本申请是以下申请的分案申请：申请日2016年03月10日；申请号：201680014066.3；发明名称：“作为抗癌药物的取代的2-氢-吡唑衍生物”。
发明领域
本发明涉及作为选择性的cdk4/6抑制剂取代的2-氢-吡唑衍生物。具体地讲，本发明涉及作为选择性的cdk4/6抑制剂的式(i)或其药学上可接受的盐。
发明背景
细胞周期的调控主要受一系列丝氨酸/苏氨酸激酶的影响，这类丝氨酸/苏氨酸激酶又被称作细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)，他们通过与其相对应的调节亚基周期素(cyclins)相结合，推动细胞周期的进行、遗传信息的转录和细胞的正常分裂增殖。cdk4/6是细胞周期的关键调节因子，能够触发细胞周期从生长期(g1期)向dna复制期(s1期)转变。在细胞增殖过程中，细胞周期素d(cyclind)与cdk4/6形成的复合物能够磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(rb)。肿瘤抑制蛋白rb一旦发生磷酸化，可释放其在未被磷酸化的状态下紧密结合的转录因子e2f，e2f激活进一步转录推动细胞周期通过限制点(r点)并从g1期进展到s期，进入了细胞增殖的周期。因此，抑制cdk4/6使之无法形成cyclind-cdk4/6复合物，就能够阻滞细胞周期自g1期向s期的进程，从而达到抑制肿瘤增殖的目的。在雌激素受体阳性(er+)乳腺癌(bc)中，cdk4/6的过度活跃非常频繁，而cdk4/6是er信号的关键下游靶标。临床前数据表明，cdk4/6和雌激素受体(er)信号双重抑制具有协同作用，并能够抑制g1期雌激素受体阳性(er+)乳腺癌(bc)细胞的生长。
cdk4/6靶点是一个竞争很激烈的研发领域。pietzsch在2010年总结了这一领域的进展情况(mini-rev.med.chem.2010,10,527-539)。malorni还在2014年总结了最新的cdk4/6抑制剂在乳腺癌临床前和临床上的研究成果(curr.opin.oncol.2014,26,568–575)。针对cdk4/6靶点的大量研究工作促进了一系列不同选择性的cdk抑制剂的开发，同时也导致少数几个有效和高选择性的cdk4/6抑制剂的发现。palbociclib(pd0332991)是这几个有效和高选择性的cdk4/6抑制剂之一，它已经进入人体临床试验，用于妇女晚期或转移性雌激素受体(er+)，人表皮生长因子受体2阴性(her2-)乳腺癌的治疗。基于paloma-1实验的中期数据，2014年8月辉瑞公司已经向fda提交了palbociclib的新药申请(nda)，fda于2015年2月批准了palbociclib的上市请求。其他两个cdk4/6抑制剂abemaciclib(ly2835219)和lee-011也已经开始为3期临床试验招募患者癌症。除了可用于乳腺癌的治疗，这些小分子的杂环化合物在临床上还可以用于其它多种癌症的治疗。这些专利包括wo2012018540，wo2012129344，wo2011101409，wo2011130232，wo2010075074，wo2009126584，wo2008032157，wo2003062236。
为了更好的满足市场需求，达到更好的肿瘤治疗效果，我们希望开发新一代更加安全有效地的高选择性的cdk4/6抑制剂。本发明将提供一种结构新颖的选择性cdk4/6抑制剂，并发现具有此类结构的化合物表现出优异的抗肿瘤效果。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供式(ⅰ)所示化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
r1选自h、卤素、oh、nh2、c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8烯烷基、c3-7环烷基；
r2选自h、卤素、c1-8烷基、c3-7环烷基、芳基或杂芳基；
r3选自h、卤素、-or8、-sr8、-n(r8)(r9)或c1-3烷基；
r4、r5、r6分别独立地选自h、卤素、oh、nh2、cn、no2、＝o，或选自任选被1、2或3个r取代的：c1-8烷基、c1-8烷氨基、n,n-二(c1-8烷基)氨基、c1-8烷氧基-c1-8烷基-、c1-8羟基烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-7环烷基、或3～7元杂环烷基；
任选地，r4、r5、r6中的任意两个可以共同形成一个3～7元环；
r7选自h、卤素、-or8、-sr8、-n(r8)(r9)或c3-7环烷基；
x1、x2、x3、x4分别独立地选自n或c(r10)；
x7选自羰基或c(r11)(r12)；
w选自o、s、或单键；
t选自n或c(r10)，并且，当w选自o或s时，t不为n；
q选自n或c(r10)；
m、n分别独立地选自0、1、或2；
r8、r9分别独立地选自h、c1-8烷基、c3-7环烷基；
r选自f、cl、br、i、nh2、cn、oh、cf3、chf2、ch2f、nhch3、n(ch3)2；
任选地，r8与r9连接在同一个原子上形成含1～4个杂原子的3～7元环；
“杂”或“杂原子”代表o、s、s(＝o)、s(＝o)2或n；
r10选自h、卤素、oh、nh2、cn、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c3-5环烷基、cn、-or8,-sr8、-n(r8)(r9)、-c(＝o)r8、-c(＝o)or8、-c(＝o)n(r8)(r9)、-s(＝o)r8、-s(＝o)2r8、-s(＝o)n(r8)(r9)或-s(＝o)2n(r8)(r9)；
r11和r12分别独立地选自h、oh、卤素、c1-8烷基或c3-7环烷基；
任选地，r4与r10连接在同一个原子上形成一个3～7元环；
任选地，结构单元
本发明的一些方案中，上述r1选自异丙基、2-丙烯基或烯丙基。
本发明的一些方案中，上述r2选自甲基、苯基。
本发明的一些方案中，上述r3选自f。
本发明的一些方案中，上述r4，r5，r6分别独立地选自h、卤素、oh、nh2、
本发明的一些方案中，上述r7选自h、f或cl。
本7.根据权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐，其中，结构单元
本发明的一些方案中，上述r10选自h、oh、nh2、f、cl、cn、
本发明的一些方案中，上述x4选自n或ch。
本发明的一些方案中，上述结构单元
本发明的一些方案中，上述结构单元
本发明化合物，其选自：
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
c1-8表示烷基中含有的碳原子数目，例如，c1表示只含有1个碳原子，c2表示含有两个碳原子，以此类推。
在式(ⅰ)化合物中，术语“c1-8烷基”表示含有1～8个碳原子的直链或直连烃基，其包括例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2,2-二甲基丙基、正己基、正庚基、正辛基等。
“c2-8烯基”表示含有2～8个碳原子且含有1个双键的直连或支链烃基，其包括乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
“c2-8炔基”表示含有2～8个碳原子且含有1个三键的直连或支链烃基，其包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基等。
“c3-7环烷基”表示含有3～7个碳原子的单环或双环烃基，其包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基等。
这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐(参见bergeetal.,"pharmaceuticalsalts",journalofpharmaceuticalscience66:1-19(1977))。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。
本文所用的“药学上可接受的盐”属于本发明化合物的衍生物，其中，通过与酸成盐或与碱成盐的方式修饰所述母体化合物。药学上可接受的盐的实例包括但不限于：碱基比如胺的无机酸或有机酸盐、酸根比如羧酸的碱金属或有机盐等等。药学上可接受的盐包括常规的无毒性的盐或母体化合物的季铵盐，例如无毒的无机酸或有机酸所形成的盐。常规的无毒性的盐包括但不限于那些衍生自无机酸和有机酸的盐，所述的无机酸或有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、氢碘酸盐、羟基、羟萘、羟乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水杨酸、硬脂酸、亚乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、单宁、酒石酸和对甲苯磺酸。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。一般地，优选醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈等非水介质。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。
本发明的某些化合物可以具有不对称碳原子(光学中心)或双键。外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个的异构体都包括在本发明的范围之内。
本文中消旋体、ambiscalemicandscalemic或者对映体纯的化合物的图示法来自maehr,j.chem.ed.1985,62:114-120。1985年，62：114-120。除非另有说明，用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。当本文所述化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心，除非另有规定，它们包括e、z几何异构体。同样地，所有的互变异构形式均包括在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(r)-和(s)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过的手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(r)-和(s)-异构体以及d和l异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氚(3h)，碘-125(125i)或c-14(14c)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂或载体介质代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考remington:thescienceandpracticeofpharmacy,21sted.,lippincott,williams&wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝o)时，意味着两个氢原子被取代。当取代基为酮基(即＝o)时，意味着两个氢原子被取代。(重复)酮取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如r)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个r所取代，则所述基团可以任选地至多被两个r所取代，并且每种情况下的r都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到化学结构通式中包括但未具体提及的化合物时，这种取代基可以通过其任何原子相键合。取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。例如，结构单元
烷基和杂烷基原子团的取代基一般被称为“烷基取代基”，它们可以选自但不限于下列基团中的一个或多个：-r’、-or’、＝o、＝nr’、＝n-or’、-nr’r”、-sr’、卤素、-sir’r”r”’、oc(o)r’、-c(o)r’、-co2r’、-conr’r”、-oc(o)nr’r”、-nr”c(o)r’、nr’c(o)nr”r”’、-nr”c(o)2r’、-nr””’-c(nr’r”r’”)＝nr””、nr””c(nr’r”)＝nr’”、-s(o)r’、-s(o)2r’、-s(o)2nr’r”、nr”so2r’、-cn、–no2、-n3、-ch(ph)2和氟代(c1-c4)烷基,取代基的数目为0～(2m’+1),其中m’是这类原子团中碳原子的总数。r'、r”、r”'、r””和r””’各自独立地优选氢、被取代或未被取代的杂烷基、被取代或未被取代的芳基(例如被1～3个卤素取代芳基)、被取代或未被取代的烷基、烷氧基、硫代烷氧基基团或芳烷基。当本发明的化合物包括一个以上的r基团时，例如，每一个r基团是独立地加以选择的，如同当存在一个以上的r'、r”、r”'、r””和r””’基团时的每个这些基团。当r'和r”附着于同一个氮原子时，它们可与该氮原子结合形成5-，6-或7-元环。例如，-nr'r“意在包括但不仅限于1-吡咯烷基和4-吗啉基。根据上述关于取代基的讨论中，本领域技术人员可以理解，术语“烷基”意在包括碳原子键合于非氢基团所构成的基团，如卤代烷基(例如-cf3、-ch2cf3)和酰基(例如-c(o)ch3、-c(o)cf3、-c(o)ch2och3等)。
与烷基原子团所述取代基相似，芳基和杂芳基取代基一般统称为“芳基取代基”，选自例如-r’、-or’、-nr’r”、-sr’、-卤素,-sir’r”r”’、oc(o)r’、-c(o)r’、-co2r’、-conr’r”、-oc(o)nr’r”、-nr”c(o)r’、nr’c(o)nr”r”’、-nr”c(o)2r’、-nr””’-c(nr’r”r’”)＝nr””、nr””c(nr’r”)＝nr’”、-s(o)r’、-s(o)2r’、-s(o)2nr’r”、nr”so2r’、-cn、–no2、-n3、-ch(ph)2、氟(c1-c4)烷氧基和氟(c1-c4)烷基等，取代基的数量为0到芳香环上开放化合价的总数之间；其中r’、r”、r”’、r””和r””’独立地优选自氢、被取代或未被取代的烷基、被取代或未被取代的杂烷基、被取代或未被取代的芳基和被取代或未被取代的杂芳基。当本发明的化合物包括一个以上的r基团时，例如，每个r基团是独立地加以选择的，如同当存在一个以上r’、r”、r”’、r””和r””’基团时的每个这些基团。
芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被通式为–t-c(o)-(crr’)q-u-的取代基所取代，其中t和u独立地选自-nr-、-o-、crr'-或单键，q是0到3的整数。作为替代选择，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被通式为–a(ch2)rb-的取代基所取代，其中a和b独立的选自–crr’-、-o-、-nr-、-s-、-s(o)-、s(o)2-、-s(o)2nr’-或单键，r是1～4的整数。任选地，由此形成的新环上的一个单键可以替换为双键。作为替代选择，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被通式为–a(ch2)rb-的取代基所取代，其中s和d分别独立的选自0～3的整数，x是–o-、-nr’、-s-、-s(o)-、-s(o)2-或–s(o)2nr’-。取代基r、r’、r”和r”’分别独立地优选自氢和被取代或未被取代的(c1-c6)烷基。
除非另有规定，术语“卤代素”或“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，术语“卤代烷基”意在包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“卤代(c1-c4)烷基”意在包括但不仅限于三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。
卤代烷基的实例包括但不仅限于：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。“烷氧基”代表通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述烷基。c1-6烷氧基包括c1、c2、c3、c4、c5和c6的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和s-戊氧基。“环烷基”包括饱和环基，如环丙基、环丁基或环戊基。3-7环烷基包括c3、c4、c5、c6和c7环烷基。“链烯基”包括直链或支链构型的烃链，其中该链上任何的稳定位点上存在一个或多个碳-碳双键，例如乙烯基和丙烯基。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
除非另有规定，术语“杂”表示杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，包括碳(c)和氢(h)以外的原子以及含有这些杂原子的原子团，例如包括氧(o)、氮(n)、硫(s)、硅(si)、锗(ge)、铝(al)、硼(b)、-o-、-s-、＝o、＝s、-c(＝o)o-、-c(＝o)-、-c(＝s)-、-s(＝o)、-s(＝o)2-，以及任选被被取代的-c(＝o)n(h)-、-n(h)-、-c(＝nh)-、-s(＝o)2n(h)-或-s(＝o)n(h)-。
除非另有规定，“环”表示被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。所谓的环包括单环、联环、螺环、并环或桥环。环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“5～7元环”是指环绕排列5～7个原子。除非另有规定，该环任选地包含1～3个杂原子。因此，“5～7元环”包括例如苯基吡啶和哌啶基；另一方面，术语“5～7元杂环烷基环”包括吡啶基和哌啶基，但不包括苯基。术语“环”还包括含有至少一个环的环系，其中的每一个“环”均独立地符合上述定义。
除非另有规定，术语“杂环”或“杂环基”意指稳定的含杂原子或杂原子团的单环、双环或三环，它们可以是饱和的、部分不饱和的或不饱和的(芳族的)，它们包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自n、o和s的环杂原子，其中上述任意杂环可以稠合到一个苯环上形成双环。氮和硫杂原子可任选被氧化(即no和s(o)p)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即n或nr，其中r是h或本文已经定义过的其他取代基)。该杂环可以附着到任何杂原子或碳原子的侧基上从而形成稳定的结构。如果产生的化合物是稳定的，本文所述的杂环可以发生碳位或氮位上的取代。杂环中的氮原子任选地被季铵化。一个优选方案是，当杂环中s及o原子的总数超过1时，这些杂原子彼此不相邻。另一个优选方案是，杂环中s及o原子的总数不超过1。如本文所用，术语“芳族杂环基团”或“杂芳基”意指稳定的5、6、7元单环或双环或7、8、9或10元双环杂环基的芳香环，它包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自n、o和s的环杂原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即n或nr，其中r是h或本文已经定义过的其他取代基)。氮和硫杂原子可任选被氧化(即no和s(o)p)。值得注意的是，芳香杂环上s和o原子的总数不超过1。桥环也包含在杂环的定义中。当一个或多个原子(即c、o、n或s)连接两个不相邻的碳原子或氮原子时形成桥环。优选的桥环包括但不限于：一个碳原子、两个碳原子、一个氮原子、两个氮原子和一个碳-氮基。值得注意的是，一个桥总是将单环转换成三环。桥环中，环上的取代基也可以出现在桥上。
杂环化合物的实例包括但不限于：吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并巯基呋喃基、苯并巯基苯基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4ah-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯、噌啉基十氢喹啉基、2h,6h-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1h-吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3h-吲哚基、isatino基、异苯并呋喃基、吡喃、异吲哚基、异二氢吲哚基、异吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基，八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、异恶唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯并黄嘌呤基、酚恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2h-吡咯基、吡咯基、吡唑基、喹唑啉基、喹啉基、4h-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6h-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、异噻唑基噻吩基、噻吩基、噻吩并恶唑基、噻吩并噻唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基。还包括稠环和螺环化合物。
除非另有规定，术语“烃基”或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、苯基等等)本身或者作为另一取代基的一部分表示直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以是单取代、二取代或多取代的，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)，可以包括二价或多价原子团，具有指定数量的碳原子(如c1-c10表示1至10个碳)。“烃基”包括但不限于脂肪烃基和芳香烃基，所述脂肪烃基包括链状和环状，具体包括但不限于烷基、烯基、炔基，所述芳香烃基包括但不限于6-12元的芳香烃基，例如苯、萘等。在一些实施例中，术语“烷基”表示直链的或支链的原子团或它们的组合，可以是完全饱和的、单元或多元不饱和的，可以包括二价和多价原子团。饱和烃原子团的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、异丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子团的同系物或异构体。不饱和烷基具有一个或多个双键或三键，其实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高级的同系物和异构体。
除非另有规定，术语“杂烃基”或者其下位概念(比如杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基等等)本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的或环状的烃原子团或其组合，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一些实施例中，术语“杂烷基”本身或者与另一术语联合表示稳定的直链的、支链的烃原子团或其组合物，有一定数目的碳原子和至少一个杂原子组成。在一个典型实施例中，杂原子选自b、o、n和s，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮杂原子任选地被季铵化。杂原子b、o、n和s可以位于杂烃基的任何内部位置(包括该烃基附着于分子其余部分的位置)。实例包括但不限于-ch2-ch2-o-ch3、-ch2-ch2-nh-ch3、-ch2-ch2-n(ch3)-ch3、-ch2-s-ch2-ch3、-ch2-ch2、-s(o)-ch3、-ch2-ch2-s(o)2-ch3、-ch＝ch-o-ch3、-ch2-ch＝n-och3和–ch＝ch-n(ch3)-ch3。至多两个杂原子可以是连续的，例如-ch2-nh-och3。
术语“烷氧基”、“烷氨基”和“烷硫基”(或硫代烷氧基)属于惯用表达，是指分别通过一个氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基基团。
除非另有规定，术语“环烃基”、“杂环烃基”或者其下位概念(比如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基等等)本身或与其他术语联合分别表示环化的“烃基”、“杂烃基”。此外，就杂烃基或杂环烃基(比如杂烷基、杂环烷基)而言，杂原子可以占据该杂环附着于分子其余部分的位置。环烷基的实例包括但不限于环戊基、环己基、1-环己烯基、3-环己烯基、环庚基等。杂环基的非限制性实例包括1-(1,2,5,6-四氢吡啶基)、1-哌啶基、2-哌啶基，3-哌啶基、4-吗啉基、3-吗啉基、四氢呋喃-2-基、四氢呋喃吲哚-3-基、四氢噻吩-2-基、四氢噻吩-3-基，1-哌嗪基和2-哌嗪基。
除非另有规定，术语“芳基”表示多不饱和的芳族烃取代基，可以是单取代、二取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价，它可以是单环或多环(比如1至3个环；其中至少一个环是芳族的)，它们稠合在一起或共价连接。术语“杂芳基”是指含有一至四个杂原子的芳基(或环)。在一个示范性实例中，杂原子选自b、n、o和s，其中氮和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基或杂芳基的非限制性实施例包括苯基、1-萘基、2-萘基、4-联苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-恶唑基、4-恶唑基、2-苯基-4-恶唑基、5-恶唑基、3-异恶唑基、4-异恶唑基、5-异恶唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯并噻唑基、嘌呤基、2-苯并咪唑基、5-吲哚基、1-异喹啉基、5-异喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一个芳基和杂芳基环系的取代基选自下文所述的可接受的取代基。
为简便起见，芳基在与其他术语联合使用时(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定义的芳基和杂芳基环。因此，术语“芳烷基”意在包括芳基附着于烷基的那些原子团(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亚甲基)已经被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。
术语“离去基团”是指可以被另一种官能团或原子通过取代反应(例如亲和取代反应)所取代的官能团或原子。例如，代表性的离去基团包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对甲苯磺酸酯等；酰氧基，如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
术语“保护基”包括但不限于“氨基保护基”、“羟基保护基”或“巯基保护基”。术语“氨基保护基”是指适合用于阻止氨基氮位上副反应的保护基团。代表性的氨基保护基包括但不限于：甲酰基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基、三氯乙酰基或三氟乙酰基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(cbz)和9-芴甲氧羰基(fmoc)；芳基甲基，如苄基(bn)、三苯甲基(tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(tms)和叔丁基二甲基甲硅烷基(tbs)等等。术语“羟基保护基”是指适合用于阻止羟基副反应的保护基。代表性羟基保护基包括但不限于：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；酰基，例如链烷酰基(如乙酰基)；芳基甲基，如苄基(bn)，对甲氧基苄基(pmb)、9-芴基甲基(fm)和二苯基甲基(二苯甲基，dpm)；甲硅烷基，如三甲基甲硅烷基(tms)和叔丁基二甲基甲硅烷基(tbs)等等。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明所使用的溶剂可经市售获得。反应一般是在惰性氮气下、无水溶剂中进行的。质子核磁共振数据记录在brukeravanceiii400(400mhz)分光仪上，化学位移以四甲基硅烷低场处的(ppm)表示。质谱是在安捷伦1200系列加6110(&1956a)上测定。lc/ms或shimadzums包含一个dad：spd-m20a(lc)和shimadzumicromass2020检测器。质谱仪配备有一个正或负模式下操作的电喷雾离子源(esi)。
