本发明属于医药化学领域，涉及一种吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂极其制备方法和用途。
背景技术：
：恶性肿瘤是目前威胁人类健康和生命的主要疾病之一，根据国家卫生和计划生育委员会统计数据显示，我国大陆肿瘤发生率约为235/10万，死亡率约为144.3/10万。由于恶性肿瘤的无限制生长于浸润、转移，现今临床采用的三大常规治疗方法(手术、放疗和化疗)无法完全切除或彻底杀灭肿瘤细胞，因此常出现肿瘤转移或复发。肿瘤生物治疗是应用现代生物技术及其相关产品进行肿瘤防治的新疗法，因其安全、有效、不良反应低等特点，成为继手术、放疗、化疗之后肿瘤治疗的第四种模式，其通过调动宿主的天然防御机制或给予天然产生的靶向性很强的物质来获得抗肿瘤的效应。吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,ido)是一种含铁血红素单体蛋白，由403个氨基酸残基组成，包括两个折叠的α-螺旋结构域，大结构域包含催化口袋，底物可在催化口袋内与ido发生疏水等作用。ido是肝脏以外唯一可催化色氨酸代谢，使其沿犬尿氨酸途径分解生成包含喹啉酸在内的一系列代谢产物的限速酶。催化色氨酸代谢的另一类酶为色氨酸-2,3-双加氧酶，其与ido有相似的血红素活性位点，但两者仅有约10％的氨基酸序列相同。人体内约有95％的游离l-色氨酸可按犬尿氨酸途径代谢，并产生多种就有生物活性的代谢产物，包括犬尿氨酸、犬尿酸、3-羟基犬尿氨酸、3-羟基邻氨苯甲酸、吡啶甲酸、喹啉酸以及氧化辅酶a等。ido在正常状态下表达水平较低，在炎症或感染过程中表达显著增加，此外脂多糖及细胞因子等均可诱导ido的表达。体外研究发现，除犬尿氨酸外，色氨酸的中间代谢产物3-羟基邻氨苯甲酸和喹啉酸也可在体外诱导小鼠胸腺细胞的t淋巴细胞凋亡。肿瘤细胞可通过消耗局部色氨酸，产生代谢产物诱导局部免疫，同时肿瘤局部浸润性t淋巴细胞水平明显下降。简而言之，ido可通过以下几种途径抑制肿瘤的局部免疫：①色氨酸耗竭机制：通过使ido过渡表达，导致t细胞增殖所必需的色氨酸缺乏，影响t细胞的有效增殖，导致t细胞易发生凋亡而被清楚；②色氨酸代谢产物毒性机制：ido催化色氨酸降解产生的代谢产物可以抑制活化t细胞的功能，甚至诱导t细胞凋亡；③ido还可以通过诱导调节性t细胞的增殖从而抑制活化t细胞的免疫功能。因此，ido是一个具有潜力的肿瘤免疫治疗的靶标。公开的选择性抑制ido的抑制剂专利申请包括wo2010005958、wo2013174947、wo2014066834、wo2016155545、cn201610059454.5、cn201710060610.4等。1-甲基色氨酸是由newlinkgenetics公司开发的口服小分子ido抑制剂，用于治疗转移性乳腺癌和实体瘤，目前长期处于临床二期试验阶段。另外，incyte公司正在研发的一系列口服ido小分子抑制剂中incb-24360也在进行临床三期试验，主要用于治疗包括骨髓增生异常综合症在内的多种癌症，但是在临床试验中出现了一定的药物代谢稳定性的毒性的问题。因此，为了达到更好的肿瘤治疗效果和目的，更好的满足市场需求，现在急需开发出新一代的高效低毒的选择性ido抑制剂。技术实现要素：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种吲哚胺-2,3-双加氧酶抑制剂及其制备方法和用途。本发明提供了式(i)所示的化合物、或其光学异构体、或其顺反异构体、或其同位素化合物、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物、或其互变异构体、或其内消旋体、或其外消旋体、或其对映异构体、或其非对映异构体、或其混合物形式、或其代谢产物、或其代谢前体：其中，a和b分别独立地选自0～5的整数；x选自氧、硫、-o-nh-、-nh-、-nh-o-；a选自无、-nr11-、氧、硫、砜基、亚砜基、c3-c7的环烷基、取代的c3-c7的环烷基、c3-c7的氧杂环烷基、取代的c3-c7的氧杂环烷基、c3-c7的氮杂环烷基、取代的c3-c7的氮杂环烷基、r11选自氢、c1～c6烷基；r1、r2分别独立地选自氢、羟基、氨基、芳基、c1-c6烷基、取代的c1-c6烷基、c3-c7环烷基、取代的c3-c7环烷基、c3-c7杂环基、取代的c3-c7杂环基、c1-c6烷氧基、取代的c1-c6烷氧基、c1-c6烷胺基、取代的c1-c6烷胺基；或者r1与r2连成3-8元杂环；或者r1与r2连接成取代的3-8元杂环；r3、r4分别独立地选自氢、卤素、氰基、三氟甲基、砜基、亚砜基、c1-c6烷基、取代的c1-c6烷基、c3-c7环烷基、取代的c3-c7环烷基、c1-c6烷氧基、取代的c1-c6烷氧基；r5、r6、r7、r8分别独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氨基、c1-c6烷基、c3-c6环烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6烷氮基；或者r5、r6、r7、r8中任意两个连接成3-8元碳环。进一步地，a和b分别独立地选自0～5的整数；x选自硫、-nh-；a选自无、氧、-nr11-、砜基、c3环烷基、r11选自氢、甲基；r1、r2分别独立地选自氢、羟基、c1-c3烷基、取代的c1-c3烷基、c3-c6环烷基、甲氧基、取代的c1烷胺基；或者r1与r2连接成4-6元杂环；或者r1与r2连接成取代的4-6元杂环；所述取代的c1-c3烷基的取代基为氘、羟基、甲基取代的c1烷胺基、氨基、卤素；所述取代的c1烷胺基的取代基为甲基；所述4-6元杂环的杂原子为n、o，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的杂原子为n，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的取代基为甲基、羟基、卤素；r3和r4为卤素；r5、r6、r7、r8分别独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氨基；或者r5、r6、r7、r8中任意两个连接成3-4元碳环。进一步地，所述式(i)化合物具有如式(ⅱ)所示的结构：其中，x选自硫、-nh-；r1、r2分别独立地选自氢、羟基、c1-c3烷基、取代的c1-c3烷基、c3-c6环烷基、甲氧基、取代的c1烷胺基；或者r1与r2连接成4-6元杂环；或者r1与r2连接成取代的4-6元杂环；所述取代的c1-c3烷基的取代基为氘、羟基、甲基取代的c1烷胺基、氨基、卤素；所述取代的c1烷胺基的取代基为甲基；所述4-6元杂环的杂原子为n、o，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的杂原子为n，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的取代基为甲基、羟基、卤素；r3和r4为卤素；r5、r6、r7、r8分别独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氨基；或者r5、r6、r7、r8中任意两个连接成3-4元碳环。进一步地，所述式(i)化合物具有如式(ⅲ)所示的结构：其中，x选自硫、-nh-；r1、r2分别独立地选自氢、羟基、c1-c3烷基、取代的c1-c3烷基、c3-c6环烷基、甲氧基、取代的c1烷胺基；或者r1与r2连接成4-6元杂环；或者r1与r2连接成取代的4-6元杂环；所述取代的c1-c3烷基的取代基为氘、羟基、甲基取代的c1烷胺基、氨基、卤素；所述取代的c1烷胺基的取代基为甲基；所述4-6元杂环的杂原子为n、o，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的杂原子为n，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的取代基为甲基、羟基、卤素；r3和r4为卤素；a选自无、氧、-nr11-、砜基、c3环烷基、r11选自氢、甲基；r5、r6、r7、r8分别独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氨基；或者r5、r6、r7、r8中任意两个连接成3-4元碳环。进一步地，所述式(i)化合物具有如式(iv)所示的结构：其中，x选自硫、-nh-；r1、r2分别独立地选自氢、羟基、c1-c3烷基、取代的c1-c3烷基、c3-c6环烷基、甲氧基、取代的c1烷胺基；或者r1与r2连接成4-6元杂环；或者r1与r2连接成取代的4-6元杂环；所述取代的c1-c3烷基的取代基为氘、羟基、甲基取代的c1烷胺基、氨基、卤素；所述取代的c1烷胺基的取代基为甲基；所述4-6元杂环的杂原子为n、o，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的杂原子为n，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的取代基为甲基、羟基、卤素；r3和r4为卤素；a选自无、氧、-nr11-、砜基、c3环烷基、r11选自氢、甲基；r5、r6、r7、r8分别独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氨基；或者r5、r6、r7、r8中任意两个连接成3-4元碳环。进一步地，所述式(i)化合物具有如式(v)所示的结构：其中，x选自硫、-nh-；r1、r2分别独立地选自氢、羟基、c1-c3烷基、取代的c1-c3烷基、c3-c6环烷基、甲氧基、取代的c1烷胺基；或者r1与r2连接成4-6元杂环；或者r1与r2连接成取代的4-6元杂环；所述取代的c1-c3烷基的取代基为氘、羟基、甲基取代的c1烷胺基、氨基、卤素；所述取代的c1烷胺基的取代基为甲基；所述4-6元杂环的杂原子为n、o，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的杂原子为n，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的取代基为甲基、羟基、卤素；r3和r4为卤素；a选自无、氧、-nr11-、砜基、c3环烷基、r11选自氢、甲基；r5、r6、r7、r8分别独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氨基；或者r5、r6、r7、r8中任意两个连接成3-4元碳环。