A)中加入灭菌注射用水溶解，配制成 lmg/ml的溶液；
[0044] 步骤二：取20 μ 1步骤一中得到的C6-N0TA溶液，加入100 μ 12- [4- (2-羟乙 基）-1_哌嗪]乙磺酸缓冲液和500μ1新鲜淋洗的68Ga (1.5mCi)，100°C反应15min;
[0045] 步骤三：加入15ml水稀释，过C18柱，IOml注射用水冲洗C18,去除杂质，用 0. 3mll0mM氯化氢乙醇溶液淋洗C18柱，收集含有标记物的淋洗液，得0. 945mCi的标记物。
[0046] 采用HPLC法对标记物进行测定。色谱分析柱为C18柱（4. 6 X 250mm)，流动相A为 水(体积分数〇. 1%三氟乙酸（TFA))，流动相B为乙腈(体积分数0. 1%TFA)。分析条件：流速 为 lml/min ;0 ~2minA/B=95/5,32minA/B=35/65,检测波长为 254 和 218nm，放射性检测应 用放射性检测器进行。
[0047] 图1是本发明所涉及的放射性金属元素标记的小分子环肽在实施例中的HPLC图。
[0048] 如图1所示，C6-N0TA-68Ga的放射性出峰时间为19min，放射化学纯度>95%，标记 率为63. 3%。
[0049] 2.体外稳定性测定
[0050] 取标记物用生理盐水稀释，分别测定室温放置2h和4h的放化纯，结果显示， C6-N0TA-68Ga在生理盐水中稳定，放置4h放化纯仍大于95%。
[0051] 3. microPET 显像
[0052] 取荷SK0V-3卵巢癌鼠、PC-3人前列腺癌裸鼠、荷MDA-MB231人乳腺癌裸鼠各2 只，置于MicroPET扫描仪（Inveon;Siemens)上。麻醉后，尾静脉注射0. 2ηι150μ Ci的 68Ga-N0TA-C6,在注射后30min，60min和120min时分别进行PET/CT全身静态显像lOmin， 使用感兴趣区技术（ROI)分析组织摄取值。
[0053] 图2是实施例中放射性金属元素标记的小分子环肽在荷SK0V-3人卵巢癌裸鼠体 内的microPET显像图。
[0054] 图3是实施例中放射性金属元素标记的小分子环肽在荷PC-3人前列腺癌裸鼠体 内的microPET显像图。
[0055] 图4是实施例中放射性金属元素标记的小分子环肽在荷MDA-MB231人乳腺癌裸鼠 体内的microPET显像图。
[0056] 如图2、3、4所示，对于荷SK0V-3人卵巢癌裸鼠、荷PC-3人前列腺癌裸鼠、荷 MDA-MB231人乳腺癌裸鼠三种不同的肿瘤模型，应用C6-N0TA-68Ga进行显像，均可显示肿 瘤。120min时三种肿瘤模型体内的显像剂基本廓清。
[0057] 4.体内分布实验
[0058] 取0. 2ml标记物，加入50ml容量瓶中，加水定容，得到标记物水溶液。取0.1 ml标 记物水溶液加入计数管中测量活度，作为标准。
[0059] 取SKOV荷瘤鼠18只，异氟烷吸入麻醉，分别尾静脉注射0. 74MBq标记物，分别在 注射后30min、60min、以及120min时进行小鼠解剖（每个时间点6只荷瘤鼠)，取肿瘤、心、 肝、脾、肺、肾、肌肉、肠、胃、脑进行称重并测量计数，经放射性衰变校正后，计算各组织摄取 放射性药物剂量（％ID/g)。
[0060] 表1不同时间点肿瘤组织及各脏器对C6-N0TA-68Ga的摄取量
[0062]
[0063] 如表1所示，SK0V-3荷瘤鼠的肿瘤组织摄取高峰在60min，120min时肿瘤组织中的 标记物含量显著减少，说明该标记物代谢较快。60min时肿瘤/血、肿瘤/肌肉分别为3. 74、 3. 99,显示本实施例所提供的C6-N0TA-68Ga靶向性的到达肿瘤。肾脏的C6-N0TA-68Ga摄取 量较高显示本实施例所提供的C6-N0TA- 68Ga主要通过肾脏代谢。
[0064] 5.组织病理学测试和MMP-2免疫组化试验
[0065] 取microPET/CT显像完毕后解剖得到的肿瘤组织，进行病理及MMP-2免疫组化检 测。
[0066] 图5是本发明所涉及的放射性金属元素标记的小分子环肽在实施例中的SK0V-3 卵巢癌的免疫组化染色图。
[0067] 图6是本发明所涉及的放射性金属元素标记的小分子环肽在实施例中的PC-3人 前列腺癌的免疫组化染色图。
[0068] 图7是本发明所涉及的放射性金属元素标记的小分子环肽在实施例中的 MDA-MB231人乳腺癌的免疫组化染色图。
[0069] 如图5,6,7所示，MMP-2在肿瘤组织中呈现高表达。说明C6-N0TA-68Ga靶向高表 达MMP-2的肿瘤组织。
