C。
[0074] 当液位高于发酵罐80%时开始排料，每次排出发酵液体积的10%左右，装入三角瓶 内封口后冷藏于4°C。发酵培养48小时后放罐，测定发酵终点赖氨酸浓度和中间排料的赖 氨酸浓度，计算产酸浓度和糖酸转化率见表1。
[0075] 实施例3
[0076] 本实施例用于说明本发明提供的发酵制备赖氨酸的方法。
[0077] 开启种子培养罐中的搅拌，调节罐压为0. IMPa，按照通风量与培养基1:1体积比 通入无菌空气，用氨水调节pH至6. 8并保持恒定。将黄色短杆菌菌种(菌株BTC02原种取 自中国工业微生物菌种保藏管理中心）活化和增殖后接入种子罐中进行培养，培养过程，流 加淀粉质原料糖化清液控制还原糖浓度为3-10g/L，流加氨水控制溶液的pH值为6. 8,并且 每隔120分钟取样镜检并测定OD值，当镜检菌体形态正常且OD值达到0. 8时停止培养，得 到成熟的种子液C。
[0078] 将种子液C加入到制备例1中的发酵培养基中开始发酵，其中，以每毫升发酵培养 基计，发酵菌种的接种量为15体积％ (接种后且流加碳源和流加氮源之前发酵罐中的培养 基的体积为发酵罐体积的40%)，发酵条件包括：按照通风量与培养基体积1. 5:1通入无菌 空气，罐压为0. 〇5MPa，流加淀粉质原料糖化清液控制发酵溶液中还原糖浓度为5. 0-7. Og/ 1，流加磷酸铵溶液控制发酵溶液中氨氮浓度为〇. 5-0. 7g/l，流加碳酸钠溶液控制溶液pH 为7. 5±0. 1。接种后至发酵12小时期间主要为菌种生长阶段，发酵温度控制为36°C;发酵 12小时至发酵结束为主要产酸阶段，发酵温度控制为39°C。
[0079] 当液位高于发酵罐70%时开始排料，每次排出发酵液体积的5%左右，装入三角瓶 内封口后冷藏于4°C。发酵培养48小时后放罐，测定发酵终点赖氨酸浓度和中间排料的赖 氨酸浓度，计算产酸浓度和糖酸转化率见表1。
[0080] 实施例4
[0081] 本实施例用于说明本发明提供的发酵制备赖氨酸的方法。
[0082] 采用实施例3的方法进行赖氨酸的发酵，不同的是，菌种生长阶段的发酵温度为 31°C菌种产酸阶段的发酵温度为34°C。产酸浓度以及发酵转换率如表1所示。
[0083] 实施例5
[0084] 本实施例用于说明本发明提供的发酵制备赖氨酸的方法。
[0085] 采用实施例3的方法进行赖氨酸的发酵，不同的是，菌种生长阶段的发酵温度为 38°C，产酸阶段的发酵温度为42°C。产酸浓度以及发酵转换率如表1所示。
[0086] 实施例6
[0087] 本实施例用于说明本发明提供的发酵制备赖氨酸的方法。
[0088] 采用实施例3的方法进行赖氨酸的发酵，不同的是，菌种生长阶段的发酵温度为 30°C，产酸阶段的发酵温度为35°C。产酸浓度以及发酵转换率如表1所示。
[0089] 实施例7
[0090] 本实施例用于说明本发明提供的发酵制备赖氨酸的方法。
[0091] 采用实施例3的方法进行赖氨酸的发酵，不同的是，接种后至发酵18小时期间主 要为菌种生长阶段，发酵温度控制为35°C ;发酵18小时至发酵结束为主要产酸阶段，发酵 温度控制为37 °C。
[0092] 实施例8
[0093] 本实施例用于说明本发明提供的发酵制备赖氨酸的方法。
[0094] 采用实施例3的方法进行赖氨酸的发酵，不同的是，发酵菌种为乳酸发酵短杆菌 菌种(菌株BTC03原种取自中国工业微生物菌种保藏管理中心)。
[0095] 对比例1
[0096] 本对比例用于说明现有技术提供的发酵赖氨酸制备的方法。
[0097] 采用实施例3的方法进行赖氨酸的发酵，不同的是，不采用分段式控制发酵温度， 而是整个发酵过程控制温度为37°C。产酸浓度、发酵周期以及发酵转换率如表1所示。
[0098] 表 1
[0099]
【主权项】