进一步地，所述式(i)化合物具有如式(vi)所示的结构：其中，x选自硫、-nh-；r1、r2分别独立地选自氢、羟基、c1-c3烷基、取代的c1-c3烷基、c3-c6环烷基、甲氧基、取代的c1烷胺基；或者r1与r2连接成4-6元杂环；或者r1与r2连接成取代的4-6元杂环；所述取代的c1-c3烷基的取代基为氘、羟基、甲基取代的c1烷胺基、氨基、卤素；所述取代的c1烷胺基的取代基为甲基；所述4-6元杂环的杂原子为n、o，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的杂原子为n，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的取代基为甲基、羟基、卤素；r3和r4为卤素；a选自无、氧、-nr11-、砜基、c3环烷基、r11选自氢、甲基；r5、r6、r7、r8分别独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氨基；或者r5、r6、r7、r8中任意两个连接成3-4元碳环。进一步地，所述式(i)化合物具有如式(vii)所示的结构：其中，x选自硫、-nh-；r1、r2分别独立地选自氢、羟基、c1-c3烷基、取代的c1-c3烷基、c3-c6环烷基、甲氧基、取代的c1烷胺基；或者r1与r2连接成4-6元杂环；或者r1与r2连接成取代的4-6元杂环；所述取代的c1-c3烷基的取代基为氘、羟基、甲基取代的c1烷胺基、氨基、卤素；所述取代的c1烷胺基的取代基为甲基；所述4-6元杂环的杂原子为n、o，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的杂原子为n，所述杂原子个数为1、2；所述取代的4-6元杂环的取代基为甲基、羟基、卤素；r3和r4为卤素；a选自无、氧、-nr11-、砜基、c3环烷基、r11选自氢、甲基；r5、r6、r7、r8分别独立地选自氢、氘、卤素、羟基、氨基；或者r5、r6、r7、r8中任意两个连接成3-4元碳环。进一步地，所述式(i)化合物为如下化合物之一：本发明还提供了前述的化合物、或其光学异构体、或其顺反异构体、或其同位素化合物、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物、或其互变异构体、或其内消旋体、或其外消旋体、或其对映异构体、或其非对映异构体、或其混合物形式、或其代谢产物、或其代谢前体在制备用于预防和/或治疗具有ido介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病的药物中的用途。进一步地，所述具有ido介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病选自癌症、骨髓增生异常综合征、阿尔茨海默病、自身免疫性疾病、抑郁症、焦虑症、白内障、心理障碍和艾滋病；其中所述的癌症优选乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、胃癌、直肠癌、胰腺癌、脑癌、皮肤癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、输卵管肿瘤、卵巢瘤、腹膜肿瘤、iv期黑色素瘤、实体瘤、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝细胞癌、乳突肾性瘤。本发明还提供了一种药物组合物，它是以前述的化合物、或其光学异构体、或其顺反异构体、或其同位素化合物、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐、或其前体药物、或其互变异构体、或其内消旋体、或其外消旋体、或其对映异构体、或其非对映异构体、或其混合物形式、或其代谢产物、或其代谢前体为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。本发明还提供了前述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗具有ido介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病的药物中的用途。进一步地，所述具有ido介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病选自癌症、骨髓增生异常综合征、阿尔茨海默病、自身免疫性疾病、抑郁症、焦虑症、白内障、心理障碍和艾滋病；其中所述的癌症优选乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、胃癌、直肠癌、胰腺癌、脑癌、皮肤癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、输卵管肿瘤、卵巢瘤、腹膜肿瘤、iv期黑色素瘤、实体瘤、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝细胞癌、乳突肾性瘤。关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀(ca～cb)烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，(c1～c4)烷基是指包含1～4个碳原子的烷基。所述c1～c6烷基是指c1、c2、c3、c4、c5、c6的烷基，即具有1～6个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、己基等等。c1-c6的烷氧基、c3-c7的环烷基、c3-c7的杂环烷基也具有与其基团相应的含义。例如，所述c3～c6的环烷基是指c3、c4、c5、c6的环烷基，即具有3～6个碳原子的环状烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等等。术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。术语“盐”和“可药用的盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。本发明的同位素化合物为一个或多个元素为其相应的同位素取代的化合物，包括但不局限于氢(1h)为氘(d)或氚(t)取代。本发明中的过夜为12h-16h。本发明制备的化合物对ido蛋白酶具有明显的抑制作用，且在体内代谢稳定，显示了良好的药代动力学。尤其是在人肝微粒体代谢稳定性上优于目前已进入临床的同类化合物incb024360，显示可能有更好的临床药代动力学。本发明的化合物或其药物组合物可以用于制备ido抑制剂类药物，也可以用于制备预防和/或治疗具有ido介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病的药物，具有广泛的应用价值。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。具体实施方式本发明化合物的通用合成方法如下：方法a：方法b：实施例1：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-氨磺酰乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(1)第一步：合成中间体1-1：化合物sm1-1用文献方法(wo2017106062)制备得到。原料sm1-1(0.1mmol，37mg)与2-氨基乙磺酰胺盐酸盐(0.2mmol，32mg，上海毕得医药有限公司)溶于thf2ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液0.5ml，室温反应过夜。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用0.5n盐酸洗，再用饱和食盐水洗。将有机相分离后将有机层减压浓缩。所得粗产品用薄层色谱板纯化，得白色固体(中间体1-1)22mg，产率48％。第二步：合成化合物1：中间体1-1(22mg，0.05mmol)溶于thf2ml中，加入2nnaoh0.5ml，室温搅拌0.5h。用乙酸乙酯萃取，有机相用蒸馏水洗，再用饱和食盐水洗。有机相分离后减压旋干，得类白色固体(化合物1)20mg，收率95％。msm/z(esi):423.0(m+h)+1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.46(s,1h),8.88(s,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.10(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.97(d,j＝16.2hz,2h),6.80–6.72(m,1h),6.48(dd,j＝13.2,7.2hz,1h),3.71–3.55(m,2h),3.29(t,j＝6.8hz,2h)。实施例2：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-(n-甲基氨磺酰基)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(2)第一步：合成中间体2-1：将中间体1-1(113mg,0.25mmol)、碳酸钾(70mg,0.5mmol)依次加入dmf(5ml)中，再缓慢加入碘甲烷(36mg,0.25mmol)，室温下搅拌过夜，tlc监控反应原料消失。加入10ml水，用20ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，prep-tlc纯化，乙酸乙酯/正己烷＝1/1展开，制得20mg中间体2-1，收率：17％。将中间体2-1(20mg,0.04mmol)加入到5ml四氢呋喃中，加入氢氧化钠(2n)溶液1.5ml，室温下搅拌反应30分钟，tlc监控反应原料基本消失。加入10ml水，用10ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，将有机相减压浓缩制得15mg白色固体(化合物2)，收率：85％。ms(esi)m/e437.0(m+h)+。实施例3：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-(n-乙基氨磺酰)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(3)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-3为原料制得化合物3。