本发明涉及一种丹参丹酚酸a制备方法，属于医药技术领域。
背景技术：
丹参在临床上广泛用于治疗心血管系统疾病，其主要活性成分为水溶性酚酸类，主要有丹酚酸b、原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、迷迭香酸等，丹酚酸a是丹参水溶性酚酸类成分中的一种，其含量较低。但近年来研究发现，丹酚酸a是目前已知的最强的抗氧化化合物之一，丹酚酸a在抗氧化、心肌缺血保护、抗血栓、神经保护、抗肝纤维化、防治糖尿病及并发症等多个方面具有广泛的药理活性(张莉，张维库，赵莹，杨秀颖，方莲花，王守宝，杜冠华(2011)。
丹酚酸a为淡黄色粉末，易溶于水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，对光和热不稳定，暴露空气易氧化成丹酚酸c和异丹酚酸c等，其结构式如下：
现有大量关于丹酚酸a制备方法的专利和文献，其中丹酚酸a制备方法的中国专利有cn200610012615.1、cn200610052442.6、cn200610165779.8、cn200710001055.4、cn200710070553.4、cn200710099618.8、cn200810120784.6、cn201010143656.0、cn201010143666.4、cn201010143678.7、cn201010143689.5、cn201010143714.x、cn201010148488.4、cn201010541651.3、cn201010598480.8、cn201010620911.6、cn201110083924.9、cn201110141512.6、cn201210487598.2、cn201210487600.6、cn201210487643.4、cn201210488782.9、cn201310192210.0、cn201310258565.5、cn201310487751.6、cn201410216134.7、cn201510086508.2、cn201511019464.8，其中专利cn200610052442.6、cn200610165779.8、cn200710070553.4、cn200810120784.6、cn201010143656.0、cn201110083924.9、cn201210487643.4、cn201310487751.6采用水或醇直接提取，该法由于丹参药材中丹酚酸a的含量约为0.03％～0.06％，故采取直接提取的方法得到的丹酚酸a提取率比较低；专利cn200710099618.8、cn201010143678.7、cn201010143689.5、cn201010143714.x、cn201010598480.8、cn201210487598.2、cn201310192210.0、cn201310258565.5采用以丹酚酸b或丹参多酚酸盐为起始原料，经过高温高压、酶促反应或加入催化剂如氯化锌等反应转化生产丹酚酸a，该法比较容易控制，但是以丹酚酸b或丹参多酚酸盐为原料其成本较高，且转化为丹酚酸a的转移率比较低，如cn201010143678.7仅为10％左右。另外一部分专利，如cn1830947公开了高温处理丹参提取物制备丹酚酸a的条件为101～140℃处理0.5～24小时，随后，cn100999470对其条件进行了细化，条件进一步优化为ph3.5～6.0,110～130℃下处理1～6小时制备丹酚酸a，为解决丹参药材中丹酚酸a含量低提供了较好的方法，解决了丹酚酸a的来源问题，但是此工艺，由于是水提液不经处理直接进行转化反应，存在如下不利因素：1)水提液中含有蛋白质及胶体物质，将与转化后的丹酚酸a结合，增加后续分离难度；2)水提取液中含有部分金属离子在转化过程中可能与丹酚酸a或丹酚酸b螯合，阻碍或加剧丹酚酸a的生成或降解；3)转化体积过大，需要增大设备从而增大了能耗，且加压操作存在安全性问题。
