本发明涉及一种模拟老窖微生态功能菌液的制备方法，属于酿酒技术领域。
背景技术
浓香型白酒的酿造过程是以环境微生物、大曲微生物和窖泥微生物等复杂物质的能量代谢过程。泥窖固态发酵是浓香型白酒典型的特点，生产上有“千年窖池万年糟，酒好全凭窖池老”的说法，但窖泥自然老熟所需时间较长，模拟老窖池窖泥微生态以及营养成分制作人工窖泥或窖泥养护液，可以加快新窖池老熟，提高新窖产酒酒质。
目前，对模拟老窖，构建新窖泥微生态环境，以提高新窖泥的品质或利用补加功能菌液促进新窖老熟的相关研究较少，是一大技术难题。
技术实现要素：
本发明旨在提供一种模拟老窖微生态功能菌液的制备方法，强化制作新窖泥微生态系统和促进新窖老熟，从而提高新窖的微生物群落结构的稳态机制，缩短新窖老熟时间，防止新窖老化。本发明制备的功能菌液可以提升新窖产酒酒质、名酒率，同时可以用于养窖、护窖。
本发明通过高通量测序解析优质老窖微生态群落结构，发现优质老窖泥中在属的分类上主要有20个属，其中所占比例较高的菌系主要包括甲烷菌：methanobacterium8.19％、methanoculleus3.7％、methanosarcina19.50％、petrimonas16.83％，瘤胃梭菌：ruminiclostridium16.57％以及未分类菌：unclassified17.16％。本发明根据解析的优质老窖中的微生态结构群落组成，模拟其微生态结构和营养组分进行功能菌液的制备。
本发明模拟老窖微生态功能菌液的制备方法，是将甲烷菌富集液、petrimonas菌富集液以及瘤胃梭菌富集液按体积比2:1:1的比例混合，制成老窖微生态功能菌液。
所述甲烷菌富集液、petrimonas菌富集液和瘤胃梭菌富集液均为培养至对数期的菌液。
所述甲烷菌富集液是通过包括如下步骤的方法制备得到：
将甲烷菌富集培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水(煮沸后冷却至30～50℃的水)或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按5～10％体积比的接种量接种优质窖泥，于30～34℃富集培养7～15天，重复上述步骤富集培养2～3次，得到甲烷菌富集液。
所述甲烷菌富集培养基按质量百分比构成如下：
k2hpo40.1～0.4‰，kh2po40.2～0.5‰，nh4cl0.5～1.0‰，mgcl2-6h2o0.1～0.4‰，半胱氨酸0.5～1.0‰，酵母膏0.6～1.0‰，乙酸钠2.0～5.0‰，甲酸钠2.0～5.0‰，na2so40.2～0.4‰，nacl0.5～1.0‰，nahco30.2～0.5‰，cacl2-2h2o0.15～0.3‰，蛋白胨1.0～2.5‰，d-葡萄糖0.5～1.5‰，na2s2.0～5.0‰，刃天青(0.1％，1000倍)1～2‰，微量元素溶液1.0～1.5％，维生素溶液1.0～1.5％，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，ph值6.5～7.0。
所述petrimonas菌富集液是通过包括如下步骤的方法制备得到：
将petrimonas菌富集培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水(煮沸后冷却至30～50℃的水)或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按5～10％体积比的接种量接种优质窖泥，于30～34℃富集培养7～15天，重复上述步骤富集培养2～3次，获得petrimonas菌富集液。
所述petrimonas菌富集培养基按质量百分比构成如下：
mes0.5～1.0‰，kh2po40.5～1.0‰，na2so410.0～15.0‰，nacl0.5～1.0‰，mgcl2-6h2o0.3～0.5‰，nahco34.0～6.0‰，cacl2-2h2o0.15～0.3‰，酵母提取物1.0～2.0‰，蛋白胨1.5～2.0‰，d-葡萄糖0.5～1.5‰，na2s2.0～3.0‰，l-半胱氨酸0.5～1.0‰，刃天青(0.1％，1000倍)1～2‰，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，ph值6.5～7.0。
所述瘤胃梭菌富集液是通过包括如下步骤的方法制备得到：
将瘤胃梭菌培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水(煮沸后冷却至30～50℃的水)或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按5～10％体积比的接种量接种优质窖泥，于30～34℃富集培养7～15天，重复上述步骤富集培养2～3次，获得瘤胃梭菌富集液。