用配有shimadzusil-20a自动进样器和日本岛津dad：spd-m20a探测器的岛津lc20ab系统进行高效液相色谱分析，采用xtimatec18(3m填料，规格为2.1x300mm)色谱柱。0-60ab_6分钟的方法：应用线性梯度，以100％a(a为0.0675％tfa的水溶液)开始洗脱，并以60％b(b为0.0625％tfa的mecn溶液)结束洗脱，整个过程为4.2分钟，然后以60％b洗脱1分钟。将色谱柱再平衡0.8分钟达到100:0，总运行时间为6分钟。10-80ab_6分钟的方法：应用线性梯度，以90％a(a为0.0675％tfa的水溶液)开始洗脱，并以80％b(b为0.0625％tfa的乙腈溶液)结束洗脱，整个过程为4.2分钟，然后以80％b洗脱1分钟。将色谱柱再平衡0.8分钟达到90:10，总运行时间为6分钟。柱温为50℃，流速为0.8ml/min。二极管阵列检测器扫描波长为200-400nm。
在sanpont-group的硅胶gf254上进行薄层色谱分析(tlc)，常用紫外光灯照射检出斑点，在某些情况下也采用其他方法检视斑点，在这些情况下，用碘(10g硅胶中加入约1g碘并彻底混合而成)、香草醛(溶解大约1g香草醛于100ml10％h2so4中制得)、茚三酮(从aldrich购得)或特殊显色剂(彻底混合(nh4)6mo7o24·4h2o、5g(nh4)2ce(iv)(no3)6、450mlh2o和50ml浓h2so4而制得)展开薄层板，检视化合物。采用still,w.c.；kahn,m.；andmitra,m.journaloforganicchemistry,1978,43,2923-2925.中所公开技术的类似方法，在silicycle的40-63μm(230-400目)硅胶上进行快速柱色谱。快速柱色谱或薄层色谱的常用溶剂是二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/甲醇和己烷/乙酸乙酯的混合物。
在gilson-281preplc322系统上采用吉尔森uv/vis-156探测器进行制备色谱分析,所采用的色谱柱是agellavenusilasbprepc18,5m、150x21.2mm；phenomenexgeminic18、5m、150x30mm；bostonsymmetrixc18,5m、150x30mm；或者phenomenexsynergic18、4m、150x30mm。在流速约为25ml/min时，用低梯度的乙腈/水洗脱化合物，其中水中含有0.05％hcl、0.25％hcooh或0.5％nh3·h2o，总运行时间为8-15分钟。
本专利报道的选择性cdk4/6抑制剂可用于一系列癌症的治疗，包括乳腺癌，非小细胞肺癌，食道癌，直肠癌和急性髓细胞白血病癌。选择性cdk4/6抑制剂可以作为一个单独的试剂或与其它化学治疗剂联合使用。
本发明采用下述缩略词：mw代表微波；r.t.代表室温；aq代表水溶液；dcm代表二氯甲烷；thf代表四氢呋喃；dmf代表n,n-二甲基甲酰胺；dmso代表二甲基亚砜；etoac代表乙酸乙酯；etoh代表乙醇；meoh代表甲醇；boc代表叔丁氧羰基，是一种胺保护基团；boc2o代表二-叔丁基二碳酸酯；hoac代表乙酸；tea代表三氟乙胺；dipea代表二异丙基乙胺；tea或et3n代表三乙胺；bnnh2代表苄胺；pmbnh2代表对甲氧基苄胺；mno2代表二氧化锰；hatu代表o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸盐；pocl3代表三氯氧磷；nah代表钠氢；lialh4代表四氢铝锂；pd2(dba)3代表三(二亚苄基丙酮)二钯；pd(dppf)cl2代表[1,1'-双(二苯基磷)二茂铁]二氯化钯；pd(oac)2代表醋酸钯；pd(pph3)4代表三苯基膦钯；pph3代表三苯基膦；xantphos代表4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽；xphos代表2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯；binap代表(±)-2,2'-双-(二苯膦基)-1,1'-联萘；xphos-pd-g2代表氯(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(ii)；nis代表n-碘代二丁酰亚胺；nbs代表n-溴代二丁酰亚胺；ncs代表n-氯代二丁酰亚胺；t-buok代表叔丁醇钾；t-buona代表叔丁醇钠；cs2co3代表碳酸铯；k2co3代表碳酸钾；nabh(oac)3代表三醋酸硼氢化钠；nabh3cn代表氰基硼氢化钠；nahco3代表碳酸氢钠；na2so4代表硫酸钠；koac代表醋酸钾；xantphos代表4,5-双-(二苯基磷基)-9,9-二甲基氧杂蒽。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式，其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明的化合物可以通过一系列的合成步骤来制备，其中r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、m、n、q、t和w与上面的定义相同。
反应流程1制备式i所示化合物
当y＝r4时，在反应流程1所示上面的反应中，2-氢-吡唑衍生物(a)与2-芳基胺(b)反应得到式i所示化合物。该反应需要合适的催化剂(比如pd2(dba)3)，合适的配体(比如xantphos)，合适的碱(比如cs2co3)，合适的溶剂(比如1,4-二氧六环)。根据反应流程1，该反应更偏好于在高温下进行。
当q-y是n-boc时，在反应流程1所示下面的反应中，式i所示化合物仍然可由2-氢-吡唑衍生物(a)与2-芳基胺(b)反应制备，但是boc基团要在强酸下(比如tfa)脱除得到胺(c)，最后胺(c)在还原胺化或亲核取代的条件下(比如nabh3cn或卤代烷)发生烷基化反应得到式i所示化合物。
反应流程2制备2-氢-吡唑衍生物(a)
其中，
在反应流程2所示的反应中，5-溴-2氢-吲唑(d)与卤代烷r2x(e)反应可以制备5-溴-2氢-吲唑(f)。该反应需要合适的碱(比如nah或meona)，合适的溶剂(比如thf)。通过对5-溴-2氢-吲唑(f)卤化可以制备5-溴-2氢-吲唑(g)，该反应需要合适的卤化试剂(比如br2，nbs或nis),合适的溶剂(比如dmf或mecn)。5-溴-2氢-吲唑(i)可以通过硼酸酯(h)的钯催化偶联制备而得，该反应需要合适的催化剂(比如pd(dppf)cl2)，合适的碱比如(k2co3)，合适的溶剂(比如二氧六环和水)。5-溴-2氢-吲唑(k)可以通过双联嚬哪醇硼酸酯(j)的钯催化偶联制备而得，该反应需要合适的催化剂(比如pd(dppf)cl2)，合适的碱(比如koac)，合适的溶剂(比如二氧六环)。2-氢-吡唑衍生物(a)可以通过化合物(l)钯催化偶联制备而得，该反应需要合适的催化剂(比如pd(dppf)cl2)，合适的碱(比如k2co3)，合适的溶剂(比如二氧六环)。根据反应流程2，该反应更偏好于在高温下进行。2-氢-吡唑衍生物(a’)可以通过化合物(a)在铑催化下加氢制备而得，该反应需要合适的催化剂(比如rh(pph3)3cl)，合适的溶剂(比如四氢呋喃)。r1’为r1还原后的烷基。
反应流程3制备2-氢-吡唑衍生物(a)
其中，
在反应流程3所示的反应中，化合物(j)与酰氯(n)反应可以制备化合物(o)。该反应需要合适的碱(比如lihmds)，合适的溶剂(比如thf)。化合物(o)可以通过环合反应制备2-氢-吡唑(q)，该反应需要合适的烷基肼(p)，合适的溶剂(比如etoh)。2-氢-吡唑(r)可以通过催化氢化制备而得，该反应需要合适的催化剂是(比如pd/c)，合适的溶剂(比如meoh)。2-氢-吡唑(a)衍生物可以通过化合物(l)制备而得，该反应需要合适的碱(比如et3n)，合适的溶剂(比如thf)。根据反应流程3，该反应更偏好于在高温下进行。
反应流程4制备2-芳香基胺(b)，此处w是s或者o，并且t是c
在反应流程4所示的反应中，吡啶溴代物(u)可以通过2-溴-5-羟基-吡啶(s)与市售的硫醇或者醇(t)发生mitsunobu反应制备。然后在钯催化的条件下，吡啶溴代物(u)可以转化成2-芳香基胺(b)，该反应要求合适的催化剂(比如pd2(dba)3)，合适的碱(比如lihmds)，合适的溶剂(比如甲苯)。根据反应流程4，该反应更偏好于在高温下进行。
反应流程5制备2-芳香基胺(b)，此处w是直接相连的单键
在反应流程5所示的反应中，当w是直接相连的单键时，2-芳香基胺(b)可以由以下两种方法制备：1)4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-5,6-二氢吡啶-1(2氢)-甲酸叔丁酯(x)与硝基吡啶(w)先在钯催化下发生偶联反应，然后还原硝基和双键；2)硝基吡啶(w)上的溴原子先被市售的胺(v)取代，然后还原硝基即可。
具体实施方式
为了更详细地说明本发明，给出下列实例，但本发明的范围并非限定于此。
方案a
制备中间体a，中间体b和中间体c的一般方法:
第1步：
5-溴-2(氢)-吲唑
向85％的水合肼(103.00克，2.06摩尔，23.20当量)水溶液中缓慢加入5-溴-2-氟苯甲醛(18.00克，88.67毫摩尔，1.00当量)，在滴加过程中有白色固体慢慢析出。将混合物在110℃下搅拌16小时。lcms显示大部分为目标化合物，将混合物冷却到16℃并过滤，滤饼用水(100毫升)洗涤得到粗产品，粗产品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：2)得到标题化合物(6.50克，32.99毫摩尔，产率37.21％)为白色固体。lcms(esi)m/z:197.1(m+1).
第2步：
5-溴-2-甲基-2氢-吲唑
在30℃，氮气保护下，向5-溴-2氢-吲唑(20.00克，101.51毫摩尔，1.00当量)和甲醇钠(5.48克，5.48毫摩尔，5.48当量)的甲醇(150.00毫升)溶液中滴加碘甲烷(57.00克，401.58毫摩尔，3.96当量)，控制滴加时间为1小时。然后将混合物加热到85℃并搅拌5小时，lcms显示原料几乎消耗完全并且检测到所需化合物的ms，将混合物冷却至16℃并浓缩得到粗产品，用3％的nahco3水溶液(30毫升)稀释，用乙酸乙酯(80毫升×2)萃取，有机相减压浓缩。残余物通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝30：1至1：1)，得到标题化合物(8.40克，39.80毫摩尔，收率39.21％)为灰色固体。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.33(s,1h),7.95(s,1h),7.58(d,j＝8.0hz,1h),7.30(dd,j＝1.8hz,8hz,1h),4.18(s,1h).lcms(esi)m/z:210.8(m+1).
第3步：
5-溴-3-碘-2-甲基-2氢-吲唑
在30℃下，向5-溴-2-甲基-吲唑(8.40克，39.80毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(90毫升)溶液中加入吡啶(4.72克，59.70毫摩尔，1.5当量)和双(三氟乙酰氧)碘代苯(20.54克，47.76毫摩尔，1.20当量)将混合物搅拌0.5小时，然后加入碘(12.12克，47.76毫摩尔，1.20当量)继续搅拌23.5小时。lcms显示反应完全，将混合物过滤得到标题化合物(8.20克，粗品)为黄色固体。lcms(esi)m/z:336.9(m+1).第4步：
5溴-2甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑
在氮气保护下，向5-溴-3-碘-2-甲基-2氢-吲唑(7.68克，22.79毫摩尔，1.00当量)和异丙烯基硼酸酯(4.21克25.07毫摩尔，1.11当量)的二氧六环(90.00毫升)溶液中加入k2co3(9.45克，68.38毫摩尔，3.00当量)的饱和水溶液(30毫升)，pd(dppf)cl2·ch2cl2(1.86克，2.28毫摩尔，0.10当量)，将混合物在100℃下搅拌3小时。tlc显示原料几乎反应完全，将混合物冷却到30℃，过滤，滤液用乙酸乙酯(100毫升×3)萃取，用水(50毫升×3)洗涤，饱和食盐水(20毫升×3)洗涤，无水na2so4干燥，过滤、浓缩，残余物通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得到标题化合物(5.36克，21.34毫摩尔，收率93.66％)为黄色的油状物。
第5步：
2-甲基-3-异丙烯基-5-硼酸酯-2氢-吲唑
在氮气保护下，向5-溴-2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑(2.80克，11.15毫摩尔，1.00当量)和双联频哪醇硼酸酯(3.40克，13.38毫摩尔，1.20当量)的二氧六环(56.00毫升)溶液中加入koac(3.28克，33.45毫摩尔，3.00当量)和pd(dppf)cl2·ch2cl2(1.82克，2.23毫摩尔，0.20当量)，将混合物在100℃下搅拌5小时。lcms显示反应完全，并检测到目标化合物的ms，将混合物冷却到16℃，混合物用乙酸乙酯(20毫升)稀释，过滤得到滤液。滤液通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得到标题产物(3.30克，9.96毫摩尔，收率89.33％，纯度90％)为紫色固体。lcms(esi)m/z:299.1(m+1).
第6步:
5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑
在氮气保护下，向2，4-二氯-5-氟-嘧啶(147.83毫克，885.34微摩尔，1.20当量)和2-甲基-3-异丙烯基-5-硼酸酯-2氢-吲唑(220.00毫克，737.78微摩尔，1.00当量)的二氧六环(4毫升)溶液中加入k2co3(305.91毫克，2.21毫摩尔，3.00当量)和pd(dppf)cl2·ch2cl2(120.50毫克，147.56微摩尔，0.20当量)，将混合物在100℃下搅拌3.5小时。tlc显示大多数原料反应完全，lcms显示主要为目标产物的ms，将混合物冷却到30℃并过滤，滤饼用乙酸乙酯(5毫升)洗涤，滤液浓缩，残余物通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：0至6：1)，得到标题产物(中间体a)(210.0毫克，693.69微摩尔，收率94.02％)为亮黄色固体。lcms(esi)m/z:303.0(m+1).
第7步：
5-氟-4-(2-甲基-3-(异丙基-1-烯-2-基)-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
向5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-(异丙基-1-烯-2-基)-2氢-吲唑(中间体a)(1.00克，3.30毫摩尔，1.00当量)的二氧六环(15.00毫升)溶液中加入氨基甲酸叔丁酯(966.49毫克,8.25毫摩尔,2.50当量)，碳酸钾(1.37克,9.90毫摩尔,3.00当量)，醋酸钯(74.09毫克,330.00微摩尔,0.10当量)和xantphos(381.89毫克,660.00微摩尔，0.20当量)。容器用氮气置换三次，在100℃下搅拌18小时。lcms显示反应完全并检测到产物。溶液冷却到20℃过滤。滤液减压浓缩得到标题化合物(3.00克，粗品)，粗产品为淡黄色固体。粗产物不需纯化直接用作下一步。lcms(esi)m/z:384.1(m+1).
第8步：
5-氟-4-(2-甲基-3-(异丙基-1-烯-2-基)-2h-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
向5-氟-4-(2-甲基-3-(异丙基-1-烯-2-基)-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基氨基甲酸叔丁酯(3.00克，3.31毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(30.00毫升)溶液中逐滴加入三氟乙酸(10.00毫升)。溶液在15℃下搅拌1小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)显示原料反应完全。溶液在30℃下减压旋干。粗产物用二氯甲烷(100毫升)稀释，用饱和碳酸氢钠(100毫升)和饱和食盐水(100毫升)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥并浓缩。粗产物用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5：1至3：1)得到标题化合物(770.00毫克，2.72毫摩尔，产率：82.11％)，产物为棕色固体。
第9步：
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
向5-氟-4-(2-甲基-3-(异丙基-1-烯-2-基)-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺(770.00毫克，2.72毫摩尔，1.00当量)的甲醇(20.00毫升)溶液中加入钯碳(250.00毫克)。在氢气(15psi)氛围下溶液加热到50℃搅拌24小时。lcms显示原料反应完全并检测到产物。反应液冷却到20℃，过滤，将滤液浓缩得到标题化合物(中间体b)(600.00毫克，2.10毫摩尔，产率：77.26％)，产物为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(s,1h),8.20(d,j＝3.9hz,1h),7.96(d,j＝9.2hz,1h),7.69(d,j＝9.7hz,1h),5.06(brs,2h),4.17(s,3h),3.54-3.45(m,1h),1.57(d,j＝7.2hz,6h).
第10步：
5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-异丙基-2氢-吲唑
向5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑(中间体a)(36.50克，120.57毫摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(182.5毫升)溶液中加入rh(pph3)3cl(11.16克，12.06毫摩尔，0.10当量)。反应体系用氢气置换几次。将混合物在50℃，氢气压力50psi条件下搅拌24小时。lcms显示反应完全。将混合物冷却到25℃，减压浓缩。向残余物中加入甲醇(100毫升)打浆搅拌16小时，然后过滤，滤饼用甲醇(15毫升×3)洗涤，滤饼减压烘干，得到标题化合物(中间体c)(28.00克，91.88毫摩尔，收率：76.20％)微黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)8.69(s,1h),8.49(d,j＝3.5hz,1h),8.06(d,j＝9.3hz,1h),7.73(d,j＝9.3hz,1h),4.19(s,3h),3.58-3.49(m,1h),1.59(d,j＝7.2hz,6h).lcms(esi)m/z:305.2(m+1).
实施例1
n-(5-氟-4(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)-6-(4-甲基哌啶-1-基)哒嗪-3-胺
第1步：
6-(4-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-胺
将6-氯-3-氨基哒嗪(3.00克，23.16毫摩尔，1.00当量)和1-甲基哌嗪(8.10克，80.87毫摩尔，3.49当量)加入微波管中并封管，将混合物在微波下加热到170℃搅拌并1.5小时。lcms显示反应完全，将混合物冷却至20℃并减压浓缩，残余物通过制备hplc(碱性)纯化，得到标题化合物(3.53克，18.27毫摩尔，收率78.87％)为白色固体。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.11(d,j＝9.6hz,1h),6.73(d,j＝9.6hz,1h),5.63(s,2h),3.30-3.24(m,4h),2.42-2.36(m,4h),2.19(s,3h).lcms(esi)m/z:194.1(m+1).
第2步：
n-(5-氟-4-(2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-胺
在氮气保护下，向5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑(中间体a)(350.00毫克，1.16毫摩尔，1.00当量)和6-(4-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-胺(228.65毫克，1.18毫摩尔，1.02当量)的二氧六环(8毫升)溶液中加入cs2co3(753.39毫克，2.31微摩尔，2.00当量)，xantphos(267.59毫克，462.46微摩尔，0.40当量)和pd2(dba)3(211.74毫克，231.21微摩尔，0.20当量)，将混合物在100-110℃下搅拌16小时。tlc和lcms显示原料反应完全，将混合物冷却到20℃并用乙酸乙酯(20毫升)稀释，过滤，滤液浓缩得到粗产物。将粗产品加入甲醇(10毫升)在25℃下静置直到有黄色沉淀析出，过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，干燥得到标题化合物(120.00毫克，258.53微摩尔，收率22.29％，纯度99％)为黄色固体。lcms(esi)m/z:460.3(m+1).
第3步：
n-(5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-胺
向pd/c(50毫克)的甲醇(10毫升)溶液中加入n-(5-氟-4-(2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-胺(120.00毫克，261.14微摩尔，1.00当量)，向反应体系中通入氢气并保持压力为15psi，将混合物在40-50℃下搅拌8小时。lcms显示反应完全，过滤，滤液浓缩，残余物通过制备hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(57.00毫克，123.50微摩尔，收率47.29％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.72(s,1h),8.46(d,j＝4.0hz,1h),8.41(d,j＝9.6hz,1h),8.06(d,j＝9.2hz,1h),7.65(d,j＝9.2hz,1h),7.40(d,j＝9.2hz,1h),4.20(s,3h),3.68-3.61(m,5h),2.63(t,j＝4.8hz,4h),2.39(s,3h),1.59(d,j＝7.2hz,6h).lcms(esi)m/z:462.2(m+1).
实施例2
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)-n-(5-(哌嗪-1-基)吡嗪-2-基)嘧啶-2-胺
第1步：
4-(5-溴吡嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向2，5-二溴吡嗪(10.00克，42.04毫摩尔，1.00当量)的n-甲基吡咯烷酮(100毫升)溶液中加入哌啶-1-甲酸叔丁酯(7.83克，42.04毫摩尔，1.00当量)和k2co3(8.72克，63.06毫摩尔，1.50当量)，将混合物加热到100℃并搅拌18小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)显示反应完全，将混合物冷却到20℃并用水(200毫升)稀释，用乙酸乙酯(200毫升×2)萃取，无水na2so4干燥，过滤，浓缩。残余物通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝20：1至5：1)，得到标题化合物(11.00克，2.05毫摩尔，收率76.24％)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.15(d,j＝1.38hz,1h)7.87(d,j＝1.38hz,1h)3.56(s,8h)1.49(s,9h).
第2步:
4-(5-氨基吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向4-(5-溴-2-氨基吡嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(10.00克，29.14毫摩尔，1.00当量)和四氟硼酸三叔丁基膦(2.54克，8.74毫摩尔，0.30当量)的甲苯(100毫升)溶液中加入lhmds(1m，60.00毫升，2.06当量)和pd2(dba)3(2.60克，2.84毫摩尔，0.10当量)，将混合物在65℃下搅拌16小时。lcms显示反应完全，将混合物冷却到20℃，用水(50毫升)淬灭，乙酸乙酯(100毫升×3)萃取。有机相合并并浓缩，将残余物溶于乙酸乙酯(100毫升)并用制备hplc(碱性)纯化，得到标题化合物(5.00克，17.90毫摩尔，收率61.43％)为橘色固体。lcms(esi)m/z:280.1(m+1).
第3步：
4-(5-((5-氟-4-(2-甲基-3-(异丙烯基)-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)哌嗪-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向5-(2-氯-5氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑(200.00毫克，660.65微摩尔，1.00当量)和4-(5-氨基吡嗪-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(246.06毫克，792.78微摩尔，1.20当量)的二氧六环(10毫升)溶液中加入cs2co3(430.51毫克，1.32毫摩尔，2.00当量)，xantphos(152.91毫克，264.26微摩尔，0.40当量)，和pd2(dba)3(120.99毫克，132.13微摩尔，0.20当量)，将混合物在110-120℃下搅拌16小时。lcms显示反应完全，将混合物冷却到25℃，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩，残余物通过制备tlc(二氯甲烷：甲醇＝20:1)纯化，得到标题化合物(150.00毫克，247.43微摩尔，收率37.45％，纯度90％)为绿色固体。lcms(esi)m/z:546.2(m+1).
第4步：
4-(5-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)哌嗪-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(5-((5-氟-4-(2-甲基-3-(异丙烯基)-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)哌嗪-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(90.00毫克，164.95微摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(10毫升)溶液中加入pd/c(100毫克)和催化量的乙酸，向反应体系中通氢气并保持压力为15psi，将混合物在50-60℃搅拌16小时。lcms显示反应完全，将混合物冷却到20℃，过滤，滤液浓缩得到标题化合物(90.00毫克，粗品)，将粗品直接用于下一步反应。lcms(esi)m/z:548.3(m+1).
第5步:
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)-n-(5-(哌嗪-1-基)吡嗪-2-基)嘧啶-2-胺
向4-(5-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)哌嗪-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(90.00毫克，164.34微摩尔，1.00当量)的甲醇(5毫升)溶液中加入盐酸-甲醇(4m，1毫升，20毫摩尔，1.00当量)，将混合物在30-40℃下搅拌3小时。tlc(二氯甲烷：甲醇＝30:1)显示原料消耗完全，lcms显示产物占49％，副产物占44％，将混合物冷却到25℃，浓缩，残余物通过制备hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(6.00毫克，13.41微摩尔，收率8.16％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.96(s,1h),8.68(d,j＝4.4hz,1h),8.31(d,j＝9.2hz,1h),8.12(s,1h),7.79(d,j＝8.8hz,1h),4.29(s,3h),3.91(t,j＝4.8hz,4h),3.74-3.69(m,1h),3.43(t,j＝5.2hz,4h),1.65(d,j＝7.2hz,6h).lcms(esi)m/z:448.1(m+1).