第一步：合成sm2-3：将乙胺盐酸盐(81.5mg，1.0mmol)溶于5mldcm，加入三乙胺(303mg，3.0mmol)，冰浴下缓慢加入2-苯二(甲)酰亚氨基乙烷磺酰氯(273mg，1.0mmol)，反应15min，tlc监控反应直至原料消失。加入10ml水，10mldcm萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，薄层色谱层析纯化(dcm/meoh＝10:1)得65mg白色固体产物，收率：23％。将此白色固体产物(65mg，0.23mmol)溶于5ml乙醇中，加入水合肼(17.7mg，0.29mmol)，回流搅拌3h，有白色固体析出，自然降温至室温，过滤，滤液减压浓缩至干，得28mg白色固体(sm2-3)，收率：80％。第二步：合成中间体3-1：将sm1-1(34mg，0.09mmol)溶于5ml四氢呋喃，加入sm2-3(28mg，0.18mmol)，搅拌下加入饱和nahco3水溶液(0.1ml)，室温搅拌30分钟，tlc监测反应直至原料基本消失，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，减压浓缩至干，薄层色谱层析纯化(pe/ea＝1:1)，得28mg白色固体(中间体3-1)，收率：65％。第三步：合成化合物3：将中间体3-1(28mg，0.059mmol)溶于1mlthf，加入2nnaoh(0.3ml)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得20mg目标化合物白色固体，收率：75％。ms(esi)m/e451(m+h)+1hnmr(400mhz,dmso)δ11.47(s,1h),8.91(s,1h),7.25–7.15(m,2h),7.10(dd,j＝6.0,2.6hz,1h),6.76(dd,j＝7.5,4.4hz,1h),6.44(t,j＝6.0hz,1h),3.59(dd,j＝12.8,6.4hz,2h),3.31–3.26(m,2h),2.98(dt,j＝14.1,7.1hz,2h),1.09(t,j＝7.2hz,3h)。实施例4：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-(异丙基氨磺酰)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(4)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-4为原料制得化合物4。第一步：合成sm2-4：将2-苯二(甲)酰亚氨基乙烷磺酰氯(273mg，1.0mmol)溶于3mldcm，搅拌下加入异丙胺(177mg，3.0mmol)，室温反应30min，tlc监控反应直至原料消失。加入10ml水，10mldcm萃取，dcm层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后将滤液减压旋干溶剂，得202mg白色固体产物，收率：68％。将此白色固体(98mg，0.33mmol)溶于5ml乙醇中，加入水合肼(22mg，0.36mmol)，回流搅拌3h，有白色固体析出，自然降温至室温，过滤，滤液减压浓缩至干，得45mg白色固体(sm2-4)，收率：82％。第二步：合成中间体4-1：将sm1-1(82mg，0.135mmol)溶于5ml四氢呋喃，加入sm2-4(45mg，0.27mmol)，搅拌下加入饱和nahco3水溶液(0.14ml)，室温搅拌30分钟，tlc监测反应直至原料基本消失，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，减压浓缩至干，薄层柱层析纯化(pe/ea＝2：1)，得40mg白色固体产物(中间体4-1)，收率：60％.第三步：合成化合物4：将中间体4-1(40mg，0.08mmol)溶于1mlthf，加入2nnaoh(0.4ml，0.8mmol)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得32mg目标化合物白色固体(化合物4)，收率：84.5％。ms(esi)m/e465(m+h)+1hnmr(400mhz,dmso)δ11.46(s,1h),8.90(s,1h),7.23–7.15(m,2h),7.10(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.79–6.73(m,1h),6.45(t,j＝6.0hz,1h),3.59(dd,j＝13.2,6.4hz,2h),3.43(dd,j＝13.3,6.5hz,1h),3.28(t,j＝6.9hz,2h),1.13(d,j＝6.5hz,6h)。实施例5：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-(n-(2-羟基乙基)氨磺酰)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(5)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-5为原料制得化合物5。第一步：合成sm2-5：将2-苯二(甲)酰亚氨基乙烷磺酰氯(273mg，1.0mmol)溶于3mldcm，搅拌下加入乙醇胺(61mg，1.0mmol)，加入三乙胺(202mg，2.0mmol)室温反应30min，tlc监控反应直至原料消失。直接减压浓缩至干，薄层色谱层析纯化(dcm/meoh＝10：1)，得192mg白色固体产物，收率：64.4％。将此白色固体(100mg，0.335mmol)溶于5ml乙醇中，加入水合肼(21mg，0.35mmol)，回流搅拌3h，有白色固体析出，自然降温至室温，过滤，滤液减压浓缩至干，得35mg白色固体sm2-5，收率：62.1％。第二步：合成中间体5-1将sm1-1(38mg，0.104mmol)溶于5ml四氢呋喃，加入sm2-5(35mg，0.208mmol)，搅拌下加入2nnaoh水溶液(0.2ml)，室温搅拌30分钟，tlc监测反应直至原料基本消失，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，减压浓缩至干，薄层色谱层析纯化(pe/ea＝1：3)，得33mg白色固体(中间体5-1)，收率：65％。第三步：合成化合物5将中间体5-1(33mg，0.067mmol)溶于1mlthf，加入2nnaoh(0.3ml，0.6mmol)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得23mg目标化合物5白色固体，收率：73.5％。ms(esi)m/e467(m+h)+。1hnmr(400mhz,dmso)δ11.48(s,1h),8.90(s,1h),7.26(t,j＝5.8hz,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.11(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),6.76(ddd,j＝8.8,4.0,2.8hz,1h),6.43(t,j＝6.0hz,1h),4.84–4.74(m,1h),3.60(dd,j＝13.0,6.5hz,2h),3.45(q,j＝6.0hz,2h),3.36–3.30(q,2h),3.02(q,j＝6.0hz,2h)。实施例6：n-(3-溴-4-氟苯基)-4-((2-(n-(2，2-二氟乙基氨磺酰)乙基)氨基)-n'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(11)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-11为原料制得化合物11。第一步：合成sm2-11：将2,2-二氟乙胺(96mg，1.2mmol)溶于1mldcm，冰浴下缓慢加入2-苯二(甲)酰亚氨基乙烷磺酰氯(273mg，1.0mmol)，搅拌下加入三乙胺(202mg，2.0mmol)，反应1h，tlc监控反应直至原料消失。加入10ml水，10mldcm萃取，dcm层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓干，得260mg白色固体产物，收率：82％。将此白色固体产物(105mg，0.33mmol)溶于5ml乙醇中，加入水合肼(21mg，0.36mmol)，回流搅拌3h，有白色固体析出，自然降温至室温，过滤，滤液减压浓缩至干，得41mg白色固体sm2-11，收率：67％。第二步：合成中间体11-1：将sm1-1(41mg，0.11mmol)溶于5ml四氢呋喃，加入sm2-11(41mg，0.22mmol)，搅拌下加入2nnaoh水溶液(0.1ml)，室温搅拌2h，tlc监测反应直至原料基本消失，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，减压浓缩至干，薄层色谱层析纯化(pe/ea＝1：1)，得18mg白色固体(中间体11-1)，收率：32％。第三步：合成化合物11：将中间体11-1(18mg，0.035mmol)溶于1mlthf，加入2nnaoh(0.2ml，0.4mmol)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得10mg目标化合物白色固体(化合物11)，收率：59％。ms(esi)m/e487(m+h)+。实施例7：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-n，n-二甲基氨磺酰乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(15)第一步：合成中间体15-1：将中间体1-1(44.9mg，0.1mmol)溶于3mldmf，搅拌下加入碘甲烷(42.6mg，0.3mmol)，加入k2co3(69mg，0.5mmol)室温反应过夜，tlc监控反应直至原料消失。加入5ml水，5ml乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用水洗涤2次，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，薄层色谱层析纯化(pe/etoac＝1：1)，得42mg白色固体(中间体15-1)，收率：88％。