所述瘤胃梭菌培养基参考陶勇等的发明专利(一株瘤胃菌及其应用)中的配方，按质量百分比构成如下：
mes0.5～1.0‰，酪蛋白胨10.0‰，酵母膏2.5‰，碳酸氢钠4.0‰，半胱氨酸1‰，磷酸氢二钾0.45‰，磷酸二氢钾0.45‰，氯化钠0.9‰，七水硫酸镁0.09‰，氯化钙0.09‰，刃天青(0.1％，1000倍)1～2‰，氯化血红素0.001‰，乳酸0.5％，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，微量元素溶液1～5‰，维生素溶液1～5‰，ph值5.5～6.0。
上述培养基配制过程中使用的酵母提取物为市购产品，又称酵母膏。
所述微量元素溶液以1l计组分构成如下：h3bo30.01g，cacl2·2h2o0.1g，feso4·7h2o0.1g，znso4·7h2o0.1g，mnso4·h2o0.5g，cuso4·5h2o0.01g，(nh4)6mo7o24·4h2o0.01g，kal(so4)2·12h2o0.1g，coc12·6h2o0.1g，nacl1.0g，mgso4·7h2o3.0g。
所述维生素溶液以1l计组分构成如下：生物素2.0mg，叶酸2.0mg，盐酸吡哆醇10.0mg，核黄素(b2)5.0mg，硫胺素(b1)5.0mg，烟酸5.0mg，对氨基苯甲酸5.0mg，泛酸5.0mg，硫幸酸5.0mg，ph值7.0。
所述窖泥浸提液是将优质窖泥按质量1:50～100的比例加入温开水(煮沸后冷却至30～50℃的水)，搅拌混匀后静置1-2h，留取上清液即为窖泥浸提液。
所述优质窖泥为窖龄≥50年，且一直在连续使用的、产酒酒质较好(公司基酒评级为a级或b级的酒)的老窖池池底窖泥。
所述黄浆水为优质老窖(窖龄≥50年，且一直在连续使用的窖池)起窖时的新鲜黄浆水，香气要纯正，能起到带入微生物生长因子及调节培养基ph值的作用。
本发明模拟老窖微生态功能菌液的制备过程在厌氧条件下进行，避免接触太多的溶解氧。
本发明制备的模拟老窖微生态功能菌液为深棕色，气味为己酸为主的复合香味，其中总菌数≥2～5×1010个/ml。按照3～5％质量比与曲粉、酒糟和酯化红曲霉添加到窖泥原料中得到生态窖泥，窖香味明显、窖泥颜色较深，更加柔熟细腻，断面也更加均匀，有一定的粘稠感，更接近浓香型白酒老窖泥的感官要求。将新制窖泥应用酿造产酒基酒的名酒率提高4～11％。
所得模拟老窖微生态功能菌液应用于窖池养护和新窖老熟时，可以将功能菌液均匀喷洒至新窖窖壁与窖底促进新窖老熟或窖池大培养应用。
本发明的有益效果体现在：
1、解决了新窖池窖泥微生态群落结构不稳定，产酒酒质差的问题。
2、促进新窖老熟，防止窖池老化，起到养窖护窖的作用。
3、提高了新窖产酒的名酒率。
本发明通过把模拟老窖微生态功能菌液应用于制作新窖泥和窖池养护，促进窖池微生物群落结构的稳定，也为微生物的生长代谢提供了良好的环境基础，使得窖池产酒酒质明显提高，主体香更加突出，风味口感更好，浓香风格更加凸显。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明技术方案作进一步分析说明。
本发明实施例中：
所述微量元素溶液以1l计组分构成如下：h3bo30.01g，cac12·2h2o0.1g，feso4·7h2o0.1g，znso4·7h2o0.1g，mnso4·h2o0.5g，cuso4·5h2o0.01g，(nh4)6mo7o24·4h2o0.01g，kal(so4)2·12h2o0.1g，cocl2·6h2o0.1g，nacl1.0g，mgso4·7h2o3.0g。
所述维生素溶液以1l计组分构成如下：生物素2.0mg，叶酸2.0mg，盐酸吡哆醇10.0mg，核黄素(b2)5.0mg，硫胺素(b1)5.0mg，烟酸5.0mg，对氨基苯甲酸5.0mg，泛酸5.0mg，硫幸酸5.0mg，ph值7.0。
所述窖泥浸提液是将优质窖泥按质量1:50～100的比例加入温开水，搅拌混匀后静置1-2h，留取上清液即为窖泥浸提液。
所述优质窖泥为窖龄≥50年，且一直在连续使用的、产酒酒质较好(公司基酒评级为a级或b级的酒，)的老窖池池底窖泥。
所述黄浆水为优质老窖(窖龄≥50年，且一直在连续使用的窖池)起窖时的新鲜黄浆水，香气要纯正，能起到带入微生物生长因子及调节培养基ph值的作用。
实施例1：
1、甲烷菌富集培养基按质量百分比构成如下：
