转基因小麦核酸检测试剂盒的制作方法

文档序号:16111306发布日期:2018-11-30 19:51阅读:472来源:国知局

本实用新型涉及基因检测领域,尤其是含外源35S启动子序列的转基因小麦核酸检测试剂盒。



背景技术:

小麦是我国的三大粮食作物之一,总产量仅次于玉米。小麦是优势作物,类型多、用途广、产量高、分布广,集粮、经、饲三种用途于一身,开发潜力大,目前小麦产量约占全国粮食产量的25%。粮食是关系到国计民生的战略物资,粮食安全是社会稳定和国家安全至关重要。因此,加强转基因小麦的监督和管理,是维护粮食安全的关键环节。

转基因小麦中的转基因成分一般包括来源于花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子、目的基因和NOS终止子组成的表达盒(gene expression cassette)。通过农杆菌介导或基因枪方法将含有上述组分的表达盒转入小麦幼胚中培育而成。

目前,转基因小麦如耐除草剂硬质红色春小麦在美国获得商业化种植的批准,由于已大面积商业化生产该转基因小麦品系,其产品有可能出现在我国进口小麦及其加工品之中。因此,国内需要建立针对该转基因小麦及其衍生品种筛查法检测的方法和试剂盒。



技术实现要素:

为了解决现有技术的不足,本实用新型提出了转基因小麦核酸检测试剂盒。

本实用新型采用如下技术方案:

转基因小麦核酸检测试剂盒,包括由试剂盒、反应盒卡接为一体的双层盒体,试剂盒包括试剂固定盘,试剂固定盘上开有固定试剂ddH2O、试剂阳性对照引物F、试剂阳性对照引物R、特异检测转基因成分35S启动子序列的引物F、特异检测转基因成分35S启动子序列的引物R、试剂2×Taq mix的固定孔;所述反应盒包括PCR反应管固定盘,PCR反应管固定盘通过盘托固定在反应盒内,PCR反应管固定盘上开有多排PCR反应管固定孔。

进一步地,所述试剂盒的盒壁为双层遮光盒壁。

进一步地,所述反应盒为单层透明盒壁。

进一步地,所述双层盒体上卡接有盒盖,盒盖上设有提手。

更进一步地,所述试剂固定盘两侧设有把手。

采用如上技术方案取得的有益技术效果为:

转基因小麦核酸检测试剂盒将试剂盒、反应盒卡接为一体,试剂固定盘开有固定试剂ddH2O、试剂阳性对照引物F、试剂阳性对照引物R、特异检测转基因成分35S启动子序列的引物F、特异检测转基因成分35S启动子序列的引物R、试剂2×Taq mix的固定孔,将检测MIR162品系的转基因成分所需的试剂和PCR反应管集中于一个盒体内,便于快速检测。

附图说明

图1为转基因小麦核酸检测试剂盒结构示意图。

图2为试剂固定盘结构示意图。

图3为PCR反应管固定盘结构示意图。

图中,1、提手,2、把手,3、试剂固定盘,4、单层透明盒壁,5、PCR反应管固定盘,6、盘托,7、盒盖,8、试剂盒,9、反应盒,10、PCR反应管固定孔,11、试剂ddH2O,12、试剂阳性对照引物F,13、试剂阳性对照引物R,14、特异检测转基因成分35S启动子序列的引物F,15、特异检测转基因成分35S启动子序列的引物R,16、试剂2×Taq mix,17、双层遮光盒壁。

具体实施方式

结合附图1至3对本实用新型的具体实施方式做进一步说明:

转基因小麦核酸检测试剂盒,包括由试剂盒8、反应盒卡接为一体的双层盒体。试剂盒包括试剂固定盘3,试剂固定盘上开有固定试剂ddH2O(超纯水)11、试剂阳性对照引物F 12、试剂阳性对照引物R 13、特异检测转基因成分35S启动子序列的引物F 14、特异检测转基因成分35S启动子序列的引物R 15、试剂2×Taq mix 16的试剂瓶的固定孔。所述反应盒9包括PCR反应管固定盘5,PCR反应管固定盘通过盘托6固定在反应盒内,PCR反应管固定盘上开有多排PCR反应管固定孔10。

试剂盒的盒壁为双层遮光盒壁17。双层遮光盒壁具有一定的遮光和保温作用,便于试剂的保存。

反应盒为单层透明盒壁4,便于观测反映的进行。

双层盒体上卡接有盒盖7,盒盖上设有提手1,便于携带。

试剂固定盘两侧设有把手2,便于整体取放试剂固定盘。PCR反应管固定盘卡接在盘托内,盘托两侧有缺口,便于取放PCR反应管固定盘。托盘领略小反应盒,正好卡接在反应盒内,便于固定PCR反应管。

本试剂盒共有试剂六种,组成如下:试剂一:2×Taq mix试剂(12mL);试剂二:特异检测转基因成分35S启动子序列的引物F试剂(10μM,10mL);试剂三:特异检测转基因成分35S启动子序列的引物R试剂(10μM,10mL);试剂四:ddH2O试剂(超纯水,15mL);试剂五:阳性对照引物F试剂(10μM,1mL);试剂六:阳性对照引物R试剂(10μM,1mL)。带刻度的PCR反应管多排:25μL和50μL处有刻度。

2×Premix Taq DNA Polymerase是经过优化的PCR扩增预混液,适用于常规PCR,含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、PCR缓冲液等PCR扩增除引物和模板外的必需组份。

其检测原理为:本试剂盒基于筛查法设计。以插入的外源35S启动子序列为模板设计特异引物,同时以小麦的持家基因Actin设计一对引物作为阳性对照,用以证明PCR工作的可靠性。检测时提取待测小麦的基因组DNA,加入Taq mix预混液,分别加入阳性对照引物和特异引物。如果样品中含有35S启动子序列的转基因成分,则在阳性引物和特异引物均可扩增出条带。如果样品中不含35S启动子序列的转基因成分,只有阳性引物能扩增出条带。

当然,以上说明仅仅为本实用新型的较佳实施例,本实用新型并不限于列举上述实施例,应当说明的是,任何熟悉本领域的技术人员在本说明书的指导下,所做出的所有等同替代、明显变形形式,均落在本说明书的实质范围之内,理应受到本实用新型的保护。

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