第二步：合成化合物15：将中间体15-1(42mg，0.088mmol)溶于3mlthf，加入2nnaoh(0.45ml，0.9mmol)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得35mg目标化合物白色固体(化合物15)，收率88％。ms(esi)m/e451(m+h)+。1hnmr(400mhz,dmso)δ11.49(s,1h),8.91(s,1h),7.19(t,j＝8.8hz,1h),7.11(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),6.76(ddd,j＝8.8,4.1,2.8hz,1h),6.44(t,j＝6.1hz,1h),3.69–3.58(m,2h),3.38–3.29(m,2h),2.82–2.76(m,6h)。实施例8：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-(吡咯烷-1-基氨磺酰)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(17)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-17为原料制得化合物17。第一步：合成sm2-17：将2-苯二(甲)酰亚氨基乙烷磺酰氯(273mg，1.0mmol)溶于3mldcm，搅拌下加入四氢吡咯(72mg，1.0mmol)，加入三乙胺(202mg，2.0mmol)室温反应30min，tlc监控反应直至原料消失。加入10ml水，10mldcm萃取，dcm层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓干，得262mg白色固体，收率：85％。将此白色固体(262mg，0.85mmol)溶于5ml乙醇中，加入水合肼(57mg，0.94mmol)，回流搅拌3h，有白色固体析出，自然降温至室温，过滤，滤液减压浓缩至干，得71.2mg白色固体产物sm2-17，收率：47.6％。第二步：合成中间体17-1：将sm1-1(74mg，0.2mmol)溶于5ml四氢呋喃，加入sm2-17(71.2mg，0.4mmol)，搅拌下加入2nnaoh水溶液(0.2ml)，室温搅拌30分钟，tlc监测反应直至原料基本消失，向反应液中加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，减压浓缩至干，薄层色谱层析纯化(pe/ea＝1：1)，得68mg白色固体(中间体17-1)，收率：67.5％。第三步：合成化合物17：将中间体17-1(68mg，0.135mmol)溶于1mlthf，加入2nnaoh(0.7ml，1.4mmol)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得40mg白色固体目标化合物17，收率：62％。ms(esi)m/e477(m+h)+1hnmr(400mhz,dmso)δ11.50(s,1h),8.91(s,1h),7.19(t,j＝8.8hz,1h),7.10(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),6.80–6.73(m,1h),6.43(t,j＝6.0hz,1h),3.63(dd,j＝13.0,6.5hz,2h),3.37(t,j＝6.7hz,2h),3.25(t,j＝6.6hz,4h),1.87–1.82(m,4h)。实施例9：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-(吗啉基氨磺酰)乙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(18)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-18为原料制得化合物18。第一步：合成sm2-18将2-苯二(甲)酰亚氨基乙烷磺酰氯(273mg，1.0mmol)溶于3mldcm，搅拌下加入吗啉(174mg，2.0mmol)，室温反应30min，tlc监控反应直至原料消失。加入10ml水，10mldcm萃取，dcm层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓干，得259mg白色固体产物，收率：80％。将此白色固体产物(259mg，0.8mmol)溶于5ml乙醇中，加入水合肼(53.7mg，0.88mmol)，回流搅拌3h，有白色固体析出，自然降温至室温，过滤，滤液减压浓缩至干，得85mg白色固体产物sm2-18，收率：50％。第二步：合成中间体18-1将sm1-1(82mg，0.22mmol)溶于5ml四氢呋喃，加入sm2-18(85mg，0.44mmol)，搅拌下加入2nnaoh水溶液(0.22ml)，室温搅拌30分钟，tlc监测反应直至原料基本消失，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，减压浓缩至干，薄层柱层析纯化(pe/ea＝1：1)，得65mg白色固体(中间体18-1)，收率：57％.第三步：合成化合物18将中间体18-1(65mg，0.125mmol)溶于5mlthf，加入2nnaoh(0.6ml，1.2mmol)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得35mg目标化合物18白色固体，收率：56％。ms(esi)m/e493(m+h)+1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.50(s,1h),8.92(s,1h),7.19(t,j＝8.8hz,1h),7.11(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.80–6.73(m,1h),6.45(t,j＝6.0hz,1h),3.65(dd,j＝10.7,5.7hz,6h),3.38(t,j＝6.7hz,2h),3.20–3.13(m,4h)。实施例10：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((2-氨磺酰丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(21)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-21为原料制得化合物21。第一步：合成中间体21-1：原料sm1-1(0.4mmol，149mg)与化合物sm2-21(0.6mmol，可按照文献us20080146642制备得到)溶于thf4ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液1ml，室温反应过夜，反应液用乙酸乙酯萃取，然后有机相逐次用0.5n盐酸洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压浓缩，粗产品用薄层色谱板纯化，得类白色固体(中间体21-1)(60mg，产率32％)。第二步：合成化合物21：中间体21-1(60mg，0.13mmol)溶于thf4ml中，加入2nnaoh1ml，室温搅拌0.5h.反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干，得白色固体化合物21(45mg，收率80％)。msm/z(esi):437.0(m+h)+1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.49(s,1h),8.91(s,1h),7.19(t,j＝8.8hz,1h),7.12(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),6.81(d,j＝8.7hz,2h),6.79–6.74(m,1h),6.31(t,j＝5.9hz,1h),3.40–3.34(m,2h),3.02(dd,j＝9.0,6.5hz,2h),2.01(dd,j＝13.0,5.3hz,2h)。实施例11：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-甲氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(22)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-22为原料制得化合物22。sm2-22按文献方法制备得到(biooranic&medicinalchemistry2001,9,2709；journalofmedicinalchemistry,2010,53,2390)。第一步：合成中间体22-1：原料sm1-1(0.4mmol，149mg)与化合物sm2-22(0.6mmol)溶于thf4ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液1ml，室温反应过夜，乙酸乙酯萃取，0.5n盐酸洗，饱和食盐水洗，有机层浓缩，prep-tlc纯化，得类白色固体(中间体22-1)(70mg，产率37％)。第二步：合成化合物22：化合物22-1(70mg，0.15mmol)溶于thf4ml中，加入2nnaoh1ml，室温搅拌0.5h。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干，得类白色固体化合物22(60mg，收率90％):msm/z(esi):451.0(m+h)+1hnmr(400mhz,cd3od)δ7.03(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.95(t,j＝8.7hz,1h),6.74(ddd,j＝8.8,4.1,2.7hz,1h),3.35(t,j＝6.7hz,2h),3.04–2.96(m,2h),2.59(s,3h),1.99(dt,j＝9.6,6.8hz,2h)。