[0070] 实施例的作用与效果
[0071] 本实施例所提供的C6-N0TA_68Ga，分子量小，血液廓清快，活体成像时肿瘤可显示 肿瘤，组织穿透性好，灵敏度高，放化合成过程简单。具有较好的临床应用前景，能够为医药 工作者的后续研究或癌症的诊断提供了较好的依据。
[0072] 由于C6能够特异性的作用于MMP-2,从而使放射性金属元素标记的小分子环肽能 够靶向的到达肿瘤细胞。
[0073] 另外，由于具有68Ga,因此能够用正电子发射断层摄影法（PET)对C6-N0TA_ 68Ga在 生物体内的分布情况进行扫描成像。采用PET进行成像，不仅灵敏度高，结果准确，也可以 无创、动态地检测。并且，能够对深部组织进行定位表达，显像轮廓清晰。
[0074] 另外，由于具有螯合配体Ν0ΤΑ，使得C6-N0TA_68Ga的热力学和动力学稳定性高，在 体内可保持完整，能够更好的显像，同时也使放射性元素更易于标记。
[0075] 当然，本发明所涉及的放射性金属元素标记的小分子环肽并不仅仅局限于上述实 施例中的内容。以上内容仅为本发明构思下的基本说明，而依据本发明的技术方案所作的 任何等效变换，均应属于本发明的保护范围。
[0076] 另外，上述实施例中采用的小分子环肽为C(Kahwgftld)Nh2，本发明所涉及的 c (X1HWGFtlx2)还可以为 c (KTAHWGFTLD) NH2。
[0077] 另外，上述实施例采用NOTA作为螯合配体，本发明所涉及的螯合配体还可以为 DOTA。
[0078] 另外，本发明所涉及的放射性金属元素标记的小分子环肽，还可以为 C(X1Hwgftlx2)NH-Y-Z的医学上可以接受的盐。
[0079] 另外，上述实施例中放射性金属元素标记的小分子环肽采用生理盐水为载体，进 行生物体显像，本发明所涉及的放射性卤素标记的小分子环肽还可以选自其它医学上可以 接受的载体，载体可以为药用辅料，也可以为药用溶剂。
[0080] 另外，本发明所提供的放射性金属元素标记的小分子环肽，除了能够用作肿瘤显 像剂对肿瘤进行显像外，还可以用作其它MMP-2高表达的受体的显像剂，如用作动脉粥样 硬化斑块显像剂对动脉粥样硬化斑块的进行显像。
【主权项】
1. 放射性金属元素标记的小分子环肽，其特征在于，为式（I)所示的化合物： C(X1HWGFTLx2)-Y-Z (I) C (X1HWGFTLx2)为8-10个氨基酸的结合所形成的环肽，X1和X2均为至少一个氨基酸基 团； Y为螯合配体； Z为68Ga,与所述Y螯合， 其中，所述环肽上含有游离氨基，所述游离氨基与所述Y配合。2. 根据权利要求1所述的放射性金属元素标记的小分子环肽，其特征在于： 其中，所述C(X1HWGFTLx2)为C(KAHWGFTLD) NH2。3. 根据权利要求1所述的放射性金属元素标记的小分子环肽，其特征在于： 其中，所述Y为1，4, 7-三氮环壬烷-1，4, 7-三乙酸或1，4, 7, 10-四氮杂环十二 烷-1，4, 7, 10-四羧酸。4. 一种组合物，其特征在于：包括如权利要求1~3中任意一项所述的放射性金属元 素标记的小分子环肽和医学上可接受的载体。5. 如权利要求1~3中任意一项所述的放射性金属元素标记的小分子环肽作为肿瘤显 像剂的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种放射性金属元素标记的小分子环肽，其特征在于，为式（I）所示的化合物：c(X1HWGFTLX2)-Y-Z（I），其中，c(X1HWGFTLX2)为8-10个氨基酸的结合所形成的环肽，X1和X2均为至少一个氨基酸基团；Y为螯合配体；Z为68Ga，与Y螯合，其中，环肽上含有游离氨基，游离氨基与Y配合。本发明还提供了含有该小分子环肽的组合物及该小分子环肽作为肿瘤显像剂的应用。根据本发明提供的c(X1HWGFTLX2)-Y-Z，分子量小，血液廓清快，组织摄取量高，穿透性好，灵敏度高，放化合成过程简单，具有较好的临床应用前景，能够为医药工作者的后续研究或临床诊断提供了较好的依据。
【IPC分类】A61K103/00, C07K7/56, A61K51/08
【公开号】CN104945486
【申请号】CN201410124083
【发明人】刘庆华, 杨敏, 张大志, 程超, 潘栋辉, 左长京, 张桉榆, 王立振, 徐宇平, 杨润琳, 陈飞
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2014年3月28日