用于检测HER2基因的FISH探针、其制备方法及应用与流程

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种用于检测her2基因的fish探针，同时本发明还涉及该fish探针的制备方法及应用。

背景技术：

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率占全身各种恶性肿瘤的7％～10％，仅次于宫颈癌。流行病学调查发现，5％～10％的乳腺癌是家族性的，有明显的家族遗传倾向。在40～60岁间、绝经期前后的妇女发病率较高。在我国，妇女乳腺癌发病率正逐年上升，并且显示出年轻化趋势。与30年前相比，我国乳腺癌死亡率上升了34.1％，其中城市上升了38.8％，它正以每年3％～4％的速度递增，死亡率已经排在女性癌症死亡率之首。乳腺癌病因尚未完全阐明，但许多研究资料表明，乳腺癌的发生除去出生地的因素外，还与内源性或外源性雌激素的长期刺激：雌激素的活性和表皮生长因子受体(her2)的过表达对乳癌的发生有重要作用。

人类her-2/neu基因(her-2基因)定位于染色体17q21，其编码产物为185kd的跨膜精蛋白p185，由1255个氨基酸组成，720—987位属于酪氨酸激酶区。her-2/neu蛋白是具有酪氨酸蛋白激酶活性跨膜慵蛋白，是egfr家族成员之一。her-2/neu蛋白由胞外的配体结合区、单链跨膜区及胞内的蛋白酪氨酸激酶区三部分组成，由于目前尚未发现能与her-2/neu蛋白直接结合的配体.其主要通过与家族中其他成员包括egfr(herl/erbbi)，her3/erbb3，her4/erbb4形成异二聚体而与各自的配体结合。her-2/neu蛋白常为异二聚体首选伴侣，且活性常强于其它异二聚体。当与配体结合后，主要通过引起受体二聚化及胞浆内酪氨酸激酶区的自身磷酸化.激活酪氨酸激酶的活性。her-2/neu蛋白在胃癌中的表达情况及影响因素her-2/neu蛋白通常只在胎儿时期表达，成年以后只在极少数组织内低水平表达。然而在多种人类肿瘤中却过度表达，如乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、原发性。肾细胞癌、子宫内膜癌等，并提示预后不良。荧光原位杂交的方法检测乳腺癌细胞中her-2/neu基因(17q12)的扩增，作为判断预后以及乳腺癌药物治疗，尤其是抗her-2单克隆抗体(赫赛汀)靶向治疗的一项辅助检测手段。

目前检测her2基因的方法包括:免疫组织化学(ihc)法检测her2蛋白过表达、荧光原位杂交(fish)法检测her2基因拷贝数、酶联免疫吸附试验(elisa)检测血清her2ecd或肿瘤组织p185。但病理常规工作中最实用的方法是ihc和fish。ihc较fish节约成本、简单易行,但容易受到组织处理方法、固定时间等影响,其结果判断和解释存在较大的变异,而fish具有高度的重复性和可靠性。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种用于检测her2基因的fish探针的制备方法。

一种用于检测her2基因的fish探针的制备方法包括以下步骤：

a、提取探针合成模板：利用基因组dna提取试剂盒提取人类基因组dna，作为her2基因以及17号染色体着丝粒区域检测探针合成的模板；

b、第一步pcr反应：采用第一组pcr反应引物，以人体基因组dna为模板，进行pcr体系的扩增，得到dna产物；

c、第二步pcr反应：采用第二组pcr反应引物，以与其对应的第一步pcr反应获得的dna产物为模板进行pcr体系的扩增，得到第二步pcr反应产物；

d、纯化：将第二步pcr反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，采用pcr产物凝胶回收试剂盒进行切胶、回收、纯化，得到检测her2基因的fish探针；

所述的第一组pcr反应引物包括her2基因第一组pcr反应引物和17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物；

所述的第二组pcr反应引物包括her2基因第二组pcr反应引物和17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

利用两对引物、分别进行两步pcr获得探针，如果第一次pcr体系的扩增产生了错误片断，则第二次pcr体系的扩增能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低，因此，增加了扩增特异性。同时通过两步pcr放大，提高了探针制备效率且降低了生产成本。

进一步的，步骤b第一步pcr反应中包含以下组分：反应引物、模板、2×estaqmastermix。

进一步的，步骤c第二步pcr反应中包含以下组分：反应引物、模板、dntp、荧光标记的dutp、taqdna聚合酶、含mg²⁺的10×taq酶反应缓冲液。

本发明直接通过荧光标记的dutp在第二步pcr扩增反应过程中即可将探针产物进行荧光标记，操作方便、简单、高效、经济。

进一步的，所述her2基因第一组pcr反应引物包括以下15对：seqidno.1和seqidno.2、seqidno.3和seqidno.4、seqidno.5和seqidno.6、seqidno.7和seqidno.8、seqidno.9和seqidno.10、seqidno.11和seqidno.12、seqidno.13和seqidno.14、seqidno.15和seqidno.16、seqidno.17和seqidno.18、seqidno.19和seqidno.20、seqidno.21和seqidno.22、seqidno.23和seqidno.24、seqidno.25和seqidno.26、seqidno.27和seqidno.28、seqidno.29和seqidno.30；

所述her2基因第二组pcr反应引物包括以下15对：seqidno.46和seqidno.47、seqidno.48和seqidno.49、seqidno.50和seqidno.51、seqidno.52和seqidno.53、seqidno.54和seqidno.55、seqidno.56和seqidno.57、seqidno.58和seqidno.59、seqidno.60和seqidno.61、seqidno.62和seqidno.63、seqidno.64和seqidno.65、seqidno.66和seqidno.67、seqidno.68和seqidno.69、seqidno.70和seqidno.71、seqidno.72和seqidno.73、seqidno.74和seqidno.75。

进一步的，所述17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物包括以下5对：seqidno.91和seqidno.92、seqidno.93和seqidno.94、seqidno.95和seqidno.96、seqidno.97和seqidno.98、seqidno.99和seqidno.100；

所述17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物包括以下5对：seqidno.106和seqidno.107、seqidno.108和seqidno.109、seqidno.110和seqidno.111、seqidno.112和seqidno.113、seqidno.114和seqidno.115。

进一步的，所述her2基因第一组pcr反应产物包括seqidno.31-seqidno.45，所述17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应产物包括seqidno.101-seqidno.105。

根据上述的制备方法得到的用于检测her2基因的fish探针包括有标记荧光染料的、针对her2基因的第一组探针和针对人类17号染色体着丝粒区域的第二组探针，所述第一组探针选自seqidno.76-seqidno.90中的至少一条探针，所述第二组探针选自seqidno.116-seqidno.120中的至少一条探针，所述第一组探针与第二组探针所标记的荧光染料颜色不一样。

fish探针应用于检测her2基因的检测方法包括以下步骤：

步骤一、制片：在载玻片上将细胞铺成单层，用丙酮固定8-12分钟，灭菌纯水中煮沸20-25分钟，在37℃孵箱中用蛋白酶消化3-5min，用2×ssc洗涤4-6min，放入70％乙醇、85％乙醇、100％乙醇中脱水各3min，室温晾干；