实施例12：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-乙氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(23)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-23为原料制得化合物23。sm2-23按文献方法(biooranic&medicinalchemistry2001,9,2709.)制备得到。第一步：合成中间体23-1：原料sm1-1(0.2mmol，74mg)与化合物sm2-23(0.3mmol)溶于thf4ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液1ml，室温反应过夜.反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干。粗产物用薄层色谱纯化，得类白色固体(中间体23-1)(15mg，产率15％)第二步：合成化合物23：中间体23-1(15mg)溶于thf4ml中，加入2nnaoh1ml，室温搅拌0.5h。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干，得类白色固体(化合物23)12mg，收率86％。msm/z(esi):465.0(m+h)+。1hnmr(400mhz,cd3od)δ7.03(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.95(t,j＝8.7hz,1h),6.74(ddd,j＝8.8,4.1,2.7hz,1h),3.34(t,j＝6.7hz,2h),2.98(ddd,j＝14.4,9.5,6.3hz,4h),2.05–1.95(m,2h),1.06(t,j＝7.2hz,3h)。实施例13：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-异丙基氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(24)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-24为原料制得化合物24。sm2-24用类似于sm2-23的方法制备得到。第一步：合成中间体24-1：原料sm1-1(0.4mmol，149mg)与化合物sm2-24(0.7mmol)溶于thf4ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液1ml，室温反应过夜，反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干。粗产物用薄层色谱纯化，得淡黄色固体(中间体24-1)，135mg，产率67％。第二步：合成化合物24：中间体24-1(135mg，0.27mmol)溶于thf4ml中，加入2nnaoh1ml，室温搅拌0.5h.反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干，得淡黄色固体(化合物24)107mg，收率83％。msm/z(esi):479.0(m+h)+1hnmr(400mhz,meod)δ7.14(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),7.07(t,j＝8.7hz,1h),6.86(ddd,j＝8.8,4.1,2.7hz,1h),3.53(s,1h),3.46(t,j＝6.7hz,2h),3.14–3.06(m,2h),2.13(dd,j＝8.7,6.6hz,2h),1.20(d,j＝6.6hz,6h)。实施例14：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-环丙基氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(25)用合成方法b以sm1-1和3-氨基丙磺酸为原料制得化合物25。方法b：第一步：合成中间体25-1：原料sm1-1(2mmol，744mg)与3-氨基丙磺酸(4mmol,556mg,商业品购买得到)溶于thf20ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液4ml，室温反应过夜，反应液用0.5n盐酸中和后用乙酸乙酯萃取。有机相逐次用0.5n盐酸洗，水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压浓缩，dcm打浆，得粗产物中间体25-1(490mg，产率53％)。第二步：合成中间体25-2：取粗产品中间体25-1(0.1mmol，50mg)，置于50ml三口瓶中，置换氮气，加入二氯甲烷1ml，dmf1滴，搅拌下滴加氯化亚砜0.1ml，40℃反应3h，tlc监测，直接旋干得到粗产品中间体25-2备用。第三步：合成中间体25-3：向25ml圆底烧瓶中，加入1mldcm，环丙胺(1mmol，57mg)，0℃搅拌下，滴加上一步产物中间体25-2的dcm溶液0.5ml，室温搅拌3h，加入乙酸乙酯萃取，有机相用0.5n盐酸洗，再用饱和食盐水洗，取有机层旋干，dcm打浆，得淡黄色固体(中间体25-3)25mg，收率50％。第四步：合成化合物25：上一步产物中间体25-3溶于thf2ml中，加入2nnaoh0.5ml，室温搅拌0.25h.加入乙酸乙酯萃取，有机相用水洗，再用饱和食盐水洗，有机层分离后减压旋干，得淡黄色固体化合物25(23mg，收率96％)。msm/z(esi):477.0(m+h)+。1hnmr(400mhz,meod)δ7.03(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.95(t,j＝8.7hz,1h),6.75(ddd,j＝8.8,4.1,2.7hz,1h),3.36(t,j＝6.7hz,2h),3.13–3.00(m,2h),2.39(dq,j＝6.8,3.6hz,1h),2.08–1.94(m,2h),0.60–0.52(m,2h),0.52–0.46(m,2h)。实施例15：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-环戊基氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(27)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-27为原料制得化合物27。sm2-27用类似于sm2-23的方法制备得到。第一步：合成中间体27-1：原料sm1-1(0.4mmol，149mg)与化合物sm2-27(0.67mmol)溶于thf4ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液1ml，室温反应过夜.反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干。粗产物用薄层色谱纯化，得淡黄色固体产物中间体27-1(125mg，产率59％)。第二步：合成化合物27：中间体27-1(125mg，0.24mmol)溶于thf4ml中，加入2nnaoh1ml，室温搅拌0.5h。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干，得淡黄色固体化合物27(105mg，收率89％)。msm/z(esi):505.0(m+h)+1hnmr(400mhz,cd3od)δ7.03(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.95(t,j＝8.7hz,1h),6.77–6.72(m,1h),3.62–3.51(m,1h),3.35(t,j＝6.7hz,2h),3.08–2.91(m,2h),2.00(dd,j＝9.8,5.4hz,2h),1.82(dd,j＝12.2,5.4hz,2h),1.59(dd,j＝9.3,2.9hz,2h),1.45(td,j＝7.5,3.9hz,2h),1.42–1.32(m,2h)。实施例16：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-(2-羟基乙基)氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(29)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-29为原料制得化合物29。sm2-29用类似于sm2-23的方法制备得到。第一步：合成中间体29-1：将sm1-1(29.7mg，0.08mmol)溶于5ml四氢呋喃，加入中间体sm2-29(29mg，0.16mmol)，搅拌下加入2nnaoh水溶液(0.2ml)，室温搅拌30分钟，tlc监测反应直至原料基本消失，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，减压浓缩至干，薄层色谱层析纯化(pe/etoac＝1：3)，得30mg白色固体中间体29-1，收率：75％。第一步：合成化合物29：将中间体29-1(30mg，0.06mmol)溶于2mlthf，加入2nnaoh(0.06ml，0.12mmol)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得23mg目标化合物29白色固体，收率：80.8％。ms(esi)m/e481(m+h)+。1hnmr(400mhz,dmso)δ11.46(s,1h),8.90(s,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.12(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),7.07(t,j＝5.9hz,1h),6.77(ddd,j＝8.9,4.1,2.8hz,1h),6.29(t,j＝5.9hz,1h),4.74(t,j＝5.5hz,1h),3.43(dd,j＝11.7,6.0hz,2h),3.37–3.27(m,6h),3.11–3.03(m,2h),2.98(q,j＝6.1hz,2h),2.00–1.89(m,3h)。