另外，以上的专利仅考虑丹酚酸b转化生成丹酚酸a，而忽略了紫草酸，根据文献(xia,h.,sun,l.,lou,h.,&rahman,m.m.(2014).conversionofsalvianolicacidbintosalvianolicacidaintissuesofradixsalviaemiltiorrhizaeusinghightemperature,highpressureandhighhumidity.phytomedicineinternationaljournalofphytotherapy&phytopharmacology,21(6),906-911.)，丹酚酸b在一定条件下降解产生丹酚酸a，丹酚酸b先降解产生紫草酸，再经过脱去一份子二氧化碳才生成丹酚酸a，故丹酚酸a是丹酚酸b和紫草酸共同的降解产物，如下式：
在精制过程，现有的专利和文献主要采用大孔吸附树脂、硅胶、聚酰胺、以及mci和sephadexlh-20，使用硅胶往往使用比较多的有机溶剂，且死吸附较大而造成丹酚酸a较多的损失，后两种mci、sephadexlh-20成本较高，且工艺控制研究不深入，往往造成在处理过程中丹酚酸a的降解和破坏。
通过转化的方式生成丹酚酸a，为丹酚酸a的制备提供了很好的思路，但是综合以上的专利文献，对丹参药材中降解生成丹酚酸a的途径及转化反应条件还没有深入的研究，根据已有的研究报道，丹酚酸a的提取和收率有一定提高，但是仍然存在转化率低，分离纯化过程较长，收率低的问题。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一个低成本、转化率高，后续分离精制过程简单，能产业化制备丹酚酸a的方法。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种丹酚酸a的制备方法，包括(1)提取步骤、(2)过大孔吸附树脂柱的粗分离步骤、(3)转化步骤、(4)精制步骤、(5)萃取步骤、(6)干燥步骤，所述(4)精制步骤是采用中高压柱色谱对丹酚酸a进行精制纯化，中高压色谱的填料为odsc18，填料粒径为10～40um，压力10～25bar。
优选地，所述的中高压色谱洗脱溶剂为甲醇-磷酸水或乙醇-磷酸水的一种，所述甲醇-磷酸水或乙醇-磷酸水的体积比为15:85～25:75，其中所述磷酸水中磷酸的质量百分比为0.1％～0.4％。
优选地，所述(4)精制步骤中，填料粒径为20um。
优选地，所述(4)精制步骤中，上样溶液的丹酚酸a浓度为1.10mg/ml～1.50mg/ml的溶液。
优选地，所述(1)提取步骤中，使用的提取溶剂选自水、甲醇、乙醇、甲醇水溶液或乙醇水溶液。
优选地，所述(2)过大孔吸附树脂柱的粗分离步骤选用的大孔吸附树脂为lk02或lky134或d101中的一种，上样速度为1bv/h，上样量为18.0～25.0ml/g大孔吸附树脂，用水和10％乙醇水分别洗脱4～5bv，弃去，然后用70％乙醇洗脱10bv，收集70％乙醇洗脱液。
优选地，所述(3)转化步骤，首先将所述70％乙醇洗脱液浓缩至丹酚酸b和紫草酸总量浓度为10.0～16.0mg/ml的溶液，再加盐酸或硫酸调ph值为3～6，加热回流16～20小时。
优选地，所述(3)转化步骤中所述丹酚酸b和紫草酸总量最佳浓度为12.5mg/ml，所述ph值最佳为4.0，最佳加热回流18个小时。
优选地，所述(5)萃取步骤采用乙酸乙酯作为萃取剂。
优选地，所述丹酚酸a的制备方法包括如下步骤：
(1)提取步骤：丹参加8倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并滤液，浓缩至药液体积与重量1:1的溶液，静置过夜，取上清液过滤，或离心，得浓缩液；