步骤二、杂交：将含有第一组探针和第二组探针的杂交液加至载玻片细胞区，盖上盖玻片，使其分布均匀，避免产生气泡，载玻片封边，放于85℃热台上变性4-6min，42℃孵箱中避光孵育18-20小时；

步骤三、洗片：去除盖玻片，依次在2×ssc、0.1％np-40/2×ssc中清洗载玻片，然后放入70％乙醇、85％乙醇、100％乙醇中脱水各3min，室温晾干；

步骤四、核染：将核染液滴加至载玻片细胞区，盖上盖玻片，使其分布均匀，避免产生气泡，避光染色5min，镜检观察。

进一步的，所述杂交液包括以下成分：第一组探针中的至少一种、第二组探针中的至少一种、去离子甲酰胺、ssc、硫酸葡聚糖。

进一步的，所述核染液为hoechst33258粉末经pbs配制浓度为1μg/ml的溶液。

本发明设计了多条探针进行检测，提高了检测灵敏度，协同增加了荧光强度，便于更加快速、准确的读取信号，方便结果判读。

附图说明

图1为阴性细胞系pbmc染色结果。

图2为阳性细胞系skbr3染色结果。

其中，箭头指示为17号染色体着丝粒区域信号(绿色)，其余为her2基因信号点(橙色)。

具体实施方式

实施例1

用于检测her2基因的fish探针的制备方法

1、her2基因探针的制备。

her2基因探针的制备方法包括以下步骤：

a、提取探针合成模板：抽取健康人外周血5ml，利用ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(pbmc)，利用基因组dna提取试剂盒提取pbmc基因组，即人类基因组dna，作为her2基因检测探针合成的模板。

b、第一步pcr反应：采用seqidno.1—seqidno.30共15对pcr反应引物，每对引物分别以人体基因组dna为模板，进行15个pcr体系的扩增，得到dna产物，以第一对引物seqidno.1和seqidno.2为例的反应体系配制如下：

pcr反应程序为：95℃，5min；(95℃，30s；57℃，30s；72℃，40s)×35个循环；72℃，10min；4℃保存。

c、第二步pcr反应：采用seqidno.46—seqidno.75为15对第二步pcr反应引物，每对引物分别以与其对应的第一步pcr反应获得的dna产物seqidno.31-seqidno.45为模板，进行15个pcr体系的扩增，得到第二步pcr反应产物，以引物对seqidno.46和seqidno.47为例的反应体系配制：

pcr反应程序为：95℃，5min；(95℃，30s；58℃，30s；72℃，40s)×30个循环；72℃，10min；4℃保存。

d、纯化：将第二步pcr反应产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，采用pcr产物凝胶回收试剂盒进行切胶、回收、纯化，得到检测her2基因的fish探针seqidno.76—seqidno.90，最终获得标记有tamra(橙色)的her2基因检测探针。

2、人类17号染色体着丝粒区域检测探针的制备

人类17号染色体着丝粒区域检测探针的制备方法包括以下步骤：

a、提取探针合成模板：抽取健康人外周血5ml，利用ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(pbmc)，利用基因组dna提取试剂盒提取pbmc基因组，即人类基因组dna，作为人类17号染色体着丝粒区域检测探针的模板。

b、第一步pcr反应：采用seqidno.91—seqidno.100共5对pcr反应引物，每对引物分别以人体基因组dna为模板，进行5个pcr体系的扩增，得到dna产物，以第一对引物seqidno.91和seqidno.92为例的反应体系配制如下：

pcr反应程序为：95℃，5min；(95℃，30s；57℃，30s；72℃，40s)×35个循环；72℃，10min；4℃保存。

c、第二步pcr反应：采用seqidno.106—seqidno.115为5对第二步pcr反应引物，每对引物分别以与其对应的第一步pcr反应获得的dna产物seqidno.101-seqidno.105为模板，进行5个pcr体系的扩增，得到第二步pcr反应产物，以引物对seqidno.106和seqidno.107为例的反应体系配制：

pcr反应程序为：95℃，5min；(95℃，30s；58℃，30s；72℃，40s)×30个循环；72℃，10min；4℃保存。

d、纯化：将第二步pcr反应产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，采用pcr产物凝胶回收试剂盒进行切胶、回收、纯化，得到人类17号染色体着丝粒区域检测探针seqidno.116—seqidno.120，最终获得标记有fluorescein(绿色)的17号染色体检测探针。

实施例2

fish探针应用于检测her2基因

1、her2基因拷贝数变异阴性细胞系pbmc染色

a、制片：调节pbmc细胞密度为4×10⁶/ml，取20μl细胞液滴加至防脱载玻片上，用盖玻片轻柔将细胞液铺平成单层细胞，待细胞晾干后滴加丙酮覆盖住细胞区固定10min。倾斜玻片弃去丙酮，室温晾干后将玻片放入灭菌纯水中沸水煮片20min。取出玻片，晾干并恢复至室温后，取适量胃蛋白酶消化液滴加至平铺细胞区，然后将玻片放入37℃孵箱的湿盒中，消化3min。取出玻片，倾斜玻片弃去消化液，将其放入2×ssc中，室温洗涤5min。取出玻片，倾斜去除液体，将其依次放入70％乙醇，85％乙醇，100％乙醇中脱水各3min，取出玻片室温晾干。

b、杂交：-20℃冰箱中取出制备好的杂交液，震荡混匀后快速离心。取10μl加至细胞区，盖上22×22mm盖玻片，轻压使杂交液分布均匀，避免产生气泡。用封片胶沿盖玻片边缘封边，将玻片放于85℃热台上，变性5min。转入42℃孵箱的湿盒中，避光孵育过夜(18～20小时)。

c、洗片：取出杂交结束的玻片，去除橡皮胶及盖玻片，放入37℃预热的2×ssc中，洗涤10min。取出玻片，放入37℃预热的0.1％np-40/2×ssc中，清洗5min。然后依次放入70％乙醇，85％乙醇，100％乙醇中脱水各3min，取出玻片室温晾干。

d、核染：取10μl核染液，滴加至细胞区，盖上22×22mm盖玻片，轻压使杂交液分布均匀，避免产生气泡。避光染色5min后即可镜检观察。

于荧光显微镜下367/452(核染蓝色)、552/576(her2探针橙色)、496/520(17号染色体绿色)滤光片下进行观察。

阴性细胞系pbmc染色结果见图1：图中箭头所指的染色信号点为绿色信号点，其余信号点为橙色信号点，可见细胞核内橙色的信号点数(her2基因染色)与绿色的信号点数(17号染色体着丝粒染色)比值正常，为1。