实施例3
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2h-吲唑-5-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
第1步：
4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向5-溴-2-硝基吡啶(20.00克，98.53毫摩尔，1.00当量)的二甲亚砜(52毫升)溶液中加入哌嗪-1甲酸叔丁酯(24.00克，128.86毫摩尔，1.31当量)和三乙胺(20.00克，197.65毫摩尔，2.01当量)。将溶液加热到60℃并搅拌18小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)显示反应完全。溶液用水(200毫升)稀释并搅拌30分钟，然后过滤。滤饼用水洗，用真空干燥得到粗产物。粗产物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝50：1至20：1)纯化得到标题化合物(27.00克，87.57毫摩尔，产率：88.87％)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18(d,j＝9.03hz,1h),8.13(d,j＝2.89hz,1h),7.21(dd,j＝9.10,2.95hz,1h),3.69-3.59(m,4h),3.51-3.40(m,4h),1.49(s,9h).
第2步：
4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向4-(6-硝基-3-吡啶)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(28.00克，90.81毫摩尔，1.00当量)的甲醇(600毫升)溶液中加入钯碳(6％，1.7克)。悬浊液抽气并充入氢气几次。溶液在50℃，氢气(50psi)氛围下搅拌18小时。tlc(二氯甲烷：甲醇＝10：1)显示原料反应完全。将悬浊液过滤，滤液旋干得到标题化合物(24.13克，86.69毫摩尔，产率：95.46％)为紫色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(d,j＝2.64hz,1h)7.18(dd,j＝8.78,2.89hz,1h)6.50(d,j＝8.78hz,1h)4.21(brs,2h)3.60-3.54(m,4h)3.00-2.92(m,4h)1.48(s,9h).
第3步：
4-(6-((5-氟-4-(2-甲基-3-(异丙基-1-烯-2-基)-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-2-甲基-3-(异丙基-1-烯-2-基)-2氢-吲唑(中间体a)(200.00毫克,660.65微摩尔，1.00当量)的二氧六环(10.00毫升)溶液中，加入4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(220.67毫克，792.79微摩尔，1.20当量)，pd2(dba)3(60.50毫克，66.07微摩尔，0.10当量)和xantphos(76.45毫克，132.13微摩尔，0.20当量)和碳酸铯(430.51毫克，1.32毫摩尔，2.00当量)。溶液在氮气保护下升温到110℃搅拌16小时。lcms显示反应完全。溶液冷却至25℃，过滤，浓缩得到粗产物。粗产物用制备tlc(乙酸乙酯：石油醚＝1：2)纯化得到标题化合物(320.00毫克，587.57微摩尔，产率：88.94％)为淡黄色固体。lcms(esi)m/z:545.3(m+1).
第4步：
4-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向4-(6-((5-氟-4-(2-甲基-3-(异丙基-1-烯-2-基)-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的甲醇(20.00毫升)溶液中加入钯碳(200.00毫克)和乙酸(2.10克，34.97毫摩尔，59.52当量)。悬浊液抽气并充入氢气几次。溶液在50℃，氢气(32psi)氛围下搅拌96小时。lcms显示反应完全。悬浊液冷却到25℃，过滤，浓缩得到标题化合物(500.00毫克，粗产品)为类白色固体。lcms(esi)m/z：547.1(m+1)。
第5步：
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基(吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
在25℃下，向4-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(500.00毫克，914.68微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(5.00毫升)溶液中一次性加入三氟乙酸(2.09克，18.29毫摩尔，20.00当量)。溶液搅拌0.5小时。lcms显示反应完全。溶液减压浓缩得到粗产物。粗产物通过制备hplc(盐酸)得到标题化合物(99.69毫克，223.26微摩尔，产率：24.41％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.98(s,1h),8.85(d,j＝3.39hz,1h),8.53(d,j＝9.03hz,1h),8.32(dd,j＝9.72,2.20hz,1h),8.01-7.96(m,1h),7.93(d,j＝9.03hz,1h),7.60(d,j＝9.66hz,1h),4.39(s,3h),3.79(dt,j＝13.90,6.92hz,1h),3.65-3.56(m,4h),3.49(d,j＝5.02hz,4h),1.69(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:447.1(m+1).
实施例4
氮-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-(5-哌嗪-1-基-2-吡啶)嘧啶-2-胺(210.00毫克，470.30微摩尔，1.00当量)的甲醇(5.00毫升)溶液中加入乙醛(77.69毫克，705.46微摩尔，1.50当量)，nabh3cn(59.11毫克，940.61微摩尔，2.00当量)和乙酸(14.12毫克，235.15微摩尔，0.50当量)。溶液在20℃下搅拌2小时。lcms显示反应完全。溶液过滤，滤液减压浓缩得到粗产物。粗产物通过制备hplc(盐酸)得到标题化合物(66.50毫克，128.83微摩尔，产率：27.39％，纯度：99％，盐酸盐)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.97(s,1h),8.84(d,j＝3.6hz,1h),8.52(d,j＝9.2hz,1h),8.32(dd,j＝9.7,2.8hz,1h),7.98(d,j＝2.8hz,1h),7.92(d,j＝9.0hz,1h),7.59(d,j＝9.5hz,1h),4.38(s,3h),4.02-3.93(m,2h),3.82-3.74(m,3h),3.38-3.34(m,4h),3.32-3.28(m,2h),1.69(d,j＝7.0hz,6h),1.46(t,j＝7.3hz,3h).lcms(esi)m/z:475.2(m+1).
实施例5
氮-(6-(1,4-高哌嗪-1-基)哒嗪-3-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
第1步：
4-(6-氯哒嗪-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向3,6-二氯哒嗪(2.00克，13.42毫摩尔，1.05当量)，1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.56克，12.78毫摩尔，1.00当量)的二甲亚砜(15.00毫升)溶液中加入一次性加入三乙胺(3.88克，38.34毫摩尔，3.00当量)。溶液加热到80℃并搅拌7小时。lcms显示原料反应完全并检测到产物的ms。溶液冷却到25℃浓缩得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝30：1至20：1)纯化得到标题化合物(1.20克，粗产物)。粗产物为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.18(d,j＝9.4hz,1h),6.79(d,j＝9.4hz,1h),3.87-3.57(m,6h),3.39-3.23(m,2h),1.99-1.93(m,2h),1.40(s,9h).lcms(esi)m/z:313.1(m+1).
第2步：
4-(6-(5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2h-吲唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)哒嗪-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺(中间体b)(200.00毫克，700.97微摩尔，1.00当量)的二氧六环(3.00毫升)溶液中加入4-(6-氯哒嗪-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯，碳酸铯(575.00毫克，1.76毫摩尔，2.52当量)，pd2(dba)3(65.00毫克，70.98微摩尔，0.10当量)和xantphos(85.00毫克，146.90微摩尔，0.21当量)。容器内的空气使用氮气置换三次。混合物加热到100℃搅拌18小时。lcms显示原料反应完全并检测到产物。溶液冷却到20℃，浓缩得到粗产物。粗产物通过制备tlc(乙酸乙酯)纯化得到标题化合物(120.00毫克，213.66微摩尔，产率30.48％)，产物为淡黄色固体。lcms(esi)m/z:562.2(m+1).
第3步：
氮-(6-(1,4-高哌嗪-1-基)哒嗪-3-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
向4-(6-(5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基氨基)哒嗪-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯(120.00毫克，213.66微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(2.00毫升)溶液中逐滴加入三氟乙酸(1.00毫升)。溶液在25℃下搅拌1小时。lcms显示原料反应完全并检测到产物。溶液减压浓缩得到粗产物。粗产物用制备hplc(盐酸)纯化得到标题化合物(45.38毫克，98.32微摩尔，产率：46.02％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.96(s,1h)8.85(d,j＝3.4hz,1h)8.48(d,j＝9.2hz,1h)8.08(d,j＝10.0hz,1h)7.90(d,j＝9.2hz,2h)4.36(s,3h)4.11(t,j＝5.0hz,2h)3.89(t,j＝5.9hz,2h)3.76(quin,j＝7.0hz,1h)3.52(t,j＝5.1hz,2h)3.48-3.36(m,2h)2.28(brs,2h)1.68(d,j＝7.0hz,6h).
实施例6
氮-(6-(3-(二甲基氨基)吡咯-1-基)哒嗪-3-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
第1步：
1-(6-氯哒嗪-3-基)-氮，氮-二甲基吡咯-3-胺
将3,6-二氯哒嗪(1.20克，8.05毫摩尔，1.00当量)，氮，氮-二甲基吡咯-3-胺(1.01克，8.86毫摩尔，1.10当量)和三乙胺(815.06毫克，8.05毫摩尔，1.00当量)的氮，氮二甲基甲酰胺(15.00毫升)溶液加热到80℃并搅拌16小时。lcms显示反应完全并检测到产物ms。溶液冷却到25℃。混合物通过制备hplc纯化得到标题化合物(1.40克，6.18毫摩尔，产率：76.71％)为亮紫色固体。lcms(esi)m/z:227.1(m+1)。第2步：
氮-(6-(3-(二甲基氨基)吡咯-1-基)哒嗪-3-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺(中间体b)(150.00毫克，525.73微摩尔，1.00当量)的二氧六环(3.00毫升)溶液中加入1-(6-氯哒嗪-3-基)-氮，氮-二甲基-吡咯-3-胺(143.03毫克，630.88微摩尔，1.20当量)，碳酸铯(428.23毫克，1.31毫摩尔，2.50当量)，pd2(dba)3(48.14毫克，52.57微摩尔，0.10当量)和xantphos(60.84毫克，105.15微摩尔，0.20当量)。容器使用氮气置换三次。混合物加热到100℃并搅拌18小时。lcms显示部分原料未反应，同时检测到产物。溶液冷却到20℃并用二氯甲烷(10毫升)稀释，然后过滤。滤液浓缩得到粗产物，粗产物通过制备hplc(盐酸)得到标题化合物(15.33毫克，32.24微摩尔，产率：6.13％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.94(s,1h),8.81(d,j＝3.4hz,1h),8.46(d,j＝9.3hz,1h),7.99(brs,1h),7.92-7.78(m,2h),4.35(s,3h),4.26-4.09(m,2h),4.01-3.85(m,2h),3.84-3.64(m,2h),3.02(s,6h),2.66(brs,1h),2.46(dd,j＝7.9,13.1hz,1h),1.67(d,j＝7.0hz,6h).
实施例7
3-[4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]哌嗪-1-基]丙腈
向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-n-(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)嘧啶-2-胺(200.00毫克，447.91微摩尔，1.00当量)的二甲基亚砜(4毫升)溶液中加入碳酸钾(123.81毫克，895.82微摩尔，2.00当量)和3-溴丙腈(120.01毫克，895.82微摩尔，73.63微升，2.00当量)。将混合物在25℃下搅拌16个小时。lcms显示有约50％的原料存在。然后将混合物加热到50℃，在50℃下搅拌2个小时，lcms显示约16％的原料存在。然后向混合物中加入甲醇(3毫升)。混合物继续在50℃下搅拌2个小时。lcms显示反应完全。待混合物冷却到25℃并浓缩除去甲醇，得到粗品。将得到的粗品用水(15毫升)稀释，过滤，将得到的滤饼用甲醇(5毫升)打浆，得到标题化合物(146.40毫克，276.05微摩尔，收率：61.63％，纯度：94.2％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.68(s,1h),8.38-8.31(m,2h),8.07-8.02(m,2h),7.99(s,1h),7.73(d,j＝9.16hz,1h),7.34(dd,j＝9.03,3.01hz,1h),4.19(s,3h),3.57-3.46(m,1h),3.22-3.14(m,4h),2.82-2.75(m,2h),2.74-2.67(m,4h),2.60-2.55(m,2h),1.59(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:500.3(m+1).
实施例8
2-[4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]哌嗪-1-基]乙腈
向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)嘧啶-2-胺(50.00毫克，111.98微摩尔，1.00当量)的二甲基亚砜(3毫升)的溶液中加入碳酸钾(30.95毫克，223.96微摩尔，2.00当量)和溴乙腈(26.86毫克，223.96微摩尔，2.00当量)。将混合物在25℃下搅拌1小时。lcms显示反应完全。将混合物浓缩，然后用水(10毫升)稀释。含水相用乙酸乙酯(10毫升×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(15毫升)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物。将该粗产物通过甲醇(5毫升×2)打浆纯化，得到标题化合物(12.40毫克，24.52微摩尔，收率：21.89％，纯度：96％)。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ9.70(s,1h),8.67(s,1h),8.58(d,j＝3.96hz,1h),8.14-8.00(m,2h),7.92(d,j＝9.23hz,1h),7.66(d,j＝9.23hz,1h),7.43(dd,j＝9.04hz,3.01hz,1h),4.14(s,3h),3.81(s,2h),3.60(td,j＝13.85,6.83hz,1h),3.22-3.11(m,4h),2.69-2.60(m,4h),1.50(d,j＝6.97hz,6h).lcms(esi)m/z:486.3(m+1).
实施例9
氮-[5-[4-(2-胺乙基)哌嗪-1-基]-2-吡啶基]-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
第1步：
2-(4-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙腈
向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)嘧啶-2-胺(17.60克，39.42毫摩尔，1.00当量)和碳酸钾(10.90克，78.84毫摩尔，2.00当量)的二甲基亚砜(176.00毫升)溶液中加入2-溴乙腈(9.46克，78.84毫摩尔，5.26毫升，2.00当量)。将混合物在30℃下搅拌1小时。lc-ms显示该反应完成。将混合物倾入水(30毫升)中并过滤。将得到的滤饼用水(5毫升×2)洗涤，真空干燥，得到标题化合物(16.00克，32.95毫摩尔，83.59％产率)，为黄色固体lcms(esi)m/z:486.3(m+1).
第2步：
氮-[5-[4-(2-胺乙基)哌嗪-1-基]-2-吡啶基]-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
在50psi的氢气压力下，将2-(4-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2h-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)胺基)吡啶-3-基)哌嗪-1-基)乙腈(6.00克，12.36毫摩尔，1.00当量)和镭尼镍(8.47克，98.88毫摩尔，8.00当量)在氨水(10.00毫升)和四氢呋喃(100.00毫升)的混合溶液在50℃下搅拌反应16小时。lc-ms显示该反应完成。将混合物过滤。将得到的滤饼用乙醇(100毫升×3)洗涤。将合并的有机层通过真空浓缩，得到粗产物，将该残余物通过制备的hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(6.50克，10.85毫摩尔，收率：87.80％，纯度：100％，盐酸盐)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.90(s,1h),8.79(d,j＝3.6hz,1h),8.39-8.22(m,2h),7.95(d,j＝2.9hz,1h),7.82(d,j＝9.2hz,1h),7.58(d,j＝9.7hz,1h),4.30(s,3h),3.73(td,j＝14.0,7.1hz,3h),3.68-3.54(m,6h),3.50(br.s.,2h),3.34(br.s.,2h),1.65(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:490.3(m+1).
实施例10
2-[4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]哌嗪-1-基]乙醇
第1步：
2-[4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]哌嗪-1-基]乙醇
向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)嘧啶-2-胺(2.00克，4.48毫摩尔，1.00当量)和2-溴乙醇(1.68克，13.44毫摩尔，954.55微升，3.00当量)的乙醇(30.00毫升)溶液中加入二异丙基乙胺(1.74克，13.44毫摩尔，2.35毫升，3.00当量)。将此混合物加热至80℃并搅拌16小时。lc-ms显示原料几乎消耗完全并且检测到所需化合物的ms。将此混合物冷却至25℃，并过滤。将滤饼用甲醇(10毫升)打浆，将此化合物过滤，将滤饼干燥，得到标题化合物(1.50克，2.97毫摩尔，产率：66.20％，纯度：97％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.74(s,1h),8.44(d,j＝3.9hz,1h),8.23(d,j＝9.0hz,1h),8.07(d,j＝8.9hz,1h),8.01(d,j＝2.6hz,1h),7.65(d,j＝9.2hz,1h),7.49(dd,j＝9.0,2.9hz,1h),4.19(s,3h),3.75(t,j＝6.0hz,2h),3.64(td,j＝14.1,7.0hz,1h),3.26-3.18(m,4h),2.80-2.70(m,4h),2.62(t,j＝6.0hz,2h),1.60(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:491.3(m+1).
实施例11
(4-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-2-基)甲醇
第1步：
哌嗪-2-基甲醇
在0℃下，向四氢铝锂(5.61克，147.74毫摩尔，1.5当量)的四氢呋喃(300毫升)悬浊液中分批加入哌嗪-2-甲酸(20.00克，98.49毫摩尔，1.00当量，2盐酸盐)。将混合物加热至70℃并搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并检测到目标产物。将反应混合物降温至0℃并用水(5毫升)和氢氧化钠水溶液(15％，5毫升)淬灭。混合物过滤，滤饼用二氯甲烷(100毫升)洗涤，滤液用无水硫酸钠干燥后浓缩得到标题化合物(2.4克，20.66毫摩尔，收率：20.98％)为淡黄色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ3.54(dd,j＝4.1,10.7hz,1h),3.40(d,j＝7.2hz,1h),3.02-2.95(m,1h),2.90(dd,j＝11.9,2.6hz,3h),2.81-2.75(m,4h),2.47(dd,j＝11.8,10.3hz,1h),1.41(s,1h)
第2步：
(4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-2-基)甲醇
向哌嗪-2-基甲醇(2.4克，20.66毫摩尔，1.00当量)的二甲亚砜(20.00毫升)中加入5-溴-2-硝基吡啶(4.19，20.66毫摩尔，1.00当量)和三乙胺(4.18克，41.32毫摩尔，2.00当量)。将反应混合物加热至50℃并搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并检测到目标产物。反应液直接用于下一步。lcms(esi)m/z:293.1(m+1)。
第3步：
2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向(4-(6-3-吡啶)哌嗪-2-基)甲醇(4.92克，20.65毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(40.00毫升)溶液中加入三乙胺(6.27克，61.95毫摩尔，3.00当量)和二碳酸二叔丁酯(9.01克，41.3毫摩尔，2.00当量)。将混合物在15℃下搅拌18小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)显示原料转化完全。将反应液用水(100毫升)稀释并在真空下除去二氯甲烷。水相用乙酸乙酯(50毫升×3)萃取。将合并有机相依次用水(50毫升)和饱和盐水(30毫升)洗涤，经过无水硫酸钠干燥并浓缩得到残余物。将该残余物通过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1到3：1)纯化得到标题化合物(1.5克，3.42毫摩尔，收率：16.57％)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18(d,j＝9.03hz,1h)8.11(d,j＝3.01hz,1h)7.20(dd,j＝9.16,3.14hz,1h)4.46(br.s.,1h)4.12-4.25(m,2h)4.02(br.s.,1h)3.93(d,j＝13.30hz,1h)3.70-3.80(m,1h)3.28-3.43(m,2h)3.14-3.25(m,1h)1.50(s,9h)1.46(s,9h)
第4步：
4-(6-氨基-3-吡啶基)-2-(叔丁氧羰基氧甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(500毫克，1.14毫摩尔，1.00当量)的甲醇(30.00毫升)溶液中加入湿钯碳(200.00毫克)。将反应瓶用氩气和氢气置换3次。在氢气(15psi)压力下，将混合物在15℃下搅拌18小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)显示原料转化完全。将反应混合物过滤，滤饼用甲醇(10毫升)洗涤。将滤液浓缩得到的残余物经过制备的tlc(乙酸乙酯)纯化得到标题化合物(200.00毫克，489.61微摩尔，收率：42.95％)为棕色固体。lcms(esi)m/z:409.2(m+1).