(2)过大孔吸附树脂柱的粗分离步骤：步骤(1)得到的浓缩液过大孔吸附树脂柱的粗分离，大孔吸附树脂为lk02或lky134或d101的一种，上样速度为1bv/h，上样量为18.0～25.0ml/g大孔吸附树脂，静置4小时，用水和10％乙醇水分别洗脱4～5bv，弃去，然后70％乙醇洗脱10bv，收集70％乙醇洗脱液；
(3)转化步骤：将步骤(2)收集70％乙醇洗脱液减压回收乙醇，减压浓缩至丹酚酸b和紫草酸总量浓度为12.5mg/ml的溶液，加盐酸或硫酸调ph值为4.0，加热回流18小时，即得富含丹酚酸a的溶液；
(4)精制步骤：将步骤(3)所得的富含丹酚酸a的溶液，加水稀释至丹酚酸a浓度为1.10mg/ml～1.50mg/ml的溶液，过滤，上中高压色谱柱，填料为odsc18，填料粒径为10～40um，压力10～25bar，洗脱溶剂为甲醇-磷酸水或乙醇-磷酸水的一种，所述甲醇-磷酸水或乙醇-磷酸水的体积比为15:85～25:75，其中所述磷酸水中磷酸的质量百分比为0.1％～0.4％，截取符合要求的丹酚酸a溶液部分；
(5)萃取步骤：将步骤(4)截取的符合要求的丹酚酸a溶液，减压浓缩至无醇，用乙酸乙酯萃取；
(6)干燥步骤：减压回收乙酸乙酯，冷冻干燥。
发明详述：
1、过大孔吸附树脂柱的粗分离步骤工艺优化
发明人用步骤(1)提取步骤获得的提取液，以丹酚酸b和紫草酸为指标考察树脂的吸附量、解析量、解析率及纯度筛选了一批大孔吸附树脂，最终发现采用lk02或lky134或d101中的一种为吸附树脂最好。另外，对上样速度、上样量和洗脱溶剂及洗脱体积等进行了考察，发现上样速度为1bv/h，上样量为18.0～25.0ml/g大孔吸附树脂，用水和10％乙醇水分别洗脱4～5bv，弃去，然后用70％乙醇洗脱10bv，收集70％乙醇洗脱液富集的丹酚酸b和紫草酸最多。
2、转化步骤工艺优化
发明人将步骤(2)粗分离步骤收集的大孔树脂柱层析液减压回收乙醇，采用单因素和响应曲面法以丹酚酸a为指标，考察丹酚酸b和紫草酸总量的浓度、转化液ph值、转化时间，得出丹酚酸b和紫草酸总量浓度为10.0～16.0mg/ml，ph值为3～6，加热回流16～20小时时，丹酚酸a的转化率较理想，转化率在45.84％～85.03％。最佳转化条件为丹酚酸b和紫草酸总量浓度为12.5mg/ml的溶液，ph值为4.0，加热回流18小时，丹酚酸a转化率最高，可达78.35％～85.03％。
在研究过程中同时发现，在丹参多酚酸环境条件下，丹酚酸a稳定性较好，不易过度破坏降解为丹酚酸c、异丹酚酸c和丹参素等，在碱性环境中丹酚酸a降解破坏比较严重；在转化过程中丹酚酸b和紫草酸与丹酚酸a的转化关系较为密切，以丹酚酸a为指标，考察丹酚酸b和紫草酸在丹参多酚酸中的比例，对转化结果影响不大，而二者的总量的浓度与丹酚酸a的转化率有较大影响。其中丹酚酸b和紫草酸总量的浓度为12.5mg/ml，丹酚酸a的转化率最高。
其中，丹酚酸a转化率的计算方法为：
3、精制步骤工艺优化研究
发明人在精制步骤的色谱柱的选择中，意外的发现采用中高压色谱柱比低压(常压)色谱柱在丹酚酸a纯化效率和转移率方面效果更好，具体明细如下：
其中对比评价方法为在相同丹酚酸a纯度98％的水平下，以精制相同量的丹酚酸a原料中间体所耗费时间、丹酚酸a的转移率作为指标进行对比。
由上表可以看出，采用中高压色谱精制的丹酚酸a的收率较高，可能与经转化步骤后的溶液在用色谱柱精制过程中，受填料及洗脱溶液及压力等条件共同作用下，将转化步骤未能转化完的丹酚酸b和紫草酸等丹酚酸成分又进一步转化为丹酚酸a的缘故。
在填料的类型上，本发明优选odsc18柱填料，可工业化生产，其中精制纯化使用的设备工业化规模的有cs-prep工业制备液相色谱分离纯化系统，色谱柱型号dac-hb800，odsc18柱填料最佳粒径为20um，径高比为1:8，洗脱溶剂最佳为甲醇-0.1％磷酸水，考虑到工业化可优化为乙醇-0.2％磷酸水，使用乙醇为无水乙醇，也可为95％乙醇或其他浓度的乙醇，可适当在0.1％～0.4％范围内调整磷酸水浓度，甲醇-磷酸水或乙醇-磷酸水的体积比在15:85～25:75范围内均可达到理想收率。