实施例17：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-乙氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(36)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-36为原料制得化合物36。sm2-36用类似于sm2-23的方法制备得到。第一步：合成中间体36-1：原料sm1-1(0.4mmol，149mg)与化合物sm2-36(0.56mmol)溶于thf4ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液1ml，室温反应过夜。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干。粗产物用薄层色谱纯化，得类白色固体中间体36-1(100mg，产率51％)。第一步：合成化合物36：中间体36-1(100mg，0.2mmol)溶于thf4ml中，加入2nnaoh1ml，室温搅拌0.5h.反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干，得淡黄色固体化合物36(90mg，收率96％)。msm/z(esi):465.0(m+h)+1hnmr(400mhz,meod)δ7.03(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.95(t,j＝8.7hz,1h),6.74(ddd,j＝8.8,4.1,2.7hz,1h),3.34(t,j＝6.7hz,2h),2.98(ddd,j＝14.4,9.5,6.3hz,4h),2.05–1.95(m,2h),1.06(t,j＝7.2hz,3h)。实施例18：n-(3-溴-4-氟苯基)-4-((3-((3，3-二氟吖定叮-1-基)氨磺酰基)丙基)氨基)-n'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(40)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-40为原料制得化合物40。sm2-40用类似于sm2-23的方法制备得到。化合物3,3-二氟三甲叉亚胺盐酸盐(216.0mg,1.7mmol)和三乙胺(703.4mg,7.0mmol)加入到10ml二氯甲烷中，将3-(1,3-氧代异吲哚-2-基)丙基-1-磺酰氯(400.0mg,1.4mmol)分批加入到反应液中。室温搅拌2小时。加入30ml二氯甲烷，有机层用1nhcl洗涤2次，再用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，硅胶柱层析纯化。得到白色固体化合物2-(3-(3,3-二氟n杂环丁基)磺酰胺)丙基)异吲哚-1,3-二酮(420.0mg,1.2mmol)，收率：87.7％。化合物2-(3-(3,3-二氟n杂环丁基)磺酰胺)丙基)异吲哚-1,3-二酮(400.0mg,1.2mmol)溶于10ml乙醇，加入0.4ml水合肼(80％)。室温搅拌1h，有大量白色固体析出。垫硅藻土抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤。滤液加入水和乙酸乙酯萃取，有机层用食盐水洗涤3次，无水硫酸钠干燥，旋干。得到化合物3-((3,3-二氟n杂环丁基)磺酰胺)丙基)-1-胺(249.0mg,1.7mmol,)sm2-40粗品，没有纯化，直接投下一步反应。收率：100％。将化合物4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4-硝基-1,2,5-噁唑-3-基)-1,2,4-噁唑-5(4氢)-酮sm1-1(150.0mg,0.4mmol)和粗品化合物3-((3,3-二氟n杂环丁基)磺酰胺)丙基)-1-胺sm2-40(249.0mg,1.7mmol,)加入到16mlthf和3ml2n的氢氧化钠中，室温搅拌3h。加入乙酸乙酯和水，萃取，干燥，旋干，硅胶柱层析纯化。得到化合物n-(3-溴-4-氟苯基)-4-((3-(3,3-二氟氮杂环丁基)磺酰基)丙基)氨基)-n'-羟基-1,2,5-噁二唑-3-脒40(95.0mg,0.18mmol)。收率：45.9％。ms(esi)m/e513(m+h)+。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.42(s,1h),8.90(s,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.12(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),6.77(ddd,j＝8.8,4.0,2.9hz,1h),6.33(t,j＝5.9hz,1h),4.45–4.34(m,4h),3.39–3.29(m,6h),2.07–1.90(m,2h)。实施例19：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(吡咯啶-1-基氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(41)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-41为原料制得化合物41。sm2-41用类似于sm2-23的方法制备得到。第一步：合成中间体41-1：将sm1-1(37mg，0.1mmol)溶于5ml四氢呋喃，加入中间体sm2-41(38.4mg，0.2mmol)，搅拌下加入2nnaoh水溶液(0.1ml)，室温搅拌30分钟，tlc监测反应直至原料基本消失，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，减压浓缩至干，薄层柱层析纯化(pe/etoac＝1：1)，得35mg白色固体中间体41-1，收率：67％；第二步：合成化合物41：将中间体41-1(35mg，0.067mmol)溶于2mlthf，加入2nnaoh(0.3ml，0.6mmol)，室温搅拌30min，tlc监测反应，直至原料反应完全，加入10ml水，10ml乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得18mg目标化合物41白色固体，收率：54％。ms(esi)m/e491(m+h)+1hnmr(400mhz,dmso)δ11.44(s,1h),8.90(s,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.12(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),6.80–6.73(m,1h),6.32(t,j＝5.9hz,1h),3.60(s,1h),3.30(d,j＝6.7hz,1h),3.23(t,j＝6.7hz,4h),3.15–3.08(m,2h),2.01–1.92(m,3h),1.86–1.80(m,4h)。实施例20：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-甲氧基氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(45)用合成方法b以sm1-1和sm2-45为原料制得化合物45。第一步：合成中间体45-1：原料sm1-1(2mmol，744mg)与3-氨基丙磺酸(4mmol,556mg)溶于thf20ml中，加入饱和碳酸氢钠溶液4ml，室温反应过夜.反应液用0.5n盐酸中和后用乙酸乙酯萃取。有机相逐次用0.5n盐酸洗，水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压浓缩，dcm打浆，得粗产物中间体45-1(490mg，产率53％)。第二步：合成中间体45-2：取粗产品中间体45-1(0.1mmol，50mg)，置于50ml三口瓶中，置换氮气，加入二氯甲烷1ml，dmf1滴，搅拌下滴加氯化亚砜0.1ml，40℃反应3h，tlc监测，直接旋干得到粗产品中间体45-2备用。第三步：合成中间体45-3：在25ml圆底烧瓶中，加入1mlthf/0.1ml水，盐酸甲氧胺(0.3mmol，25mg)，碳酸钾(0.3mmol，42mg)，搅拌下，滴加上一步制备的中间体45-2的dcm溶液0.5ml，室温搅拌2h.反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干，得中间体45-3，直接用于下步反应。第四步：合成化合物45：上一步的产物中间体45-3溶于thf4ml中，加入2nnaoh1ml，室温搅拌0.25h.反应液用乙酸乙酯萃取，有机相逐次用水洗，饱和食盐水洗。有机层分离后减压旋干。粗产物用薄层色谱纯化，得白色固体(化合物45)10mg，收率20％msm/z(esi):467.0(m+h)+。1hnmr(400mhz,cd3od)δ7.03(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.95(t,j＝8.7hz,1h),6.74(ddd,j＝8.8,4.0,2.8hz,1h),3.64(s,3h),3.35(t,j＝6.7hz,2h),3.15(dd,j＝8.6,6.8hz,2h),2.10–1.95(m,2h)。实施例21：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-羟基氨磺酰基)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(46)用合成方法b以46-1和羟氨为原料制得化合物46。往25ml圆底烧瓶中，加入2mlthf/0.2ml水，盐酸羟胺(2mmol，139mg)，碳酸钾(2mmol，139mg)。搅拌下，滴加34-2的dcm溶液1ml，室温搅拌3h，加入乙酸乙酯萃取，有机相用0.5n盐酸洗，再用饱和食盐水洗。取有机层减压旋干，直接用于下步反应。前一步骤产物溶于thf2ml中，加入1nnaoh0.5ml，室温搅拌0.25h。乙酸乙酯萃取，有机相用0.5n盐酸洗，再用饱和食盐水洗。取有机层减压旋干。粗产品用薄层色谱板纯化，得类白色固体化合物46(10mg，收率10％)。msm/z(esi):453.0(m+h)+1hnmr(400mhz,meod)δ7.03(dd,j＝5.9,2.7hz,1h),6.95(t,j＝8.7hz,1h),6.74(ddd,j＝8.8,4.0,2.8hz,1h),3.37(t,j＝6.7hz,2h),3.19–3.13(m,2h),2.05(dd,j＝14.8,7.1hz,2h)。