第5步：
2-(((叔丁氧羰基)氧)甲基)-4-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡
啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向4-(6-氨基-3-吡啶基)-2-(叔丁氧羰基氧甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(200.00毫克，489.61微摩尔，1.00当量)的二氧六环(5毫升)溶液中加入5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-吲唑(中间体c)(150.70毫克，494.51微摩尔，1.01当量)，碳酸铯(319.05毫克，979.22微摩尔，2.00当量)，pd2(dba)3(44.83毫克，48.96微摩尔，0.10当量)和xantphos(56.66毫克，97.92微摩尔，0.20当量)。将反应瓶用氮气置换3次。将混合物加热至100℃并搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并检测到目标产物。将反应液冷却到15℃并过滤，滤饼用乙酸乙酯(5毫升)洗涤。滤液浓缩得到的残余物用制备级tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)纯化得到标题化合物(104.00毫克，153.67微摩尔，收率：31.39％)为棕色固体。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.69(s,1h),8.37(d,j＝4.0hz,1h),8.07-7.98(m,2h),7.73(d,j＝9.2hz,1h),7.35(dd,j＝2.9,9.1hz,1h),4.49(br.s.,1h),4.46-4.25(m,2h),4.19(s,3h),4.03(br.s.,1h),3.57-3.50(m,2h),3.39(d,j＝11.5hz,1h),3.23(t,j＝9.6hz,1h),2.94-2.69(m,2h),1.60(d,j＝7.0hz,6h),1.50(s,9h),1.50(s,9h)
第6步：
(4-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-2-基)甲醇
向2-(((叔丁氧羰基)氧)甲基)-4-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100毫克，147.76微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(2.00毫升)中加入三氟乙酸(1.00毫升)。将混合物在15℃下搅拌1小时。lcms显示原料转化完全并且检测到目标产物。将反应液浓缩得到的残余物经过制备的hplc(盐酸)纯化得到目标化合物(43.08毫克，78.41微摩尔，收率：53.07％，盐酸盐)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.92(s,1h),8.80(d,j＝3.5hz,1h),8.41(d,j＝9.2hz,1h),8.30(dd,j＝2.5,9.7hz,1h),7.96(d,j＝2.5hz,1h),7.85(d,j＝9.0hz,1h),7.57(d,j＝9.5hz,1h),4.33(s,3h),3.96-3.84(m,3h),3.84-3.69(m,2h),3.57(d,j＝12.9hz,2h),3.39(dt,j＝3.0,12.1hz,1h),3.28-3.09(m,2h),1.65(d,j＝7.0hz,6h)lcms(esi)m/z:477.2(m+1)
实施例12
氮-[5-[3-(乙氨基)吡咯烷-1-基]-2-吡啶基]-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
第1步：
(3s)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向(3s)-吡咯烷-3-醇(3.50克，28.32毫摩尔，1.00当量，盐酸盐)的二氯甲烷(30.00毫升)溶液中加入三乙胺(11.46克，113.28毫摩尔，4.00当量)和二碳酸二叔丁酯(8.04克,36.82毫摩尔，1.30当量)。将混合物在20℃下搅拌18个小时。tlc显示反应完全。将混合物用水(10毫升)稀释，然后加入柠檬酸水溶液(10％，20毫升)。水相用二氯甲烷(10毫升×2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤(20毫升×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(4.00克，粗品)为黄色油状。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ4.42-4.32(m,1h),3.49-3.35(m,3h),3.31-3.19(m,1h),2.08-1.82(m,2h),1.51-1.42(m,9h)。
第2步:
3-羰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下，向(3s)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500.00毫克，2.67毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(10.00毫升)溶液中分次加入戴斯马丁试剂(1.70克，4.01毫摩尔，1.50当量)。待混合物升温至20℃，将混合物在20℃下搅拌18个小时。tlc显示反应完全。将反应液用10毫升30％的亚硫酸钠溶液淬灭，再加入碳酸氢钠(5毫升)溶液。含水相用二氯甲烷(5毫升×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(15毫升×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(453.00毫克，粗品)为黄色油状。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ3.85-3.65(m,4h),2.66-2.52(m,2h),1.51-1.44(m,9h)。
第3步:
3-[苄基(乙基)氨基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下，向3-羰基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(353.00毫克，1.91毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(8.00毫升)溶液中加入苄基乙胺(309.90毫克，2.29毫摩尔，1.20当量)和醋酸(1.15毫克，19.10微摩尔，0.01当量)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。然后再加入氰基硼氢化钠(647.69毫克，3.06毫摩尔，1.60当量)。将混合物在25℃下搅拌3小时。lcms显示反应完全。将混合物用水(10毫升)淬灭。水相用二氯甲烷(10毫升×2)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(10毫升×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产品。将该粗产品通过硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20：1至10：1)纯化，得到标题化合物(211.00毫克，693.10微摩尔，收率：36.29％)为无色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.38-7.28(m,4h),7.25(d,j＝6.27hz,1h),3.71-3.06(m,7h),2.59(q,j＝7.15hz,2h),2.06-1.98(m,1h),1.90-1.77(m,1h),1.46(s,9h),1.04-0.97(m,3h).lcms(esi)m/z:305.3(m+1)。
第4步：
氮-苄基-氮-乙基-吡咯烷-3-胺
向3-[苄基(乙基)氨基]吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.00克，6.57毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(12毫升)溶液中加入三氟乙酸(4.59克，40.27毫摩尔，6.13当量)。将混合物在20℃下搅拌30分钟。tlc显示反应完全。将反应液浓缩，得到标题化合物(2.00克，粗品，三氟乙酸盐)为黄色油状物。lcms(esi)m/z:205.3(m+1)。
第5步：
氮-苄基-氮-乙基-1-(6-硝基-3-吡啶基)吡咯烷-3-胺
向氮-苄基-氮-乙基-吡咯烷-3-胺(2.00克，4.63毫摩尔，1.00当量，三氟乙酸盐)的二甲基亚砜(10.00毫升)溶液中加入三乙胺(2.74克，27.06毫摩尔，5.85当量)和5-溴-2-硝基吡啶(1.13克，5.55毫摩尔，1.20当量)。将混合物在90℃下搅拌18个小时。lcms显示反应完全。将混合物用水(20毫升)稀释，水相用乙酸乙酯(15毫升×4)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(20毫升×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗产品。将该粗产品通过硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10：1至3：1)纯化，得到标题化合物(700.00毫克，粗品)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.16(d,j＝9.04hz,1h),7.77(d,j＝3.01hz,1h),7.41-7.28(m,4h),6.81(dd,j＝9.14,2.92hz,1h),3.85-3.25(m,8h),2.68(q,j＝7.03hz,2h),2.36-1.97(m,2h),1.09(t,j＝7.06hz,3h).lcms(esi)m/z:327.2(m+1)。
第6步：
5-[3-[苄基(乙基)氨基]吡咯烷-1-基]吡啶-2-胺
向氮-苄基-氮-乙基-1-(6-硝基-3-吡啶基)吡咯烷-3-胺(450.00毫克，1.38毫摩尔，1.00当量)的乙醇(10毫升)溶液中加入锌粉(360.62毫克，5.52毫摩尔，4.00当量)和氯化铵(737.48毫克，13.80毫摩尔，10.00当量)。将混合物加热到70℃搅拌3小时。lcms显示反应完全。待混合物冷却到25℃时，过滤，滤液浓缩，得到标题化合物(216.00毫克，粗品)为紫色固体。lcms(esi)m/z:297.2(m+1).
第7步：
氮-[5-[3-[苄基(乙基)氨基]吡咯烷-1-基]-2-吡啶基]-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
在氮气保护下，向5-[3-[苄基(乙基)氨基]吡咯烷-1-基]吡啶-2-胺(129.00毫克，435.21微摩尔，1.00当量)的二氧六环(4.00毫升)溶液中加入5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-吲唑(中间体c)(159.16毫克，522.25微摩尔，1.20当量)，pd2(dba)3(39.85毫克，43.52微摩尔，0.10当量)，xantphos(50.36毫克，87.04微摩尔，0.20当量)和碳酸铯(354.50毫克，1.09毫摩尔，2.50当量)。将混合物在110℃下搅拌18个小时。lcms显示反应完全。将混合物冷却到25℃，然后浓缩得到粗产物。将该粗产物通过制备的tlc(乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(145.00毫克，粗品)为黄色固体。lcms(esi)m/z:565.3(m+1)。
第8步：
氮-[5-[3-(乙氨基)吡咯烷-1-基]-2-吡啶基]-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
向氮-[5-[3-[苄基(乙基)氨基]吡咯烷-1-基]-2-吡啶基]-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺(181.00毫克，320.52微摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(5毫升)的溶液中加入湿钯碳(400.00毫克)和甲酸胺(2.02克，32.05毫摩尔，100.00当量)。将混合物在60℃下搅拌16个小时。lcms显示反应完全。待混合物冷却到25℃，然后过滤。将滤液浓缩得到粗产物，并将该粗产物通过制备的hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(34.64毫克，59.47微摩尔，收率：18.56％，纯度：94％，盐酸盐)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.89(s,1h),8.75(d,j＝3.64hz,1h),8.35(d,j＝9.29hz,1h),7.92(dd,j＝9.60,2.95hz,1h),7.81(d,j＝9.16hz,1h),7.64(d,j＝2.89hz,1h),7.53(d,j＝9.54hz,1h),4.30(s,3h),4.18-4.02(m,1h),3.61-3.85(m,4h),3.54-3.41(m,1h),3.23(q,j＝7.24hz,2h),2.69-2.52(m,1h),2.44-2.27(m,1h),1.65(d,j＝7.03hz,6h),1.40(t,j＝7.28hz,3h).lcms(esi)m/z:475.3(m+1).
实施例13
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-[5-(4-吡啶基)-2-吡啶基]嘧啶-2-胺
第1步：
4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-吲唑(1.00克，3.28毫摩尔，1.00当量)的二氧六环(10毫升)溶液中加入4-(6-氨基-3-吡啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.09克，3.94毫摩尔，1.20当量)，pd2(dba)3(150.18毫克，164.00微摩尔，0.05当量)，xantphos(189.79毫克，328.00微摩尔，0.10当量)和碳酸铯(2.14克，6.56微摩尔，2.00当量)。将混合物在110℃下搅拌16个小时。lcms显示反应完全。将混合物浓缩，得到粗品。将粗产物用二氯甲烷(10毫升)稀释，过滤。滤液浓缩得到粗品。将该粗品用甲醇(10毫升)打浆纯化,得到标题化合物(1.11克,粗品)。lcms(esi)m/z:546.2(m+1).
第2步:
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-n-[5-(4-吡啶基)-2-吡啶基]嘧啶-2-胺
向4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.08克，1.98毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(12毫升)的溶液中加入三氟乙酸(5.36克，46.97毫摩尔，3.48毫升，23.72当量)。将混合物在25℃下搅拌1个小时。lcms显示反应完全。将混合物浓缩，得到粗品。取0.7克粗品，通过制备hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(183.40毫克，350.38微摩尔，收率：17.70％,纯度：99.05％)为黄色固体。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.93(s,1h),8.83(d,j＝3.51hz,1h),8.32-8.45(m,3h),7.85(d,j＝9.03hz,1h),7.62(d,j＝9.16hz,1h),4.33(s,3h),3.74(d,j＝6.99hz,1h),3.57(d,j＝12.67hz,2h),3.10-3.27(m,3h),2.20(d,j＝13.68hz,2h),1.96-2.10(m,2h),1.66(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:446.2(m+1).
实施例14
3-[4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]-1-吡啶基]丙腈
向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-[5-(4-哌啶基)-2-吡啶基]嘧啶-2-胺(1.25克，1.86毫摩尔，1.00当量，三氟乙酸盐)的甲醇(10毫升)溶液中加入三乙胺(1.10克,10.82毫摩尔，1.50毫升，5.82当量)。将混合物在25℃下搅拌30分钟，然后加入碳酸钾(514.14毫克，3.72毫摩尔，2.00当量)和3-溴丙腈(498.37毫克，3.72毫摩尔，305.75微升，2.00当量)。将混合物在25℃下搅拌16个小时。lcms显示反应完全。将混合物浓缩，用水(15毫升)稀释，然后过滤，得到滤饼。将滤饼用甲醇(8毫升)打浆，得到标题化合物(217.00毫克,412.59微摩尔，收率：22.18％，纯度：94.8％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.70(s,1h),8.42-8.36(m,2h),8.19(d,j＝2.13hz,1h),8.02-8.09(m,2h),7.74(d,j＝9.16hz,1h),7.58(dd,j＝8.66hz,2.38hz,,1h),4.19(s,3h),3.59-3.45(m,1h),3.04(d,j＝11.29hz,2h),2.91-2.73(m,2h),2.60-2.47(m,3h),2.23(dt,j＝11.48hz,2.51hz,2h),1.93-1.72(m,4h),1.59(s,6h).lcms(esi)m/z:499.3(m+1).
实施例15
氮-(5-((1s,4s)-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2h-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
第1步:
5-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-(1s,4s)-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，将5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-吲唑(中间体c)(376.67毫克，1.24毫摩尔，1.20当量)，5-(6-氨基-3-吡啶基)-(1s,4s)-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(300.00毫克，1.03毫摩尔，1.00当量)，碳酸铯(671.19毫克，2.06毫摩尔，2.00当量)，pd(oac)2(46.25毫克，206.00微摩尔，0.20当量)和xphos(196.41毫克，412.00微摩尔，0.40当量)的二氧六环(10.00毫升)溶液用氮气置换3次，并将此混合物在100℃下搅拌16小时。lcms显示反应完成。将此混合物通过减压浓缩的到残余物，并将该残余物通过制备的tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1：2)纯化，得到标题化合物(350.00毫克，粗品)，为黄色固体。lcms(esi)m/z:559.3(m+1).
第2步：
氮-(5-((1s,4s)-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
在0℃下，在15分钟内，向5-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-(1s,4s)-2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(365.00毫克，653.36微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(8.00毫升)溶液中滴加三氟乙酸(4.00毫升)，并将此反应液在15℃下反应80分钟。lcms显示反应完成。将此混合物通过减压浓缩的到残余物，并将该残余物通过制备的hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(110.00毫克，239.90微摩尔，收率：36.72％，纯度：100％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.92(s,1h),8.78(d,j＝3.51hz,1h),8.43(d,j＝9.29hz,1h),7.98(dd,j＝9.66,2.89hz,1h),7.88-7.83(m,1h),7.72(d,j＝2.89hz,1h),7.54(d,j＝9.54hz,1h),4.83(s,1h),4.62(s,1h),4.34(s,3h),3.80(dd,j＝10.60,2.32hz,1h),3.77-3.70(m,1h),3.55(d,j＝10.54hz,1h),3.50-3.41(m,2h),2.36(d,j＝11.29hz,1h),2.17(d,j＝11.42hz,1h),1.66(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:459.3(m+1).
实施例16
氮-(5-(1,7-二氮螺环[4.4]壬烷-7-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
第1步：
(s)-1-苯甲酰脯氨酸甲酯
向l-脯氨酸甲酯盐酸盐(20.00克，120.76毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(300.00毫升)溶液中加入三乙胺(36.66克，362.28毫摩尔，3.00当量)和苯甲酰氯(16.98克，120.76毫摩尔，1.00当量)。将反应混合物在15℃下搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并检测到目标产物。将反应液浓缩得到的残余物用乙酸乙酯(200毫升)稀释并依次用水(100毫升)，柠檬酸水溶液(2.5％，100毫升)和饱和碳酸氢钠(100毫升)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩得到标题化合物(24.00克，102.89毫摩尔，收率：85.20％)为白色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.63-7.52(m,2h),7.45-7.38(m,3h),4.68(dd,j＝5.2,8.2hz,1h),3.82-3.75(m,3h),3.66(td,j＝7.0,10.2hz,1h),3.57-3.53(m,1h),2.40-2.17(m,1h),2.07-1.98(m,2h),1.95-1.82(m,1h)
第2步：
1-苯甲酰基-2-(腈甲基)吡咯烷-2-甲酸甲酯
在-78℃下，向(s)1-苯甲酰基吡咯烷-2-甲酸甲酯(10.00克，42.87毫摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(150.00毫升)溶液中滴加二异丙基胺锂的四氢呋喃(2摩尔每升，25.72毫升，1.20当量)溶液，并将此混合物搅拌1小时。然后向此混合物中滴加2-溴乙腈(6.17克，51.44毫摩尔，1.20当量)的四氢呋喃(30.00毫升)溶液。将此混合物在15℃下搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并且检测到目标产物。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(100毫升)淬灭并分液，水相用乙酸乙酯(100毫升)萃取。将合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩得到标题化合物(12.00克，粗品)为棕色的油状物。此粗品直接用于下一步。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.60-7.54(m,2h),7.50-7.40(m,3h),3.81(s,3h),3.80-3.77(m,1h),3.77-3.73(m,1h),3.71-3.64(m,1h),3.15(d,j＝17.2hz,1h),2.44-2.27(m,2h),2.17-2.05(m,2h)
第3步：
1-苯甲酰基-1,7-二氮杂螺[4,4]壬烷-6-酮
向1-苯甲酰基-2-(腈甲基)吡咯烷-2-甲酸甲酯(5.00克，18.36毫摩尔，1.00当量)和氨水(5.00毫升)的甲醇(100.00毫升)溶液中加入雷尼镍(5.00克)。反应瓶依次用氩气和氢气置换3次。在氢气55psi压力下将混合物加热至70℃并搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并且检测到目标产物。将反应混合物冷却到25℃并过滤。滤液浓缩得到的残余物经过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝3：1到二氯甲烷：甲醇＝30：1)纯化，得到标题化合物(2.25克，收率：50.17％)为浅棕色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.62-7.50(m,2h),7.45-7.35(m,3h),5.84(br.s.,1h),3.71-3.53(m,3h),3.42-3.34(m,1h),2.95(ddd,j＝12.8,9.7,6.8hz,1h),2.34(td,j＝6.7,12.5hz,1h),2.20-1.96(m,3h),1.94-1.82(m,1h)
第4步：
1-苄基-1,7-二氮杂螺[4,4]壬烷
在0℃下，向四氢铝锂(7.13克，187.99毫摩尔，5.60当量)的四氢呋喃(300.00毫升)悬浊液中分批加入1-苯甲酰基-1,7-二氮杂螺[4,4]壬烷-6-酮(8.2克，33.57毫摩尔，1.00当量)。加料完毕后将混合物加热至70℃并搅拌2小时。lcms显示原料转化完全并且检测到目标产物。将反应混合物冷却到15℃并用水(7毫升)淬灭，再加入氢氧化钠水溶液(15％，7毫升)和水(21毫升)。将混合物过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，浓缩得到的残余物经过硅胶柱(二氯甲烷：甲醇＝30：1到10：1)得到标题化合物(3.67克，16.97毫摩尔，收率：50.54％)为淡黄色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36-7.28(m,4h),7.26-7.20(m,1h),3.69(d,j＝13.2hz,1h),3.59(d,j＝13.2hz,1h),3.13-3.04(m,2h),2.99(td,j＝10.8,7.7hz,1h),2.77(d,j＝11.2hz,1h),2.70-2.62(m,1h),2.59-2.51(m,1h),2.01(td,j＝12.9,8.1hz,2h),1.92-1.85(m,2h),1.80-1.71(m,2h),1.59(ddd,j＝12.6,7.6,4.6hz,1h)
第5步：
1-苄基-7-(6-硝基吡啶-3-基)-1,7-二氮杂螺[4,4]壬烷
向1-苄基-1，7-二氮杂螺[4,4]壬烷(1.80克，8.32毫摩尔，1.00当量)和5-溴-2-硝基吡(1.81克，8.90毫摩尔，1.07当量)的氮，氮-二甲基甲酰胺(20.00毫升)溶液中加入三乙胺(1.80克，17.80毫摩尔，2.14当量)。将此混合物加热至100℃并搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并且检测到目标产物。将反应混合物冷却至15℃并用乙酸乙酯(40毫升)稀释，然后用水(50毫升×2)洗涤两次。水相用乙酸乙酯(20毫升)萃取。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，并浓缩得到的残余物经过硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝10：1到1：1)纯化得到标题化合物(1.65克，4.88毫摩尔，收率：58.60％)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18(d,j＝9.0hz,1h),7.83(d,j＝2.9hz,1h),7.37-7.29(m,5h),7.27-7.22(m,1h),6.86(dd,j＝9.1,2.9hz,1h),3.78-3.70(m,1h),3.70-3.61(m,2h),3.57-3.45(m,2h),3.27(d,j＝10.3hz,1h),2.83-2.74(m,1h),2.69(td,j＝7.4,9.3hz,1h),2.35(td,j＝12.5,9.0hz,1h),1.98-1.82(m,5h)
第6步：
5-(1-苄基-1,7-二氮杂螺[4,4]壬烷-7-基)吡啶-2-胺
向1-苄基-7-(6-硝基-3-吡啶基)-1,7-二氮杂螺[4，4]壬烷(2.60克，7.68毫摩尔，1.00当量)的乙醇(40.00毫升)溶液中加入锌粉(2.01克，30.73毫摩尔，4.00当量)和氯化铵(4.11克，76.83毫摩尔，10.00当量)。将此混合物加热至80℃并搅拌3小时。lcms显示原料转化完全并检测到目标产物。将反应混合物冷却到15℃并用乙醇(30毫升)稀释，然后过滤。滤饼用乙醇(30毫升)洗涤。将滤液浓缩得到的粗品经过制备级hplc(碱性)纯化得到标题化合物(560.00毫克，1.72毫摩尔，收率：22.34％，纯度：94.5％)为红色的油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.52(d,j＝2.8hz,1h),7.36-7.28(m,4h),7.21-7.14(m,1h),6.86(dd,j＝8.8,3.0hz,1h),6.51(d,j＝8.7hz,1h),3.98(br.s.,2h),3.74(d,j＝13.3hz,1h),3.63(d,j＝13.2hz,1h),3.47-3.38(m,2h),3.24(q,j＝8.6hz,1h),3.04(d,j＝9.4hz,1h),2.77-2.59(m,2h),2.37(s,1h),2.27(td,j＝12.5,8.6hz,1h),2.02-1.75(m,6h)
第7步：
氮-(5-(1-苄基-1,7-二氮杂螺[4,4]壬烷-7-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
在氮气保护下，向5-(1-苄基-1,7-二氮杂螺[4,4]壬烷-7-基)吡啶-2-胺(370毫克，1.20毫摩尔，1.00当量)和5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2甲基-吲唑(438.84毫克，1.44毫摩尔，1.20当量)的四氢呋喃(20.00毫升)溶液中加入叔丁醇钾(403.84毫克，3.60毫摩尔，3.00当量)和[2-(2-胺乙基)苯基]-氯化钯；2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯络合物(88.63毫克，120.00毫摩尔，0.10当量)。将此混合物加热至80℃并搅拌18小时。lcms显示有9.9％原料剩余并检测到33.6％的目标产物。将反应混合物冷却到15℃并用水(20毫升)和乙酸乙酯(20毫升)稀释，过滤。滤液分液后水相用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取二次。合并的有机相用饱和盐水(10毫升)洗涤，然后浓缩。得到的残余物通过制备级tlc(乙酸乙酯：甲醇＝10:1)纯化得到标题化合物(220.00毫克，381.47微摩尔，收率：31.79％)为棕色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.69(s,1h),8.34(d,j＝4.0hz,1h),8.22(br.s.,1h),8.06(d,j＝9.3hz,1h),7.89(br.s.,1h),7.78-7.69(m,2h),7.40-7.29(m,4h),7.27-7.22(m,1h),7.00(dd,j＝2.9,9.0hz,1h),4.17(s,3h),3.74(br.s.,1h),3.70-3.59(m,1h),3.56-3.49(m,3h),3.33(q,j＝8.4hz,1h),3.13(d,j＝9.2hz,1h),2.75(br.s.,1h),2.69(br.s.,1h),2.31(br.s.,1h),1.95-1.84(m,5h),1.60(d,j＝7.0hz,6h)
第8步：
氮-(5-(1,7-二氮螺环[4.4]壬烷-7-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
在80℃下，氮-(5-(1-苄基-1,7-二氮螺环[4.4]壬烷-7-基)-2-吡啶基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2h-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺(220.00毫克，381.47微摩尔，1.00当量)，甲酸铵(481.12毫克，7.63毫摩尔，20.00当量)和湿的pd/c(220.00毫克)在四氢呋喃(22.00毫升)和甲醇(22.00毫升)的混合物中搅拌16小时。lc-ms显示反应完成。将混合物过滤并将滤液真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(30.00毫克，80.56微摩尔，产率：21.12％，纯度：98％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.92(s,1h),8.78(d,j＝3.5hz,1h),8.41(d,j＝9.2hz,1h),8.00-7.81(m,2h),7.66(d,j＝2.5hz,1h),7.55(d,j＝9.5hz,1h),4.34(s,3h),3.93(d,j＝10.9hz,1h),3.80-3.67(m,2h),3.65-3.47(m,4h),2.64-2.54(m,1h),2.53-2.43(m,1h),2.35-2.18(m,4h),1.67(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:487.4(m+1).
实施例17
5-氟-氮-(5-(六氢吡咯[3,4-b][1,4]嗪-6(2氢)-基)吡啶-2-基)-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
第1步：
3-溴-4-(2-羟乙氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向2,5-二氢吡咯-1-甲酸叔丁酯(8.00克，47.28毫摩尔，1.00当量)的乙二醇(30.00毫升)溶液中分批加入氮-溴代丁二酰亚胺(9.26克，52.01毫摩尔，1.10当量)。将此混合物在15℃下搅拌16小时。lc-ms和tlc显示反应完全。水(100毫升)加入到混合物中。将所得混合物在15℃下搅拌0.5小时，并用乙酸乙酯(100毫升×3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到标题化合物(14.00克，粗品)为白色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ4.31(br.s.,1h),4.17(d,j＝5.5hz,1h),3.98-3.92(m,1h),3.87-3.82(m,1h),3.77-3.72(m,2h),3.71-3.58(m,2h),3.57-3.39(m,1h),2.06-2.01(m,1h),1.49(d,j＝6.7hz,9h).lcms(esi)m/z:264.0(m+1-56).