4、萃取步骤优化
在精制工艺步骤，截取符合要求的丹酚酸a溶液部分含有大量的乙醇或甲醇，因此需要将其蒸除，从保持丹酚酸a结构稳定的角度考虑，最好采用减压蒸馏法，待溶液无醇味为止。然后将丹酚酸a采用有机溶剂从剩余溶液中萃取出来。本发明优选采用乙酸乙酯进行萃取，更优选萃取3～5次。
5、丹酚酸a的含量检测
色谱方法：色谱柱为welchmaterialsxbc18(4.6×150mm，5μm)；流动相：乙腈(a)-0.5％乙酸水(b)梯度洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；检测波长：286nm；流动相梯度洗脱比例如下：
对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸a对照品(工作对照品)适量，加50％乙醇制成每1.0ml含丹酚酸a0.5mg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取样品粉末10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加50％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
本发明有益的技术效果：
(1)本发明在转化步骤前先将丹酚酸类成分进行粗分离，分出富含丹酚酸b及紫草酸的溶液，再进行转化，从而使要转化药液的体积减小，不需要较大的设备。
(2)本发明采用常压下加热回流转化，无需高压反应，易工业化操作。
(3)采用中高压色谱柱，能将未转化完的丹酚酸b和紫草酸的丹酚酸溶液再经过转化加以利用，提高丹酚酸a整体收率。
(4)本发明获得的丹酚酸a纯度高(98％以上)，收率高(3.0‰以上)，且重复性好。
附图
图1：丹酚酸a含量测定色谱图
具体实施方案
下述是结合具体实施例进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不是用于限制本发明的范围。
实施例1
(1)提取步骤
取丹参药材，粉碎成粗粉，称取8kg，加8倍量50％乙醇回流提取3次，每次2小时，合并滤液，浓缩至药液体积与重量1:1的溶液，静置过夜，取上清液过滤，或离心。
(2)粗分离步骤
将得到的浓缩液，大孔吸附树脂为lk02，上样速度为1bv/h，上样量为20.0ml/g大孔吸附树脂，静置4小时，水洗和10％乙醇水分别洗脱5bv，弃去，以薄层色谱监测，三氯化铁显色未出现蓝色斑点，然后70％乙醇洗脱10bv，三氯化铁显色至不显蓝色为止。
(3)转化步骤
将收集的大孔树脂柱层析液减压回收乙醇，减压浓缩至丹酚酸b和紫草酸总量为12.5mg/ml的溶液，加盐酸或硫酸调ph值为4.0，加热回流18小时，即得富含丹酚酸a的溶液。
(4)精制步骤
将富含丹酚酸a的溶液，加水稀释至丹酚酸a浓度为1.10mg/ml的溶液，过滤，上中高压色谱柱，填料为odsc18(粒径为10um)，压力20～25bar，洗脱溶剂为甲醇-0.2％磷酸水，甲醇-0.2％磷酸水的体积比为15:85，检测波长286nm，截取符合要求的丹酚酸a溶液部分。
(5)萃取步骤
将截取的丹酚酸a溶液，减压浓缩至无醇，使用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次。
(6)干燥步骤
减压回收乙酸乙酯，冷冻干燥,放入冷冻干燥箱中，温度在-20～-40℃预冻2～4小时，抽真空，在-5～-10℃，升华干燥12小时，0～10℃再干燥3小时，得到丹酚酸a32.8g(收率4.1‰，收率＝丹酚酸a的量/丹参药材)，按丹酚酸a含量测定方法检测，丹酚酸a纯度为98.3％。
实施例2
(1)提取步骤
