鱼类养殖微生物添加剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种鱼类养殖用的微生物添加剂及其制备方法，属于微生物调节剂在 水产养殖业中应用的生物材料技术领域。
【背景技术】
[0002] 随着养殖业的迅猛发展，鱼粉、豆稍等饲料原料价格大幅攀升，饲料成本居高不 下，严重制约了水产养殖效益的提升。与此同时，由于饲料成分中天然存在的各类抗营养因 子（膜蛋白酶抑制因子、脈酶、大豆凝血素等）、氨基酸组成不平衡影响了动物消化吸收机 能，从而导致饲料利用率降低。
[0003] 水产养殖业的快速发展，特别是大力发展工厂化高密度养殖的今天，培养良好的 养殖环境，提高生产效率，降低生产成本已经成为水产养殖的重要条件。健康无公害养殖的 普及和推广，微生物制剂W其无毒害、无残留等优点，越来越受到人们的关注和青睐。利用 某些微生物的代谢作用，降低养殖水体的氨氮、硫化氨含量，从而有效预防水产动物中毒， 给水产动物创造良好的生存环境。同时，一些微生物能够促进巧料的转化，进而营养成分被 养殖动物吸收利用，间接促进养殖动物的生长。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种用于鱼类养殖用的微生物添加剂及其制备方法。本发 明充分利用菌种之间的协同作用，起到促进鱼饲料转化、营养成分吸收率高的作用。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 鱼类养殖微生物添加剂，采用纳豆芽抱杆菌炬acillus natto)、乳酸链球 菌（Str巧tococ州S lactis)、嗜酸乳杆菌（Xeatobacillus acidophilus)、酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)、高山被抱霉（Mo;rtierella alpina)和硝化细菌制备菌种； 所述菌种的质量百分比为；纳豆芽抱杆菌5~30%，乳酸链球菌10~25%，嗜酸乳杆菌10~ 25%，酿酒酵母5~30%，硝化细菌5~10%，高山被抱霉5~10〇/〇。
[0007] 本发明提供的鱼类养殖微生物添加剂，优选的，所述菌种的质量百分比为；纳豆芽 抱杆菌22%，乳酸链球菌25%，嗜酸乳杆菌18%，酿酒酵母19%，硝化细菌8%，高山被抱霉8%。
[0008] 本发明还提供了上述鱼类养殖微生物添加剂的制备方法，包括W下步骤：
[0009] ①接种；将所述各菌种接于斜面培养基上；纳豆芽抱杆菌培养温度25~3(TC，培 养时间为12~2化；嗜酸乳杆菌培养温度为30~35C，培养时间为12~2化；乳酸链球菌 培养温度为30~35°C，培养时间为12~2化；酿酒酵母培养温度为32~37°C，培养时间 为12~2化；高山被抱霉培养温度为25~30。培养时间为12~2化；硝化细菌培养温度 为25~30°C，培养时间为12~2化；
[0010] ②菌种培养；将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基用 无菌海水配制，抑为6. 0~8. 0 ;锥形瓶放入摇床振荡，温度为32°C，振荡48~72h ;采用 血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到1〇8个/mL ;
[0011] ③一级发酵；将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000血锥形瓶中，培养基 用无菌海水配制，P册.0~8. 0,放入摇床振荡，温度为32°C，振荡48~72h ;使菌种数量分 别达到108个/mL W上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
[0012] ④二级发酵；将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂 培养基P册.0~8.0,接种量为1~5%，32°C下培养4~7天，使发酵液中菌数达到5~ 12X 1〇8个/mU即得到所述鱼类养殖微生物添加剂。
[0013] 本发明提供的鱼类养殖微生物添加剂的制备方法，所述复合菌剂培养基配方 为：蜂蜜1~8g/100血、藏糖5~lOg/100血、蛋白腺0. 1~0. 8g/100血、皿2P040. 2~ 0. 5g/100mL、K2HP040. 5 ~3g/100血、M拆04 .7肥00. 5 ~3g/100mL、化clO. 5 ~lOg/100血， 其余为蒸觸水。
[0014] 本发明提供的鱼类养殖微生物添加剂的制备方法，如无特殊说明，所用的液体培 养基均为现有技术中的常用培养基，在此不做费述。
[0015] 相比于现有技术，本发明提供的鱼类养殖微生物添加剂在加入到养殖水体后，微 生物的大量繁殖一定程度上可W抑制有害病原微生物，并可促进饲料的分解和被鱼类吸收 利用的效率。同时养殖水体中由鱼类产生的有机污染物通过本发明所述微生物的分解，从 而使水质得到净化。
【具体实施方式】
[0016] 下面的实施例可W使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不W任何方 式限制本发明。
[0017] 实施例1
[0018] 鱼类养殖微生物添加剂，采用30%纳豆芽抱杆菌、12%乳酸链球菌、29%嗜酸乳杆 菌、15%酿酒酵母、5%高山被抱霉和10%硝化细菌，按照W下步骤制备：
[0019] ①接种；将所述各菌种接于斜面培养基上；纳豆芽抱杆菌培养温度25~3(TC，培 养时间为2化；嗜酸乳杆菌培养温度为30~35C，培养时间为2化；乳酸链球菌培养温度为 30~35°C，培养时间为2化；酿酒酵母培养温度为32~37°C，培养时间为2化；高山被抱霉 培养温度为25~3(TC，培养时间为2化；硝化细菌培养温度为25~3(TC，培养时间为2化；
[0020] ②菌种培养；将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基用 无菌海水配制，抑为6. 0~8. 0 ;锥形瓶放入摇床振荡，温度为32C，振荡4她；采用血球计 数板计数，菌液中菌种数量分别达到1妒个/mL ;
