本发明涉及天然产物的提取技术领域，具体涉及一种虾青素的提取方法。
背景技术：
虾青素，又称变胞藻黄素或虾红素，是一种类胡萝卜素，是一种较强的抗氧化剂，在虾、蟹、藻类、酵母中存在，目前已知的天然虾青素含量较高的是雨生红球藻和法拉酵母，雨生红球藻含有的主要是酯化的虾青素，酯化的虾青素是存储在体内的更为稳定的未被氧化过的虾青素，因此被公认为是自然界中生产虾青素最好的生物。
虾青素为为长链不饱和双键结构体系，因此，性质不稳定，易异构化和降解，对热、氧、光、酸、碱等较为敏感。目前虾青素的提取率、纯度均较低，生产成本高，因此需要更为全面的开发提取方法，提高虾青素的提取率和纯度，增加其经济效益。
技术实现要素：
针对以上现有技术的不足之处，本发明提供一种虾青素的提取方法。
本发明采取的技术方案如下：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：取雨生红球藻藻粉3～5g，进行低温研磨，加入0.3～0.6mg/ml的纤维素酶和0.1～0.3mg/ml的果胶酶共200～300ml进行破壁，破壁温度0～4℃、破壁时间45～60min、酶反应ph3.5～5.0，加入0.5～2g/ml的氯化钠溶液，混合5～10min，分离上清和沉淀；
s2：取步骤s1中的沉淀，按料液比1：2～3，加入含2～3％氢氧化钠的甲醇溶液，反应1～2h，加入食用油-丙酮-乙酸乙酯进行提取，分离，得到提取液a和滤渣x；取滤渣x分别用不同体积比的丙酮-甲醇溶液依次进行提取，分离，合并后得到滤渣y和提取液b；取滤渣y以乙醇提取，分离，得到提取液c；
s3：将提取液a、提取液b和提取液c混合，冷冻干燥，选择用三种大孔树脂材料混合而成的组合型大孔树脂进行纯化，得到本发明虾青素。
优选的，所述步骤s1中氯化钠的加入量为20～50ml，离心参数为：2000～3000rpm离心5～10min。
优选的，所述步骤s2中食用油-丙酮-乙酸乙酯的体积比为50～52∶25～29∶19～25，丙酮-甲醇的体积比分别为99∶1、75～88∶12～25、50～60∶40～50、0∶100。
优选的，所述步骤s3中三种大孔树脂材料分别为xda-1、xda-6和xad-16。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明首先利用低温研磨的方法对雨生红球藻进行初级破壁，然后结合纤维素酶和果胶酶进行二次破壁，从而实现细胞的充分破壁，并且二次破壁时的温度为0～4℃，突破了常规的破壁温度选择思路，避免高温对雨生红球藻有效成分的破坏作用，为后续的虾青素提取提供良好的基础。
2、本发明通过多级提取的方式，条件温和，不会对虾青素产生破坏，同时采用了组合型大孔树脂进行纯化，大大提高了虾青素的提取率和纯度，从而提高了雨生红球藻的利用价值，增加经济效益，为工业化生产奠定坚实基础。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚，但本发明的保护范围不限于以下实施例。
实施例1：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：取雨生红球藻藻粉3g，进行低温研磨，加入0.4mg/ml的纤维素酶和0.1mg/ml的果胶酶共300ml进行破壁，破壁温度0℃、破壁时间60min、酶反应ph4，加入0.7g/ml的氯化钠溶液50ml，混合10min，2000rpm离心5min，分离上清和沉淀；
s2：取步骤s1中的沉淀，按料液比1∶2，加入含3％氢氧化钠的甲醇溶液，反应1h，加入食用油-丙酮-乙酸乙酯(体积比为52∶29∶19)进行提取，分离，得到提取液a和滤渣x；取滤渣x分别用体积比为99∶1、88∶12、60∶40、0∶100的丙酮-甲醇溶液依次进行提取，分离，合并后得到滤渣y和提取液b；取滤渣y以乙醇提取，分离，得到提取液c；
s3：将提取液a、提取液b和提取液c混合，冷冻干燥，选择用三种大孔树脂材料混合而成的组合型大孔树脂进行纯化，所述三种大孔树脂材料为xda-1，xda-6和xad-16，得到本发明虾青素。
实施例2：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：取雨生红球藻藻粉5g，进行低温研磨，加入0.3mg/ml的纤维素酶和0.1mg/ml的果胶酶共200ml进行破壁，破壁温度4℃、破壁时间45min、酶反应ph3.5，加入2g/ml的氯化钠溶液50ml，混合10min，2000rpm离心10min，分离上清和沉淀；
s2：取步骤s1中的沉淀，按料液比1∶3，加入含2％氢氧化钠的甲醇溶液，反应2h，加入食用油-丙酮-乙酸乙酯(体积比为50∶25∶25)进行提取，分离，得到提取液a和滤渣x；取滤渣x分别用体积比为99∶1、75∶25、60∶40、0∶100的丙酮-甲醇溶液依次进行提取，分离，合并后得到滤渣y和提取液b；取滤渣y以乙醇提取，分离，得到提取液c；
s3：将提取液a、提取液b和提取液c混合，冷冻干燥，选择用三种大孔树脂材料混合而成的组合型大孔树脂进行纯化，所述三种大孔树脂材料为xda-1，xda-6和xad-16，得到本发明虾青素。
实施例3：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：取雨生红球藻藻粉3g，进行低温研磨，加入0.6mg/ml的纤维素酶和0.3mg/ml的果胶酶共300ml进行破壁，破壁温度0℃、破壁时间45min、酶反应ph5.0，加入0.5g/ml的氯化钠溶液20ml，混合5min，3000rpm离心5min，分离上清和沉淀；