1. 一种发酵制备赖氨酸的方法，该方法包括：将赖氨酸发酵菌种接入赖氨酸发酵培养 基中，在流加碳源和流加氮源的条件下，进行发酵以生成赖氨酸，所述发酵过程包括菌种生 长阶段和菌种产酸阶段，在菌种生长阶段的发酵温度为30-38°C，在菌种产酸阶段的发酵温 度为32-42°C，且在菌种生长阶段的发酵温度低于在菌种产酸阶段的发酵温度。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中，在菌种生长阶段的发酵温度为32-36°C，在菌种 产酸阶段的发酵温度为35-39°C。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，在菌种生长阶段的发酵温度比在菌种产酸阶 段的发酵温度低〇.5-5°C。
4. 根据权利要求3所述的方法，其中，在菌种生长阶段的发酵温度比在菌种产酸阶段 的发酵温度低2-3. 5°C。
5. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述菌种生长阶段是指将赖氨酸发酵菌种接种 至发酵培养基中开始至赖氨酸的生成速率达到5g/L/h时的发酵时间段，所述菌种产酸阶 段是指赖氨酸的生成速率大于5g/L/h时至发酵结束时的发酵时间段。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述流加为连续流加； 流加的碳源为淀粉类原料的糖化清液和/或纤维素类原料的糖化清液；流加碳源的量 使培养液中还原性糖的浓度控制在2-12克/升； 流加的氮源选自尿素、硫酸铵、氯化铵、磷酸铵、硝酸铵、液氨和氨水中的一种或多种； 流加氮源的量使培养液中氮的浓度控制在〇. 35-1. 2克/升。
7. 根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中，以接种后且流加碳源和流加氮源 之前的培养培养基为基准，所述赖氨酸发酵菌种的接种量为5-20体积％。
8. 根据权利要求1所述的方法，其中，接种后且流加碳源和流加氮源之前发酵罐中的 培养基的体积为发酵罐体积的40-60%，流加碳源和流加氮源至发酵罐体积的70-80%时放 料，放料体积为放料前发酵罐中培养基体积的4-10%。
9. 根据权利要求1-8中任意一项所述的方法，其中，该方法还包括，在所述发酵的过程 中向发酵培养基中加入碱性物质的步骤，所述碱性物质的加入使得发酵培养基的PH值为 6. 5-7· 5〇
10. 根据权利要求6所述的方法，其中，所述碱性物质选自液氨、氨水、硫酸铵、氢氧化 钠、氢氧化钾、氢氧化锂、氢氧化钡、氢氧化铝、氢氧化锰、氢氧化锌、碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂 和氨水中的一种或多种。
11. 根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中，所述发酵培养的条件为：通气量 为0· 5-L 5体积：（体积?分钟)，压力为0· 05-0. IMPa，时间为45-50小时。
12. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述发酵菌种选自大肠杆菌、谷氨酸棒杆菌、乳 酸发酵短杆菌和黄色短杆菌的一种或多种。
【专利摘要】本发明公开了一种发酵制备赖氨酸的方法，该方法包括：将赖氨酸发酵菌种接入赖氨酸发酵培养基中，在流加碳源和流加氮源的条件下，进行发酵以生成赖氨酸，所述发酵过程包括菌种生长阶段和菌种产酸阶段，在菌种生长阶段的发酵温度为30-38℃，在菌种产酸阶段的发酵温度为32-42℃，且在菌种生长阶段的发酵温度低于在菌种产酸阶段的发酵温度。采用上述技术方案来生产赖氨酸，有效地提高了产赖氨酸浓度和发酵转化率，并且缩短了发酵周期、降低了能耗。
【IPC分类】C12R1-13, C12R1-15, C12P13-08, C12R1-19
【公开号】CN104561162
【申请号】CN201310503252
【发明人】苏会波, 林海龙, 罗虎, 周勇, 卢宗梅, 李凡, 彭超
【申请人】中粮营养健康研究院有限公司, 中粮生物化学（安徽）股份有限公司, 中粮集团有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月23日