取丹参药材，粉碎成粗粉，称取8kg，加6倍量无水乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并滤液，浓缩至药液体积与重量1:1的溶液，静置过夜，取上清液过滤，或离心。
(2)粗分离步骤
将得到的浓缩液，大孔吸附树脂为lky134，上样速度为1bv/h，上样量为19.0ml/g大孔吸附树脂，静置4小时，水洗和10％乙醇水分别洗脱4～5bv，弃去，然后70％乙醇洗脱10bv。
(3)转化步骤
将收集的大孔树脂柱层析也减压回收乙醇，减压浓缩至丹酚酸b和紫草酸总量为12.5mg/ml的溶液，加盐酸或硫酸调ph值为4.0，加热回流18小时，即得富含丹酚酸a的溶液。
(4)精制步骤
将富含丹酚酸a的溶液液，加水稀释至丹酚酸a浓度为1.10mg/ml的溶液，过滤，上中高压色谱柱，填料为odsc18(粒径为20um)，压力10～20bar，洗脱溶剂为乙醇-0.2％磷酸水，乙醇-0.2％磷酸水的体积比为15:85，检测波长286nm，截取符合要求的丹酚酸a溶液部分。
(5)萃取步骤
将截取的丹酚酸a溶液，减压浓缩至无醇，使用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次。
(6)干燥步骤
减压回收乙酸乙酯，冷冻干燥，温度在-20～-40℃预冻2～4小时，抽真空，在-5～-10℃，升华干燥12小时，0～10℃再干燥3小时，得到丹酚酸a31.8g(收率3.9‰)，按丹酚酸a含量测定方法检测，丹酚酸a纯度为98.1％。
实施例3
(1)提取步骤
取丹参药材，粉碎成粗粉，称取8kg，加6倍量70％甲醇回流提取2次，每次1小时，合并滤液，浓缩至药液体积与重量1:1的溶液，静置过夜，取上清液过滤，或离心。
(2)粗分离步骤
将得到的浓缩液，大孔吸附树脂为d101，上样速度为1bv/h，上样量为18.0ml/g大孔吸附树脂，静置4小时，水洗和10％乙醇水分别洗脱5bv，弃去，以薄层色谱监测，三氯化铁显色未出现蓝色斑点，然后70％乙醇洗脱10bv，三氯化铁显色至不显蓝色为止。
(3)转化步骤
将收集的大孔树脂柱层析液减压回收乙醇，减压浓缩至丹酚酸b和紫草酸总量为10mg/ml的溶液，加盐酸或硫酸调ph值为3.0，加热回流20小时，即得富含丹酚酸a的溶液。
(4)精制步骤
将富含丹酚酸a的溶液，加水稀释至丹酚酸a浓度为1.50mg/ml的溶液，过滤，上中高压色谱柱，填料为odsc18(粒径为30um)，压力10～20bar，洗脱溶剂为甲醇-0.2％磷酸水，乙醇-0.2％磷酸水的体积比为25:75，检测波长286nm，截取符合要求的丹酚酸a溶液部分。
(5)萃取步骤
将截取的丹酚酸a溶液，减压浓缩至无醇，使用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次。
(6)干燥步骤
减压回收乙酸乙酯，冷冻干燥,放入冷冻干燥箱中，温度在-20～-40℃预冻2～4小时，抽真空，在-5～-10℃，升华干燥12小时，0～10℃再干燥3小时，得到丹酚酸a24.8g(收率3.0‰)，按丹酚酸a含量测定方法检测，丹酚酸a纯度为98.6％。
实施例4
(1)提取步骤
取丹参药材，粉碎成粗粉，称取8kg，加6倍量甲醇回流提取3次，每次1小时，合并滤液，浓缩至药液体积与重量1:1的溶液，静置过夜，取上清液过滤，或离心。
(2)粗分离步骤
将得到的浓缩液，大孔吸附树脂为lky134，上样速度为1bv/h，上样量为25.0ml/g大孔吸附树脂，静置4小时，水洗和10％乙醇水分别洗脱4～5bv，弃去，然后70％乙醇洗脱10bv。
(3)转化步骤
将收集的大孔树脂柱层析也减压回收乙醇，减压浓缩至丹酚酸b和紫草酸总量为16.0mg/ml的溶液，加盐酸或硫酸调ph值为6.0，加热回流20小时，即得富含丹酚酸a的溶液。
(4)精制步骤
