一种诊断家禽结核病的多重PCR检测试剂盒及其检测方法与流程

文档序号:12645228阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种诊断家禽结核病的多重PCR检测试剂盒,其特征在于该试剂盒含有多重PCR引物组、2×PCR核心试剂预混物Premix Taq反应液、阳性对照、阴性对照和DL1000分子量标准溶液。

2.根据权利要求1所述一种诊断家禽结核病的多重PCR检测试剂盒,其特征在于试剂盒中的多重PCR引物组为:扩增序列3的DnaJ基因片段的引物对序列1和序列2,引物工作浓度为20pmol/μl;扩增序列6的IS1245基因片段的引物对序列4和序列5,引物工作浓度为10pmol/μl;扩增序列9的IS901基因片段的引物对序列7和序列8,引物工作浓度为;10pmol/μl。

3.权利要求2所述的一种诊断家禽结核病的多重PCR检测试剂盒的检测方法,其特征在于该方法包括如下步骤:

(1)提供临床疑似家禽样品DNA,并同时设立阴性对照dd H2O及阳性对照禽结核参考菌株CVCC68201的DNA;

(2)配制20μL多重PCR反应体系:1)模板:样品DNA/阳性对照/阴性对照1μL;引物组:DnaJ、IS1245和IS901基因的上下游引物各1μL;2×PCR核心试剂预混物Premix Taq反应液10μL,ddH2O 1μL。

(3)采用如下PCR反应程序:第一步,96℃2min;第二步,96℃10s,56℃~60℃10s,72℃1min,35个循环;第三步,72℃2min;

(4)PCR反应结束后,取10μL产物及5μL DL1000分子量Marker进行1%琼脂糖凝胶电泳,紫外凝胶成像分析系统上观察结果;

(5)结果判定如DNA分子量Marker出现标准条带,空白对照无条带出现,阳性对照有DnaJ、IS1245和IS901基因相符的特异扩增条带,说明实验成立;否则,此次实验视为无效。在实验成立的条件下,多重PCR检测试剂盒检测的疑似临床样品DNA,如扩增条带呈现579bp的IS901基因片段、387bp的IS1245基因片段和142bp的dnaJ基因片段三条带,则可直接判为禽结核病阳性。

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