k2hpo40.1‰，kh2po40.2‰，nh4cl0.5‰，mgcl2-6h2o0.1‰，半胱氨酸0.5‰，酵母膏0.6‰，乙酸钠2.0‰，甲酸钠2.0‰，na2so40.2‰，nacl0.5‰，nahco30.2‰，cacl2-2h2o0.15‰，酵母提取物1.0‰，蛋白胨1.0‰，d-葡萄糖0.5‰，na2s2.0‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，微量元素溶液1.0％，维生素溶液1.0％，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，ph值6.5。
将甲烷菌富集培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按5％的接种量接种优质窖泥，于30℃富集培养7天，重复上述步骤富集培养2次，获得甲烷菌富集液。
2、petrimonas菌富集培养基按质量百分比构成如下：
mes0.5‰，kh2po40.5‰，na2so410.0‰，nacl0.5‰，mgcl2-6h2o0.3‰，nahco34.0‰，cacl2-2h2o0.15‰，酵母提取物1.0‰，蛋白胨1.5‰，d-葡萄糖0.5‰，na2s2.0‰，l-半胱氨酸0.5‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，ph值6.5。
将petrimonas菌富集培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水(或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按5％的接种量接种优质窖泥，于30℃富集培养7天，重复上述步骤富集培养2次，获得petrimonas菌富集液。
3、瘤胃梭菌培养基按质量百分比构成如下
mes0.5‰，酪蛋白胨10.0‰，酵母汁2.5‰，碳酸氢钠4.0‰，半胱氨酸1‰，磷酸氢二钾0.45‰，磷酸二氢钾0.45‰，氯化钠0.9‰，七水硫酸镁0.09‰，氯化钙0.09‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，氯化血红素0.001‰，乳酸0.5％，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，微量元素溶液1‰，维生素溶液1‰，ph值5.5。
将瘤胃梭菌培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按5％的接种量接种优质窖泥，于30℃富集培养7天，重复上述步骤富集培养2次，获得瘤胃梭菌富集液。
4、将甲烷菌富集液、petrimonas菌富集液以及瘤胃梭菌富集液按体积比2:1:1的比例混合，制成老窖微生态功能菌液。
本实施例制成的模拟老窖微生态功能菌液为深棕色，气味为己酸为主的复合香味，其中总菌数2×1010个/ml。按照3％质量比与曲粉、酒糟和酯化红曲霉添加到窖泥原料中得到生态窖泥，窖香味明显、窖泥颜色较深，更加柔熟细腻，断面也更加均匀，有一定的粘稠感，更接近浓香型白酒老窖泥的感官要求。将新制窖泥应用酿造产酒基酒的名酒率提高了4％。
实施例2：
1、甲烷菌富集培养基按质量百分比构成如下：
k2hpo40.2‰，kh2po40.3‰，nh4cl0.6‰，mgcl2-6h2o0.2‰，半胱氨酸0.6‰，酵母膏0.7‰，乙酸钠2.1‰，甲酸钠2.1‰，na2so40.3‰，nacl0.6‰，nahco30.3‰，cacl2-2h2o0.16‰，酵母提取物1.1‰，蛋白胨1.1‰，d-葡萄糖0.6‰，na2s2.1‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，微量元素溶液1.1％，维生素溶液1.1％，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，ph值6.5。
将甲烷菌富集培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按6％的接种量接种优质窖泥，于32℃富集培养10天，重复上述步骤富集培养2次，获得甲烷菌富集液。
2、petrimonas菌富集培养基按质量百分比构成如下：
mes0.6‰，kh2po40.6‰，na2so411.0‰，nacl0.6‰，mgcl2-6h2o0.4‰，nahco34.1‰，cacl2-2h2o0.16‰，酵母提取物1.1‰，蛋白胨1.6‰，d-葡萄糖0.6‰，na2s2.1‰，l-半胱氨酸0.6‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，ph值6.5。
将petrimonas菌富集培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按6％的接种量接种优质窖泥，于32℃富集培养10天，重复上述步骤富集培养2次，获得petrimonas菌富集液。