将富含丹酚酸a的溶液，加水稀释至丹酚酸a浓度为1.30mg/ml的溶液，过滤，上中高压色谱柱，填料为odsc18(粒径为40um)，压力10～15bar，洗脱溶剂为乙醇-0.4％磷酸水，乙醇-0.2％磷酸水的体积比为20:80检测波长286nm，截取符合要求的丹酚酸a溶液部分。
(5)萃取步骤
将截取的丹酚酸a溶液，减压浓缩至无醇，使用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次。
(6)干燥步骤
减压回收乙酸乙酯，冷冻干燥，温度在-20～-40℃预冻2～4小时，抽真空，在-5～-10℃，升华干燥12小时，0～10℃再干燥3小时，得到丹酚酸a26.4g(收率3.3‰)，按丹酚酸a含量测定方法检测，丹酚酸a纯度为98.7％。
实施例5
(1)提取步骤
取丹参药材，粉碎成粗粉，称取8kg，加12倍量水回流提取3次，每次2小时，合并滤液，浓缩至药液体积与重量1:1的溶液，静置过夜，取上清液过滤，或离心。
(2)粗分离步骤
将得到的浓缩液，大孔吸附树脂为d101，上样速度为1bv/h，上样量为25.0ml/g大孔吸附树脂，静置4小时，水洗和10％乙醇水分别洗脱5bv，弃去，以薄层色谱监测，三氯化铁显色未出现蓝色斑点，然后70％乙醇洗脱10bv，三氯化铁显色至不显蓝色为止。
(3)转化步骤
将收集的大孔树脂柱层析液减压回收乙醇，减压浓缩至丹酚酸b和紫草酸总量为16.0mg/ml的溶液，加盐酸或硫酸调ph值为5.0，加热回流16小时，即得富含丹酚酸a的溶液。
(4)精制步骤
将富含丹酚酸a的溶液，加水稀释至丹酚酸a浓度为1.20mg/ml的溶液，过滤，上中高压色谱柱，填料为odsc18(粒径为10um)，压力20～25bar，洗脱溶剂为甲醇-0.1％磷酸水，甲醇-0.1％磷酸水的体积比为15:85，检测波长286nm，截取符合要求的丹酚酸a溶液部分。
(5)萃取步骤
将截取的丹酚酸a溶液，减压浓缩至无醇，使用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次。
(6)干燥步骤
减压回收乙酸乙酯，冷冻干燥,放入冷冻干燥箱中，温度在-20～-40℃预冻2～4小时，抽真空，在-5～-10℃，升华干燥12小时，0～10℃再干燥3小时，得到丹酚酸a29.5g(收率3.7‰)，按丹酚酸a含量测定方法检测，丹酚酸a纯度为99.2％。
实施例6
(1)提取步骤
取丹参药材，粉碎成粗粉，称取8kg，加7倍量无水乙醇回流提取2次，每次2小时，合并滤液，浓缩至药液体积与重量1:1的溶液，静置过夜，取上清液过滤，或离心。
(2)粗分离步骤
将得到的浓缩液，大孔吸附树脂为lk02，上样速度为1bv/h，上样量为25.0ml/g大孔吸附树脂，静置4小时，水洗和10％乙醇水分别洗脱4～5bv，弃去，然后70％乙醇洗脱10bv。
(3)转化步骤
将收集的大孔树脂柱层析也减压回收乙醇，减压浓缩至丹酚酸b和紫草酸总量为14.0mg/ml的溶液，加盐酸或硫酸调ph值为3.0，加热回流19小时，即得富含丹酚酸a的溶液。
(4)精制步骤
将富含丹酚酸a的溶液液，加水稀释至丹酚酸a浓度为1.10mg/ml的溶液，过滤，上中高压色谱柱，填料为odsc18(粒径为20um)，压力10～20bar，洗脱溶剂为乙醇-0.4％磷酸水，乙醇-0.4％磷酸水的体积比为20:80，检测波长286nm，截取符合要求的丹酚酸a溶液部分。
(5)萃取步骤
将截取的丹酚酸a溶液，减压浓缩至无醇，使用等体积的乙酸乙酯萃取3～5次。
(6)干燥步骤
减压回收乙酸乙酯，冷冻干燥，温度在-20～-40℃预冻2～4小时，抽真空，在-5～-10℃，升华干燥12小时，0～10℃再干燥3小时，得到丹酚酸a27.2g(收率3.4‰)，按丹酚酸a含量测定方法检测，丹酚酸a纯度为99.4％。
应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。