降高血压药物雷米普利用药指导及基因检测试剂盒的制作方法

文档序号:20602737发布日期:2020-05-01 21:47阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于判别降高血压药物雷米普利的用药型的引物组合物,其特征在于,该引物组合包括针对能判别用药型的2个snp标记的pcr引物对和延伸引物,其中,pcr引物序列对选自如seqidno:1a-2a所示的序列,延伸引物序列选自如seqidno:1b-2b所示的序列。

2.权利要求1所述的引物组合物,其中所述snp分别选自:

rs4344、rs4359。

3.权利要求1所述的引物组合物,其中上述pcr引物序列为核心序列,其在5'端可包括5-15个保护碱基序列,优选为10bp的tag:acgttggatg。

4.权利要求1-3所述的引物组合物,其中延伸引物5'端可增加作为接头的碱基序列,其中优选为1-15个碱基,更优选1-3个碱基。

5.由权利要求1-4的引物组合物所制备的用于判别雷米普利用药的检测产品,包括:

(1)用于pcr的反应试剂,包括:上述扩增引物对,耐高温的dna聚合酶,dntps,pcr反应缓冲液;

(2)用于pcr产物纯化的试剂;

(3)用于单碱基延伸反应的试剂,包括:上述延伸引物,耐高温的单碱基延伸酶(sap酶),ddntps,延伸反应缓冲液。

6.权利要求5所述的检测产品,其中还包括用于质谱检测且保护上述snp组合的载体,优选质谱芯片和质谱仪。

7.使用权利要求1-4的引物组合物,或权利要求5-6的检测产品,进行质谱法判别雷米普利用药的方法,包括以下步骤:

(1)多重pcr:使用上述pcr引物对,在两个反应体系中,对上述2个snp位点所在dna区域同时进行扩增,得到含2处多态位点所在dna区域的pcr产物;

(2)pcr产物纯化:对步骤(1)得到的pcr产物进行纯化,以减少对后续反应的干扰;

(3)单碱基延伸:使用上述2条特异性的延伸引物,在两个反应体系中,对步骤(2)得到的纯化后pcr产物进行多重单碱基延伸,延伸引物在对应的snp位点处延伸一个核苷酸,该核苷酸与snp位点处的基因型互补配对;

(4)延伸产物纯化:对步骤(3)得到的延伸产物进行纯化,以获得高纯的延伸产物,避免盐离子等杂质对后续检测的影响;

(5)质谱仪检测:将步骤(4)得到的纯化产物点在含有基质的靶片上,放入质谱仪进行检测。

8.权利要求7的方法,其中步骤2的纯化过程可以选自碱性磷酸酶消化、碱性磷酸酶和外切酶exoi消化、切胶纯化、pcr纯化柱过柱。

9.使用权利要求1-4的引物组合物,或权利要求5-6的检测产品,用于进行降高血压药物雷米普利用药的指导。


技术总结
本发明提供一种利用不同单核苷酸多态性(SNP)位点具有不同分子量的延伸引物,从而通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI‑TOF MS)同时检测多个位点,最终实现降高血压药物雷米普利的用药的方法和试剂盒。本发明能同时检测2个雷米普利药物代谢相关的SNP位点,并具有成本低、无需合成探针、耗时短、结果分析简单便捷、应用领域极其广泛的优点,能够有效的减少雷米普利用法用量相关不良事件的发生和血栓性疾病的预防。可以用于临床需要服用雷米普利的高血压患者的辅助诊断、治疗。

技术研发人员:马庆伟;钟逾
受保护的技术使用者:北京毅新博创生物科技有限公司
技术研发日:2018.10.24
技术公布日:2020.05.01
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