高效便捷提取水稻DNA的方法与流程

文档序号:15457507发布日期:2018-09-15 01:31

本发明涉及分子生物学遗传育种技术领域,具体地说涉及一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA的方法。



背景技术:

DNA的提取是植物分子遗传学及遗传工程的前提。通常DNA提取方法需要满足以下几个主要条件:所得DNA具备理想的纯度;DNA完整,断裂少,降解程度小;方法方便便捷,成本低。提高基因组DNA制备的效率和降低成本是从事DNA分子标记工作者共同关心的问题。

目前,关于水稻基因组DNA提取方法有诸多报道,但常规提取方法如CTAB法和大量面市的DNA提取试剂盒,虽然可提到高质量的DNA,但提取过程烦琐,成本较高,不便于应用在大规模的基因型检测作业中。

而一些简易的适用于分子标记辅助选择、作图群体、突变体筛选、种子检验等需要大批量样品进行基因型分析的DNA提取方法,虽然已有不少简化,但仍存在操作步骤复杂、成本较高或其制备的模板DNA的扩增结果不够稳定或只适用于叶片DNA的提取等问题,因而还需进一步探索高效、快速、简便、低成本的DNA提取方法



技术实现要素:

本发明所要解决的技术问题在于,提供了一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA,并缩短PCR加样时间的方法。

为解决上述技术问题,本发明提供了一种高效便捷提取水稻DNA的方法,包括如下步骤:

(1)将200μL96孔PCR板置于冰上,用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上;

(2)每孔加入70μL缓冲液A,用封板膜封好,立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃,保持10min;

(3)取出平板,迅速加入等体积的缓冲液B,混匀。

步骤(3)中的提取液1μL能够直接作为模板DNA进行PCR检测。

进一步的,如需存留一周以上的时间进行PCR检测,则用排枪吸取上述提取液40μL到一块新的200μL 96孔PCR孔板内,加入3倍提取液体积的TE缓冲液;放入4℃冰箱保存,备用。

步骤(2)中所述缓冲液A为新鲜溶液。

步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括:800μL 20%Tween20。

步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括:160μL 5mol/L NaOH。

步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括:7.04mL ddH2O

步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括:1mL pH8.01mol/L Tris-HCl。

步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括:40μL pH8.00.5mol/LEDTA。

步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括:8.96mL ddH2O。

本发明有益的技术效果包括:

(1)本发明仅用NaOH、Tween20、Tris-HCl和EDTA 4种化学试剂,共140μL提取液,成本低。

(2)本发明操作简便,仅需3步,每人每天可以提取上千份样品。

(3)本发明仪器设备简单,只需常规的PCR仪。

(4)本发明使用96孔PCR板提取DNA,使用排枪移取提取液,可缩短进一步PCR加样的时间。

附图说明

图1是盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的叶片取样后的PCR板;

图2是使用盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的叶片利用PCR板提取的DNA和传统CTAB法提取的DNA电泳的对比图(1-8为PCR板提取的DNA电泳图,9-16为传统CTAB法提取的电泳图);

图3是使用盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的干籽粒利用PCR板提取的DNA和传统CTAB法提取的DNA电泳的对比图(1-8为PCR板提取的DNA电泳图,9-16为传统CTAB法提取的电泳图);

图4是使用盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的根利用PCR板提取的DNA和传统CTAB法提取的DNA电泳的对比图(1-8为PCR板提取的DNA电泳图,9-16为传统CTAB法提取的电泳图)。

具体实施方式

下面结合实施例详述本发明。为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚、明确,以下参照附图并举实施例对本发明进一步详细说明,但本发明并不局限于这些实施例。

为了解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA的方法。

一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA的方法,包括如下步骤:

(1)将200μL96孔PCR板置于冰上,用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上(图1);

(2)每孔加入70μL缓冲液A,用封板膜封好,立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃,保持10min;

(3)取出平板,迅速加入等体积的缓冲液B,混匀。

进一步的,步骤(3)中的提取液1μL可直接作为模板DNA进行PCR检测

进一步的,如需存留一段时间进行PCR检测(1周以后),用排枪吸取上述提取液40μL(根据需要决定吸取量)到一块新的200μL 96孔PCR孔板内,加入3倍提取液体积的TE缓冲液。放入4℃冰箱保存,备用。

进一步地,步骤(2)中所述缓冲液A为新鲜溶液。

进一步地,步骤(2)中所述缓冲液A包含:800μL 20%Tween20,160μL 5mol/L NaOH,7.04mL ddH2O(以整块96孔PCR板计)

进一步地,步骤(3)中所述缓冲液B包含:1mL 1mol/L Tris-HCl(pH8.0),40μL 0.5mol/LEDTA(pH8.0),8.96mL ddH2O。

本发明同样适用于提取水稻干籽粒或水稻根的基因组DNA。

中所述的水稻干籽粒不需要去壳,但需压碎。

中所述的水稻干籽粒,若取半粒籽粒提取DNA,则用刀片切下无胚的一半即可。

本发明还提供上述DNA提取的方法在水稻中的应用。

实施例1

用于提取水稻DNA的材料为:盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的叶片。

将200μL96孔PCR板置于冰上,用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上。每份材料放置两行共24孔。每孔加入70μL缓冲液A,用封板膜封好,立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃,保持10min;取出平板,迅速加入等体积的缓冲液B,混匀。

取0.15g琼脂糖粉,加入15mL蒸馏水,用微波炉加热至透明,制备1%的琼脂糖胶。

分别取A1、B2、C3、D4、E5、F6、H7、I8中的提取液10μL,混合Buffer加入琼脂糖胶孔中,110V,30min电泳后,置于凝胶成像仪中拍摄。

实施例2

用于提取水稻DNA的材料为:盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的干籽粒。

将200μL96孔PCR板置于冰上,将干籽粒压碎后,放入PCR板上。每份材料放置两行共24孔。每孔加入70μL缓冲液A,用封板膜封好,立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃,保持10min;取出平板,迅速加入等体积的缓冲液B,混匀。

取0.15g琼脂糖粉,加入15mL蒸馏水,用微波炉加热至透明,制备1%的琼脂糖胶。

分别取A1、B2、C3、D4、E5、F6、H7、I8中的提取液10μL,混合Buffer加入琼脂糖胶孔中,110V,30min电泳后,置于凝胶成像仪中拍摄。

实施例3

用于提取水稻DNA的材料为:盐丰47、长粒香、超优千号、广湘145的根。

将200μL96孔PCR板置于冰上,用剪刀取10mg水稻根放入PCR板上(图1);每份材料放置两行共24孔。每孔加入70μL缓冲液A,用封板膜封好,立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃,保持10min;取出平板,迅速加入等体积的缓冲液B,混匀。

取0.15g琼脂糖粉,加入15mL蒸馏水,用微波炉加热至透明,制备1%的琼脂糖胶。

分别取A1、B2、C3、D4、E5、F6、H7、I8中的提取液10μL,混合Buffer加入琼脂糖胶孔中,110V,30min电泳后,置于凝胶成像仪中拍摄。

以上所述,仅是本发明的几个实施例,并非对本发明做任何形式的限制,虽然本发明以较佳实施例揭示如上,然而并非用以限制本发明,任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案的范围内,利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例,均属于本发明技术方案保护范围内。

再多了解一些
当前第1页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1