第2步：
3-溴-4-(2-(对甲苯磺酰氧基)乙氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下，向3-溴-4-(2-羟乙氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(14.00克，45.14毫摩尔，1.00当量)，三乙胺(6.85克，67.71毫摩尔，1.50当量)和4-二甲氨基吡啶(551.48毫克，4.51毫摩尔，0.10当量)在甲苯(100.00毫升)的溶液中加入对甲苯磺酰氯(11.19克，58.68毫摩尔，1.30当量)。混合物在10℃下搅拌16小时lc-ms和tlc显示反应完全。将混合物用水(100毫升)稀释，水层用乙酸乙酯(100毫升)萃取。将合并的有机层，用饱和氯化钠水溶液(30毫升×2)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗产物，其经柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4：1)，得到标题化合物(11.10克，23.90毫摩尔，产率：52.95％)为白色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.81(d,j＝8.3hz,2h),7.38(d,j＝8.0hz,2h),4.19-4.11(m,3h),4.10-4.02(m,1h),3.90-3.66(m,5h),3.45-3.29(m,1h),2.48(s,3h),1.49(s,9h).lcms(esi)m/z:408.0(m+1-56).
第3步：
4-苄基六氢吡咯[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2氢)-甲酸叔丁酯
在140℃下，将3-溴-4-(2-(对甲苯磺酰氧基)乙氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(11.10克，23.90毫摩尔，1.00当量)和苄胺(7.68克，71.70毫摩尔，3.00当量)的二甲苯(150.00毫升)搅拌16小时。tlc和lc-ms显示反应完成。将混合物通过真空浓缩，得到残余物，将其用乙酸乙酯(100毫升)和水(100毫升)稀释。将水层以乙酸乙酯(100毫升×2)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗产物，其经柱纯化(pe：ea＝20：1至4：1)，得到标题化合物(5.80克，14.21毫摩尔，产率：59.45％，纯度：78％)为黄色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.81(d,j＝8.3hz,2h),7.38(d,j＝8.0hz,2h),4.19-4.11(m,3h),4.10-4.02(m,1h),3.90-3.66(m,5h),3.45-3.29(m,1h),2.48(s,3h),1.49(s,9h).lcms(esi)m/z:319.1(m+1).
第4步：
4-苄基六氢吡咯[3,4-b][1,4]噁嗪
在0℃下，向4-苄基六氢吡咯[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2氢)-甲酸叔丁酯(2.90克，9.11毫摩尔，1.00当量)在乙酸乙酯(30.00毫升)溶液中加入盐酸/乙酸乙酯(30.00毫升)。混合物在10℃下搅拌16小时。lc-ms显示该反应完成。将混合物真空浓缩，得到标题化合物(2.60克，8.93毫摩尔，产率：98.00％，盐酸盐)为白色固体。lcms(esi)m/z:219.3(m+1).
第5步：
4-苄基-6-(6-硝基吡啶-3-基)八氢吡咯[3,4-b][1,4]噁嗪
在80℃下，将4-苄基六氢吡咯[3,4-b][1,4]噁嗪(2.60克，8.93毫摩尔，1.00当量，2hcl)，5-溴-2-硝基-吡啶(1.81克，8.93毫摩尔，1.00当量)和三乙胺(3.61克，35.72毫摩尔，4.00当量)的氮,氮-二甲基甲酰胺(30.00毫升)的混合物搅拌16小时。lc-ms显示反应完成。将混合物用乙酸乙酯(40毫升)和水(120毫升)稀释，并用乙酸乙酯(40毫升×3)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗产物，其经柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3：1至1：1)，得到标题化合物(2.00克，5.88毫摩尔，产率：65.80％)为黄色固体。lcms(esi)m/z:341.1(m+1).
第6步：
5-(4-苄基六氢吡咯[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2氢)-基)吡啶-2-胺
在80℃下，将4-苄基-6-(6-硝基吡啶-3-基)八氢吡咯[3,4-b][1,4]噁嗪(2.00克，5.88毫摩尔，1.00当量)，铁粉(1.64克，29.40毫摩尔，5.00当量)和氯化铵(3.15克，58.80毫摩尔，10.00当量)的乙醇(50.00毫升)和水(10.00毫升)的混合物搅拌16小时。lc-ms显示反应完成。将混合物过滤并将滤液真空浓缩，得到粗产物，其通过制备型hplc(三氟乙酸)纯化，得到标题化合物(1.00克，3.13毫摩尔，产率：53.15％，纯度：97％)，为棕色油状物。lcms(esi)m/z:311.2(m+1).
第7步：
氮-(5-(4-苄基六氢吡咯[3,4-b][1,4]嗪-6(2氢)-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
在氮气保护下，将5-(4-苄基-2,3,4a，5,7,7a六氢吡咯[3,4-b][1,4]嗪-6-基)吡啶-2-胺(300.00毫克，966.53微摩尔，1.00当量)，5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基吲唑(中间体c)(294.55毫克，966.53微摩尔，1.00当量)，[2-(2-氨基乙基)苯基]-氯钯；二环己基-[2-(2,4,6-三异丙基)苯基]磷(71.40毫克，96.65微摩尔，0.10当量)和叔丁醇钾(325.36毫克，2.90毫摩尔，3.00当量)的四氢呋喃(30.00毫升)溶液在80℃下搅拌16小时。lc-ms显示反应完成。向该混合物中依次加入(30毫升)和乙酸乙酯(30毫升)，并在20℃下搅拌15分钟，然后过滤，分液。水层用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备的tlc板(二氯甲烷：甲醇＝10：1)纯化，得到标题化合物(190.00毫克，265.95微摩尔，收率：27.52％，纯度：81％)，产为黄色固体。lcms(esi)m/z:579.4(m+1).
第8步：
5-氟-氮-(5-(六氢吡咯[3,4-b][1,4]嗪-6(2氢)-基)吡啶-2-基)-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
将氮-(5-(4-苄基六氢吡咯[3,4-b][1,4]嗪-6(2氢)-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺(160.00毫克，276.49微摩尔，1.00当量)，甲酸铵(348.38毫克，5.53毫摩尔，20.00当量)和湿的pd/c(15.00毫克)的四氢呋喃(16.00毫升)和甲醇(16.00毫升)的混合溶液在80度下搅拌16小时。lc-ms显示所需产物生成。将混合物过滤并将滤液真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备型hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(20.00毫克，40.94微摩尔，产率：14.81％，纯度：100％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.89(s,1h),8.75(d,j＝3.6hz,1h),8.33(d,j＝9.0hz,1h),7.90(d,j＝7.7hz,1h),7.81(d,j＝9.0hz,1h),7.62(s,1h),7.54(d,j＝9.4hz,1h),4.59(br.s.,1h),4.30(s,3h),4.19(br.s.,1h),4.11(d,j＝11.9hz,1h),3.97-3.79(m,3h),3.79-3.67(m,2h),3.58(d,j＝11.0hz,1h),3.51(br.s.,1h),3.28(d,j＝13.1hz,1h),1.65(d,j＝6.9hz,6h).lcms(esi)m/z:489.4(m+1).
实施例18
1-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2h-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-2-酮
第1步：
氮-(5-溴-2-吡啶基)-氮-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯-
在0℃下，向5-溴吡啶-2-胺(2.00克，11.56毫摩尔，1.00当量)，n，n-二异丙基乙胺(4.48克，34.68毫摩尔，6.05毫升，3.00当量)和二甲基氨基吡啶(282.46毫克，2.31毫摩尔，0.20当量)的二氯甲烷(30.00毫升)溶液中加入碳酸二叔丁酯(7.57克，34.68毫摩尔，7.97毫升，3.00当量)。将反应混合物在30℃下搅拌16小时。lc-ms和tlc显示反应完成。将混合物真空浓缩，得到粗产物。将其通过柱分离(乙酸乙酯：石油醚＝50：1)纯化得到标题化合物(2.00克，5.36毫摩尔，收率：46.35％)为白色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.55(d,j＝2.3hz,1h),7.86(dd,j＝2.5,8.4hz,1h),7.20(d,j＝8.5hz,1h),1.47(s,18h).lcms(esi)m/z:373.1(m+1)。
第2步：
3-氧代哌嗪-1-甲酸苄酯
在0℃下，向碳酸钠(24.77克，233.73毫摩尔，3.00当量)，哌嗪-2-酮(7.80克，77.91毫摩尔，1.00当量)的乙酸乙酯(70.00毫升)和水(70.00毫升)的混合物溶液中加入氯甲酸苄酯(16.79克，93.49毫摩尔，13.99毫升，95％纯度，1.20当量)。将反应混合物在30℃下搅拌16小时。tlc显示反应完全。将混合物用乙酸乙酯(80毫升×3)萃取。合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(80毫升×3)洗涤，经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗产物，将该粗产物用(石油醚：乙酸乙酯＝20：1，80毫升)打浆。将所得混合物在30℃下搅拌15分钟并过滤。将固体真空干燥，得到标题化合物(15.50克，66.17毫摩尔，产率：84.93％)，为白色固体。
第3步：
苄基-4-[6-[二(叔丁氧基羰基)氨基]-3-吡啶基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，将3-氧代哌嗪-1-甲酸苄酯(4.00克，17.08毫摩尔，1.00当量)，叔丁基-氮-(5-溴-2-吡啶基)-氮-叔丁氧羰基氨基甲酸叔丁酯(6.37克，17.08毫摩尔，1.00当量)，氮，氮-二甲基乙烷-1,2-二胺(602.09毫克，6.83毫摩尔，734.26微升，0.40当量)，碳酸钾(7.08克，51.24毫摩尔，3.00当量)和cui(650.42毫克，3.42毫摩尔，0.20当量)的二氧六环(80.00毫升)混合物在100℃下搅拌16小时。lc-ms显示反应完成。将混合物过滤，滤液真空浓缩，得到粗产物，其通过制备型的tlc纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)，得到标题化合物和单-boc产物的混合物(3.20克，粗品)。lcms(esi)m/z:527.2(m+1)。
第4步：
4-(6-氨基吡啶-3-基)-3-氧代-哌嗪-1-甲酸苄酯
在0℃下，向苄基4-[6-[二(叔丁氧基羰基)氨基]-3-吡啶基]-3-氧代-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.20克，6.08毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(20.00毫升)溶液中加入三氟乙酸(10.00毫升)。将反应混合物在30℃下搅拌2小时。lc-ms显示该反应完成。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，并将其用二氯甲烷稀释。碳酸钾(10克)加入到混合物中。将所得混合物在30℃搅拌15分钟并过滤。将滤液真空浓缩，得到标题化合物(2.00克，粗品)为棕色油状物。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ7.87(d,j＝2.5hz,1h),7.42-7.36(m,4h),7.25-7.13(m,2h),6.63(d,j＝8.8hz,1h),5.21(s,2h),4.28(br.s.,2h),3.88(br.s.,2h),3.73(t,j＝5.3hz,2h).lcms(esi)m/z:327.1(m+1)。
第5步：
4-(6-((5-氟-4-(3-)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸苄酯
在氮气保护下，将5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基吲唑(中间体c)(1.60克，5.25毫摩尔，1.00当量)，苄基-4-(6-氨基吡啶-3-基)-3-氧代-哌嗪-1-甲酸酯(2.06克，6.30毫摩尔，1.20当量)，碳酸铯(5.13克，15.75毫摩尔，3.00当量)，xphos(500.58毫克，1.05毫摩尔，0.20当量)和pd(oac)2(117.87毫克，525.00微摩尔，0.10当量)的二氧六环(50.00毫升)混合物在110℃下搅拌16小时。lc-ms显示反应完成。将混合物过滤，将滤液真空浓缩，得到粗产物。将该粗产物经过柱纯化(二氯甲烷：甲醇＝20：1)，得到标题化合物(2.40克，3.59毫摩尔，产率：68.42％，纯度：89％)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.65(s,1h),8.70(s,1h),8.57(d,j＝9.0hz,1h),8.45(d,j＝3.8hz,1h),8.33(d,j＝2.5hz,1h),8.05(d,j＝9.2hz,1h),7.75(d,j＝9.2hz,1h),7.67(dd,j＝8.9,2.6hz,1h),7.47-7.31(m,5h),5.22(s,2h),4.37(s,2h),4.20(s,3h),3.93-3.86(m,2h),3.82-3.72(m,2h),3.58-3.46(m,1h),1.61(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:595.2(m+1)。
第6步：
1-(6-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-2-酮
在氢气球氛围下，将4-(6-((5-氟-4-(3-)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)-3-氧代哌嗪-1-甲酸苄酯(2.40克，3.59毫摩尔，1.00当量)和湿pd/c(400.00毫克，纯度：10％)的甲醇(20.00毫升)和四氢呋喃(20.00毫升)混合物在30℃下搅拌16小时。lc-ms显示反应完成。将混合物过滤，将滤液真空浓缩，得到粗产物，将其用二氯甲烷(20毫升)稀释。向该混合物中滴加盐酸/乙酸乙酯(5毫升，4m)，然后真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备型的hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(1.25克，2.32毫摩尔，产率：64.62％，纯度：99％，盐酸盐)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.92(s,1h),8.83(d,j＝3.6hz,1h),8.63(d,j＝2.1hz,1h),8.45(dd,j＝2.5,9.4hz,1h),8.36(d,j＝9.3hz,1h),7.86-7.78(m,1h),7.67(d,j＝9.5hz,1h),4.31(s,3h),4.20-4.10(m,4h),3.83-3.68(m,3h),1.66(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:461.2(m+1).
实施例19
氮-[5-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-吡啶基]-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
第1步：
3-(6-硝基-3-吡啶基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
向3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(1.00克，4.71毫摩尔，1.00当量)的二甲基亚砜(20.00毫升)溶液中加入三乙胺(1.43克，14.13毫摩尔，3.00当量)和5-溴-2-硝基-吡啶(1.15克，5.65毫摩尔，1.20当量)。将混合物在100℃下搅拌16个小时。lcms显示反应完全。待混合物冷却到20℃，向混合物中加入40毫升水，含水相用二氯甲烷(50毫升×2)萃取，饱和食盐水(50毫升×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产品通过甲醇(2毫升×3)打浆纯化，得到标题化合物(639.00毫克，粗品)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.18(d,j＝9.2hz,1h),8.09(d,j＝3.0hz,1h),7.15(dd,j＝9.2hz,3.0hz,1h),4.47(br.s.,2h),3.58(d,j＝10.0hz,2h),3.27(br.s.,2h),2.12-1.99(m,2h),1.86-1.76(m,2h),1.49(s,9h).lcms(esi)m/z:335.2(m+1)。
第2步：
3-(6-氨基-3-吡啶基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
在氢气(15psi)条件下，向3-(6-硝基-3-吡啶基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(339.00毫克，1.01毫摩尔，1.00当量)的甲醇(11.00毫升)溶液中加入钯碳(50.00毫克)。将反应混合物在20℃下搅拌18个小时。lcms显示反应完全。将混合物过滤，浓缩，得到标题化合物(287.00毫克，粗品)为紫色固体。lcms(esi)m/z:305.2(m+1)。
第3步：
3-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向3-(6-氨基-3-吡啶基)-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(140.00毫克，459.94微摩尔，1.00当量)的二氧六环溶液中加入5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-吲唑(中间体c)(249.50毫克，818.69微摩尔，1.78当量)，xantphos(79.84毫克，137.98微摩尔，0.30当量)，碳酸铯(446.58毫克，1.37毫摩尔，2.98当量)和pd2(dba)3(63.18毫克，68.99微摩尔，0.15当量)。将混合物在110℃下搅拌18个小时。lcms显示原料反应完全，没有检测到产物。tlc显示原料反应完全且有两个新点产生。将反应混合物过滤，将滤饼溶解在10毫升水里，水相用二氯甲烷(10毫升×2)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(10毫升)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到标题化合物(25.00毫克，粗品)为黄色固体。lcms(esi)m/z:573.3(m+1)。
第4步：
氮-[5-(3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)-2-吡啶基]-5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-胺
向3-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯(25.00毫克，43.66微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(2毫升)溶液中加入三氟乙酸(765.00毫克，6.71毫摩尔，153.67当量)。将混合物在20℃下搅拌0.5个小时。lcms显示反应完全。将反应混合物浓缩得到粗产物。将该粗产物通过制备hplc的(盐酸)纯化，得到标题化合物(11.80毫克，22.82微摩尔，收率：52.27％，纯度：91.39％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.89(s,1h),8.77(d,j＝3.5hz,1h),8.35(d,j＝9.2hz,1h),8.25(dd,j＝9.5,2.1hz,1h),7.87(d,j＝1.9hz,1h),7.81(d,j＝9.0hz,1h),7.55(d,j＝9.5hz,1h),4.30(s,5h),3.84-3.67(m,3h),3.36-3.32(m,2h),2.20(s,4h),1.64(d,j＝6.9hz,6h).lcms(esi)m/z:473.3(m+1).
实施例20
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-(4-甲基-5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)嘧啶-2-胺
第1步：
4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-4-甲基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向4-(6-氨基-4-甲基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(200.00毫克，684.04微摩尔，1.00当量)的二氧六环(5.00ml)溶液中加入5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-吲唑(中间体c)(250.15毫克，820.85微摩尔，1.20当量)，pd2(dba)3(62.64毫克，68.40微摩尔，0.10当量)，xantphos(79.16毫克，136.81微摩尔，0.20当量)和碳酸铯(445.75毫克，1.37毫摩尔，2.00当量)。将混合物在110℃下搅拌16个小时。lcms显示反应完全。将混合物浓缩，粗产品通过制备tlc(乙酸乙酯:石油醚＝2:1)纯化，得到标题化合物(150.00毫克,粗品)为黄色固体。lcms(esi)m/z:561.4(m+1).
第2步：
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-(4-甲基-5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)嘧啶-2-胺
在20℃下，向4-[6-[[5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-4-甲基-3-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(150.00毫克，267.54微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(4毫升)溶液中加入三氟乙酸(1.53克，13.42毫摩尔，50.16当量)。将反应混合物搅拌0.5个小时。lcms显示反应完全。将混合物浓缩得到粗产物，并将其通过制备的hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(111.60毫克，224.54微摩尔，收率：83.93％，纯度：100％，盐酸盐)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.93(s,1h),8.83(d,j＝3.51hz,1h),8.32-8.45(m,3h),7.85(d,j＝9.03hz,1h),7.62(d,j＝9.16hz,1h),4.33(s,3h),3.74(d,j＝6.99hz,1h),3.57(d,j＝12.67hz,2h),3.10-3.27(m,3h),2.20(d,j＝13.68hz,2h),1.96-2.10(m,2h),1.66(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:446.2(m+1)。
方案b
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺的制备:
实施例21
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺
第1步：
5-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑
在氮气保护下，向2-甲基-3-异丙烯基-5-硼酸酯-2氢-吲唑(500.00毫克，1.68毫摩尔，1.00当量)的二氧六环(10毫升)和水(2毫升)的混合溶液中加入2-氯-5-氟-4-碘-吡啶啶(518.98毫克，2.02毫摩尔，1.20当量)，k2co3(696.58毫克，5.04毫摩尔，3.00当量)和pd(dppf)cl2(122.93毫克，168.00微摩尔，0.10当量)，将混合物在110℃下搅拌3小时。lcms显示反应完全，将混合物冷却到20℃，然后加入水(10毫升)，用乙酸乙酯(15毫升×3)萃取。有机相合并用盐水(15毫升×2)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤。将滤液浓缩后得到的残余物通过硅胶柱柱(石油醚：乙酸乙酯＝30：1至5：1)纯化，得到标题产物(500毫克，1.66毫摩尔，收率：98.63％)为黄色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.32(d,j＝2.1hz,1h),7.89(s,1h),7.77(dd,j＝9.0,0.8hz,1h),7.52-7.47(m,2h),5.69(t,j＝1.5hz,1h),5.35(s,1h),4.22(s,3h),2.30(d,j＝1.0hz,3h).lcms(esi)m/z:302.0(m+1).
第2步：
5-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑
向5-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-2-甲基-3-异丙烯基-2氢-吲唑(500mg，1.66毫摩尔，1.00当量)的甲醇(5毫升)和四氢呋喃(5毫升)的混合溶液中加入rh(pph3)3cl(153.59毫克，166.00微摩尔，0.1当量)，向体系中通入氢气并保持压力为50psi，将混合物在50℃下搅拌16小时。lcms显示反应完全。将混合物冷却到20℃，并浓缩得到残余物。将该残余物通过硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20：1至5：1)纯化，得到标题化合物(460.00毫克，1.51毫摩尔，收率：91.23％)为白色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.33(d,j＝2.3hz,1h),8.05(s,1h),7.75(dd,j＝9.0,0.8hz,1h),7.50(d,j＝5.6hz,1h),7.45(td,j＝9.0,1.7hz,1h),4.20(s,3h),3.55-3.48(m,1h),1.58(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:304.0(m+1).
第3步：
4-(5-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向5-(2-氯-5氟吡啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑(200.00毫克，658.41微摩尔，1.00当量)和4-(6-氨基-3-吡啶)哌啶-1-甲酸叔丁酯(274.90毫克，987.62微摩尔，1.50当量)的二氧六环(8毫升)溶液中加入cs2co3(643.57毫克，1.98毫摩尔，3.00当量)，xantphos(76.19毫克，131.68微摩尔，0.20当量)，和pd2(dba)3(60.29毫克，65.84微摩尔，0.10当量)，将混合物在110℃下搅拌16小时。lcms显示反应完全，将混合物冷却到20℃，过滤。滤饼用乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩，得到标题化合物(350.00毫克，粗品)为黑色油状物，不纯化直接用于下一步。lcms(esi)m/z:546.4(m+1)。
第4步：
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺
向4-(5-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)吡啶-2-基)氨基)吡啶-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(350.00毫克，641.44微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(5毫升)溶液中加入三氟乙酸(2.0毫升)，将混合物在20℃下搅拌0.5小时。lcms显示反应完全。将混合物减压浓缩除去二氯甲烷和三氟乙酸得到残余物。将该残余物通过制备的hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(250.00毫克，558.27微摩尔，收率：87.03％，纯度：99.49％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.47(d,j＝2.6hz,1h),8.39(s,1h),8.21(dd,j＝9.7,2.9hz,1h),7.89(d,j＝2.8hz,1h),7.87-7.80(m,2h),7.44(d,j＝9.5hz,1h),7.40(d,j＝5.5hz,1h),4.31(s,3h),3.76-3.69(m,1h),3.56-3.51(m,4h),3.50-3.45(m,4h),1.64(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:304.0(m+1).