2、her2基因拷贝数变异阳性细胞系skbr3染色

a、制片：调节skbr3细胞密度为4×10⁶/ml，取20μl细胞液滴加至防脱载玻片上，用盖玻片轻柔将细胞液铺平成单层细胞，待细胞晾干后滴加丙酮覆盖住细胞区固定10min。倾斜玻片弃去丙酮，室温晾干后将玻片放入灭菌纯水中沸水煮片20min。取出玻片，晾干并恢复至室温后，取适量胃蛋白酶消化液滴加至平铺细胞区，然后将玻片放入37℃孵箱的湿盒中，消化3min。取出玻片，倾斜玻片弃去消化液，将其放入2×ssc中，室温洗涤5min。取出玻片，倾斜去除液体，将其依次放入70％乙醇，85％乙醇，100％乙醇中脱水各3min，取出玻片室温晾干。

b、杂交：-20℃冰箱中取出制备好的杂交液，震荡混匀后快速离心。取10μl加至细胞区，盖上22×22mm盖玻片，轻压使杂交液分布均匀，避免产生气泡。用封片胶沿盖玻片边缘封边，将玻片放于85℃热台上，变性5min。转入42℃孵箱的湿盒中，避光孵育过夜(18～20小时)。

c、洗片：取出杂交结束的玻片，去除橡皮胶及盖玻片，放入37℃预热的2×ssc中，洗涤10min。取出玻片，放入37℃预热的0.1％np-40/2×ssc中，清洗5min。然后依次放入70％乙醇，85％乙醇，100％乙醇中脱水各3min，取出玻片室温晾干。

d、核染：取10μl核染液，滴加至细胞区，盖上22×22mm盖玻片，轻压使杂交液分布均匀，避免产生气泡。避光染色5min后即可镜检观察。

于荧光显微镜下367/452(核染蓝色)、552/576(her2探针橙色)、496/520(17号染色体绿色)滤光片下进行观察。

阳性细胞系skbr3染色结果见图2：图中箭头所指的染色信号点为绿色信号点，其余信号点为橙色信号点，可见细胞核内橙色的信号点数(her2基因染色)与绿色的信号点数(17号染色体染色)比值结果增加，说明her2基因拷贝数增加。

上述实施例中各试剂组成如下：

胃蛋白酶：取40mg胃蛋白酶，加1ml去离子水溶解。

20×ssc：称取nacl175g，柠檬酸三钠88g，加入800ml去离子水，充分溶解并调ph至7.4左右，去离子水定容至1000ml，高压灭菌。使用时取50ml20×ssc，加入450ml无菌去离子水，充分混匀后获得2×ssc工作液。

50％硫酸葡聚糖：称取0.5g硫酸葡聚糖，去离子水定容至1ml。

杂交液：以100μl杂交液为例，体系配制如下：

0.1％np-40/2×ssc：20×ssc100ml，np-401ml，去离子水899ml，用naoh调节ph值至7.0～7.5。

核染液：hoechst33258粉末经pbs配制浓度为1μg/ml的溶液。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

