一种小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其制备
【技术领域】：
[0001] 本发明提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇（SdLDL-C)检测试剂盒，所述试剂盒 为液体双试剂，包括试剂R1与R2,所述试剂R1含MOPS缓冲液（PH7. 0) 20~80mmol/L，胆 固醇酯酶1400~1800U/L，胆固醇氧化酶2300~2600U/L，磷脂酶2500~3000U/L，过氧 化氢酶1000~1300U/L，作为表面活性剂A的聚乙二醇烷基苯基醚（JK-14)1.0~3.0g/ L，作为保护剂的聚氧乙烯苄基苯乙烯醚（A3PK)0. 1~0. 5g/L，N-乙基N-(2-羟基-3-磺 丙基）-3_甲基苯胺钠盐（T00S)0. 3~0. 7mmol/L ;试剂R2含MOPS缓冲液（PH7. 0)20~ 80mmol/L，过氧化物酶2000~5000U/L，作为表面活性剂B的聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100) 5~18g/L，4-氨基安替比林（4-AA) 25~60mmol/L，叠氮钠0. 05 %。本试剂灵敏度 高，特异性强，试剂配制简单，无需预处理样本，值得进一步推广使用。
【背景技术】：
[0002] 低密度脂蛋白（LDL)具有异质性，由一系列大小、密度和化学组成各异的颗粒组 成。应用非变性梯度凝胶电泳法或密度梯度超离心法可将LDL分为3种或更多亚组分，其名 称也因实验方法而异。在LDL亚组分中有一部分LDL的颗粒较小（直径< 26nm)，密度较大 (1.04 ~1.06kg/L)，称为小而密低密度脂蛋白（small dense Low-Density Lipoprotein， sdLDL)，亦称B型LDL ;-部分LDL的颗粒较大（直径> 27nm)，密度较小（1. 02~1. 03kg/ L)，称为大而轻低密度脂蛋白（large，buoyant LDL，lbLDL)，亦称A型LDL;介于两者之间的 亚组分称中间型低密度脂蛋白。近来研宄发现sdLDL与普通LDL相比，其致动脉粥样硬化能 力更强，与冠心病（CHD)有着密切关系，已被美国胆固醇教育计划（National Cholesterol Education Program，NCEP)委员会成人治疗组列入新发现的重要心血管病危险因素之一。
[0003] 小而密低密度脂蛋白胆固醇可通过梯度密度超速离心法，梯度凝胶电泳法，化学 沉淀法，分子筛色谱分析法，毛细管电泳法，核磁共振光谱法，指标评估法，动态光散射法， 均相法等多种方法进行测定。梯度密度超速离心法、分子筛色谱分析法、毛细管电泳法、动 态光散射法操作繁琐，对实验室条件和实验操作人员要求较高，梯度凝胶电泳法耗时，特异 性差，化学沉淀法测定值不精确，核磁共振光谱法需要配备贵重的实验设备，指标评估法只 能粗略估计，不能准确测定其浓度。目前采用最多的sdLDL-C检测方法为均相法。使用特 殊的表面活性剂选择性地将非LDL解离，其解离释放出来的胆固醇酯被胆固醇酯酶和胆固 醇氧化酶分解掉，使其不参与显色反应，通过磷脂酶分解表面富含磷脂质的lbLDL，剩余的 sdLDL就可以通过参与完整的Trinder反应进行显色测定sdLDL-C，具有快速、特异的优点。
【发明内容】
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[0004] 本发明的目的在于，搭配使用几种特殊的表面活性剂、保护剂和酶，进行SdLDL-C 检测试剂盒制备。
[0005] 本发明的技术方案：使用一种特殊的表面活性剂A和保护剂，以及磷脂酶，选择性 地将高密度脂蛋白（HDL)、极低密度脂蛋白（VLDL)及乳糜微粒（CM)解离，磷脂酶分解表面 富含磷脂质的lbLDL，保护剂保护sdLDL组分不与磷脂酶、胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶反 应，使sdLDL完整保留下来。HDL、VLDL、CM被解离后释放出来的胆固醇酯被胆固醇酯酶和 胆固醇氧化酶分解掉，使其不参与显色反应，lbLDL被磷脂酶分解。剩余的sdLDL通过表面 活性剂B解除保护，参与完整的Trinder反应进行显色测定sdLDL-C。
[0006] 本检测试剂盒的检测原理：
【主权项】
1. 本发明提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇（sdLDL-C)检测试剂盒，所述试剂盒为 液体双试剂，包括试剂R1与R2,所述试剂R1含MOPS缓冲液（PH7. 0)，胆固醇酯酶，胆固醇 氧化酶，磷脂酶，过氧化氢酶，作为表面活性剂A的聚乙二醇烷基苯基醚（JK-14)，作为保护 剂的聚氧乙烯苄基苯乙烯醚（A3PK)，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠盐 (T00S);试剂R2含MOPS缓冲液（PH7. 0)，过氧化物酶，作为表面活性剂B的聚乙二醇辛基 苯基醚（Triton X-100)，4-氨基安替比林（4-AA)，叠氮钠。
2. 根据权利要求1所述试剂R1中，MOPS缓冲液（PH7. 0)的浓度范围为20~80mmol/ L〇
3. 根据权利要求1所述试剂R1中，胆固醇酯酶的浓度范围为1400~1800U/L ;胆固醇 氧化酶的浓度范围为2300~2600U/L ;磷脂酶的浓度范围为2500~3000U/L过氧化氢酶 的浓度范围为1000~1300U/L。
4. 根据权利要求1所述试剂R1中，表面活性剂A :聚乙二醇烷基苯基醚（JK-14)的浓 度范围为1.0~3.0g/L。
5. 根据权利要求1所述试剂R1中，保护剂：聚氧乙烯苄基苯乙烯醚（A3PK)的浓度范 围为 0. 1 ~0. 5g/L。
6. 根据权利要求1所述试剂R1中，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基）-3-甲基苯胺钠 盐（T00S)的浓度范围为0. 3~0. 7mmol/L。
7. 根据权利要求1所述试剂R2中，MOPS缓冲液（PH7. 0)的浓度范围为20~80mmol/ L〇
8. 根据权利要求1所述试剂R2中，过氧化物酶的浓度范围为2000~5000U/L。
9. 根据权利要求1所述试剂R2中，表面活性剂B :聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100)的浓度范围为5~18g/L。
10. 根据权利要求1所述试剂R2中，4-氨基安替比林（4-AA)的浓度范围为25~ 60mmol/L〇
11. 根据权利要求1所述试剂R2中，叠氮钠的浓度范围为0. 05%。
【专利摘要】本发明提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)检测试剂盒，所述试剂盒为液体双试剂，包括试剂R1与R2，所述试剂R1含MOPS缓冲液(PH7.0)，胆固醇酯酶，胆固醇氧化酶，磷脂酶，过氧化氢酶，作为表面活性剂A的聚乙二醇烷基苯基醚(JK-14)，作为保护剂的聚氧乙烯苄基苯乙烯醚(A3PK)，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)；试剂R2含MOPS缓冲液(PH7.0)，过氧化物酶，作为表面活性剂B的聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)，4-氨基安替比林(4-AA)，叠氮钠。本试剂灵敏度高，特异性强，试剂配制简单，无需预处理样本，值得推广使用。
【IPC分类】C12Q1-26, C12Q1-30, C12Q1-44, C12Q1-28, C12Q1-60
【公开号】CN104673879
【申请号】CN201510111190
【发明人】王贤俊
【申请人】王贤俊
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月7日