小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，包括R1和R2两种独立液态试剂，R1试剂各成分浓度为：PH值为7.0的MOPS缓冲液20～24g/L，过氧化氢酶1.8～2.2g/L，胆固醇氧化酶0.09～0.11g/L，胆固醇酯酶1.2～1.4g/L，作为表面活性剂I的PEG-2000含量为9～11g/L，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)1.4～1.8g/L，其余为纯化水；R2试剂各成分浓度为：PH值为7.0的MOPS缓冲液20～24g/L，过氧化物酶0.12～0.15g/L，作为表面活性剂Ⅱ的PEG-6000含量为13～17g/L，4-氨基安替比林0.45～0.55g/L，作为稳定剂的乙二胺四乙酸0.9～1.1g/L，其余为纯化水。本发明能适合临床实验室对小而密低密度脂蛋白胆固醇含量测定的需要。
【专利说明】小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明属于血清检测试剂【技术领域】，尤其与一种用于血清小而密低密度脂蛋白胆固醇测定的试剂盒有关。
【背景技术】
[0002]低密度脂蛋白是血清脂蛋白中的一种。血清低密度脂蛋白胆固醇对动脉粥样硬化斑块的形成有极大的作用，是冠心病的重要风险因子。根据其密度和大小的不同，低密度脂蛋白(LDL)又可分为大而轻低密度脂蛋白和小而密低密度脂蛋白(sdLDL),其中sdLDL因其颗粒小、易氧化等特点是LDL致动脉粥样硬化的主要亚型，所以目前临床实验室普遍开展对小而密低密度脂蛋白胆固醇含量的测定工作。
【发明内容】
[0003]本发明目的就是要适应临床实验室对小而密低密度脂蛋白胆固醇含量测定的需要，提供一种用于血清小而密低密度脂蛋白胆固醇测定的试剂盒。
[0004]为此，本发明采用以下技术方案:小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，包括Rl和R2两种独立液态试剂，其特征是:所述的Rl试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液20~24g/L，过氧化氢酶1.8~2.2 g/L，胆固醇氧化酶0.09~0.11 g/L，胆固醇酯酶1.2~1.4 g/L,作为表面活性剂I的PEG-2000含量为9~11 g/L, N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS) 1.4~1.8 g/L,其余为纯化水；
所述的R2试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液20~24g/L，过氧化物酶0.12~0.15 g/L，作为表面活性剂II的PEG-6000含量为13~17 g/L，4_氨基安替比林
0.45~0.55 g/L，作为稳定剂的乙二胺四乙酸0.9~1.1 g/L，其余为纯化水。
[0005]本发明用于测定血清小而密低密度脂蛋白胆固醇时，首先制作测定样本，使用含肝素150U/ml、氯化镁90mmol/L、加速剂5mmol/L的前处理液与等体积血清混合,在温度37°C下孵育IOmin,然后直立冰水浴15min,在温度4°C下以1300r/min离心旋转15min后收集上清液作为sdLDL-C直接测定的待测标本；测定标本制作好后，选用两根试管分别作为校准管和样品管，校准管中加入10微升校准液，样品管中加入10微升待测标本，然后在校准管和样品管中各加入本发明所述的Rl试剂240微升混匀，在温度37°C下孵育5分钟，使用全自动生化分析仪在主波长546nm时测定各管的吸光度A1,然后再在校准管和样品管中各加入本发明所述的R2试剂80微升混匀，在温度37°C下孵育5分钟，使用全自动生化分析仪在主波长546nm时测定各管的吸光度A2，可以计算出使用Rl和R2测得的吸光度差值Δ A=A2-A1，血清小而密低密度脂蛋白胆固醇含量就可以通过下述公式计算而得:sdLDL-C(nmol/L)=(A A测定/ Λ A校准)XCs (校准液sdLDL-C溶度)。本发明产品的性能要求:精密度(CV) ≤ 5.0%，灵敏度在医学决定水平浓度下(0.62mmol/L)，试剂与样本反应产生的吸光度值应≥0.01OA0
[0006]使用本发明可以达到以下有益效果:能够使用全自动生化分析仪直接测定血清小而密低密度脂蛋白胆固醇容量，适合临床实验室对小而密低密度脂蛋白胆固醇含量测定的需要。
【具体实施方式】
[0007]下面结合实施例对本发明进行进行详细描述。
[0008]实施例一:
本发明试剂盒的Rl和R2试剂按下 述成分和含量配置:Rl试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液20g/L，过氧化氢酶2.2 g/L,胆固醇氧化酶0.11 g/L,胆固醇酯酶1.2g/L,作为表面活性剂I的PEG-2000含量为9 g/L, N-乙基-N- (2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS) 1.8 g/L，其余为纯化水；所述的R2试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液20g/L，过氧化物酶0.15 g/L,作为表面活性剂II的PEG-6000含量为13g/L，4-氨基安替比林0.45 g/L，作为稳定剂的乙二胺四乙酸1.1 g/L，其余为纯化水。
[0009]使用罗氏P800全自动生化分析仪，测定方法采用两点重点法，主波长采用546nm，定标模式采用线性，反应方向正向上升，首先使用含肝素150U/ml、氯化镁90mmol/L、加速剂5mmol/L的前处理液与等体积血清混合，在温度37°C下孵育lOmin，然后直立冰水浴15min，在温度4°C下以1300r/min离心旋转15min后收集上清液作为sdLDL-C直接测定的待测标本；选用两根试管分别作为校准管和样品管，校准管中加入10微升校准液，样品管中加入10微升待测标本，然后在校准管和样品管中各加入Rl试剂240微升混匀，在温度37°C下孵育5分钟，测定各管的吸光度A1，然后再在校准管和样品管中各加入本发明所述的R2试剂80微升混匀，在温度37°C下孵育5分钟，测定各管的吸光度A2,生化分析仪计算出使用Rl和R2测得的吸光度差值Λ A=A2-A1，并通过下述公式自动计算出血清小而密低密度脂蛋白胆固醇含量:sdLDL-C (1111101/1)=(厶4测定/厶4校准)\(^(校准液8(10^-(:溶度)。重复测10次取平均值，实测结果如下:平均值为0.43鹽01/1，标准差0.0201;根据精密度公式:精密度=标准差/平均值X 100 %，精密度为4.7 %，小于5 %，符合要求。