sequencelisting

<110>河北德路通生物科技有限公司

<120>用于检测her2基因的fish探针、其制备方法及应用

<160>120

<170>patentinversion3.3

<210>1

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>1

agtacgcagtcgcggtacac20

<210>2

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>2

ggtggtgacagtaaacagccc21

<210>3

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>3

gaacaggacgcttgctttagt21

<210>4

<211>23

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>4

ctccctattttgtcaggatttca23

<210>5

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>5

tgaatgaaaccatcagaaacg21

<210>6

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>6

gctgccagggtctgagtct19

<210>7

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>7

aggtgagtcgcaggacagaag21

<210>8

<211>22

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>8

gaaaacaaacagaaatcgggag22

<210>9

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>9

gagccctgtcctgcctcttca21

<210>10

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>10

acaatgcccagtcccggtgg20

<210>11

<211>23

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>11

gtagctttcctgactggactaac23

<210>12

<211>24

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>12

gtaaggataaggtggagttttgta24

<210>13

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>13

gggaccggagaaaccagggg20

<210>14

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>14

ggaggcggaggctgccaact20

<210>15

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>15

gcaggggagacaaaatgaaag21

<210>16

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>16

gaggggtgaggacatgaggag21

<210>17

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>17

ggaggaagtgtggggaagag20

<210>18

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>18

gccagtgaggggagattaaa20

<210>19

<211>23

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>19

gggcatttctggtctcagggata23

<210>20

<211>23

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>20

gcacaactcagggcaaaggggta23

<210>21

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>21

gaaatccctctacttcccaag21

<210>22

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>22

gaaacacagacgcatcccatc21

<210>23

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>23

cagagtagaggtgagaaggaa21

<210>24

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>24

ctataagcagagggagacaag21

<210>25

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>25

ggaatgcaggtgtcatacagg21

<210>26

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>26

gaaagaacaaggcagctcgg20

<210>27

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>27

ggctacatgttcctgatctcc21

<210>28

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>28

ggtctcccatctgctttcttt21

<210>29

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>29

agtttggactttattgtgga20

<210>30

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应引物

<400>30

aagatttctttgttggcttt20

<210>31

<211>389

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>31

agtacgcagtcgcggtacaccggctcacggtcgccctgggagccgctcgccagcgccgct60

gccccagctagcaggaccaaccgcgccgccaggccggccatcctttctccctggctcgcc120

gccgggggaggagcttaggagtatgaagcttccacttccggagtaaccggaagttcctgt180

gttctttattctactctccgctgaagtccacacagtttaaattaaagttcccggattttt240

gtgggcgcctgccccgcccctcgtccccctgctgtgtccatatatcgaggcgatagggtt300

aagggaaggcggacgcctgatgggttaatgagcaaactgaagtgttttccatgatctttt360

ttgaggtagggctgtttactgtcaccacc389

<210>32

<211>640

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>32

gaacaggacgcttgctttagtatcctctccctgctcacctcccctgcactcccatcagca60

ccgacccacacccaatctcatagaagccttgtagctaaggatcaccctttctcctccccc120

actctcctcaccccttgtcaacttttctttttcgtcctgggggttggaatgagtaagaag180

tagcctgggattccattcactcacttaacaaacatttctgagtccttagctctagcacct240

tgctaagcaaggcaaaatctccaggaggcaccattcacattgcattttctgtgaatggtg300

ctctggggagcagcattcacattgccttttctgtgaatggcaaattcttccagttaaata360

taacatgaatagtgtcccctggagttgaccacccaactgatactgactgagaagctgaaa420

tgaacaaaacaaccccttagccctccaggagctgaccggaaatccagtgctaatactact480

ttgcatcttacagattagttcttttacaatactgtttttttttcttttttcatttcattt540

tgtcctttctgtgactctgggatgagtctttttatgaggatcctcatataaagatggaca600

tttaggattaaagaggatgaaatcctgacaaaatagggag640

<210>33

<211>516

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>33

tgaatgaaaccatcagaaacgaattgtcccctgaaatcaagactttgtgattgccatagt60

tgtatgcttctcaaaggttcctcgtctcctcttccttggaccaaaagtcagaggcaagaa120

tgccctcattcataccccagtggtctatacctccagcagcaagtcgagtgagcaagtgat180

gtcctgaaaggcccagtggatcagtggaatgaagcgggcaggaagacttagtgctcctga240

aacaaggaatccagaatccaggagaaggatggctcagtggggctttcaagggacaagtat300

gggggttgaaggggtcactgtccctataccaaatccgaaaatattgtgaccaggaaccat360

tctgtccaactcttctatttcaggtggcaaagcaaagctatattcaagaccacatgcaaa420

gctactccctgagcaaagagtcacagataaaacgggggcaccagtagaatggccaggaca480

aacgcagtgcagcacagagactcagaccctggcagc516

<210>34

<211>463

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>34

aggtgagtcgcaggacagaagagtgctttttgtttcagcagagcagcctggggagagata60

aaagctactcctggggcctgggcctgcattcctgagatgtgggtaagaggggcccagggt120

cagagtgtctggcaagcttggctctgcccctttgctgtcctggagactagggctaatcct180

gggctcagggagtggcctccccatggttaggatacaagtgctcatcaagggccaccccta240

ggaaggaccaattttcctatcagaagcttctaagttatcctcctttggcccaaagggaca300

cctcaagcctactctgaggaactctttccaatgaactaattcctacagtcacttccccag360

caacctgtgcctcagcctcaaggcactgtggggtaggcctcagtttgtggcctggacatc420

ggactgtggaccagacgactcctcccgatttctgtttgttttc463

<210>35

<211>519

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>35

gagccctgtcctgcctcttcagtgtcagtggtcactccactgcccacaggctggggtctt60

gggcaaaacacacgcatctgccctgatctgagtttgctgccctctgtcccgcagtcagcc120

ccactctgttcccactccctctccccagccccctagctagacccctctcaccagcacccc180

tttcccttccctgagggtccccctcgctgtctttgtccctcagacatcctctttcctggg240

ctctcctgccaggccctgctggagggacagttaaggaggaaatcgaatcagcagcgccca300

cccctgccccccttcctctcctcttgtcagacaccagacgaggttttttcctctggcttc360

ccagctctgaatgggctcattctttttcagaggctcggcccctctcgagcctcctcccca420

gggcgtgagttctgaccccagctcctccccccatccccactccagccccctctccagctt480

gctccaccctctctaccgcccaccgggactgggcattgt519

<210>36

<211>534

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>36

gtagctttcctgactggactaacctttccggacacaacagcagggcaggggtggggcctg60

