一株适用于生活污水的高效聚磷菌的制作方法

本发明涉及一株适用于生活污水的高效聚磷菌，还涉及该聚磷菌在处理生活污水时的使用方法。

背景技术：

磷是造成水体富营养化的主要污染物之一，除磷一直是污水处理领域的研究重点。相比于物理、化学方法，生物法除磷具有安全、高效、费用低廉等优势，是我国城市污水处理系统中应用最为广泛的除磷技术。目前普遍认可的生物法除磷机理是聚合磷酸盐积累微生物(poly-phophateaccumulatingmicroorganisms，paos)的释/吸磷作用，在厌氧/好氧交替的运行条件下，具有超量吸磷能力的微生物类群，统称为聚磷菌。已报道的能成为优势菌群的聚磷菌主要分布于假单胞菌属(pseudomonas)、不动杆菌属(acinetobacter)、气单胞菌属(aeromonas)、产碱杆菌属(alcaligenes)、克雷伯氏杆菌属(klebsiella)和芽孢杆菌属(bacillus)等。

例如，cn103540546a公开了一株高效聚磷菌pseudomonassp.gpa1，属于假单胞菌属，具有较强的聚磷能力。

例如，cn1807585a公开了一株高效聚磷菌gm6，属于恶臭假单胞菌，将菌液按照2％的比例投放至医院废水处理设施中，有利于医院废水处理。

聚磷菌的性能直接关系着污水处理系统对磷的去除效果，但人们对这一点的认识还不够充分。为了改善污水处理系统的除磷效果，目前常用的方式还是投加絮凝剂或者是调整工艺控制参数，采用投加高效聚磷菌方式的还相对较少，适用于生活污水处理的高效聚磷菌也较少。

技术实现要素：

鉴于现有技术存在的问题，本发明的首要目的是提供一株适用于生活污水处理的高效聚磷菌，所述高效聚磷菌命名为h7，用以提高污水处理系统的除磷能力，改善水体富营养化。

本发明提供的高效聚磷菌h7分离自深圳市南山区污水处理厂的二沉池回流污泥，属于克雷伯氏菌属(klebsiellasp.)，菌种保藏号为gdmccno：60336。目前保藏在广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，保藏日期为2018年3月21日，保藏地址：中国。

h7的菌落呈淡黄色、表面有光泽、光滑、边缘整齐，其菌落形态图见图2。

高效聚磷菌h7为革兰氏阳性菌，接触酶反应和氧化酶反应呈阳性；淀粉水解反应、明胶液化反应、甲基红反应、v-p反应和柠檬酸盐利用反应均呈阴性。

h7的系统发育树如图1，可以发现该菌与克雷伯氏菌属(klebsiellasp.)的多株菌的基因相似性达到98％以上。因此，将h7归类于klebsiellasp.的置信度较高。

本发明另一目的在于提供一种所述高效聚磷菌在生活污水处理中的使用方法，包括，将高效聚磷菌h7用于污水处理。

本发明相对于现有技术的有益效果包括：

1、本发明所述的高效聚磷菌，用以提高污水处理系统的除磷能力，同时改善水体富营养化。

2、本发明提供了一株适用于生活污水处理的高效聚磷菌h7，可应用于城市污水处理厂、农村小型污水处理设备等。

附图说明

图1，聚磷菌h7的系统发育树；

图2，聚磷菌h7的菌落形态图。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明进行解释说明，但本发明不局限于此。

实施例1

本发明从深圳市南山区污水处理厂的二沉池回流污泥中采集污泥样品。将5ml污泥样品转移至50ml离心管中，同时加入约40ml的无菌生理盐水，进行充分震荡，打散污泥样品，形成菌悬液。随后，将菌悬液进行梯度稀释，取10^-4、10^-3、10^-6三个梯度在营养琼脂上涂布平板，并通过划线分离纯化的方式得到多株纯菌。将所得的纯菌接种至缺磷培养基内，培养24h；随后，用无菌注射器取5ml培养液转移至富磷培养基内，好氧环境培养24h，取样测定tp浓度。如果tp浓度出现明显下降的，则对该菌株进行异染粒和β-聚羟基丁酸(phb)染色试验，进一步确定聚磷能力，同时具有异染粒和phb的菌株为聚磷菌，挑选出聚磷能力最强的菌株，命名为高效聚磷菌h7。

h7的菌落呈淡黄色、表面有光泽、光滑、边缘整齐，其菌落形态图见图2。

高效聚磷菌h7为革兰氏阳性菌，接触酶反应和氧化酶反应呈阳性；淀粉水解反应、明胶液化反应、甲基红反应、v-p反应和柠檬酸盐利用反应均呈阴性。

h7的系统发育树如图1，可以发现该菌与克雷伯氏菌属(klebsiellasp.)的多株菌的基因相似性达到98％以上。

上述缺磷培养基配方如下：ch3coona·3h2o3.32g，na2hpo4·2h2o23mg，k2so417.83mg，cacl2·2h2o11mg，nh4cl152.8mg，mgso4·7h2o81.12mg，hepes缓冲液7g，微量元素溶液2ml，蒸馏水1l，ph7.2。充n21min形成厌氧环境，密封后灭菌。

上述富磷培养基配方如下：ch3coona·3h2o3.32g，k2hpo425mg，cacl2·2h2o25.68mg，nh4cl305.52mg，pipes缓冲液8.5g，mgso4·7h2o91.26mg，nacl20mg，微量元素溶液2ml，蒸馏水1l，ph7.2。

上述微量元素溶液配方如下：na2edta63.7g，mncl2·4h2o5.06g，znso42.2g，feso4·7h2o5.0g，cacl25.5g，cuso4·5h2o1.57g，na2moo4·4h2o1.1g，cocl2·6h2o1.61g，蒸馏水1l，ph7.0。

实施例2

挑取聚磷菌h7的单个菌落接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，置于30℃、120r/min的恒温振荡培养箱内培养，培养24h后取出，离心分离弃去培养基，用无菌生理盐水洗涤三次后，加入无菌生理盐水，振荡摇匀制备成菌液。

将制备好的菌液按1～2％体积比例加入生活污水中，菌株浓度控制在10⁶cfu/ml左右。添加聚磷菌h7的试验组，tp去除率为36.5±3.39％，添加无菌生理盐水的对照组，tp的去除率为27.97±4.17％。对比可知，投加聚磷菌h7可将tp去除率提高10％左右。

实施例3

将聚磷菌h7及另外两株已知聚磷菌(芽孢杆菌属)分别接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基，置于30℃，120r/min的恒温振荡培养箱内培养24h，形成聚磷菌的富集培养液，菌体浓度在10⁸-10⁹个/ml。然后，按照1∶1∶1的比例混合三种不同聚磷菌的富集培养液，形成混合菌液。

将混合菌液按照1∶10000的比例投放至某a/o工艺处理量为50吨/天的小型污水处理设备。投放本发明高效聚磷菌h7菌液(仅投放混合菌液)前，小型污水处理设备对tp的去除效果较差，在进水tp浓度为2.6～7.9mg/l的条件下，tp去除率为52.35％～69.71％；按照前述投放比例投放本发明高效聚磷菌h7菌液12h小时后，出水中tp未检出，去除率达到了100％；投放菌液7天后，小型污水处理设备对tp去除率依然维持在80.77％-89.74％之间。试验结果表明：投加高效聚磷菌h7可以显著改善小型污水处理设备对tp的去除效果，tp去除率可提高20％左右。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。