s2：取步骤s1中的沉淀，按料液比1∶3，加入含3％氢氧化钠的甲醇溶液，反应1h，加入食用油-丙酮-乙酸乙酯(体积比为52∶29∶19)进行提取，分离，得到提取液a和滤渣x；取滤渣x分别用体积比为99∶1、88∶12、50∶50、0∶100的丙酮-甲醇溶液依次进行提取，分离，合并后得到滤渣y和提取液b；取滤渣y以乙醇提取，分离，得到提取液c；
s3：将提取液a、提取液b和提取液c混合，冷冻干燥，选择用三种大孔树脂材料混合而成的组合型大孔树脂进行纯化，所述三种大孔树脂材料为xda-1，xda-6和xad-16，得到本发明虾青素。
实施例4：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：取雨生红球藻藻粉4g，进行低温研磨，加入0.5mg/ml的纤维素酶和0.2mg/ml的果胶酶共250ml进行破壁，破壁温度2℃、破壁时间50min、酶反应ph4.5，加入1.5g/ml的氯化钠溶液25ml，混合5min，2000rpm离心5min，分离上清和沉淀；
s2：取步骤s1中的沉淀，按料液比1∶3，加入含3％氢氧化钠的甲醇溶液，反应1h，加入食用油-丙酮-乙酸乙酯(体积比为52∶29∶19)进行提取，分离，得到提取液a和滤渣x；取滤渣x分别用体积比为99∶1、80∶20、55∶45、0∶100的丙酮-甲醇溶液依次进行提取，分离，合并后得到滤渣y和提取液b；取滤渣y以乙醇提取，分离，得到提取液c；
s3：将提取液a、提取液b和提取液c混合，冷冻干燥，选择用三种大孔树脂材料混合而成的组合型大孔树脂进行纯化，所述三种大孔树脂材料为xda-1，xda-6和xad-16，得到本发明虾青素。
对比例1：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：取雨生红球藻藻粉3g，进行低温研磨，加入0.1mg/ml的纤维素酶和0.1mg/ml的果胶酶共100ml进行破壁，破壁温度0℃、破壁时间60min、酶反应ph3.5，加入2g/ml的氯化钠溶液20ml，混合10min，3000rpm离心5min，分离上清和沉淀；
s2：取步骤s1中的沉淀，按料液比1∶2，加入含1％氢氧化钠的甲醇溶液，反应1h，加入食用油-丙酮-乙酸乙酯(体积比为30∶40∶30)进行提取，分离，得到提取液a和滤渣x；取滤渣x分别用体积比为99∶1、60∶40、30∶70、0∶100的丙酮-甲醇溶液依次进行提取，分离，合并后得到滤渣y和提取液b；取滤渣y以乙醇提取，分离，得到提取液c；
s3：将提取液a、提取液b和提取液c混合，冷冻干燥，选择用三种大孔树脂材料混合而成的组合型大孔树脂进行纯化，所述三种大孔树脂材料为xda-1，xda-6和xad-16，得到本发明虾青素。
对比例2：
一种虾青素的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
s1：取雨生红球藻藻粉3g，进行低温研磨，加入1mg/ml的纤维素酶和0.5mg/ml的果胶酶共200ml进行破壁，破壁温度0℃、破壁时间60min、酶反应ph3.5，加入2g/ml的氯化钠溶液20ml，混合10min，3000rpm离心5min，分离上清和沉淀；
s2：取步骤s1中的沉淀，按料液比1∶2，加入含5％氢氧化钠的甲醇溶液，反应1h，加入食用油-丙酮-乙酸乙酯(体积比为60∶35∶5)进行提取，分离，得到提取液a和滤渣x；取滤渣x分别用体积比为99∶1、95∶5、70∶30、10∶90的丙酮-甲醇溶液依次进行提取，分离，合并后得到滤渣y和提取液b；取滤渣y以乙醇提取，分离，得到提取液c；
s3：将提取液a、提取液b和提取液c混合，冷冻干燥，选择用三种大孔树脂材料混合而成的组合型大孔树脂进行纯化，所述三种大孔树脂材料为xda-1，xda-6和xad-16，得到本发明虾青素。
对比例3：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：与实施例1相同；
s2：于实施例1相同；
s3：将提取液a、提取液b和提取液c混合，冷冻干燥，选择用ab-8型大孔树脂进行纯化，得到本发明虾青素。
对比例4：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：取雨生红球藻藻粉3g，加入0.4mg/ml的纤维素酶200ml进行破壁，破壁温度0℃、破壁时间60min、酶反应ph4，加入0.7g/ml的氯化钠溶液50ml，混合10min，2000rpm离心5min，分离上清和沉淀；
s2：取步骤s1中的沉淀，按料液比1∶2，加入含3％氢氧化钠的甲醇溶液，反应1h，加入食用油-丙酮-乙酸乙酯(体积比为52∶29∶19)进行提取，分离，得到提取液；
s3：将提取液进行冷冻干燥，选择用三种大孔树脂材料混合而成的组合型大孔树脂进行纯化，所述三种大孔树脂材料为xda-1，xda-6和xad-16，得到本发明虾青素。
对比例5：
一种虾青素的提取方法，包括以下步骤：
s1：与实施例1相同，区别在于破壁温度为40℃；
s2：与实施例1相同；
s3：与实施例1相同。
实验例：
分别测定实施例与对比例中的虾青素提取率和纯度。测定结果见表1。
表1：测定结果
根据实验结果可知，本发明方法虾青素的提取率高达99.1％，纯度高达99.8％，提取率和纯度均远远高于对比例。可见本发明结合低温研磨、酶法低温破壁、有机溶剂多级提取和组合型大孔树脂纯化等技术手段，取得了明显优于对比例方法的技术效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。