gggagaaaggacacctctaaccctgatcctaacatcccgatggcctctaaggctgcctgc120

acactcatccaggtgcaagccctccaaggtgtggtgtgatgaaccagtgactcctggagc180

caggtcagcgcatcctcttcccgcagggctgtaagctgcaggactgagaggcaggttgac240

caggtcctgggctggatgatggggtgagagtaaggggtcagttttgatacatgcccaact300

tttctctctagccctaagacatcctgggcaaattgcttacctcagttcccctgatcctca360

ccctaaccctaacaccagctcaagagaaaatagggatattgatggccatccagaagggct420

gctgtgttccatacacagcaatatttctcgaatgtttgtgacagcggtccaaggaataag480

ttaattttacattatcactctggatacctgtacaaaactccaccttatccttac534

<210>37

<211>630

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>37

gggaccggagaaaccaggggagccccccgggcagccgcgcgccccttcccacggggccct60

ttactgcgccgcgcgcccggcccccacccctcgcagcaccccgcgccccgcgccctccca120

gccgggtccagccggagccatggggccggagccgcagtgagcaccatggagctggcggcc180

ttgtgccgctgggggctcctcctcgccctcttgccccccggagccgcgagcacccaaggt240

gggtctggtgtggggaggggacggagcagcggcgggaccctgccctgtggatgccccgcc300

gaggtcccgcggccggcggggccagaggggcccggacgagctctcctatcccgaagttgt360

ggacagtcgagacgctcagggcagccgggccctggggccctcgggcgggagggggcagtt420

acacggcagcggctcgagatggcccatccaagagactggcgctttccaggctccgagggg480

ctccgggaacttgtcaaagaagttctctgaaattgttcagaaagttttcccgcaaagggt540

gtattgcgtagagcgcgcgcgcgcgtttccccccttcttgagccccctcaagctttctca600

aagcctttccagttggcagcctccgcctcc630

<210>38

<211>575

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>38

gcaggggagacaaaatgaaagtgttctgggagtcgtgggtggtctccataggtcagaggg60

tctggggagggagtgggtgtcatcgtggctgtgtgttgcccgaggggccctctgtgagtg120

agtgcatggccgtgttatctctgcaggtctacgccagggtgttcctcagttgtgtggtct180

ttgtatttgtgtgtctgggctttgtgttgccaaacagcagtctctctgctgacttgggga240

cacaggctgaactctgtcctctgcaggaactcccttaaggtgctgggccagatctgccat300

aaacagagggaggtagccttctatggccacgccttcttgctgaggaagaaggttcctctc360

ttccagggagtacatccttgccctccctgtttcccagacaagcatcttcacctctcatct420

tctgatgagaagggtgaggccatactgagctgtcaggctgagctgctgcccttcctcacc480

ttgggctgggagttgatcagggaatggcagttgctgcagagctggatttgagggctgggt540

tctctggatggggcctcctcatgtcctcacccctc575

<210>39

<211>556

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>39

ggaggaagtgtggggaagaggagggggtgcaagtgggtgaggcatggagtggggaggcct60

ccctcagggacatggacccttgagttctatttctgttcctccctcctgttcctccctctt120

tgtccttatctgcctagagaggtgggaatagaggccattctgagtatcactaggagacca180

ccagtttgtggccactggccactggcccaggcagggaacctgggggcttgccctaccagc240

ctctcccagcaatctgaaggcagggggtacctcgtattaccccctaggatttgaccttag300

gctccaacttgctgggagagcagtgcctctggtgtcagaccccaagccagcccttgtgct360

gtccctgaatctgcatgtagcctgtgggaggcggagcagtgaccggcaggaattctgggc420

agctcaggcacctgtgggcctgagggtgccctctgcccccacccttccgatctcctgggc480

aagacacgccaggtgattcatctcaccagagcagaaaaacaagttcaactgggcacttta540

atctcccctcactggc556

<210>40

<211>573

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>40

gggcatttctggtctcagggataccaggctggggtccaagtgggccaggtgtggcagttc60

agccctatgccccatggctgatggctcgcgctgggcaggtatgcagggctgacgtagtgc120

ctttgtggcagcagtttcgtggcacacattctgccagctggttctggagtcttgccctga180

ggaggtggccagggtgagggtgccagcgcaggaacctttggcgcatgcttcaccctggcc240

tgggatctgcagcctgggtccagatgcccacaactggaatctgacgctccttttctcttc300

atgggggactcccagaggtctctgcaatgaccagagccccggttgtcccatgcctcagct360

gcaactccagctgaccctccttccccactctctgggtggcattacgggggtgtggatccc420

ttgccaagaggttggcatgtgggtgtgctggaatggcatagggagaatgcaccgagtttg480

tttgcttgggagaggggcagggggtatccagaagattcatgattcgtcatcgcctctctt540

gggggatttttacccctttgccctgagttgtgc573

<210>41

<211>587

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>41

gaaatccctctacttcccaagcacgcaagctttctcctgctgttaaacctgcagtgtgca60

agggacatgggcggaggggtccttcagtcaggcttctccctgtctgaggtggcatgactt120

ggagtgagtttggatggggtggccaggtctgagaaggtcccccgccagtgtcctctgacc180

catctgctctctcctgccagtgtgcaccggcacagacatgaagctgcggctccctgccag240

tcccgagacccacctggacatgctccgccacctctaccagggctgccaggtggtgcaggg300

aaacctggaactcacctacctgcccaccaatgccagcctgtccttcctgcaggtgaggcc360

cgtgggcaacccagccaggccctgcctccagctgggctgagccctctgtttacaggtggg420

tggcagaagaaggtgccctgcccttctgtttcctctcttgttgtggtttctcaaccagga480

agtcctttctaacatctaacccccattcattttactgcagaatcagttgactctctctat540

aacgtggctggccgaggtcatgtctggatgggatgcgtctgtgtttc587

<210>42

<211>607

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>42

cagagtagaggtgagaaggaaggagagagctgcggtccacatgagcatctggacctagca60

tggacaactcactcctccctggctctcgctttgttcttgttgcgggtgtggtggtggtgg120

gactcaaagacggtaaagatagctttctctcctccctggggaatctgggggttgtttaaa180

aggcctgctcctcttttagaaggcaggagggccccaagggaagcagaaggtgacagaagg240

ggaaagggtcctctgatcattgctcaccccacagagatcttgaaaggaggggtcttgatc300

cagcggaacccccagctctgctaccaggacacgattttgtggaaggacatcttccacaag360

aacaaccagctggctctcacactgatagacaccaaccgctctcgggcctgtaagccatgc420

ccctccctgctgcctcttctctcagacagcctgaccccagccgcaaactcccaacttaca480

acccagtgcctgcccgccactgccccagccgcctacaccacccatttcctccctctctgt540

ccctcctgccatctccctgtgcctcttcatctctggggttctctgtcttgtctccctctg600

cttatag607

<210>43

<211>689

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>43

ggaatgcaggtgtcatacaggtgacatgggaggggtgggataacaggcttgggatgtctc60

ccctgggccaggtagtctccctagaaggtgatgctgatgagggtctggtgcccagggcgc120

cactcagccctcatcctgccctttgcccaacagtgacgcgcactgtctgtgccggtggct180

gtgcccgctgcaaggggccactgcccactgactgctgccatgagcagtgtgctgccggct240

gcacgggccccaagcactctgactgcctggtatgtgcctctgctttgtgcccaatgtgct300

ctaccccccaggatgcaaggggtgggcaccctgcctggtactgccctattgcccctggca360

caccagggcaaaacagcacagtgaaagccagccacctgtccccccaggcctgcctccact420

tcaaccacagtggcatctgtgagctgcactgcccagccctggtcacctacaacacagaca480

cgtttgagtccatgcccaatcccgagggccggtatacattcggcgccagctgtgtgactg540

cctgtccctgtgagtgccagggagaaacacagttttctcattttggtggggaggtttgtt600

tctgtaaatgggagcatatggggagcactgtctgcatcttgctttgagagctggtcatga660

cagttcctgccgagctgccttgttctttc689

<210>44

<211>683

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>44

ggctacatgttcctgatctccttagacaactacctttctacggacgtgggatcctgcacc60

ctcgtctgccccctgcacaaccaagaggtgacagcagaggatggaacacagcggtgtgag120

aagtgcagcaagccctgtgcccgaggtacccactcactgcccccgaggccagctgcagtt180

cctgtccctctgcgcatgcagcctggcccagcccaccctgtcctatccttcctcagaccc240

tcttgggacctagtctctgccttctactctctacccctggcccccctcagccctacaagt300

gtccctatatcccctgtcagtgtggggaggggcccggaccctgatgctcatgtggctgtt360