方案c
制备中间体d的一般方法：
第1步：
5-溴-2，3-二氟苯甲醛
将2，3-二氟苯甲醛(3.00克，21.22毫摩尔，1.00当量)溶解在硫酸(18.4摩尔每升，10.20毫升，8.89当量)并在40分钟内加热至60℃。这时在20分钟内分三批加入1-溴吡咯烷-2,5-二酮(4.51克，25.33毫摩尔，1.20当量)。在氮气保护下加热3小时，tlc和hplc显示反应完全。将反应混合物倒入冰水中并用石油醚(30毫升×2)萃取两次，用水(30毫升×2)和饱和盐水(30毫升×2)洗涤，再减压浓缩。浓缩残余物经柱层析(石油醚)纯化得到标题化合物(2.10克，9.50毫摩尔，45.00％收率)为黄色液体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ10.29(s,1h),7.77(brs,1h),7.65-7.54(m,1h).
第2步：
(反式)-5-溴-2,3-二氟苯甲醛-氧-甲基肟
将5-溴-2,3-二氟-苯甲醛(1.50克，6.79毫摩尔，1.00当量)，氧-甲基羟胺(680.52毫克，8.15毫摩尔，1.20当量)和碳酸钾(1.13克，8.15毫摩尔，1.20当量)混合物的二甲醚(20.00毫升)溶液加热至40℃并搅拌14小时。tlc显示大约1％的原料没有反应完。将反应混合物过滤，滤液减压浓缩得到标题化合物(1.00克，粗品)，未经进一步纯化直接用于下一步。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.22(s,1h),7.77-7.75(m,1h),7.35-7.27(m,1h),4.04(s,3h).
第3步：
5-溴-7-氟-2氢-吲唑
将(反式)-5-溴-2,3-二氟苯甲醛-氧-甲基肟(4.90克，19.60毫摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(35.00毫升)和水合肼(20.60克，411.51毫摩尔，21.00当量，85％规格)溶液加热至90℃并搅拌72小时。lcms显示20％的原料没有反应完。将有机溶剂浓缩掉，得到的混合物用乙酸乙酯(20毫升)稀释并用水(20毫升×2)洗涤，再减压浓缩得到残余物。将此残余物用柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝60：1到40：1)纯化得到标题化合物(3.25克，12.09毫摩尔，61.69％收率，80％纯度)为白色固体。lcms(esi)m/z:215.0(m+1).第4步：
5-溴-7-氟-2-甲基-2氢-吲唑
在氮气保护，30℃下30分钟内向5-溴-7-氟-2氢-吲唑(1.10克，5.12毫摩尔，1.00当量)和甲醇钠(552.71毫克，10.23毫摩尔，2.00当量)的甲醇(20.00毫升)中滴加碘甲烷(1.09克，7.67毫摩尔，1.50当量)。在30分钟内将混合物加热至85℃并搅拌5小时。lcms显示约3％的原料没反应完。将反应混合物冷却至30℃并减压浓缩干，用3％的碳酸氢钠水溶液稀释再用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取。将有机相减压浓缩得到残余物，并经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝20：1到5：1)纯化得到标题化合物(360.00毫克，1.57毫摩尔，30.66％收率)为黄色固体。lcms(esi)m/z:229.0(m+1).
第5步：
5-溴-7-氟-3-碘-2-甲基-2氢-吲唑
在30℃下向5-溴-7-氟-2-甲基-2氢-吲唑(500.00毫克，2.18毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(5.00毫升)溶液中加入吡啶(259.00毫升，3.27毫摩尔，1.50当量)和双(三氟乙酰氧基)碘苯(1.13克，2.62毫摩尔，1.20当量)，并搅拌30分钟。在30℃下再加入碘(664.86毫克，2.62毫摩尔，1.20当量)并搅拌23.5小时。lcms显示原料转化完全。将反应液过滤得到滤饼，并用溶剂(石油醚：二氯甲烷＝2：1，10毫升)洗涤，得到标题化合物(300.00毫克，828.31微摩尔，38.00％收率，98％纯度)为白色固体。lcms(esi)m/z:354.8(m+1).
第6步：
6-溴-4-氟-2-甲基-3-(丙烯-2-基)-2氢-吲唑
在氮气保护下向5-溴-7-氟-3-碘-2-甲基-2氢-吲唑(320.00毫克，901.56微摩尔，1.00当量)和2-异丙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧环戊硼烷(181.80毫克，1.08毫摩尔，1.20当量)的四氢呋喃(8.00毫升)和水(5.00微升)溶液中加入碳酸钾(373.81毫克，2.70毫摩尔，3.00当量)和pd(dppf)cl2(131.93毫克，180.31微摩尔，0.20当量)。在50-60℃将反应混合物搅拌16小时。lcms显示55％的目标产物。tlc显示原料转化完全。将混合物过滤，滤液浓缩干。浓缩残余物经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)得到标题化合物(210.00毫克，780.35微摩尔，86.56％收率)为浅棕色液体。lcms(esi)m/z:268.9(m+1).
第7步：
4-氟-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧环戊硼烷-2-基)-3-(丙烯-2-基)-2氢-吲唑
在氮气保护下向5-溴-7-氟-3-异丙烯基-2-甲基-吲唑(302.00毫克，1.12毫摩尔，1.00当量)和双联频哪醇硼酸酯(341.30毫克，1.34毫摩尔，1.20当量)的四氢呋喃(10.00毫升)溶液中加入3滴水，pd(dppf)cl2(163.90毫克，224.00微摩尔，0.20当量)和乙酸钾(329.75毫克，3.36毫摩尔，3.00当量)。在80-90℃下将混合物搅拌14小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)显示大部分原料反应完了。将混合物冷却到25℃并过滤，滤液浓缩干。浓缩残余物经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝8：1)纯化得到标题化合物(306.00毫克，967.80微摩尔，86.41％收率)为白色固体。lcms(esi)m/z:317.2(m+1).
第8步：
5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2-甲基3-(丙烯-2-基)-2氢-吲唑
在氮气保护下向2,4-二氯-5-氟-嘧啶(177.44毫克，1.06毫摩尔，1.20当量)和7-氟-3-异丙烯-2-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧环戊硼烷-2-基)吲唑(280.00毫克，885.57微摩尔，1.00当量)的四氢呋喃溶液中加入碳酸钾(367.18毫克，2.66毫摩尔，3.00当量)，pd(dppf)cl2(129.59毫克，177.11微摩尔，0.20当量)和3滴水。在80-90℃下将混合物搅拌16小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)显示大部分原料转化。将混合物冷却到25℃并过滤，滤饼用乙酸乙酯(3毫升×2)洗涤，滤液浓缩干。浓缩得到的残余物经过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝7：1)得到标题化合物(中间体d)(260.00毫克，802.57微摩尔，90.63％收率，99％纯度)。lcms(esi)m/z:320.9(m+1).
实施例22
5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
第1步：
4-(6-((5-氟-4-(7-氟-2-甲基-3-(异丙烯-2-基)-2(氢)-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-7-氟-2-甲基-3-(异丙烯-2-基)-2氢-吲唑(中间体d)(100毫克，311.80毫摩尔，1.00当量)的二氧六环(3毫升)溶液中加入4-(6-氨基-3-吡啶)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(99.81毫克，358.57毫摩尔，1.15当量)，碳酸铯(203.18毫克，623.6毫摩尔，2.00当量)，pd2(dba)3(57.1毫克，62.36微摩尔，0.2当量)和xantphos(72.17毫克，124.72微摩尔，0.40当量)。将混合物用氮气置换三次并加热至100℃并搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并检测到目标产物。将反应液冷却到25℃并用二氯甲烷(5毫升)稀释后过滤。将滤液浓缩得到的残余物用制备级tlc(乙酸乙酯)纯化得到标题化合物(100.00毫克，177.74微摩尔，收率：57.01％)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.38(d,j＝3.9hz,1h),8.30(s,1h),8.03(d,j＝2.8hz,1h),7.80(d,j＝12.7hz,1h),7.38(dd,j＝9.0,2.9hz,1h),5.75-5.69(m,1h),5.37(s,1h),4.23(s,3h),3.67-3.56(m,4h),3.17-3.04(m,4h),2.31(s,3h),1.50(s,9h).
第2步：
4-(6-((5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向4-(6-((5-氟-4-(7-氟-2-甲基-3-(异丙烯-2-基)-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100.00毫克177.74微摩尔，1.00当量)的甲醇(10.00毫升)和乙酸(500微升)混合溶液中加入三(三苯基膦)氯化铑(49.33毫克，53.32微摩尔，0.3当量)。将反应瓶用氩气和氢气置换3次。在氢气(50psi)压力下，将混合物加热至50℃并搅拌18小时。lcms显示原料转化完全并检测到目标产物。将反应液冷却到25℃并过滤，滤液浓缩得到的残余物用制备级tlc(乙酸乙酯)纯化得到标题化合物(15毫克，粗品)为黄色固体。lcms(esi)m/z:565.3(m+1).
第3步：
5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
向4-(6-((5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-2氢-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(15毫克，26.57微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(1毫升)溶液中加入三氟乙酸(500微升)。将混合物在25℃下搅拌1小时。lcms显示原料转化完全并检测到目标产物。将反应液浓缩得到的残余物经过制备级hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(3.88毫克，8.27微摩尔，收率：31.12％，纯度：99％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.73(d,j＝3.9hz,1h),8.63(s,1h),8.27(dd,j＝2.6,9.7hz,1h),7.91(d,j＝2.4hz,1h),7.84(d,j＝13.2hz,1h),7.55(d,j＝9.7hz,1h),4.22(s,3h),3.71-3.61(m,1h),3.60-3.51(m,4h),3.49-3.41(m,4h),1.59(d,j＝7.0hz,6h)lcms(esi)m/z:465.2(m+1).
实施例23
2-[4-[6-[[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]哌嗪-1-基]乙醇
第1步：
2-[4-[6-[[5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)嘧啶-2-基]氨基]-3-吡啶基]哌嗪-1-基]乙醇
向5-氟-4-(7-氟-3-异丙基-2-甲基-吲唑-5-基)-氮-(5-哌嗪-1-基-2-吡啶基)嘧啶-2-胺(80.00毫克，172.22微摩尔，1.00当量)和2-溴乙醇(64.56毫克，516.66微摩尔，3.00当量)的乙腈(5.00毫升)溶液中加入二异丙基乙胺(66.77毫克，516.66微摩尔，3.00当量)。将混合物加热至70℃并搅拌16小时。lc-ms显示原料几乎消耗完全并且检测到所需化合物的ms。将此反应混合物在减压下浓缩得到残余物。将此残余物用乙酸乙酯(10毫升)稀释并依次用水(5×3毫升)和盐水(3×5毫升)洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，将滤液浓缩得到残余物。将此残余物通过制备的hplc(碱性条件)纯化得到标题化合物(20.31毫克，39.14微摩尔，产率：22.72％，纯度：98％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.59(s,1h),8.48(d,j＝3.5hz,1h),8.18(d,j＝8.8hz,1h),8.01(br.s,1h),7.80(d,j＝12.5hz,1h),7.73-7.63(m,1h),4.22(s,3h),3.76(t,j＝5.8hz,2h),3.71-3.60(m,1h),3.24(brs,5h),2.76(br.s,4h),2.64(t,j＝5.5hz,2h),1.60(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:509.3(m+1).
方案d
中间体e的一般合成:
第1步：
3-(异丁酰基)-4-氧代哌啶-1-甲酸苄酯
在0℃下，向4-氧代哌啶-1-甲酸苄酯(128.07克，549.04毫摩尔，1.95当量)的甲苯(600.00毫升)溶液中缓慢滴加lihmds(550毫升550.00毫摩尔，1.95当量)，将此混合物在0℃下搅拌1小时。然后在0℃下，向反应混合物中缓慢滴加2-甲基丙酰氯(30.00克，281.56毫摩尔，1.00当量)，滴加完毕后，将混合物加热至25℃并搅拌18小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)显示原料反应完全。向反应混合物中加入10％的醋酸水溶液(100毫升)淬灭该反应，分液，有机层依次用水(500ml)和饱和食盐水(500ml)洗涤。将得到的有机层经无水硫酸钠干燥并过滤，滤液浓缩，得到残余物，将其通过硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50：1至20：1)纯化，得到标题化合物(57.00克，粗品)为浅黄色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ16.10(s,1h),7.38-7.36(m,5h),5.18(s,2h),4.33(s,2h),3.69-3.66(m,2h),2.68-2.57(m,1h),2.48(brs,2h),1.14(d,j＝6.4hz,6h).
第2步：
6，7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5(4氢)甲酸苄酯
在25℃下，向3-(异丁酰基)-4-氧代哌啶-1-甲酸苄酯(57.00克，187.90毫摩尔，1.00当量)的乙醇(600.00毫升)溶液中，加入40％的甲基肼水溶液(110.00克，954.53毫摩尔，5.08当量)。将混合物搅拌1小时。lcms显示原料已反应完全。将反应溶液浓缩，得到粗产物，并将其通过制备的hplc(三氟乙酸)纯化，得到积分溶液。将积分溶液里的乙腈浓缩除去，用碳酸氢钠调节水相的ph为8，然后用二氯甲烷(500毫升×2)萃取两次。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩，得到标题化合物(6.50克，20.74毫摩尔，11.4％产率)为无色油状物。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.43-7.29(m,5h),5.18(s,2h),4.58(s,2h),3.82-3.71(m,5h),3.03(quin,j＝7.0hz,1h),2.82-2.67(m,2h),1.28(d,j＝6.4hz,6h).
第3步：
3-异丙基-2-甲基-4，5，6，7-四氢-2氢-吡唑并[4，3-c]吡啶
在25℃下，向6，7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5(4氢)甲酸苄酯(6.50克，20.74毫摩尔，1.00当量)的甲醇(100.00毫升)溶液中，加入pd/c(1.00克)和浓度为12摩尔/升的盐酸(1.00毫升)溶液，并依次用氮气和氢气分别置换三次，向反应液中通入氢气，保持反应体系压力在50psi下搅拌2小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)显示原料已反应完全。将反应混合物过滤，滤液浓缩，得到标题化合物(5.25克，粗品)为灰白色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.93(brs,2h),4.31(brs,2h),3.76(s,3h),3.09-2.98(m,3h),2.10(brs,2h),1.26(d,j＝7.0hz,6h).
第4步：
5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-4，5，6，7-四氢-2氢-吡唑并[4，3-c]吡啶
在25℃下，向3-异丙基-2-甲基-4，5，6，7-四氢-2氢-吡唑并[4，3-c]吡啶(5.25克，20.75毫摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(60.00毫升)溶液中，加入2,4-二氯-5-氟嘧啶(3.50克，20.96毫摩尔，1.01当量)和三乙胺(9.51克，94.01毫摩尔，4.53当量)，将反应混合物搅拌18小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)显示原料反应完全。将反应溶液用水(200ml)稀释，并用乙酸乙酯(200毫升×2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5:1至2:1)纯化，得到标题化合物(中间体e)(5.60克，18.08毫摩尔，87.12％产率)为灰白色固体。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.94(d,j＝6.0hz,1h),4.84(s,2h),4.03(t,j＝5.8hz,2h),3.79(s,3h),3.07(spt,j＝7.1hz,1h),2.88(t,j＝5.7hz,2h),1.32(d,j＝7.2hz,6h).
实施例24
5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)-n-(5-(1-甲基哌嗪-4-基)吡啶-2-基)吡啶-2-胺
第1步：
6-硝基-5'，6'-二氢-[3，4'-联吡啶]-1'(2'氢)甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向5-溴-2-硝基吡啶(10.00克，49.26毫摩尔，1.02当量)的二氧六环(120毫升)和水(10毫升)的混合溶液中，加入4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2氢-吡啶-1-甲酸叔丁酯(15.00克，48.51毫摩尔，1.00当量)，碳酸钾(5.9克，72.77毫摩尔，1.50当量)，和pd(dppf)cl2(1.77克，2.43毫摩尔，0.05当量)，然后将反应混合物加热到80℃，搅拌18小时。tlc(石油醚：乙酸乙酯＝3：1)显示原料已反应完全。将反应溶液过滤，并经无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到粗产物，将其通过柱层析石油醚：乙酸乙酯＝3：1)纯化，得到标题化合物(18.70克，粗品)为淡黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.64(d,j＝2.0hz,1h)8.24(d,j＝8.4hz,1h)7.95(dd,j＝8.5,2.3hz,1h)6.33(brs,1h)4.16(d,j＝2.6hz,2h)3.69(t,j＝5.6hz,2h)2.57(brs,2h)1.50(s,9h).
第2步：
4-(6-氨基吡啶-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
向4-(6-硝基-3-吡啶基)-3,6-二氢-2氢-吡啶-1-甲酸叔丁酯(18.70克，48.51毫摩尔，1.00当量)的甲醇(500毫升)溶液中，加入pd/c(2.00克，)，将反应体系依次用氮气和氢气分别置换三次，向反应液中通入氢气，保持反应体系压力为50psi，将反应混合物升温至50℃，搅拌18小时。lc-ms显示原料反应完全。过滤混合物，将滤液浓缩，得到标题化合物(10.40克，37.50毫摩尔，77.31％产率)为灰白色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.92(d,j＝2.4hz,1h)7.31-7.27(m,1h)6.48(d,j＝8.5hz,1h)4.35(brs,2h)4.23(brs,2h)2.78(t,j＝12.1hz,2h)2.60-2.48(m,1h)1.78(brs,2h)1.61-1.52(m,2h)1.48(s,9h).
第3步：
5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺
在0℃下，向氢化铝锂(2.05克，54.09毫摩尔，3.00当量)的四氢呋喃(100毫升)溶液中，缓慢滴加叔丁基4-(6-氨基-3-吡啶基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.00克，3.18毫摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(50ml)溶液，滴加完毕后，将混合物加热至70℃并搅拌2小时。lc-ms显示原料反应完全。在0℃下，向反应混合物中加入20％的氢氧化钾水溶液(4ml)淬灭反应，产生大量固体，将反应混合物过滤，滤液浓缩，得到标题化合物(4.00克，粗品)为白色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.93(d,j＝2.3hz,1h)7.31(dd,j＝8.4,2.4hz,1h)6.46(d,j＝8.4hz,1h)4.33(brs,2h)2.95(d,j＝11.7hz,2h)2.41-2.32(m,1h)2.31(s,3h)2.04-1.98(m,2h)1.80-1.67(m,4h).
第4步：
5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基l-6,7-二氢-2氢吡唑并[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)-n-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
在氮气保护下，向5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-4，5，6，7-四氢-2氢-吡唑[4，3-c]吡啶(中间体e)(2.00克，6.46毫摩尔，1.00当量)的甲苯(20.00毫升)溶液中，加入5-(1-甲基-4-哌啶基)吡啶-2-胺(1.36克，7.10毫摩尔，1.10当量)，碳酸铯(4.21克，12.91毫摩尔，2.00当量)，pd2(dba)3(400.00毫克，436.81微摩尔，0.07当量)和xantphos(520.00毫克，898.69微摩尔，0.14当量)。将混合物加热至110℃并搅拌18小时。lcms显示原料已反应完全。将反应混合物冷却至20℃，浓缩，得到残余物。将其通过柱层析(乙酸乙酯至二氯甲烷：甲醇＝10：1)纯化，得到粗产物，将其经制备的hplc(碱性)纯化，得到标题化合物(2.48克，4.61毫摩尔，71.42％产率)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.27(d,j＝1.9hz,1h),8.13(d,j＝7.2hz,1h),8.01(d,j＝8.5hz,1h),7.45(d,j＝8.8hz,1h),5.01(s,2h),4.16(t,j＝5.8hz,2h),3.77(s,3h),3.65(d,j＝12.3hz,2h),3.26-3.12(m,3h),3.09-2.98(m,1h),2.93(s,3h),2.86(t,j＝5.8hz,2h),2.22-1.98(m,4h),1.34(d,j＝7.0hz,6h).
实施例25
n-(5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-6,7-二氢-2氢-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-3-胺
在氮气保护下，5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-6，7-二氢-4氢-吡唑并[4，3-c]吡啶(中间体e)(200.00毫克，645.64微摩尔，1.00当量)和6-(4-甲基哌嗪-1-基)哒嗪-3-胺(124.77毫克，645.64微摩尔，1.00当量)的二氧六环(5.00毫升)的溶液中，加入碳酸铯(420.72毫克，1.29毫摩尔，2.00当量)，pd2(dba)3(59.12毫克，64.56微摩尔，0.10当量)和xantphos(74.72毫克，129.13微摩尔，0.20当量)，然后将反应混合物加热至110℃，搅拌16小时。lcms显示原料已反应完全。将反应混合物冷却至25℃，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过制备的hplc(碱性)纯化，得到标题化合物(132.29毫克，283.54微摩尔，43.92％产率)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.23(d,j＝9.91hz,1h),7.93(d,j＝6.90hz,1h),7.34(d,j＝9.91hz,1h),4.85(s,2h),4.02(t,j＝5.84hz,2h),3.77(s,3h),3.63-3.57(m,4h),3.17(q,j＝7.00hz,1h),2.81(t,j＝5.77hz,2h),2.65-2.59(m,4h),2.38(s,3h),1.32(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:467.2(m+1).
实施例26
5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)-n-(5-(4-甲基-1,4-高哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
第1步：
1-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)-1，4-高哌嗪
向5-溴-2-硝基-吡啶(2.00克，9.85毫摩尔，1.00当量)和1-甲基-1,4-高哌嗪(1.69克，14.78毫摩尔，1.50当量)的二甲亚砜(20.00毫升)溶液中，加入碳酸钾(2.72克，19.70毫摩尔，2.00当量)，将混合物加热至80℃并搅拌16小时。lcms显示原料已反应完全。将反应混合物冷却至25℃并加入水(50毫升)，然后用乙酸乙酯(100毫升×3)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100毫升×3)洗涤，并经无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，得到粗产物。将其通过柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝30：1至1：3)纯化，得到标题化合物(2.00克，8.46毫摩尔，85.94％产率)为白色固体。lcms(esi)m/z:237.1(m+1).
第2步：
5-(4-甲基-1，4-的高哌嗪-1-基)吡啶-2-胺
在25℃下，向1-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)-1，4-高哌嗪(2.00克，8.46毫摩尔，1.00当量)的甲醇(20.00毫升)溶液中，加入pd/c中(10％，500毫克)。将反应体系依次用氮气和氢气分别置换三次，向反应液中通入氢气，保持反应体系压力为15psi，搅拌2小时。tlc显示原料已反应完全。将反应混合物过滤，并减压浓缩，得到标题化合物(1.70克，8.24毫摩尔，97.41％产率)为白色固体。lcms(esi)m/z:207.1(m+1).
