表达ETS转录因子的工程化的内皮细胞的制作方法

文档序号:14957039发布日期:2018-07-17 23:46阅读:来源:国知局

技术特征:

1.E4ORF1+ETV2+工程化的内皮细胞的细胞群体。

2.根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述细胞包含编码ETV2多肽的重组核酸分子。

3.根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述细胞包含编码腺病毒E4ORF1多肽的重组核酸分子。

4.根据权利要求2或3所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述核酸分子是质粒载体的形式。

5.根据权利要求2或3所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述核酸分子未整合到所述工程化的内皮细胞的基因组DNA中。

6.根据权利要求2或3所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述核酸分子整合到所述工程化的内皮细胞的基因组DNA中。

7.根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述内皮细胞来源于分化的内皮细胞。

8.根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述内皮细胞来自成体内皮细胞。

9.根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述内皮细胞不是胚胎内皮细胞。

10.根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述内皮细胞是人内皮细胞。

11.根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述内皮细胞来源于原代内皮细胞。

12.根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体,其特征在于,所述内皮细胞来自人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。

13.一种组合物,其特征在于,其包含根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体。

14.根据权利要求13所述的组合物,其特征在于,还包含载体溶液。

15.根据权利要求14所述的组合物,其特征在于,所述载体溶液是生理盐水溶液。

16.根据权利要求13所述的组合物,其特征在于,所述组合物还包含干细胞或祖细胞。

17.根据权利要求16所述的组合物,其特征在于,所述干细胞或祖细胞是造血干细胞或祖细胞(HSPC)。

18.一种治疗组合物,其特征在于,其包含根据权利要求1所述的工程化的内皮细胞的细胞群体和适合施用于个体的载体溶液。

19.根据权利要求18所述的治疗组合物,其特征在于,所述载体溶液是生理盐水溶液。

20.根据权利要求18所述的治疗组合物,其特征在于,所述组合物还包含干细胞或祖细胞。

21.根据权利要求20所述的治疗组合物,其特征在于,所述干细胞或祖细胞是HSPC。

22.根据权利要求17所述的组合物或权利要求21所述的治疗组合物,其特征在于,所述HSPC获得自或源自骨髓。

23.根据权利要求17所述的组合物或权利要求21所述的治疗组合物,其特征在于,所述HSPC获得自或源自外周血。

24.根据权利要求17所述的组合物或权利要求21所述的治疗组合物,其特征在于,所述HSPC获得自或源自羊水。

25.根据权利要求17所述的组合物或权利要求21所述的治疗组合物,其特征在于,所述HSPC获得自脐带血。

26.根据权利要求18所述的治疗组合物,其特征在于,其用于细胞移植过程。

27.根据权利要求18所述的治疗组合物,其特征在于,用于HSPC移植过程。

28.一种在培养基中维持或扩增内皮细胞的方法,其特征在于,所述方法包括:将编码ETV2多肽的核酸分子和编码E4ORF1多肽的核酸分子引入内皮细胞,以产生E4ORF1+ETV2+工程化的内皮细胞,其中,所述工程化的内皮细胞可以在培养基中维持或扩增。

29.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,进一步包括培养所述工程化的内皮细胞。

30.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,进一步包括在不存在血清的情况下培养所述工程化的内皮细胞。

31.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,进一步包括在不存在外源性生长因子的情况下培养所述工程化的内皮细胞。

32.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,所述引入通过转染来进行。

33.根据权利要求32所述的方法,其特征在于,所述转染使用选自脂质体介导的转染,聚凝胺介导的转染,DEAE葡聚糖介导的转染,电穿孔,磷酸钙沉淀,显微注射和微粒轰击之一种的方法进行。

34.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,所述引入通过病毒介导的转导来进行。

35.根据权利要求29所述的方法,其特征在于,所述病毒介导的转导使用选自慢病毒介导的转导,腺病毒介导的转导,逆转录病毒介导的转导,腺相关病毒介导的转导和疱疹病毒介导的转导之一种的方法进行。

36.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,所述内皮细胞是原代内皮细胞。

37.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,所述内皮细胞是人内皮细胞。

38.根据权利要求28所述的方法,其特征在于,所述内皮细胞是人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。

39.一种在培养基中维持或扩增感兴趣的细胞群体的方法,其特征在于,所述方法包括:(a)获得或产生根据权利要求1所述的E4ORF1+ETV2+工程化的内皮细胞的细胞群体,和(b)在相同培养容器中培养所述工程化的内皮细胞和感兴趣的细胞群体。

40.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述工程化的内皮细胞在所述培养容器的表面上形成饲养细胞层。

41.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的细胞是癌细胞、干细胞、祖细胞或杂交瘤细胞。

42.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的细胞是HSPC。

43.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的细胞是HSPC,并且所述培养获得CD45RA-HSPC的选择性扩增。

44.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的细胞是HSPC,并且所述培养获得CD34+高的、CD45RA-HSPC的选择性扩增。

45.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的细胞是HSPC,并且所述培养获得HSPC中CD45RA-比例的增加。

46.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述感兴趣的细胞是HSPC,并且所述培养获得HSPC中CD34+高的、CD45RA-的比例的增加。

47.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述步骤(b)的培养在不存在血清的情况下进行。

48.根据权利要求39所述的方法,其特征在于,所述步骤(b)的培养在不存在外源生长因子的情况下进行。

49.一种维持或扩增感兴趣的细胞群体的方法,其特征在于,所述方法包括:(a)从根据权利要求1所述的E4ORF1+ETV2+工程化的内皮细胞的细胞群体的培养物中获得条件培养基,和(b)使所述感兴趣的细胞与所述条件培养基接触。

50.一种维持或扩增感兴趣的细胞群体的方法,其特征在于,所述方法包括:(a)获得或产生根据权利要求1所述的E4ORF1+ETV2+工程化的内皮细胞的细胞群体,(b)在培养容器中培养所述工程化的内皮细胞,(c)从所述培养容器中收集条件培养基,和(d)使所述感兴趣的细胞与所述条件培养基接触。

51.根据权利要求49或50所述的方法,其特征在于,进一步包括培养所述感兴趣的细胞。

52.一种条件细胞培养基,其特征在于,其是从根据权利要求1所述的E4ORF1+ETV2+工程化的内皮细胞的培养物中获得的。

53.一种核酸载体,其特征在于,其包含:(a)编码ETV2多肽的核苷酸序列和(b)编码E4ORF1多肽的核苷酸序列。

54.根据权利要求53所述的核酸载体,其特征在于,所述载体是表达载体。

55.根据权利要求53所述的核酸载体,其特征在于,所述编码ETV2多肽的核苷酸序列和编码E4ORF1多肽的核苷酸序列处于分别不同的启动子的控制下。

56.根据权利要求53所述的核酸载体,其特征在于,所述编码ETV2多肽的核苷酸序列和编码E4ORF1多肽的核苷酸序列处于相同的启动子的控制下。

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