gacctgtcccggtatgaaggctgagacggccccttccccacccacccccacctcctcagt420

gtgctatggtctgggcatggagcacttgcgagaggtgagggcagttaccagtgccaatat480

ccaggagtttgctggctgcaagaagatctttgggagcctggcatttctgccggagagctt540

tgatgggtaagagtgggcacgatgacctgagacagtgtcagggcagacagagtcctgagg600

atccagatgtggcagcatctcttggggatggcaggagacagaagtggggggatcaagaat660

gcaaagaaagcagatgggagacc683

<210>45

<211>878

<212>dna

<213>her2基因第一组pcr反应产物

<400>45

agtttggactttattgtggaggcagcggggagccaaggcaggttttagagtaggagaggg60

tccaagcctgtgggtcacccttccgacttccctttccgaatgccaaacaccttcatgtcc120

cccgtgggccccctttgtccctcccaccccaaactagccctcaatccctgaccctggctt180

ccgcccccagccctctgacgtccatcatctctgcggtggttggcattctgctggtcgtgg240

tcttgggggtggtctttgggatcctcatcaagcgacggcagcagaagatccggaagtaca300

cgatgcggagactgctgcaggaaacggaggtgaggcggggtgaagtcctcccagcccgcg360

tggggtctgcaccggcccccggcactgacccaccaccccctcaccccagctggtggagcc420

gctgacacctagcggagcgatgcccaaccaggcgcagatgcggatcctgaaagagacgga480

gctgaggaaggtgaaggtgcttggatctggcgcttttggcacagtctacaaggtcagggc540

caggtcctggggtgggcggccccagaggatgggggcggtgcctggaggggtgtggtcggc600

agttctgatgggaggggcaagagctggaggcagtgtttgggggagggcagttacagcgga660

gaagggagcggggccaagccctagggtggtgaaggatgtttggaggacaagtaatgatct720

cctggaaggcaggtaggatccagcccacgctcttctcactcatatcctcctctttctgcc780

cagggcatctggatccctgatggggagaatgtgaaaattccagtggccatcaaagtgttg840

agggaaaacacatcccccaaagccaacaaagaaatctt878

<210>46

<211>17

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>46

acggtcgccctgggagc17

<210>47

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>47

atcatggaaaacacttcagtt21

<210>48

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>48

cacccaatctcatagaagcc20

<210>49

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>49

agactcatcccagagtcacag21

<210>50

<211>25

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>50

gattgccatagttgtatgcttctca25

<210>51

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>51

tgtgctgcactgcgtttgt19

<210>52

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>52

cagcagagcagcctggggaga21

<210>53

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>53

tctggtccacagtccgatgt20

<210>54

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>54

ggggtcttgggcaaaacac19

<210>55

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>55

agggtggagcaagctggag19

<210>56

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>56

caacagcagggcaggggtg19

<210>57

<211>21

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>57

ggaccgctgtcacaaacattc21

<210>58

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>58

ttcccacggggccctttact20

<210>59

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>59

agcgccagtctcttggatgg20

<210>60

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>60

cgtgggtggtctccatagg19

<210>61

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>61

ctgcagcaactgccattcc19

<210>62

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>62

ctccctctttgtccttatct20

<210>63

<211>20

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>63

ttgaacttgtttttctgctc20

<210>64

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>64

gttcagccctatgccccat19

<210>65

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>65

ggataccccctgcccctct19

<210>66

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>66

tctccctgtctgaggtggc19

<210>67

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>67

tgaatgggggttagatgtt19

<210>68

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>68

ttcttgttgcgggtgtggt19

<210>69

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>69

ggaaatgggtggtgtaggc19

<210>70

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>70

gccactcagccctcatcct19

<210>71

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>71

gaaacaaacctccccacca19

<210>72

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>72

cagttcctgtccctctgcg19

<210>73

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>73

ttctgtctcctgccatccc19

<210>74

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>74

ccaaactagccctcaatcc19

<210>75

<211>19

<212>dna

<213>her2基因第二组pcr反应引物

<400>75

gctcccttctccgctgtaa19

<210>76

<211>329

<212>dna

<213>第一组探针

<400>76

acggtcgccctgggagccgctcgccagcgccgctgccccagctagcaggaccaaccgcgc60

cgccaggccggccatcctttctccctggctcgccgccgggggaggagcttaggagtatga120

agcttccacttccggagtaaccggaagttcctgtgttctttattctactctccgctgaag180

tccacacagtttaaattaaagttcccggatttttgtgggcgcctgccccgcccctcgtcc240

ccctgctgtgtccatatatcgaggcgatagggttaagggaaggcggacgcctgatgggtt300

aatgagcaaactgaagtgttttccatgat329

<210>77

<211>501

<212>dna

<213>第一组探针

<400>77

cacccaatctcatagaagccttgtagctaaggatcaccctttctcctcccccactctcct60

caccccttgtcaacttttctttttcgtcctgggggttggaatgagtaagaagtagcctgg120

gattccattcactcacttaacaaacatttctgagtccttagctctagcaccttgctaagc180

aaggcaaaatctccaggaggcaccattcacattgcattttctgtgaatggtgctctgggg240

agcagcattcacattgccttttctgtgaatggcaaattcttccagttaaatataacatga300

atagtgtcccctggagttgaccacccaactgatactgactgagaagctgaaatgaacaaa360

acaaccccttagccctccaggagctgaccggaaatccagtgctaatactactttgcatct420

tacagattagttcttttacaatactgtttttttttcttttttcatttcattttgtccttt480

ctgtgactctgggatgagtct501

<210>78

<211>448

<212>dna

<213>第一组探针

<400>78

gattgccatagttgtatgcttctcaaaggttcctcgtctcctcttccttggaccaaaagt60

cagaggcaagaatgccctcattcataccccagtggtctatacctccagcagcaagtcgag120

tgagcaagtgatgtcctgaaaggcccagtggatcagtggaatgaagcgggcaggaagact180

tagtgctcctgaaacaaggaatccagaatccaggagaaggatggctcagtggggctttca240

agggacaagtatgggggttgaaggggtcactgtccctataccaaatccgaaaatattgtg300

accaggaaccattctgtccaactcttctatttcaggtggcaaagcaaagctatattcaag360

accacatgcaaagctactccctgagcaaagagtcacagataaaacgggggcaccagtaga420

atggccaggacaaacgcagtgcagcaca448

<210>79

<211>400

<212>dna

<213>第一组探针

<400>79

cagcagagcagcctggggagagataaaagctactcctggggcctgggcctgcattcctga60

gatgtgggtaagaggggcccagggtcagagtgtctggcaagcttggctctgcccctttgc120

tgtcctggagactagggctaatcctgggctcagggagtggcctccccatggttaggatac180

aagtgctcatcaagggccacccctaggaaggaccaattttcctatcagaagcttctaagt240

tatcctcctttggcccaaagggacacctcaagcctactctgaggaactctttccaatgaa300

ctaattcctacagtcacttccccagcaacctgtgcctcagcctcaaggcactgtggggta360

ggcctcagtttgtggcctggacatcggactgtggaccaga400

<210>80

<211>400

<212>dna