第3步：
5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)-n-(5-(4-甲基-1，4-高哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
在氮气保护下，向5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-6，7-二氢-4氢-吡唑并[4，3-c]吡啶(中间体e)(200.00毫克，645.64微摩尔，1.00当量)和5-(4-甲基-1，4-高哌嗪-1-基)吡啶-2-胺(159.83毫克，774.77微摩尔，1.20当量)的二氧六环(5.00毫升)溶液中，加入碳酸铯(420.72毫克，1.29毫摩尔，2.00当量)，pd2(dba)3(59.12毫克，64.56微摩尔，0.10当量)和xantphos(74.72毫克，129.13微摩尔，0.20当量)，然后将反应混合物加热至110℃，搅拌16小时。lcms显示原料已反应完全。将反应混合物冷却至25℃，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将其通过制备的hplc(碱性)纯化，得到标题化合物(93.10毫克，194.12微摩尔，30.07％产率)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ7.91-7.84(m,2h),7.77(d,j＝3.01hz,1h),7.22(dd,j＝9.16,3.14hz,1h),4.85(s,2h),4.01(t,j＝5.83hz,2h),3.77(s,3h),3.62-3.57(m,2h),3.52(t,j＝6.27hz,2h),3.17(q,j＝7.03hz,1h),2.83-2.75(m,4h),2.67-2.61(m,2h),2.40(s,3h),2.06(dt,j＝11.51,5.98hz,2h),1.36-1.29(m,6h).lcms(esi)m/z:480.2(m+1).
实施例27
n-(5-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-胺
第1步：
n，n-二甲基-1-(6-硝基吡啶-3-基)哌啶-4-胺
在氮气保护下，向n，n-二甲基哌啶-4-胺(100.00毫克，779.97微摩尔，1.00当量)和5-溴-2-硝基吡啶(158.33毫克，779.97微摩尔，1.00当量)的二氧六环(5毫升)溶液中，加入binap(48.57毫克，78.00微摩尔，0.10当量。)，碳酸铯(508.26毫克，1.56毫摩尔，2.00当量)和pd(oac)2(17.51毫克，78.00微摩尔，0.10当量)，然后将反应混合物加热至90℃，搅拌16小时。tlc显示原料已反应完全。将反应混合物过滤浓缩得粗产物，将其通过制备的tlc(二氯甲烷：甲醇＝10：1)纯化，得到标题化合物(125.00毫克，499.40微摩尔，64.03％产率)为黄色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.20-8.14(m,2h),7.21(dd,j＝9.2,3.2hz,1h),3.99(d,j＝13.2hz,2h),3.12-3.02(m,2h),2.47-2.39(m,1h),2.33(s,6h),2.01(d,j＝12.4hz,2h),1.70-1.64(m,2h).lcms(esi)m/z:251.1(m+1).
第2步：
5-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-胺
向n，n-二甲基-1-(6-硝基吡啶-3-基)哌啶-4-胺(525.00毫克，2.10毫摩尔，1.00当量)的甲醇(10毫升)溶液中加入pd-c(10％，100毫克)。将反应体系依次用氮气和氢气分别置换三次，向反应液中通入氢气，保持反应体系压力为15psi，搅拌4小时。tlc显示原料已反应完全。将反应混合物过滤，滤液浓缩，得到标题化合物(450.00毫克，2.04毫摩尔，97.27％产率)为黄色固体。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ7.65-7.61(m,1h),7.34(dd,j＝9.2,2.4hz,1h),6.59(dd,j＝8.8,0.8hz,1h),3.52-3.44(m,2h),2.65(dt,j＝12.4,2.4hz,2h),2.42-2.38(m,6h),2.05-1.98(m,2h),1.67(dq,j＝12.4,4.4hz,2h).lcms(esi)m/z:221.0(m+1).
第3步：
n-(5-(4-(二甲基氨基)哌啶-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑并[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-胺
在氮气保护下，向5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)的混合物-3-异丙基-2-甲基-6，7-二氢-4氢-吡唑并[4，3-c]吡啶(中间体e)(150.00毫克，484.23微摩尔，1.00当量)和5-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]吡啶-2-胺(128.02毫克，581.08微摩尔，1.20当量)的二氧六环(5.00毫升)溶液中，加入pd2(dba)3(44.34毫克，48.42微摩尔，0.10当量)，碳酸铯(315.54毫克，968.46微摩尔，2.00当量)和xantphos(56.04毫克，96.85微摩尔，0.20当量)，然后将反应混合物加热至110℃，搅拌16小时。lcms显示原料已反应完全。将反应混合物冷却至25℃，过滤并浓缩，得到粗产物，将其通过制备的hplc(甲酸)纯化，得到标题混合(81.64毫克，165.39微摩尔，34.16％产率)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.01-7.86(m,3h),7.51(dd,j＝9.16,2.76hz,1h),4.85(s,2h),4.06-3.96(m,2h),3.84-3.72(m,5h),3.38-3.33(m,1h),3.17(dt,j＝14.02,6.98hz,1h),2.90(s,6h),2.85-2.77(m,4h),2.22(d,j＝12.05hz,2h),1.90(qd,j＝12.03,3.70hz,2h),1.32(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:494.2(m+1).
实施例28
氮-(2-(二甲胺基)乙基)-氮-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基)-氮-甲基吡啶-2,5-二胺
第1步:
氮-(2-(二甲胺基)乙基)-氮-甲基-6-硝基吡啶-3-胺
向5-溴-2-硝基-吡啶(2.00克，9.85毫摩尔，1.00当量)和n,n,n-三甲基乙烷-1，2-二胺(1.51克，14.78毫摩尔，1.50当量)的二甲基甲酰胺(20.00毫升)溶液中一次性加入碳酸钾(2.72克，19.70毫摩尔，2.00当量)。将反应混合物加热到90℃并搅拌16个小时。lcms显示反应完全。将反应液冷却到25℃后，向反应液中加入水(50毫升)。反应混合物用乙酸乙酯(100毫升×3)萃取。将有机相合并后用饱和食盐水(100毫升×3)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物。粗产物通过柱色谱(石油醚：乙酸乙酯＝30:1到1:3)纯化，得到标题化合物(1.50克，6.69毫摩尔，收率67.91％)为白色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ,8.19-8.15(m,1h),7.99(d,j＝3.14hz,1h),7.02(dd,j＝9.29,3.14hz,1h),3.63-3.57(m,2h),3.16(s,3h),2.57-2.51(m,2h),2.31(s,6h).lcms(esi)m/z:225.1(m+1).
第2步：
n3-(2-(二甲胺基)乙基)-n3-甲基吡啶-3,6-二胺
在氮气保护下，向n,n,n'-三甲基-n'-(6-硝基-3-吡啶)乙烷-1,2-二胺(1.50克，6.69毫摩尔，1.00当量)的甲醇(15.00毫升)溶液中加入pd/c(300毫克)。悬浮液用h2置换几次，然后在25℃且h2(一个大气压)保护下搅拌2个小时。tlc显示反应完全。将反应液过滤，浓缩得到标题化合物(1.20克，6.18毫摩尔，收率92.33％)为白色固体，不需要进一步纯化。lcms(esi)m/z:195.1(m+1).
第3步：
n5-(2-(二甲胺基)乙基)-n2-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基)-n5-甲基吡啶-2,5-二胺
在微波管中加入5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-6,7-二氢-4氢-吡唑[4,3-c]吡啶(中间体e)(150.00毫克，484.23微摩尔，1.00当量)，n3-(2-(二甲胺基)-n3-甲基吡啶-3,6-二胺(112.89毫克，581.08微摩尔，1.20当量),碳酸铯(315.54毫克，968.46微摩尔，2.00当量)，pd2(dba)3(88.68毫克，96.85微摩尔，0.20当量)和xantphos(56.04毫克，96.85微摩尔，0.20当量)的二氧六环(5.00毫升)溶液。将反应液用氮气置换几次后加热到130℃，搅拌2.5个小时。lcms显示反应物未反应完全，有约14％的产物。待反应液冷却到25℃，过滤，浓缩得到粗产物。粗产物通过制备hplc(盐酸)纯化得到标题化合物(91.63毫克，7微摩尔，收率47％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4):δ,8.25(d,j＝7.03hz,1h),8.03(dd,j＝9.54,3.01hz,1h),7.95(d,j＝2.89hz,1h),7.46(d,j＝9.54hz,1h),5.08(s,2h),4.25(t,j＝5.58hz,2h),4.06(s,3h),3.88(t,j＝7.22hz,2h),3.45(t,j＝7.22hz,2h),3.40-3.35(m,1h),3.15-3.07(m,5h),3.0-22.97(m,6h),1.43(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:468.3(m+1).
实施例29
4-(6-(5-氟-4-(6,7-二氢3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基胺基吡啶-3-基)哌啶-4-醇
第1步：
4-(6-胺基吡啶-3-基)-4-羟基哌啶-甲酸叔丁酯
在-70℃下，向5-溴吡啶-2-胺(1.00克，5.78毫摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(13.00毫升)溶液中慢慢滴加正丁基锂(2.5m，7.07毫升，3.06当量)。在-70℃下搅拌1.5个小时后，将反应液升温到25℃，然后搅拌2个小时。lcms显示仍然有约19％的反应物。lcms显示有几个新点，约有8％的产物。反应液在-70℃下用水和饱和氯化铵溶液淬灭，然后回到25℃。混合物通过乙酸乙酯(50毫升×3)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20毫升×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物。粗产物通过制备hplc(碱性)纯化得到标题化合物(300.00毫克，1.02毫摩尔，收率17.69％)为黄色油状。1hnmr(300mhz,dmso-d6):δ,7.98(d,j＝2.07hz,1h),7.43(dd,j＝8.67,2.45hz,1h),6.38(d,j＝8.67hz,1h),5.75(s,2h),4.89(s,1h),3.79(d,j＝9.80hz,2h),3.11(brs,2h),1.77-1.63(m,2h),1.62-1.52(m,2h),1.41(s,9h).lcms(esi)m/z:294.0(m+1).
第2步：
4-(6-(5-氟-4-(6,7-二氢3-异丙基-2-甲基-2氢吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基胺基吡啶-3-基)-4-羟基哌啶-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向4-(6-胺基-3-吡啶基)-4-羟基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(130.00毫克，443.14微摩尔，1.00当量)的二氧六环(5.00毫升)溶液中加入5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-6,7-二氢-4氢-吡唑[4,3-c]吡啶(中间体e)(164.73毫克，531.77微摩尔，1.20当量)，pd2(dba)3(40.58毫克，44.31微摩尔，0.10当量)，xantphos(51.28毫克，88.62微摩尔，0.20当量)和碳酸铯(288.77毫克，886.28微摩尔，2.00当量)。反应混合物在110℃下搅拌16个小时。lcms显示反应完全并检测到产物。待反应液冷却到25℃时，抽滤，滤液浓缩得到粗产物。粗产物通过制备tlc(二氯甲烷：甲醇＝10:1)纯化得到标题化合物(220.00毫克，粗品)为黄色固体。lcms(esi)m/z:567.2(m+1]).
第3步：
4-(6-(5-氟-4-(6,7-二氢3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5-(4氢)-基)嘧啶-2-基胺基吡啶-3-基)哌啶-4-醇
在0℃下，向4-(6-(5-氟-4-(6,7-二氢3-异丙基-2-甲基-2氢吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基胺基吡啶-3-基)-4-羟基哌啶-甲酸叔丁酯(220.00毫克，388.23微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(4.00毫升)溶液中加入三氟乙酸(2.00毫升)。将反应混合物加热到25℃，搅拌一个小时。lcms显示反应完全并检测到产物。将反应液浓缩，得到粗产物。粗产物通过制备hplc(盐酸)纯化得到标题化合物(115.01毫克，246.51微摩尔，收率63.50％)。1hnmr(300mhz,methanol-d4)δ8.53(d,j＝1.9hz,1h),8.35(dd,j＝9.0,2.3hz,1h),8.29(d,j＝6.6hz,1h),7.50(d,j＝9.0hz,1h),4.26(t,j＝5hz,2h),4.07(s,3h),3.60-3.32(m,7h),3.16-3.06(m,2h),2.47-2.30(m,2h),2.02(d,j＝13.8hz,2h),1.49-1.40(m,6h).lcms(esi)m/z:467.2(m+1).
实施例30
氮-(5-(1,4-高哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6,7-二氢3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-胺
第1步：
4-(6-硝基吡啶-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向5-溴-2-硝基-吡啶(2.00克，9.85毫摩尔，1.00当量)和1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.37克，11.82毫摩尔，1.20当量)的二甲基亚砜(20.00毫升)溶液中一次性加入碳酸钾(2.72克，19.70毫摩尔，2.00当量)。将反应混合物加热到80℃并搅拌16个小时。lcms显示反应完全并检测到产物。将反应液冷却到25℃，向反应液中加入水(50毫升)，然后用乙酸乙酯(100毫升×3)萃取。合并的有机相用饱和食盐水(100毫升×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产物。粗产物通过柱色谱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝30:1到1:3)得到标题化合物(2.00克,6.20毫摩尔,收率62.99％)为白色固体。lcms(esi)m/z:323.1(m+1).
第2步：
4-(6-胺基吡啶-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向4-(6-硝基吡啶-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.80克，5.58毫摩尔，1.00当量)的甲醇(20.00毫升)溶液中加入pd/c(300毫克)。悬浮液用h2置换几次，然后在25℃且h2(一个大气压)保护下搅拌2个小时。tlc显示反应完全并有一个新点产生。将反应液过滤，滤液浓缩得到粗产物(1.70克,粗品)为白色固体。粗产物没有纯化，直接用于下一步反应。lcms(esi)m/z:293.2(m+1).
第3步：
4-(6-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基胺基)吡啶-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-6,7-二氢-4氢-吡唑[4,3-c]吡啶(中间体e)(200.00毫克，645.64微摩尔，1.00当量)的二氧六环(5.00毫升)溶液中加入4-(6-胺基吡啶-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯(226.53毫克，774.77微摩尔，1.20当量)，pd2(dba)3(59.12毫克，164.56微摩尔，0.01当量),碳酸铯(420.72毫克，1.29毫摩尔，2.00当量)和xantphos(74.72毫克，129.13微摩尔，0.20当量)。将反应混合物在110℃下搅拌16个小时。lcms显示反应完全并检测到期待的产物。将反应液冷却到25℃，抽滤，滤液浓缩得到粗产物。粗产物通过制备tlc(乙酸乙酯)纯化得到标题化合物(250.00毫克，粗品)为白色固体。lcms(esi)m/z:566.2(m+1).
第4步：
氮-(5-(1,4-高哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6,7-二氢3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-胺
在25℃且氮气保护下，向4-(6-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基胺基)吡啶-3-基)-1,4-高哌嗪-1-甲酸叔丁酯(250.00毫克，441.95微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(5.00毫升)溶液中加入三氟乙酸(3毫升)。反应混合物在25℃下搅拌半个小时。lcms显示反应完全并检测到期待的产物。将反应液浓缩得到粗产物。粗产物通过制备hplc(盐酸)纯化得到标题化合物(127.94毫克，274.80微摩尔，收率62.18％)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.23(d,j＝6.78hz,1h),7.94(dd,j＝9.47,2.70hz,1h),7.86(d,j＝2.64hz,1h),7.41(d,j＝9.41hz,1h),5.04-5.14(m,2h),4.24(t,j＝5.21hz,2h),4.06(s,3h),3.83-3.94(m,2h),3.65(t,j＝6.02hz,2h),3.45-3.53(m,2h),3.34-3.42(m,3h),3.06-3.13(m,2h),2.24-2.33(m,2h),1.44(d,j＝7.03hz,6h).lcms(esi)m/z:466.2(m+1).
实施例31
氮-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基)-5-(哌嗪-1-基)吡嗪-2-胺
第1步：
4-(5-胺基吡嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下，向4-(5-溴吡嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(10.00克,29.14毫摩尔,1.00当量)和四氟硼酸三叔丁基磷(2.54克，8.74毫摩尔，0.30当量)的甲苯(100.00毫升)溶液中加入lihmds(1m，60.00毫升，2.06当量)和pd2(dba)3(2.60克，2.84毫摩尔，0.10当量)。将反应液在65℃下搅拌16个小时。lcms显示反应完全并检测到期待的产物。反应混合物冷却到25℃，向反应液中加入水(50毫升)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(100毫升×3).将合并的有机相浓缩干，得到粗产物。粗产物通过制备hplc(碱)纯化得到标题化合物(5.00克，17.90毫摩尔，收率61.43％)为橙色固体。lcms(esi)m/z:280.1(m+1).
第2步：
4-(5-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基胺基)吡嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在微波瓶中，向5-(2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-6,7-二氢-4氢-吡唑[4,3-c]吡啶(中间体e)(500.00毫克，1.61毫摩尔，1.00当量)，4-(5-胺基吡嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(495.97毫克，1.78毫摩尔，1.10当量)的二氧六环(16.00毫升)溶液中加入pd2(dba)3(147.81毫克，161.41微摩尔，0.10当量)，binap(201.01毫克，322.82微摩尔，0.20当量)和叔丁醇钠(232.67毫克，2.42毫摩尔，1.50当量)和水(400.00微升)。向反应体系通入氮气2分钟，然后封管，加热到140℃搅拌4个小时。lcms显示反应完全并检测到期待的产物。将反应液通过硅藻土过滤(乙酸乙酯洗涤)，滤液用水(20毫升)洗。将有机相浓缩干，得到粗产物。粗产物通过制备tlc(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)纯化得到标题化合物(800.00毫克，粗品)为黄色固体。lcms(esi)m/z:553.3(m+1).
第3步:
氮-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基)-5-(哌嗪-1-基)吡嗪-2-胺
向4-(5-((5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-6,7-二氢-2氢-吡唑[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基)胺基)吡嗪-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(800.00毫克，1.45毫摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(15.00毫升)溶液中加入三氟乙酸(23.03克，201.95毫摩尔，139.28当量)。将反应混合物在30℃下搅拌7个小时。lcms显示反应完全并检测到期待的产物。将反应液浓缩干，得到粗产物。粗产物通过制备hplc(盐酸)纯化得到标题化合物(213.05毫克，435.69微摩尔，收率30.05％)。1hnmr(400mhz,methanol–d4):δ8.26(s,1h),8.16-8.24(m,2h),5.20(s,2h),4.36(brs,2h),4.07(s,3h),3.84-3.98(m,4h),3.35-3.44(m,5h),3.15(brs.,2h),1.33-1.53(m,6h).lcms(esi)m/z:453.2(m+1).
实施例32
氮-(5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡嗪-2-胺
在30℃下，向5-氟-4-(3-异丙基-2-甲基-6，7-二氢-2氢-吡唑啉酮[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)-氮-(5-(哌嗪-1-基)哌嗪-2-基)嘧啶-2-胺(250.00毫克，552.45微摩尔，1.00当量)的甲醇(25.00毫升)溶液中加入nabh3cn(69.43毫克，1.10毫摩尔，2.00当量)，hcho(24.89毫克，828.68微摩尔，1.50当量)和三氟乙酸(62.99毫克，552.45微摩尔，1.00当量)。将反应混合物在30℃下搅拌4小时。lcms显示反应完全。将反应混合物浓缩干燥,得到的粗产品先通过制备hplc(盐酸)纯化，后通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到标题化合物(35.03毫克，75.08微摩尔，13.59％产率)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.88(s,1h),7.97(d,j＝1.13hz,1h),7.93(d,j＝6.90hz,1h),4.04(t,j＝5.84hz,2h),3.75-3.79(m,3h),3.57-3.67(m,4h),3.12-3.22(m,1h),2.77-2.85(m,6h),2.52(s,3h),2.03(s,1h),1.33(d,j＝7.03hz,6h),1.28-1.32(m,1h).lcms(esi)m/z:467.2(m+1).
实施例33
5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)-氮-(4-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
第1步:
5-溴-4-甲基-2-硝基吡啶
向冷却到0℃的h2so4(184.00克，1.88摩尔，23.39当量)中缓慢滴加h2o2(58.06克，1.71摩尔，21.28当量)，滴加过程中保持温度低于-20℃，然后加入5-溴-4-甲基吡啶-2-胺(15.00克，80.20毫摩尔，1.00当量)的h2so4(100.00毫升)混合物。将反应混合物先在冰浴下搅拌45分钟，后升温到30℃。三小时后反应液的颜色由草绿色渐变为亮黄。向反应混合物中加入冰(500毫升)，将析出的固体过滤、水洗，然后在真空下干燥，得到标题化合物(12.00克，55.29毫摩尔，68.95％产率)为亮橘色固体，未进一步纯化。lcms(esi)m/z:216.9(m+1),218.9(m+3).
第2步:
4-(4-甲基-6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在n2保护下，向5-溴-4-甲基-2-硝基吡啶(500.00毫克，2.30毫摩尔，1.00当量)，哌嗪-1-甲酸叔丁酯(514.05毫克，毫摩尔，1.20当量)，binap(286.43毫克，460.00微摩尔，0.20当量)和cs2co3(1.05克，3.22毫摩尔，1.40当量)的二氧六环(20.00毫升)混合液中加入pd2(dba)3(210.62毫克，230.00微摩尔，0.10当量)。将反应混合物在110℃、n2保护下搅拌16小时。lcms显示反应完全。将反应混合物冷却到20℃，然后过滤，将滤液浓缩干燥后通过tlc板(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化，得到标题化合物(420.00毫克，1.30毫摩尔，56.65％产率)为黄色固体。lcms(esi)m/z:323.0(m+1).
第3步:
4-(6-氨基-4甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在n2保护下，向4-(4-甲基-6-硝基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(350.00毫克，651.45微摩尔，1.00当量)的甲醇(15.00毫升)溶液中加入10％的pd-c(200毫克)，将此悬浊液排真空后充入氢气，然后在30℃、h2(15psi)条件下搅拌1.5小时。lcms显示反应完全。将混合物过滤浓缩干燥，得到的粗产品通过硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)纯化，得到标题化合物(125.00毫克，427.53微摩尔，65.63％产率)为黄色固体。lcms(esi)m/z:293.2(m+1).
第4步:
4-(6-(5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向4-(6-氨基-4甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(124.59毫克，426.12微摩尔，1.10当量)，5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-3-异丙基-2-甲基-4，5，6，7-四氢-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶(中间体e)(120.00毫克，387.38微摩尔，1.00当量)，pd2(dba)3(35.47毫克，38.74微摩尔，0.10当量)，xantphos(44.83毫克，77.48微摩尔，0.20当量)和cs2co3(252.43毫克，774.76微摩尔，2.00当量)的二氧六环(20.00毫升)混合物中，充入n2，然后将反应混合物在110℃下搅拌16小时。lcms显示反应完全。将反应混合物过滤浓缩干燥，得到的粗产品用乙酸乙酯(50毫升)稀释，水(20毫升)洗，将有机相旋干后通过制备tlc板(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到目标化合物(150.00毫克，265.17微摩尔，68.45％产率)为黄色固体。lcms(esi)m/z:566.3(m+1).