[0010]实施例二:
本发明试剂盒的Rl和R2试剂按下述成分和含量配置:Rl试剂各成分浓度为:ΡΗ值为
7.0的MOPS缓冲液24g/L，过氧化氢酶1.8 g/L，胆固醇氧化酶0.09 8/1，胆固醇酯酶1.4 g/L，作为表面活性剂I的PEG-2000含量为11 g/L, N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS) 1.4 g/L,其余为纯化水；R2试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液24g/L，过氧化物酶0.12 g/L,作为表面活性剂II的PEG-6000含量为17 g/L, 4-氨基安替比林0.55 g/L，作为稳定剂的乙二胺四乙酸0.9，其余为纯化水。
[0011]使用罗氏P800全自动生化分析仪，测定方法采用两点重点法，主波长采用546nm，定标模式采用线性，反应方向正向上升，首先使用含肝素150U/ml、氯化镁90mmol/L、加速剂5mmol/L的前处理液与等体积血清混合，在温度37°C下孵育lOmin，然后直立冰水浴15min，在温度4°C下以1300r/min离心旋转15min后收集上清液作为sdLDL-C直接测定的待测标本；选用两根试管分别作为校准管和样品管，校准管中加入10微升校准液，样品管中加入10微升待测标本，然后在校准管和样品管中各加入Rl试剂240微升混匀，在温度37°C下孵育5分钟，测定各管的吸光度A1，然后再在校准管和样品管中各加入本发明所述的R2试剂80微升混匀，在温度37°C下孵育5分钟，测定各管的吸光度A2,生化分析仪计算出使用Rl和R2测得的吸光度差值Λ A=A2-A1，并通过下述公式自动计算出血清小而密低密度脂蛋白胆固醇含量:sdLDL-C (nmol/L) = ( Λ A测定/ Λ A校准)XCs (校准液sdLDL-C溶度)。重复测10次取平均值，实测结果如下:平均值为0.56鹽01/1，标准差0.0269;根据精密度公式:精密度=标准差/平均值X 100%，精密度为4.8%，小于5%，符合要求。
[0012]实施例三:
本发明试剂盒的Rl和R2试剂按下述成分和含量配置:Rl试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液22.5g/L，过氧化氢酶2.01 g/L，胆固醇氧化酶0.106 g/L，胆固醇酯酶1.32 g/L,作为表面活性剂I的PEG-2000含量为10 g/L, N-乙基-N- (2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS) 1.65 g/L，其余为纯化水；R2试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液22.5g/L，过氧化物酶0.13 g/L,作为表面活性剂II的PEG-6000含量为15g/L，4-氨基安替比林0.51 g/L，作为稳定剂的乙二胺四乙酸1.0，其余为纯化水。
[0013]使用罗氏P800全自动生化分析仪，测定方法采用两点重点法，主波长采用546nm，定标模式采用线性，反应方向正向上升，首先使用含肝素150U/ml、氯化镁90mmol/L、加速剂5mmol/L的前处理液与等体积血清混合，在温度37°C下孵育lOmin，然后直立冰水浴15min，在温度4°C下以1300r/min离心旋转15min后收集上清液作为sdLDL-C直接测定的待测标本；选用两根试管分别作为校准管和样品管，校准管中加入10微升校准液，样品管中加入10微升待测标本，然后在校准管和样品管中各加入Rl试剂240微升混匀，在温度37°C下孵育5分钟，测定各管的吸光度A1，然后再在校准管和样品管中各加入本发明所述的R2试剂80微升混匀，在温度37°C下孵育5分钟，测定各管的吸光度A2,生化分析仪计算出使用Rl和R2测得的吸光度差值Λ A=A2-A1，并通过下述公式自动计算出血清小而密低密度脂蛋白胆固醇含量:sdLDL-C (nmol/L) = ( Λ A测定/ Λ A校准)XCs (校准液sdLDL-C溶度)。重复测10次取平均值，实测结果如下:平均值为0.58鹽01/1，标准差0.0248;根据精密度公式:精密度=标准差/平均值X 100 %，精密度为4.3 %，小于5 %，符合要求。
【权利要求】
1.小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，包括Rl和R2两种独立液态试剂，其特征是:所述的Rl试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液20~24g/L，过氧化氢酶·1.8~2.2 g/L，胆固醇氧化酶0.09~0.11 g/L，胆固醇酯酶1.2~1.4 g/L，作为表面活性剂I的PEG-2000含量为9~11 g/L, N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)_3_甲基苯胺钠盐(TOOS) 1.4~1.8 g/L，其余为纯化水； 所述的R2试剂各成分浓度为:PH值为7.0的MOPS缓冲液20~24g/L，过氧化物酶·0.12~0.15 g/L，作为表面活性剂II的PEG-6000含量为13~17 g/L，4_氨基安替比林·0.45~0.55 g/L，作为稳定剂的·乙二胺四乙酸0.9~1.1 g/L，其余为纯化水。
【文档编号】C12Q1/44GK103589776SQ201310414650
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年9月12日 优先权日:2013年9月12日
【发明者】石丽萍, 夏春伟 申请人:绍兴圣康生物科技有限公司