<213>第一组探针

<400>80

cagcagagcagcctggggagagataaaagctactcctggggcctgggcctgcattcctga60

gatgtgggtaagaggggcccagggtcagagtgtctggcaagcttggctctgcccctttgc120

tgtcctggagactagggctaatcctgggctcagggagtggcctccccatggttaggatac180

aagtgctcatcaagggccacccctaggaaggaccaattttcctatcagaagcttctaagt240

tatcctcctttggcccaaagggacacctcaagcctactctgaggaactctttccaatgaa300

ctaattcctacagtcacttccccagcaacctgtgcctcagcctcaaggcactgtggggta360

ggcctcagtttgtggcctggacatcggactgtggaccaga400

<210>81

<211>435

<212>dna

<213>第一组探针

<400>81

caacagcagggcaggggtggggcctggggagaaaggacacctctaaccctgatcctaaca60

tcccgatggcctctaaggctgcctgcacactcatccaggtgcaagccctccaaggtgtgg120

tgtgatgaaccagtgactcctggagccaggtcagcgcatcctcttcccgcagggctgtaa180

gctgcaggactgagaggcaggttgaccaggtcctgggctggatgatggggtgagagtaag240

gggtcagttttgatacatgcccaacttttctctctagccctaagacatcctgggcaaatt300

gcttacctcagttcccctgatcctcaccctaaccctaacaccagctcaagagaaaatagg360

gatattgatggccatccagaagggctgctgtgttccatacacagcaatatttctcgaatg420

tttgtgacagcggtc435

<210>82

<211>418

<212>dna

<213>第一组探针

<400>82

ttcccacggggccctttactgcgccgcgcgcccggcccccacccctcgcagcaccccgcg60

ccccgcgccctcccagccgggtccagccggagccatggggccggagccgcagtgagcacc120

atggagctggcggccttgtgccgctgggggctcctcctcgccctcttgccccccggagcc180

gcgagcacccaaggtgggtctggtgtggggaggggacggagcagcggcgggaccctgccc240

tgtggatgccccgccgaggtcccgcggccggcggggccagaggggcccggacgagctctc300

ctatcccgaagttgtggacagtcgagacgctcagggcagccgggccctggggccctcggg360

cgggagggggcagttacacggcagcggctcgagatggcccatccaagagactggcgct418

<210>83

<211>486

<212>dna

<213>第一组探针

<400>83

cgtgggtggtctccataggtcagagggtctggggagggagtgggtgtcatcgtggctgtg60

tgttgcccgaggggccctctgtgagtgagtgcatggccgtgttatctctgcaggtctacg120

ccagggtgttcctcagttgtgtggtctttgtatttgtgtgtctgggctttgtgttgccaa180

acagcagtctctctgctgacttggggacacaggctgaactctgtcctctgcaggaactcc240

cttaaggtgctgggccagatctgccataaacagagggaggtagccttctatggccacgcc300

ttcttgctgaggaagaaggttcctctcttccagggagtacatccttgccctccctgtttc360

ccagacaagcatcttcacctctcatcttctgatgagaagggtgaggccatactgagctgt420

caggctgagctgctgcccttcctcaccttgggctgggagttgatcagggaatggcagttg480

ctgcag486

<210>84

<211>417

<212>dna

<213>第一组探针

<400>84

ctccctctttgtccttatctgcctagagaggtgggaatagaggccattctgagtatcact60

aggagaccaccagtttgtggccactggccactggcccaggcagggaacctgggggcttgc120

cctaccagcctctcccagcaatctgaaggcagggggtacctcgtattaccccctaggatt180

tgaccttaggctccaacttgctgggagagcagtgcctctggtgtcagaccccaagccagc240

ccttgtgctgtccctgaatctgcatgtagcctgtgggaggcggagcagtgaccggcagga300

attctgggcagctcaggcacctgtgggcctgagggtgccctctgcccccacccttccgat360

ctcctgggcaagacacgccaggtgattcatctcaccagagcagaaaaacaagttcaa417

<210>85

<211>453

<212>dna

<213>第一组探针

<400>85

gttcagccctatgccccatggctgatggctcgcgctgggcaggtatgcagggctgacgta60

gtgcctttgtggcagcagtttcgtggcacacattctgccagctggttctggagtcttgcc120

ctgaggaggtggccagggtgagggtgccagcgcaggaacctttggcgcatgcttcaccct180

ggcctgggatctgcagcctgggtccagatgcccacaactggaatctgacgctccttttct240

cttcatgggggactcccagaggtctctgcaatgaccagagccccggttgtcccatgcctc300

agctgcaactccagctgaccctccttccccactctctgggtggcattacgggggtgtgga360

tcccttgccaagaggttggcatgtgggtgtgctggaatggcatagggagaatgcaccgag420

tttgtttgcttgggagaggggcagggggtatcc453

<210>86

<211>415

<212>dna

<213>第一组探针

<400>86

tctccctgtctgaggtggcatgacttggagtgagtttggatggggtggccaggtctgaga60

aggtcccccgccagtgtcctctgacccatctgctctctcctgccagtgtgcaccggcaca120

gacatgaagctgcggctccctgccagtcccgagacccacctggacatgctccgccacctc180

taccagggctgccaggtggtgcagggaaacctggaactcacctacctgcccaccaatgcc240

agcctgtccttcctgcaggtgaggcccgtgggcaacccagccaggccctgcctccagctg300

ggctgagccctctgtttacaggtgggtggcagaagaaggtgccctgcccttctgtttcct360

ctcttgttgtggtttctcaaccaggaagtcctttctaacatctaacccccattca415

<210>87

<211>436

<212>dna

<213>第一组探针

<400>87

ttcttgttgcgggtgtggtggtggtgggactcaaagacggtaaagatagctttctctcct60

ccctggggaatctgggggttgtttaaaaggcctgctcctcttttagaaggcaggagggcc120

ccaagggaagcagaaggtgacagaaggggaaagggtcctctgatcattgctcaccccaca180

gagatcttgaaaggaggggtcttgatccagcggaacccccagctctgctaccaggacacg240

attttgtggaaggacatcttccacaagaacaaccagctggctctcacactgatagacacc300

aaccgctctcgggcctgtaagccatgcccctccctgctgcctcttctctcagacagcctg360

accccagccgcaaactcccaacttacaacccagtgcctgcccgccactgccccagccgcc420

tacaccacccatttcc436

<210>88

<211>484

<212>dna

<213>第一组探针

<400>88

gccactcagccctcatcctgccctttgcccaacagtgacgcgcactgtctgtgccggtgg60

ctgtgcccgctgcaaggggccactgcccactgactgctgccatgagcagtgtgctgccgg120

ctgcacgggccccaagcactctgactgcctggtatgtgcctctgctttgtgcccaatgtg180

ctctaccccccaggatgcaaggggtgggcaccctgcctggtactgccctattgcccctgg240

cacaccagggcaaaacagcacagtgaaagccagccacctgtccccccaggcctgcctcca300

cttcaaccacagtggcatctgtgagctgcactgcccagccctggtcacctacaacacaga360

cacgtttgagtccatgcccaatcccgagggccggtatacattcggcgccagctgtgtgac420

tgcctgtccctgtgagtgccagggagaaacacagttttctcattttggtggggaggtttg480

tttc484

<210>89

<211>468

<212>dna

<213>第一组探针

<400>89

cagttcctgtccctctgcgcatgcagcctggcccagcccaccctgtcctatccttcctca60

gaccctcttgggacctagtctctgccttctactctctacccctggcccccctcagcccta120

caagtgtccctatatcccctgtcagtgtggggaggggcccggaccctgatgctcatgtgg180

ctgttgacctgtcccggtatgaaggctgagacggccccttccccacccacccccacctcc240

tcagtgtgctatggtctgggcatggagcacttgcgagaggtgagggcagttaccagtgcc300

aatatccaggagtttgctggctgcaagaagatctttgggagcctggcatttctgccggag360

agctttgatgggtaagagtgggcacgatgacctgagacagtgtcagggcagacagagtcc420

tgaggatccagatgtggcagcatctcttggggatggcaggagacagaa468

<210>90

<211>521

<212>dna

<213>第一组探针

<400>90

ccaaactagccctcaatccctgaccctggcttccgcccccagccctctgacgtccatcat60

ctctgcggtggttggcattctgctggtcgtggtcttgggggtggtctttgggatcctcat120

caagcgacggcagcagaagatccggaagtacacgatgcggagactgctgcaggaaacgga180

ggtgaggcggggtgaagtcctcccagcccgcgtggggtctgcaccggcccccggcactga240

cccaccaccccctcaccccagctggtggagccgctgacacctagcggagcgatgcccaac300

caggcgcagatgcggatcctgaaagagacggagctgaggaaggtgaaggtgcttggatct360

ggcgcttttggcacagtctacaaggtcagggccaggtcctggggtgggcggccccagagg420

atgggggcggtgcctggaggggtgtggtcggcagttctgatgggaggggcaagagctgga480

ggcagtgtttgggggagggcagttacagcggagaagggagc521

<210>91

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>91

gggaggcaatgagaagcaa19

<210>92

<211>20

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>92

caggctgatccatcttaggg20

<210>93

<211>22

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>93