3、瘤胃梭菌培养基按质量百分比构成如下
mes0.5‰，酪蛋白胨10.0‰，酵母汁2.5‰，碳酸氢钠4.0‰，半胱氨酸1‰，磷酸氢二钾0.45‰，磷酸二氢钾0.45‰，氯化钠0.9‰，七水硫酸镁0.09‰，氯化钙0.09‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，氯化血红素0.001‰，乳酸0.5％，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，微量元素溶液1‰，维生素溶液1‰，ph值5.5。
将瘤胃梭菌培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按6％的接种量接种优质窖泥，于32℃富集培养10天，重复上述步骤富集培养2次，获得瘤胃梭菌富集液。
4、将甲烷菌富集液、petrimonas菌富集液以及瘤胃梭菌富集液按体积比2:1:1的比例混合，制成老窖微生态功能菌液。
本实施例制成的模拟老窖微生态功能菌液为深棕色，气味为己酸为主的复合香味，其中总菌数2.5×1010个/ml。按照5％质量比与曲粉、酒糟和酯化红曲霉添加到窖泥原料中得到生态窖泥，窖香味明显、窖泥颜色较深，更加柔熟细腻，断面也更加均匀，有一定的粘稠感，更接近浓香型白酒老窖泥的感官要求。将新制窖泥应用酿造产酒基酒的名酒率提高了6％。
实施例3：
1、甲烷菌富集培养基按质量百分比构成如下：
k2hpo40.3‰，kh2po40.4‰，nh4cl0.7‰，mgcl2-6h2o0.3‰，半胱氨酸0.7‰，酵母膏0.8‰，乙酸钠2.2‰，甲酸钠2.2‰，na2so40.4‰，nacl0.7‰，nahco30.4‰，cacl2-2h2o0.17‰，酵母提取物1.2‰，蛋白胨1.2‰，d-葡萄糖0.7‰，na2s2.2‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，微量元素溶液1.2％，维生素溶液1.2％，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，ph值6.5。
将甲烷菌富集培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按7％的接种量接种优质窖泥，于34℃富集培养10天，重复上述步骤富集培养2次，获得甲烷菌富集液。
2、petrimonas菌富集培养基按质量百分比构成如下：
mes0.7‰，kh2po40.7‰，na2so412.0‰，nacl0.7‰，mgcl2-6h2o0.5‰，nahco34.2‰，cacl2-2h2o0.17‰，酵母提取物1.2‰，蛋白胨1.7‰，d-葡萄糖0.7‰，na2s2.2‰，l-半胱氨酸0.7‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，ph值6.5。
将petrimonas菌富集培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按7％的接种量接种优质窖泥，于34℃富集培养10天，重复上述步骤富集培养2次，获得petrimonas菌富集液。
3、瘤胃梭菌培养基按质量百分比构成如下
mes0.5‰，酪蛋白胨10.0‰，酵母汁2.5‰，碳酸氢钠4.0‰，半胱氨酸1‰，磷酸氢二钾0.45‰，磷酸二氢钾0.45‰，氯化钠0.9‰，七水硫酸镁0.09‰，氯化钙0.09‰，刃天青(0.1％，1000倍)1‰，氯化血红素0.001‰，乳酸0.5％，黄浆水10％，窖泥浸提液40％，微量元素溶液1‰，维生素溶液1‰，ph值5.5。
将瘤胃梭菌培养基置于厌氧发酵罐中并搅拌混匀，加入50％体积的温开水或净化水，通入氮气除氧，随后加热至121℃灭菌20min，冷却至室温，然后按7％的接种量接种优质窖泥，于34℃富集培养10天，重复上述步骤富集2次，获得瘤胃梭菌富集液。
4、将甲烷菌富集液、petrimonas菌富集液以及瘤胃梭菌富集液按体积比2:1:1的比例混合，制成老窖微生态功能菌液。
本实施例制成的模拟老窖微生态功能菌液为深棕色，气味为己酸为主的复合香味，其中总菌数3×1010个/ml。将制得的功能菌液按质量比8％和大曲、酒糟与酯化红曲霉加入到窖池大培养的窖泥中。窖池大培养后，窖泥颜色更深，泥质更加柔熟细腻，窖香更加明显，更符合浓香型白酒酿造的要求。窖池大培养后产酒酒质明显提高，所产名酒率提高9％。
虽然本发明以将较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权力要求书界定的为准。