[0021] ③一级发酵；将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的lOOOmL锥形瓶中，培养基 用无菌海水配制，P册.0~8. 0,放入摇床振荡，温度为32 C，振荡4她；使菌种数量分别达到 108个/mL W上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
[0022] ④二级发酵；将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂 培养基P册.0~8.0,接种量为3%，32°C下培养7天，使发酵液中菌数达到10X10 8个/mL， 即得到所述鱼类养殖微生物添加剂。
[0023] 本实施例提供的鱼类养殖微生物添加剂的制备方法，所述复合菌剂培养基 配方为：蜂蜜8g/100血、藏糖lOg/100血、蛋白腺0. 5g/100血、KH2PO4O. 3g/100血、 K2HPO4I. 5g/100mL、M拆〇4 ? 7H2〇2g/100mL、NaC16g/100mL，其余为蒸觸水。
[0024] 实施例2
[0025] 鱼类养殖微生物添加剂，采用15%纳豆芽抱杆菌、25%乳酸链球菌、20%嗜酸乳杆 菌、30%酿酒酵母、10%高山被抱霉和10%硝化细菌，按实施例1所述方法制备，即得到所述 鱼类养殖微生物添加剂。
[002引 实施例3
[0027] 鱼类养殖微生物添加剂，所述菌种的质量百分比为；纳豆芽抱杆菌22%，乳酸链球 菌25%，嗜酸乳杆菌18%，酿酒酵母19%，硝化细菌8%，高山被抱霉8%，按实施例1所述方法制 备，即得到所述鱼类养殖微生物添加剂。
[0028] 本发明提供的鱼类养殖微生物添加剂的性能实验
[0029] 试验组添加实施例3微生物添加剂，
[0030] 对照组空白。
[0031] 后续饲料添加相同，实验面积20亩。结果如表1所示，添加本发明实施例1微生 物添加剂后相对于对照组缠鱼、侧鱼、鍵鱼的各个数据均有明显提高。
[0032] 表 1
[0033]
【主权项】
1. 鱼类养殖微生物添加剂，其特征在于：采用纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto)、乳酸 链球菌（Streptococcus lactis)、嗜酸乳杆菌（Leatobacillus acidophilus)、酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)、高山被抱霉（Mortierella alpina)和硝化细菌制备菌种； 所述菌种的质量百分比为：纳豆芽孢杆菌5~30%，乳酸链球菌10~25%，嗜酸乳杆菌10~ 25%，酿酒酵母5~30%，硝化细菌5~10%，高山被孢霉5~10%。
2. 根据权利要求1所述的鱼类养殖微生物添加剂，其特征在于：所述菌种的质量百分 比为：纳豆芽孢杆菌22%，乳酸链球菌25%，嗜酸乳杆菌18%，酿酒酵母19%，硝化细菌8%，高 山被孢霉8%。
3. 根据权利要求1所述的鱼类养殖微生物添加剂的制备方法，其特征在于： ① 接种：将所述各菌种接于斜面培养基上；纳豆芽孢杆菌培养温度25~30°C，培养时 间为12~24h ;嗜酸乳杆菌培养温度为30~35°C，培养时间为12~24h ;乳酸链球菌培 养温度为30~35°C，培养时间为12~24h ;酿酒酵母培养温度为32~37°C，培养时间为 12~24h ;高山被孢霉培养温度为25~30°C，培养时间为12~24h ;硝化细菌培养温度为 25~30°C，培养时间为12~24h ; ② 菌种培养：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基用无菌 海水配制，pH为6. 0~8. 0 ;锥形瓶放入摇床振荡，温度为32°C，振荡48~72h ;采用血球 计数板计数，菌液中菌种数量分别达到1〇8个/mL ; ③ 一级发酵：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的l〇〇〇mL锥形瓶中，培养基用无 菌海水配制，PH6. 0~8. 0,放入摇床振荡，温度为32°C，振荡48~72h ;使菌种数量分别达 到108个/mL以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合； ④ 二级发酵：将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养 基pH6. 0~8. 0,接种量为1~5%，32°C下培养4~7天，使发酵液中菌数达到5~12 X 108 个/mL，即得到所述鱼类养殖微生物添加剂。
4. 根据权利要求3所述的鱼类养殖微生物添加剂的制备方法，其特征在于：所述复合 菌剂培养基配方为：蜂蜜1~8g/100mL、鹿糖5~10g/100mL、蛋白胨0? 1~0? 8g/100mL、 KH2P040. 2 ~0? 5g/100mL、K2HP040. 5 ~3g/100mL、MgS04 CffiOO. 5 ~3g/100mL、Nacl0. 5 ~ 10g/100mL，其余为蒸馈水。
【专利摘要】本发明提供一种鱼类养殖微生物添加剂，采用纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)、乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、高山被孢霉(Mortierella alpina)和硝化细菌制备菌种；所述菌种的质量百分比为：纳豆芽孢杆菌5～30%，乳酸链球菌10～25%，嗜酸乳杆菌10～25%，酿酒酵母5～30%，硝化细菌5～10%，高山被孢霉5～10%。
【IPC分类】C12N1-16, C12R1-645, C12R1-865, C12N1-14, C12R1-23, C12N1-20, C12R1-07, C02F3-34
【公开号】CN104673697
【申请号】CN201310638441
【发明人】崔国臣, 顾艳丽, 崔昌娜, 周悦
【申请人】大连三科生物工程有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2013年11月29日