aaagtgaaggaggatagaatgt22

<210>94

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>94

agatggtcccgtagaaatg19

<210>95

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>95

ggcagaacactgagcaatc19

<210>96

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>96

gaacccaaggctgtagaaa19

<210>97

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>97

gtctttctgctccctttac19

<210>98

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>98

gtccctctgagtttacctt19

<210>99

<211>21

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>99

agcaaagagggatagataggt21

<210>100

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应引物

<400>100

tcctggtggacactgaact19

<210>101

<211>427

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应产物

<400>101

gggaggcaatgagaagcaaggaggatctaccctgctcaggcccagggaagggctgcagca60

gaggacagcaagggagcagtgtcctcaggggattgggcctcttactcacagcaaggaaca120

aaaggaagagttccctgaggctgctgaaaaccagggggctgctggtgctggagcaggatt180

ttgaggacatgcaaaagggtttcggcaagggacagagggaggaaggaactggggagtgag240

ggtcagcccaagataaccaggcctctcccaggaatcttcgggacactcagaagcagtggc300

catgcccagttgggcccacaaagggcacccagtgcctagcatgagaaacaggcctgccta360

ttgcccaggcctgacaaagcccagccattgctggcacctgctgtagcccctaagatggat420

cagcctg427

<210>102

<211>613

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应产物

<400>102

aaagtgaaggaggatagaatgtgtcagtgggagagggggatgggagagccatattttaga60

cagggtcatacaggagggtatagatctaaccactattcctctggcccattccacatctat120

ccccatcccaccccctgcacagtgcttgggtcaaagcctctcagtcctgcttgtatttct180

ccaagagtgatccggggaccaactgcatcagaactgtggggcgaggtcacagcccctgcc240

tgtgagaagtgcagattcctctgcctggaccagaatccctgggaactggacccaggaatt300

tcccaagatctctgggggattctgagacagcccaaagtatgggaactgcagatgtcctcc360

taaaaggggagcactgtctcaaggggtccaggtcacctagctctaccctgcagtgaccac420

accagtctgagccttggagaatgctgctctttcctcctggaattcccttcccagcattcc480

tcacctggtaactcttacacatccctcaagacccaactcaagggccacctcctcctgatg540

tcacttcctgaactttctcctgtgcttccactctcctctaccaagtgatgttgacatttc600

tacgggaccatct613

<210>103

<211>445

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应产物

<400>103

ggcagaacactgagcaatcctcagaaggaagaagcagagggagggaggcccacaggggag60

acagaacctttaacaccaaccagggtcctggtcctgggtccagcagatctggcaggaatg120

aggaatgggaggcttatgggtaagggcttcagccaggcagggaaaggcctcactctccct180

tccactcctttccctgctccccactttcctgtcccatctttggtaacaggctcagcatct240

ccagctgcacccacccactagatttgccccaattccttctcctctctcatgcctgaggcc300

caggtggcttccagagctgaccaggtctactttagaattttaatgaaataacctgggtag360

aagtgctggtgccctgccagccacagcaggtactccacatatggtaaactggaactgtct420

tctcagtttctacagccttgggttc445

<210>104

<211>498

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应产物

<400>104

gtctttctgctccctttacactctgtgcagcatccagacctgcctgcagtgagctcctct60

actcccccaccaaagctctgttgaattaatgtccctgtggggtttaagtgactgacagta120

acttcctcagtctccttgcagcctagtctaggaaggtgccttctaaagaatagcattcta180

atgtgaaattttagtactgtgaaagtctaatgggagaaatcagattcctttacaagatta240

cagaaaaaaaacagggcaatgagtatctctaaaagagaatgctcacttggagtgtcgatg300

gggttaggtggccgatacaggatgaaaggctttcatttggctccctgacttgctgggttt360

ggggatttccctggtccgcgtcattatctcttccctcctgcccagcatgtgctcacacta420

gcccctctgcctggttgtccttcccacaggccctttttcttacatttttttagacaatta480

aggtaaactcagagggac498

<210>105

<211>524

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第一组pcr反应产物

<400>105

agcaaagagggatagataggtgtgggagtacagggacagaatcacagttgggacccttga60

gaaggcagttggagtttttctgccagggcaggagaagtcttctgggcacccagactggca120

cgtgcaaaggcatagaggcaagcttcccctgacacacggctggaggggaagctctaagtg180

ctgcgcacaggctgttcacactgcatccttctccctggacttgctccccccacagcacct240

ccatccttccagttagctatccagaccacccccctcaccctctcacacccacatcctgtg300

ggccccacatttgagaaacaagaattcagttgcttctcacccccccaccccatggctgct360

catcacctggtctgagtccccatcccctctctccccatacttggtctctgcttccatcct420

tgactcctgacgtctaattgcaactcaatactaggtcagatcatgtcacacttctgctct480

ggtgcaagaattatgtggttccttcagttcagtgtccaccagga524

<210>106

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>106

gggacagagggaggaagga19

<210>107

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>107

tacagcaggtgccagcaat19

<210>108

<211>21

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>108

ctcagtcctgcttgtatttct21

<210>109

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>109

ccatactttgggctgtctc19

<210>110

<211>20

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>110

cccactttcctgtcccatct20

<210>111

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>111

ggcaccagcacttctaccc19

<210>112

<211>21

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>112

aaagtctaatgggagaaatca21

<210>113

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>113

gaaggacaaccaggcagag19

<210>114

<211>19

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>114

cttgagaaggcagttggag19

<210>115

<211>18

<212>dna

<213>17号染色体着丝粒区域第二组pcr反应引物

<400>115

aaggatggaggtgctgtg18

<210>116

<211>197

<212>dna

<213>第二组探针

<400>116

gggacagagggaggaaggaactggggagtgagggtcagcccaagataaccaggcctctcc60

caggaatcttcgggacactcagaagcagtggccatgcccagttgggcccacaaagggcac120

ccagtgcctagcatgagaaacaggcctgcctattgcccaggcctgacaaagcccagccat180

tgctggcacctgctgta197

<210>117

<211>183

<212>dna

<213>第二组探针

<400>117

ctcagtcctgcttgtatttctccaagagtgatccggggaccaactgcatcagaactgtgg60

ggcgaggtcacagcccctgcctgtgagaagtgcagattcctctgcctggaccagaatccc120

tgggaactggacccaggaatttcccaagatctctgggggattctgagacagcccaaagta180

tgg183

<210>118

<211>174

<212>dna

<213>第二组探针

<400>118

cccactttcctgtcccatctttggtaacaggctcagcatctccagctgcacccacccact60

agatttgccccaattccttctcctctctcatgcctgaggcccaggtggcttccagagctg120

accaggtctactttagaattttaatgaaataacctgggtagaagtgctggtgcc174

<210>119

<211>242

<212>dna

<213>第二组探针

<400>119

aaagtctaatgggagaaatcagattcctttacaagattacagaaaaaaaacagggcaatg60

agtatctctaaaagagaatgctcacttggagtgtcgatggggttaggtggccgatacagg120

atgaaaggctttcatttggctccctgacttgctgggtttggggatttccctggtccgcgt180

cattatctcttccctcctgcccagcatgtgctcacactagcccctctgcctggttgtcct240

tc242

<210>120

<211>193

<212>dna

<213>第二组探针

<400>120

cttgagaaggcagttggagtttttctgccagggcaggagaagtcttctgggcacccagac60

tggcacgtgcaaaggcatagaggcaagcttcccctgacacacggctggaggggaagctct120

aagtgctgcgcacaggctgttcacactgcatccttctccctggacttgctccccccacag180

cacctccatcctt193