实施例22：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((4-氨磺酰基丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲咪(98)用类似于实施例1的合成方法以sm1-1和sm2-98为原料制得化合物98。称取叠氮钠(650mg,10mmol)溶于5ml水中，缓慢加入到原料1,4-丁磺酸内酯(2.72g,20mmol)的丙酮(5ml)溶液中室温下搅拌过夜。将反应液减压浓缩，用乙酸乙酯萃取(2*20ml)，将水相浓缩干后，用丙酮/甲基叔丁基醚＝1/1(10ml)打浆，过滤，用甲基叔丁基醚淋洗，固体干燥，制得1.36g产物，收率：76％。将五氯化磷(1.7g,8mmol)加入到前一步反应产物(1.36g,7.6mmol)的甲苯20ml溶液中，加热至回流反应3小时，tlc监控反应原料消失，将反应液减压浓缩制得1.49g产物直接用于下一步，收率100％。将10ml氨水缓慢加入到上一步产物(1.49g,7.6mmol)的乙醇(10ml)溶液中，室温下搅拌反应2小时，tlc监控反应原料消失。将反应液减压浓缩，加入10ml乙酸乙酯打浆，过滤，用乙酸乙酯淋洗，有机相合并浓缩，制得850mg无色油状物产物，收率63％。将上一步产物(300mg,1.68mmol)溶于水/乙醇(3ml/3ml)的混合溶液中，加入(10％)钯碳催化剂0.2g，通氢气置换三次，室温下搅拌反应过夜，tlc监控反应原料消失。过滤，用乙醇淋洗，有机相合并浓缩，制得248mg无色油状物sm2-98，收率97％。将sm2-98(248mg,1.32mmol)和原料sm1-1(245mg,0.66mmol)依次加入到10ml四氢呋喃中，加入碳酸氢钠饱和溶液2ml，室温下搅拌反应过夜，tlc监控反应原料基本消失。加入10ml水，用10ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，将有机相减压浓缩制得266mg中间体98-1，收率：84％。将中间体98-1(103mg,0.22mmol)加入到5ml四氢呋喃中，加入氢氧化钠(2n)溶液1.5ml，室温下搅拌反应30分钟，tlc监控反应原料基本消失。加入10ml水，用10ml乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，将有机相减压浓缩制得80mg白色固体目标化合物98，收率：81％。ms(esi)m/e451.0(m+h)+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)11.46(1h,s),8.89(1h,s),7.19(1h,t),7.11(1h,dd),6.77(3h,m)；6.19(1h,t)；3.24-3.22(2h,m)；3.02-2.98(2h,m)；1.73-1.68(4h,m).实施例23：n-(3-溴-4-氟苯基)-4-((3-((3-氟吡咯烷-1-基)磺酰基)丙基)氨基)-n'-羟基-1,2,5-恶二唑-3-甲脒(化合物39)用类似于合成化合物40的方法制备得到化合物39。ms(esi+)m/z497(m+h+).1hnmr(400mhz,dmso)δ11.45(s,1h),8.92(s,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.12(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.80–6.73(m,1h),6.34(t,j＝5.9hz,1h),5.38(dddd,j＝57.2,9.7,6.0,3.8hz,1h),4.17(ddd,j＝20.2,10.8,6.0hz,2h),4.01(dd,j＝10.8,3.7hz,1h),3.95(dd,j＝10.8,3.7hz,1h),3.31(d,j＝6.6hz,2h),3.26–3.17(m,2h),1.97(dt,j＝14.5,7.1hz,2h)。实施例24:n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(吗啉代)丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(化合物43)用类似与合成化合物18的方法制备得到化合物43。lc/ms(esi+)m/z493(m+h+).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.45(s,1h),8.91(s,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.11(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),6.79–6.73(m,1h),6.33(d,j＝5.7hz,1h),3.66–3.60(m,6h),3.16–3.12(m,6h),1.97(d,j＝7.2hz,2h)。实施例25:4-((4-(氮杂环丁烷-1-基磺酰基)丁基)氨基)-n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-1,2,5-二唑-3-甲脒(化合物117)用类似于合成化合物40的方法制备得到化合物117.ms(esi+)m/z493(m+h+).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.48(s,1h),8.92(s,1h),7.19(t,j＝8.8hz,1h),7.12(dd,j＝6.0,2.6hz,1h),6.81–6.70(m,1h),6.24(t,j＝5.8hz,1h),3.83(q,j＝7.2hz,4h),3.25(d,j＝5.8hz,2h),3.14(t,j＝7.1hz,2h),2.21–2.12(m,2h),1.70(d,j＝3.2hz,4h)。实施例26：n-(3-溴-4-氟苯基)-4-((4-((3-氟氮杂-1-基)磺酰基)丁基)氨基)-n′-羟基-1,2,5-噁二唑-3-酰胺(化合物121)用类似于实施例18的合成方法制得化合物121。ms(esi+)m/z509(m+na+).1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ1hnmr(400mhz,dmso)δ11.48(s,1h),8.92(s,1h),7.22(t,j＝8.8hz,1h),7.12(dd,j＝6.1,2.7hz,1h),6.77(ddd,j＝8.8,4.0,2.9hz,1h),6.25(t,j＝5.9hz,1h),5.45-5.32(m,1h),4.20–3.94(m,4h),3.26–3.21(m,4h),1.71–1.70(m,4h).实施例27:n-(3-溴-4-氟苯)-n'-羟基-4-((3-(n-(甲基-d3)磺酰基)正丙基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-羧肟酰胺(化合物127)用氘代甲胺盐酸盐为原料用类似于sm2-22的方法制备得到sm2-127，用类似于合成化合物22的方法制备得到化合物127。ms(esi+)m/z454[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.32–10.61(m,2h),9.02–8.54(m,1h),7.19(t,j＝8.8hz,1h),7.12(d,j＝3.4hz,1h),6.83–6.73(m,1h),6.40(s,1h),3.30–3.21(m,2h),3.14–2.99(m,2h),2.06–1.88(m,2h).实施例28:n-(3-溴-4-氟苯基)-4-((3-(n，n-二(三氘代甲基)氨)丙基)氨基)-n'-羟基-1,2,5-二唑-3-甲脒(化合物128)用氘代二甲胺盐酸盐为原料制备得到sm2-128，用类似于合成化合物36的方法制备得到化合物128。lc/ms(esi+)m/z471.2[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.44(s,1h),8.90(s,1h),7.18(t,j＝8.8hz,1h),7.11(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),6.82–6.72(m,1h),6.32(t,j＝5.8hz,1h),3.36–3.25(m,2h),3.12–3.03(m,2h),2.03–1.88(m,2h).实施例29:n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-((4-(n-氘代甲基氨磺酰基)丁基)氨基)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(化合物134)用类似于化合物127的方法制备得到化合物134。ms(esi+)m/z468[m+h]+.1hnmr(400mhz,cd3od)δ7.14(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),7.07(t,j＝8.7hz,1h),6.86(ddd,j＝8.8,4.1,2.7hz,1h),3.37(d,j＝6.5hz,2h),3.14–3.06(m,2h),2.71(d,j＝4.2hz,3h),1.94–1.76(m,4h).实施例30:n-(3-溴-4-氟苯基)-4-((4-(n，n-二(三氘代甲基)氨基)丁基)氨基)-n'-羟基-1,2,5-二唑-3-甲脒(化合物135)用类似于化合物127的方法制备得到化合物135.ms(esi+)m/z485[m+h]+.1hnmr(400mhz,meod)δ7.15(dd,j＝6.0,2.7hz,1h),7.07(t,j＝8.7hz,1h),6.86(ddd,j＝8.8,4.1,2.7hz,1h),3.37(d,j＝6.5hz,2h),3.13–3.04(m,2h),1.84(ddd,j＝18.1,11.3,5.2hz,4h).