第5步:
5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2-甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)-氮-(4-甲基-5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
向4-(6-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-甲基2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(150.00毫克，265.17微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(7.50毫升)溶液中，滴加三氟乙酸(11.52克，101.00毫摩尔，380.87当量)。将反应混合物在30℃下搅拌2小时。lcms显示反应完全。将混合物浓缩干燥，得到的粗产品通过制备hplc(甲酸)纯化，得到标题化合物(121.00毫克，236.52微摩尔，89.19％产率)为黄色的油。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.15(d,j＝7.2hz,1h),8.05(s,1h),7.24(s,1h),5.00(s,2h),4.16(t,j＝5.8hz,2h),3.81(s,3h),3.51-3.39(m,4h),3.31-3.24(m,4h),3.24-3.16(m,1h),2.89(t,j＝5.8hz,2h),2.55-2.45(m,3h),1.36(d,j＝7.2hz,6h).lcms(esi)m/z:466.2(m+1).
方案e
5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2，7，7-三甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)-氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺的合成:
实施例34
5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2，7，7-三甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)-氮-(5-(1-甲基哌啶4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
第1步:
3，3-二甲基4-氧哌啶-1-甲酸苄酯
在0℃下，向4-氧哌啶-1-甲酸苄酯(2.00克，8.57豪摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(25毫升)溶液中一次性加入钠氢(719.88毫克，18.00毫摩尔，2.10当量)和碘化钾(3.80克，26.74毫摩尔，3.12当量)。将混合物在30℃下搅拌16小时。lcms显示反应完全。向反应混合物中加入氯化铵盐溶液(50毫升)，然后用乙酸乙酯(50毫升×2)提取。将有机相浓缩干燥，所得残余物通过制备tlc板(石油醚:乙酸乙酯＝6:1)纯化，得到标题化合物(870.00毫克，3.33毫摩尔，38.86％产率)为透明的油。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ7.38-7.33(m,5h),5.19(s,2h),3.81-3.77(t,j＝6.4hz,2h),3.50-3.46(m,2h),2.50(s,2h),1.11-1.04(m,6h).lcms(esi)m/z:284.1(m+1).
第2步:
5-(异丁酰基)-3，3-二甲基4-氧哌啶-1-甲酸苄酯
在0℃下，向3，3-二甲基4-氧哌啶-1-甲酸苄酯(6.00克，22.96毫摩尔，1.00当量)的甲苯(150.00毫升)溶液中一次性加入lda(2m，22.96毫升，2.00当量)，将反应混合物在此温度下搅拌30分钟后，加入异丁酰氯(3.67克，34.44毫摩尔，1.50当量)，然后缓慢升温到30℃并搅拌16小时。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝6:1)显示反应完全。将反应混合物用氯化氨盐溶液(80毫升)淬灭，然后用乙酸乙酯(100毫升×2)提取。将有机相合并后浓缩干燥，所得粗产品通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝50:1)纯化，得到标题化合物(5.60克，16.90毫摩尔，73.60％产率)为黄色的油。
第3步:
6，7-二氢-3-异丙基2，7，7-三甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-甲酸苄酯
向5-(异丁酰基)-3,3-二甲基4-氧哌啶-1-甲酸苄酯(3.90克，11.77毫摩尔，1.00当量)和40％的甲基肼水溶液(13.99克，121.47毫摩尔，10.32当量)的乙醇(35.00毫升)溶液中一次性加入醋酸(706.66毫克，11.77毫摩尔，1.00当量)。将反应混合物在32℃下搅拌16小时。lcms显示反应完全。将反应液浓缩干燥，所得粗产品通过制备tlc板(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到标题化合物(600.00毫克，1.76毫摩尔，14.93％产率)为透明的油。lcms(esi)m/z:342.2(m+1).
第4步:
3-异丙基-2，7，7-三甲基-4，5，6，7-四氢-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶
在n2保护下，向6，7-二氢-3-异丙基2，7，7-三甲基-2氢-吡唑啉酮[4,3-c]吡啶-5(4氢)-甲酸苄酯(600.00毫克，1.76毫摩尔，1.00当量)的甲醇(20.00毫升)溶液中加入10％的pd/c(0.4克)，将此悬浊液排真空后充入氢气，然后在30℃、h2(15psi)条件下搅拌2小时。lcms显示反应完全。将混合物过滤浓缩干燥，得到标题化合物(323.00毫克，1.56毫摩尔，88.53％产率)为黄色的油。lcms(esi)m/z:208.2(m+1).第5步:
5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4，5，6，7-四氢3-异丙基-2，7，7-三甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶
在30℃下，向3-异丙基-2，7，7-三甲基-4，5，6，7-四氢-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶(323.00毫克，1.56毫摩尔，1.00当量)和2，4-二氯-5-氟嘧啶(338.62毫克，2.03毫摩尔，1.30当量)的四氢呋喃(25.00毫升)溶液中加入三乙胺(1.58克，15.58毫摩尔，10.00当量)，将反应混合物在30℃下搅拌12小时。lcms显示反应完全。将反应混合物用饱和食盐水(20毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(50毫升×2)提取。将有机相合并之后干燥，得到的残余物通过制备tlc板(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)纯化，得到标题化合物(380.00毫克，1.12毫摩尔，72.11％产率)为黄色的油。lcms(esi)m/z:338.1(m+1).
第6步:
5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2,7,7-三甲基-2氢-吡唑啉酮[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)-氮-(5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-基)嘧啶-2-胺
在n2保护下，向5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4，5，6，7-四氢3-异丙基-2，7，7-三甲基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶(380.00毫克，1.12毫摩尔，1.00当量)，5-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-2-胺(257.07毫克，1.34毫摩尔，1.20当量)和cs2co3(729.84毫克，2.24毫摩尔，2.00当量)的二氧六环(25.00毫升)混合物中一次性加入pd2(dba)3(102.56毫克，112.00毫摩尔，0.10当量)和xantphos(129.61毫克，224.00微摩尔，0.20当量)。向反应混合物中充入n2，然后将反应混合物在110℃下搅拌16小时。lcms显示反应完全。向反应混合物中加入水(10毫升)稀释，然后用乙酸乙酯(50毫升×2)提取。将有机相合并之后干燥，得到的残余物先通过制备hplc(盐酸)纯化，后通过sfc(ad-3s_5_40_3ml，column:chiralpakad-3100×4.6mmi.d.3um，mobilephase:40％ethanol(0.05％dea)inco2，flowrate:3ml/minwavelength:220nm)纯化，得到标题化合物(60.00毫克，121.80微摩尔，10.87％产率)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.36(s,1h),8.30(d,j＝6.8hz,1h),8.27-8.19(m,1h),7.56-7.48(m,1h),5.09(s,2h),4.12(s,3h),4.05(s,2h),3.73-3.60(m,2h),3.44-3.35(m,1h),3.31-3.25(m,1h),3.21-3.09(m,1h),2.96(s,3h),2.35(s,1h),2.26-2.08(m,4h),1.51-1.44(m,12h).lcms(esi)m/z:493.3(m+1).
方案f
氮-(5-(1,4-二氮杂庚烷-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2苯基-2氢-吡唑啉酮[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-胺的合成:
实施例35
氮-(5-(1,4-二氮杂庚烷-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-苯基-2氢-吡唑啉酮[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-胺
第1步:
6,7-二氢-3-异丙基-2-苯基-2氢-吡唑啉酮[4,3-c]吡啶-5(4氢)-甲酸苄酯
向3-(2-甲基丙酰)-4-氧-哌啶-1-甲酸苄酯(500.00毫克，1.65毫摩尔，1.00当量)的乙醇(5.00毫升)溶液中加入苯基肼(178.24毫克，1.65毫摩尔，1.00当量)，将反应混合物加热到80℃并在此温度下搅拌4小时。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)和lcms显示反应完全。将反应混合物冷却到25℃，然后减压浓缩以除去溶剂。得到的残余物通过硅胶柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)纯化，得到标题化合物(330.00毫克，878.92微摩尔，53.27％产率)为红色的油。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.50-7.36(m,10h),5.23(s,2h),4.70(s,2h),3.83(brs,2h),3.07(q,j＝7.0hz,1h),2.86(brs,2h),1.28-1.20(m,6h).lcms(esi)m/z:376.1(m+1).
第2步:
4，5，6，7-四氢-3-异丙基-2-苯-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶
向6，7-二氢-3-异丙基-2-苯基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-甲酸苄酯(330.0毫克，878.92微摩尔，1.00当量)的甲醇(5.00毫升)溶液中加入10％的钯碳(50毫克)，将反应混合物在25℃、h2(15psi)的条件下搅拌2小时。tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示反应完全。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩，得到标题化合物(200.00毫克，粗品)为黄色的油。
第3步:
5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4，5，6，7-四氢-3-异丙基-2-苯基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶
向4，5，6，7-四氢-3-异丙基-2-苯-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶(200.00毫克，828.74微摩尔，1.00当量)的四氢呋喃(5.00毫升)溶液中加入三乙胺(167.72毫克，1.66毫摩尔，2.00当量)和2，4-二氯-5-氟-嘧啶(166.05毫克，994.49微摩尔，1.20当量)。将反应混合物在25℃下搅拌2小时。lcms显示反应完全。将反应混合物浓缩干燥，得到的残余物通过制备tlc板(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)纯化，得到标题化合物(190.00毫克，510.97微摩尔，61.66％产率)为白色固体。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.99(d,j＝6.0hz,1h),7.52-7.43(m,3h),7.40-7.36(m,2h),4.97(s,2h),4.12(t,j＝5.9hz,2h),3.10(q,j＝7.1hz,1h),2.99(t,j＝5.9hz,2h),1.30(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:372.0(m+1).
第4步:
4-(6-(5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-苯基-2氢-吡唑啉酮[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶2-氨基吡啶-3基)-1,4-二氮杂庚-1-甲酸叔丁酯
在n2保护下，向5-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)-4，5，6，7-四氢-3-异丙基-2-苯基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶(190.00毫克，510.97微摩尔，1.00当量)，4-(6-氨-3-吡啶基)-1，4-二氮杂庚-1-甲酸叔丁酯(224.10毫克，766.46微摩尔，1.50当量)的二氧六环(5.00毫升)混合液中加入cs2co3(499.45毫克，1.53毫摩尔，3.00当量)，xantphos(59.13毫克，102.19微摩尔，0.20当量)，和pd2(dba)3(46.79毫克，51.10微摩尔，0.10当量)。将反应混合物加热到120℃并在此温度下搅拌16小时。lcms显示反应完全。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩，得到的残余物通过制备tlc板(纯乙酸乙酯)纯化，得到标题化合物(100.00毫克，粗品)为黄色固体。lcms(esi)m/z:628.3(m+1).
第5步:
氮-(5-(1,4-二氮杂庚-1-基)吡啶-2-基)-5-氟-4-(6,7-二氢-3-异丙基-2-苯-2氢-吡唑啉酮[4,3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶-2-胺
向4-(6-(5-氟-4-(6，7-二氢-3-异丙基-2-苯基-2氢-吡唑啉酮[4，3-c]吡啶-5(4氢)-基)嘧啶2-氨基吡啶-3基)-1，4-二氮杂庚-1-甲酸叔丁酯(100.00毫克，159.30微摩尔，1.00当量)的二氯甲烷(3.00毫升)溶液中加入三氟乙酸(1毫升)。将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。lcms显示反应完全。将反应混合物减压浓缩以除去溶剂，得到的残余物通过制备hplc(盐酸)纯化，得到标题化合物(50.00毫克，94.76微摩尔，59.49％产率)。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ8.24(d,j＝6.8hz,1h),7.92(dd,j＝9.4,2.8hz,1h),7.86(d,j＝2.6hz,1h),7.73-7.68(m,3h),7.65-7.57(m,2h),7.39(d,j＝9.5hz,1h),5.17(s,2h),4.31(t,j＝5.0hz,2h),3.92-3.84(m,2h),3.65(t,j＝6.0hz,2h),3.52-3.45(m,2h),3.41-3.36(m,2h),3.14(t,j＝5.1hz,2h),3.06(td,j＝14.0,6.9hz,1h),2.33-2.24(m,2h),1.37(d,j＝7.0hz,6h).lcms(esi)m/z:528.2(m+1).
药理部分
本发明涉及的化合物是选择性的cdk4/6抑制剂，例如，它们对cdk2酶的活性较cdk4/6差(ic50数值比较)。以下实验结果证实本专利列举的化合物确实是特定的cdk4/6抑制剂并且可作为潜在的抗癌药。此处用到的ic50是指使用某种试剂产生50％最大抑制时对应该试剂的浓度。本发明涉及的化合物还有它们无法预料的生物活性，例如，实施例13，它不是外排转运体底物，而palbociclib及ly2835219实验证明是外排转运体底物。进而，实施例13在脑部组织的暴露量远高于同时间palbociclib及ly2835219脑部组织的暴露量。可以推测实施例13比较palbociclib及ly2835219更有潜力治疗脑转移的乳腺癌，其占乳腺癌患者的15％左右。这里展示的生物活性只是部分个体实施例代表性的生物活性。
生化实验
实验材料：
cdk2/cyclina，cdk4/cyclind1，cdk6/cyclind1(lifetechnology)。ulight标记的多肽底物ulight-4e-bp1和ulight-mbp(perkinelmer)。铕标记的抗髓磷脂碱蛋白抗体和铕标记的兔源抗体(perkinelmer)，envision多标记分析仪进行信号的检测(perkinelmer)。
实验方法：
将待检测的化合物进行三倍稀释，包括10个浓度梯度，最终的浓度范围是5um到0.25nm。
●cdk2/cyclina的酶反应体系
标准的lanceultra方法通过10μl的酶反应体系进行，包含0.5nmcdk2/cyclina蛋白，100nm
ulight-mbp多肽，和25μmatp。分别将其溶解在酶缓冲液中，缓冲液的成分包括：ph7.5的羟乙基哌嗪乙硫磺酸溶液50mm，乙二胺四乙酸1mm，氯化镁10mm，0.01％brij-35，二硫苏糖醇2mm。开始反应后，用顶部热封膜topseal-a将optiplate384孔板封好，室温孵育60分钟。
●cdk4/cyclind1的酶反应体系
标准的lanceultra方法通过10μl的酶反应体系进行，包含0.3nmcdk4/cyclind1蛋白，50nmulight-4e-bp1多肽，和350μmatp。分别将其溶解在酶缓冲液中，缓冲液的成分包括：ph7.5的羟乙基哌嗪乙硫磺酸溶液50mm，乙二胺四乙酸1mm，氯化镁10mm，0.01％brij-35，二硫苏糖醇2mm。开始反应后，用顶部热封膜topseal-a将optiplate384孔板封好，室温孵育180分钟。
●cdk6/cyclind1的酶反应体系
标准的lanceultra方法通过10μl的酶反应体系进行，包含0.8nmcdk6/cyclind1蛋白，50nmulight-4e-bp1多肽，和250μmatp。分别将其溶解在酶缓冲液中，缓冲液的成分包括ph7.5的羟乙基哌嗪乙硫磺酸溶液50mm，乙二胺四乙酸1mm，氯化镁10mm，0.01％brij-35，二硫苏糖醇2mm。开始反应后，用顶部热封膜topseal-a将optiplate384孔板封好，室温孵育180分钟。
准备酶反应终止缓冲液，用1倍稀释的检测缓冲液溶解edta，终止反应在室温进行5分钟。分别在cdk2/cyclina、cdk4/cyclind1和cdk6/cyclind1反应中加入5μl检测混合液(分别用铕标记的抗髓磷脂碱蛋白抗体和铕标记的兔源抗体配置)。室温孵育60min，根据时间分辨荧光共振能量转移原理利用envision仪器检测反应信号。
数据分析：
利用方程式(max-ratio)/(max-min)*100％将原始数据换算成抑制率，ic50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(xlfit5中205模式得出，idbs)。表1提供了本发明的化合物对cdk2/cdk4/cdk6激酶的抑制活性。
细胞实验
实验材料：
rpmi1640培养基，胎牛血清，盘尼西林/链霉素抗生素购自promega(madison,wi)。mcf-7细胞系和mda-mb-436细胞系购自欧洲细胞培养物保藏所(ecacc)。envision多标记分析仪(perkinelmer)。
实验方法：
将mcf-7细胞种于黑色384孔板中，45μl细胞悬液每孔，其中包含200个mcf-7细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。
将待测化合物用bravo进行3倍稀释至第10个浓度，即从10μm稀释至0.508nm，设置双复孔实验。向中间板中加入49μl培养基，再按照对应位置，转移1μl每孔的梯度稀释化合物至中间板，混匀后转移5μl每孔到细胞板中。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养6天。
向细胞板中加入每孔25ml的promegacelltiter-glo试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用perkinelmerenvision多标记分析仪读数。
数据分析：
利用方程式(max-ratio)/(max-min)*100％将原始数据换算成抑制率，ic50的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(xlfit5中205模式得出，idbs)。表1提供了本发明的化合物对mcf-7和mda-mb-436细胞增殖的抑制活性。
实验结论：
本发明化合物对cdk4和cdk6激酶具有明显的抑制活性，并对cdk2激酶具有较高的选择性。同时本发明的化合物对雌激素受体阳性的mcf-7乳腺癌细胞具有明显的增殖抑制活性，而对雌激素受体阴性的mda-mb-436细胞增殖抑制活性较差。其中实施例3、9、10、15具有较参照化合物palbociclib和ly2835219更高的对cdk4和cdk6激酶的抑制活性；实施例3、7、9、10、15具有较参照化合物palbociclib和ly2835219更高的对mcf-7细胞增殖的抑制活性；实施例7具有较参照化合物ly2835219更高的对雌激素受体阳性的乳腺癌细胞增殖抑制活性选择性(mcf-7/mda＝mb-436)。
表1
caco-2细胞双向渗透性评估实验
实验目的：
caco-2细胞是一种广泛用于研究小肠吸收的体外模型，它是一种人的结肠癌细胞。单层caco-2细胞模型已广泛地应用于评估在小肠吸收过程中的被动和主动转运过程。gf120918a为一个强外排转运体抑制剂，这些外排转运体包含p糖蛋白(p-gp)和乳腺癌抗性蛋白(bcrp)等。本实验用于测定实施例7及参照化合物palbociclib和ly2835219穿过caco-2细胞模型的双向渗透性，并且通过加入gf120918a评估受试化合物的外排转运。
实验操作：
实验标准条件如下：
-测试浓度:2μm(dmso≤1％)；
-重复：n＝2；
-方向:双向转运，包括a→b和b→a两个方向；
-孵育时间：单个时间点，2小时；
-转运缓冲液：hbss，ph7.4；
-孵育条件:37℃,5％co2。
孵育结束后，取给药孔和接收孔内的样品溶液立即与含有内标的冷乙腈溶液混合。采用lc/ms/ms方法分析待测化合物在所有样品(包括起始给药液，给药孔上清液，接收液)中的浓度。并计算表观渗透系数，外排比等参数。
实验结论：
表2列出了实施例7及参照化合物palbociclib和ly2835219在caco-2单层细胞中的渗透系数。与参照化合物palbociclib和ly2835219相比，实施例7具有较高的渗透性，而且体内吸收及转运受到外排转运体影响的可能性较低。更好的渗透性可能使得实施例7在体内组织(比如乳腺、肺部)中分布更多，带来更好的体内抗肿瘤药效。同时，更好的渗透性使得实施例7有可能穿透血脑屏障，达到治疗乳腺癌或者肺癌脑转移的目的。
表2
脑部渗透性研究
实验目的：
以sd大鼠为受试动物，应用lc/ms/ms法测定了大鼠口服给予实施例7及参照化合物palbociclib和ly2835219后不同时刻的脑和血浆中的药物浓度，以评价其脑组织分布特征。
实验操作：
选择健康成年雄性sd大鼠7-9周龄，共12只，购自上海斯莱克实验动物有限公司。称取适量受试化合物，将化合物配制成1mg/ml的0.5％甲基纤维素混悬液。大鼠接收单次口服给药，剂量为10mg/kg。给药后0.5,2,8,24小时分别处死3只动物，采集全血及脑组织，全血离心(3000g,15分钟，4度)制备血浆，甲醇：磷酸缓冲液＝1：2作为匀浆液以5:1比例与脑组织样品匀浆，制得脑匀浆样品。用lc/ms/ms法测定各样品的药物浓度，并计算auc数据以评价暴露量。
实验结论：
表3展示了在口服给药剂量为10mg/kg时，本发明实施例7与参照化合物palbociclib和ly2835219的脑组织暴露量数据。结果表明在0.5小时和2小时这两个时间点上，本发明实施例7相比参照化合物palbociclib和ly2835219具有较高的大鼠脑组织暴露量，这表明实施例7有利于开发成治疗癌症脑转移的药物；与此同时，8小时后本发明实施例7在脑部的暴露量明显下降，介于参照化合物palbociclib和ly2835219之间，表明本发明实施例7在脑部不会蓄积太长时间，具有较好的安全性。
表3
体内药效研究
在皮下植入mcf-7乳腺癌患者来源的基于人源肿瘤细胞系的异种移植(cdx)balb/c裸小鼠上进行体内药效实验
实验操作：
balb/c裸鼠，雌性，6-8周，体重约18-22克，将小鼠保持在一个特殊的无病原体的环境中，且在单个通风笼中(10只小鼠每笼)。所有的笼子，铺垫和水在使用前进行消毒。所有的动物都可以自由获取标准认证的商业实验室饮食。共有100只购于上海bklaboratoryanimalco.,ltd的小鼠用于研究。每只小鼠在左胁腹皮下植入雌激素片(0.36克，60天缓释)，3天之后，每只小鼠在右胁腹皮下植入肿瘤细胞(10x106在0.2毫升磷酸盐缓冲液中)，用于肿瘤的生长。当平均肿瘤体积达到约150-200立方毫米时开始给药。将试验化合物每日口服给药，给药剂量如表5所示。肿瘤体积每3天用二维卡尺测量，体积以立方毫米计量，通过以下公式计算：v＝0.5axb2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。抗肿瘤药效是通过用化合物处理过的动物的平均肿瘤增加体积除以未处理过动物的平均肿瘤增加体积来确定。
实验结论：
本发明的实施例3和实施例7在mcf-7乳腺癌基于人源肿瘤细胞系的异种移植(cdx)模型上展示了显著的抗肿瘤活性。如表4所示，实验开始21天后，未给药动物组的肿瘤体积从最开始的187立方毫米快速增长至1443立方毫米，而同期实施例3所在动物组的肿瘤体积只是从最开始的187立方毫米缓慢增长至432立方毫米，增长速度明显慢于参照化合物palbociclib和ly2835219所在组，考虑到实施例3的给药剂量(25mg/kg)只有参照化合物ly2835219(50mg/kg)的一半或者参照化合物palbociclib(45mg/kg)(实验证明palbociclib高剂量不能耐受)的将近一半，我们认为实施例3的抗肿瘤活性明显优于这两个参考化合物。与此同时，给药21天后，实施例7所在动物组的肿瘤体积从最开始的187立方毫米缓慢增长至350立方毫米，增长速度明显慢于相同剂量的参照化合物ly2835219所在组，这表明与相同剂量的参照化合物ly2835219相比，实施例7抗肿瘤活性更加显著。表4