDA固体培养基。用牛津杯在距培养皿中央25mm的对称两侧各打一个孔（Φ7mm），并加入150μl实施例1制备得到的微生物制剂于孔内，每种病原菌设3个平行。将平板放入30℃培养箱，72h后测量抑菌圈的直径。结果见表1。表1荧光假单胞菌HF-3对病原菌的抑制效果病原菌尖孢镰刀菌立枯丝核菌白腐垫壳孢菌粉红单端孢菌单丝壳白粉菌抑菌圈直径11mm9mm14mm11mm28mm从表1的数据可以看出，本发明提供的含荧光假单胞菌HF-3的微生物制剂对尖孢镰刀菌、立枯丝核菌、白腐垫壳孢菌和粉红单端孢菌的抑制效果不明显，但其对单丝壳白粉菌的抑制效果特别显著，抑菌圈直径达到28mm，取得了意料不到的技术效果。实施例3含荧光假单胞菌微生物制剂在黄瓜白粉病防治中的应用1、实验地点：青岛市城阳区惜福镇蔬菜大棚；2、实验设置：1）实验组：设三个处理组，每个处理组为随机选择的两垄黄瓜，共100棵，各处理组之间设置保护行。在黄瓜的生长中期，将实施例1制备得到的微生物制剂分别加水稀释100、300、500倍后，按10mL/m2的用量均匀喷洒在各处理组的黄瓜叶片上；7天后再按相同用量喷洒一遍；连用3次；最后一次喷洒完菌液10天后，检查各处理组黄瓜白粉病的发病情况。2）对照组：使用清水喷洒黄瓜叶片，其他操作与实验组均相同。3、结果分析病害分级标准：0级无病斑；1级：病斑面积占叶面积的1/4以下；2级：病斑面积占叶面积的1/4-2/4；3：病斑面积占叶面积的2/4-3/4；4级：病斑面积占叶面积的3/4以上。病情指数＝[∑(病级值×该级发病叶数)/(调查总叶数×最高病级值)]×100%防治效率的计算公式＝[1-(处理的病情指数/对照的病情指数)]×100%。以SPSS统计软件对实验数据进行分析，结果如表2所示：表2含荧光假单胞菌微生物制剂对黄瓜白粉病的防治效果从表2的数据可以看出，本发明提供的含荧光假单胞菌的微生物制剂能有效防治黄瓜白粉病，所述微生物制剂稀释100倍后，对黄瓜白粉病的防治效率高达95.8%，稀释500倍后，防治效率仍高于85%，取得了意料不到的技术效果。所述微生物制剂可作为生防制剂，广泛应用于黄瓜白粉病的防治。实施例4含荧光假单胞菌微生物制剂在防治草莓白粉病中的应用1、实验地点：青岛市崂山区草莓枯桃草莓种植基地；2、实验设置：1）实验组：三个处理组，每个处理组10垄草莓，共1200棵，每个处理组之间设立保护行；在草莓开花初期，将实施例制得的含荧光假单胞菌微生物制剂分别加水稀释300、600、900倍后，按15mL/m2的用量均匀喷洒在草莓叶片反正面及瓜茎上；每次喷洒间隔10天，连用3次；最后一次喷洒完菌液10天后，检查草莓白粉病的发病情况。2）对照组：使用清水喷洒草莓叶片，其他操作与实验组均相同。3、结果分析采用与实施例3相同的方法对实验数据进行分析，结果如表3所示：表3含荧光假单胞菌微生物制剂对草莓白粉病的防治效果从表3的实验结果可知，本发明提供的含荧光假单胞菌微生物制剂也能有效防治草莓白粉病，当所述微生物制剂稀释至900倍时，所述微生物制剂对草莓白粉病的防治效率仍能高于85%，效果非常显著。实施例5含荧光假单胞菌微生物制剂在烟草白粉病防治中的应用1、实验地点：中国农科院烟草所实验大棚；2、实验设置：1）实验组：设3个处理组，每个处理组为随机选择的两垄烟草，共100棵，各处理组之间设置保护行。在烟草的生长中期，将实施例1制备得到的微生物制剂分别加水稀释100、300和500倍后，按10mL/m2的用量均匀喷洒在各处理组的烟草叶片上；7天后再按相同用量喷洒一遍；连用5次；最后一次喷洒完菌液10天后，检查各处理组烟草白粉病的发病情况。2）化学药物对照组：使用2%抗霉菌素水剂200倍稀释液，其他操作与上述方法均相同。3）空白对照组：使用清水喷洒黄瓜叶片，其他操作与实验组均相同。3、结果分析采用与实施例3相同的方法对实验数据进行分析，结果如表4所示：表4含荧光假单胞菌微生物制剂对烟草白粉病的防治效果从表4的数据可以看出，本发明提供的含荧光假单胞菌的微生物制剂对烟草白粉病也具有显著的防治效果。所述微生物制剂稀释300倍后，对烟草白粉病的防治效率超过80%，与化学药物对照组的防治效率相当，稀释500倍后，防治效率仍高于75%，取得了意料不到的技术效果。综上，本发明提供的含荧光假单胞菌微生物制剂可开发成生物农药，专门用于植物白粉病的防治，应用前景广阔。当前第1页1 2 3