实施例31：n-(3-溴-4-氟苯基)-n'-羟基-4-(2-(2-氨基磺酰乙氧基)-乙基胺)-1,2,5-恶二唑-3-甲脒(化合物136)用类似于化合物127的方法制备得到化合物136.ms(esi+)m/z467[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.52(s,1h),8.90(s,1h),7.19(t,j＝8.8hz,1h),7.12(dd,j＝6.0,2.8hz,1h),6.84(s,2h),6.78(m,1h),6.21(t,j＝6.0hz,1h),3.78(t,j＝6.8hz,2h),3.61(t,j＝5.6hz,2h),3.39(m,2h),3.30(t,j＝6.8hz,2h).实施例32:n-(3-溴-4-氟苯)-n'-羟基-4-((3-(n-((甲基-d3)氨磺酰基)正丙基)硫)-1,2,5-噁二唑-3-羧肟酰胺(化合物152)用合成方法b，类似于化合物45的方法，用sm152-1(购买得到)制备得到化合物152.ms(esi+)m/z471[m+h]+。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.43(s,1h),7.17(dd,j＝5.8,2.5hz,1h),7.13(s,1h),7.01(t,j＝8.4hz,1h),6.86–6.77(m,1h),4.48(s,1h),3.33(t,j＝6.9hz,2h),3.19(t,j＝7.1hz,2h),2.30(dd,j＝15.3,8.5hz,2h)。实施例33:n-(3-溴-2-氟苯基)-n'-羟基-4-((3-(n-三氘代甲基氨磺酰基)丙基)硫)-1,2,5-噁二唑-3-甲脒(化合物153)用类似于化合物152的方法制备得到。ms(esi+)m/z472m+h+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.64(s,1h),8.92(s,1h),7.34(dd,j＝8.4,5.0hz,1h),7.09–6.94(m,3h),3.29(t,j＝7.2hz,2h),3.15(dd,j＝9.9,5.4hz,2h),2.10(dt,j＝15.0,7.5hz,2h).以下通过试验例来具体说明本发明的有益效果：以下生物学试验例来进一步说明本发明的用途，但并不意味着限制本发明的应用范围。试验例1：本发明化合物对人源ido1蛋白酶抑制活性的测定：1)实验材料及仪器：ido1(his-tag)酶(bpsbioscience)，l-色氨酸(sigma)，亚甲基蓝(sigma)，源自牛肝脏的过氧化氢酶(sigma)，l-抗坏血酸(sigma)，丙三醇(sigma)，磷酸二氢钾溶液(sigma)，吐温20(tween20，sigma)，自动加样工作平台liquidhandler(bravo&echo)，酶标仪spectramaxm5e(moleculardevices)。2)化合物测试实验方法：用吸光度试验方法对待测化合物进行测试：将待测化合物加dmso配成高浓度储存溶液。用dmso稀释参照化合物储存液，配成100×溶液。在工作板中第一列加入8μl上述待测化合物和100×参照化合物为最高浓度，3倍稀释11个浓度，配成100×溶液。取以上板中溶液0.5μl到检测板。每孔加入0.5μl100x化合物溶液。hpe和zpe对照孔加入0.5μl100％dmso。向每孔加入25μl2×ido1(his-tag)酶溶液(包含l-抗坏血酸，亚甲基蓝和过氧化氢酶)。hpe对照孔加入25μl不含有ido1(his-tag)酶的反应液。将检测板1000rpm离心1分钟混匀。然后将检测板放置室温下孵育30分钟。再向每孔加入25μl上述2×底物(l-色氨酸)溶液。将检测板1000rpm离心1分钟混匀。将检测板置于酶标仪(spectramaxm5e)，设置温度为25℃，每隔10分钟在320nm处测吸光度(od值)，测至60分钟。计算吸光值增长率：从spectralmaxm5e中导出10分钟到60分钟吸光值增长曲线的斜率。计算化合物抑制系数：化合物抑制率＝(zpe对照孔吸光值增长率-化合物孔吸光值增长率)/(zpe对照孔吸光值增长率-hpe对照孔吸光值增长率)x100。结果用prism5.0进行分析。3)结果：本发明中化合物对人源ido1蛋白酶活性抑制ic50见表1。表1本发明中化合物对人源ido1蛋白酶抑制活性实施例编号ic50(nm)实施例编号ic50(nm)实施例编号ic50(nm)119105119872541144209937412472199418513632249549149923172687151582428171151651281068168175891621894结论：本发明化合物对人源ido1蛋白酶活性具有明显的抑制作用。试验例2：本发明化合物对hela细胞内ido蛋白酶活性抑制的测定：1)实验材料及仪器：2)化合物测试实验方法2.1将hela细胞植入96孔板中从烧瓶中取出培养基，用pbs冲洗细胞。将tryple溶液加入烧瓶并使细胞分离。再用含有10％fbs的新鲜培养基洗涤细胞一次，并将它们重悬于培养基中至最终浓度为2.3×106/ml。只有活力大于90％的细胞才能用于检测。按每孔3000个细胞密度将hela细胞植入96孔板的100μl适当生长培养基。将细胞在37℃和5％co2下孵育过夜。2.2化合物准备和处理将化合物用dmso稀释至10mm浓度，然后进行3倍连续稀释9个浓度。将5μl化合物加入到45μl培养基中作为中位稀释度(10倍稀释，含有10％dmso)。向各孔补充96μl新鲜生长培养基以使总体积为196μl。从中位稀释度化合物溶液中取2μl化合物溶液加入到测定板孔中的细胞中，然后在37℃，5％co2培养箱中孵育30分钟。加入2μl人ifn-γ溶液，至200μl总体积中终浓度为10ng/ml，最终浓度为0.1％。细胞在37℃，5％co2培养箱中孵育48小时。2.3ido/犬尿氨酸实验和数据分析在37℃，5％co2培养箱中再孵育48h后，每孔加入140μl上清液，转移至新的96孔板中。每孔再加入10μl6.1n三氯乙酸，密封后于50℃保温30min。然后将平板以2500rpm离心10分钟。将每孔100μl上清液转移到另一个96孔测定板中，并与100μl的6％(w/v)对二甲基氨基苯甲醛混合。使用enspire按od480nm读板。计算每个筛选板的hc(高对照：10ng/ml的ifn-γ)和lc(低对照：没有ifn-γ)的平均数据。化合物孔的百分比抑制(％inh)＝100*(avehc-cpdwell)/(avehc-avelc)。最后使用graphpadprism6软件计算化合物的ic50和绘制效应-浓度曲线。2)结果：本发明中化合物对hela细胞中ido1蛋白酶活性抑制ic50见表2.表2对hela细胞中ido1蛋白酶活性抑制ic50试验结果说明：本发明化合物对hela细胞内ido蛋白酶活性具有抑制作用。试验例3：本发明化合物的肝微粒体代谢稳定性实验第一步：母溶液按以下表3的成分比列配制：表3.母溶液的配制试剂浓度体积最后浓度磷酸盐缓冲液200mm200μl100mm高纯水-106μl-mgcl2溶液50mm40μl5mm第二步：两个实验分别进行如下：a)加nadph：10μl20mg/ml浓度的肝微粒体和40μl10mm浓度的nadph加入孵化试验中。肝微粒体和nadph的最终浓度为0.5mg/ml和1mm。b)不加nadph：10μl20mg/ml浓度的肝微粒体和40μl高纯水加入孵化试验中。肝微粒体的最终浓度为0.5mg/ml。第三步：加入4μl的200μm浓度的阳性对照物或者测试化合物后反应开始。本实验中的阳性对照物为verapamil。测试化合物的最终浓度为2μm。第四步：在0,15,30,45和60分钟的时间点由反应溶液中各取出50μl。往反应液中加入4倍体积的乙腈和is(100nm浓度的alprazolam,200nm浓度的labetalol,200nm浓度的caffeine和2μm浓度的ketoprofen)。样品在3，220克重力下离心40分钟。上层清夜100μl中加入100μl高纯水用lc-ms/ms分析。第五步：数据分析：从提取的离子色谱图确定峰面积。斜率值k通过母体药物的剩余百分比与孵育时间曲线的自然对数的线性回归来确定。体外半衰期(体外t1/2)由斜率值确定：invitrot1/2＝-(0.693/k)体外内在清除率(invitroclint，以μl/min/mg为单位)使用以下等式(重复测定的平均值)由体外半衰期t1/2(分钟)换算：放大内在清除率(scaleupclint，以ml/min/kg为单位)通过使用以下式(重复测定的平均值)由体外t1/2(分钟)换算：小鼠，大鼠和人肝微粒体代谢稳定性实验结果见表4。表4小鼠，大鼠和人肝微粒体代谢稳定性实验结果incb024360是美国incyte公司开发的ido抑制剂，目前已经进入临床iii期。表4中的数据显示本发明的化合物在人肝微粒体中的代谢稳定性比参照化合物incb024360有显著提高，预示了本发明化合物有很大可能可以有更好的临床药代动力学。试验例4：本发明化合物的小鼠药代动力学1)实验材料及仪器：lc-20ad高效液相色谱系统(日本shimadzu(岛津)公司)api4000三重四极杆质谱仪，(美国appliedbiosystem公司)phenixwinnolin药动学软件(version6.3，美国certara公司)高速冷冻离心机(thermofisherscientific)分析天平(赛多利斯，secura225d-1cn)实验动物：icr小鼠(成都达硕实验动物有限公司)dma(sigma)cmc-na(成都科龙化工)肝素(成都科龙化工)2)实验方法及结果精密称取化合物(本发明化合物为化合物4，以进入临床iii期的类似发明参照化合物incb-24360为对照化合物)5mg，加入相应的溶媒至终体积10ml，超声涡旋混匀。配置成浓度为0.5mg/ml的溶液。取配制的终溶液0.2ml，于-20℃保存，用于浓度测定。健康成年icr小鼠9只(20-30g)，禁食过夜(自由饮水)后，灌胃给药，给药体积0.2ml/10g；于给药前及给药后0.5,1,2,4,6,8,12,24h由眼眶后静脉丛采血0.1ml，4℃离心5min分离血浆，于-20℃保存待测。然后采用lc/ms/ms法测定血浆中的待测化合物浓度。表5.本发明化合物的药代动力学参数本发明的化合物显示了良好的药代动力学。综上，本发明制备的化合物对ido蛋白酶具有明显的抑制作用，且在体内代谢稳定，显示了良好的药代动力学。尤其是在人肝微粒体代谢稳定性上优于目前已进入临床的同类化合物incb024360，显示可能有更好的临床药代动力学。本发明的化合物或其药物组合物可以用于制备ido抑制剂类药物，也可以用于制备预防和/或治疗具有ido介导的色氨酸代谢途径的病理学特征的疾病的药物，具有广泛的应用价值。当前第1页12