;0,琼脂16g，高压蒸气灭菌20min。
[0044] 下述实施例中，甜菜根腐病W整株为单位进行调查，病害分级标准如下：
[0045] 0级；块根生长正常、完好；
[0046] 1级；块尾及根表组织有轻微病变，病变尚未侵及根体内组织；
[0047] 2级；根尾及根表组织有明显病变，维管束呈褐色，但尚未木质化；
[0048] 3级：维管束呈深褐色，导管木质化，生育严重受阻，病根有部分早开始腐烂，腐烂 部分占块根的10%W下；
[0049] 4级；腐烂部分占块根的10%~30% (不包括10% );
[0化0] 5级：块根腐烂部分占块根的30%W上（不包括30%)或全株因病枯死。
[0化1] 病情指数=[S(病根数X相对应级数值）/(调查总根数X最高级）]X100
[0化2] 防治效果（％ ) = [(对照区病情指数-处理区病情指数）/对照区病情指 数]X100
[0053] 实施例1、蜡状芽抱杆菌炬acillus cereus)LHTYBACGMCCNo. 7566的分离鉴定
[0054] 1、样品采集；采集样品为甜菜根内和根际±壤，地点为黑龙江省伦河市。
[0化5] 2、分离方法；将甜菜块根上大部分±抖落，用毛刷取Ig粘附在甜菜表面的根际± 壤放入已灭菌的装有9mL无菌水的试管中，充分振荡2min，取ImL稀释液加入含9mL无菌 水的试管中，混合均匀后梯度稀释至1(T5浓度，分别取l(T3、l(r4和1(T5浓度的稀释液lOOuL 涂牛肉膏平板、TSA平板和PDA平板，30°C下培养3天后，挑取不同的单菌落，纯化后进行转 管并保存于4°C。
[0056] 3.生防菌的生物活性测定和生防相关物质检测：
[0057] 3. 1生防菌平板括抗实验
[005引在PDA平板上活化，将甜菜根腐病菌作为祀标菌，用5mm的打孔器在根腐病菌平板 上打成5mm的菌饼。用平板对時法检测分离菌株的括抗效果，在PDA平板中屯、接种直径为 5mm的甜菜根腐病菌菌饼，待测菌株接种于距祀标菌饼3cm处，28°C恒温箱中培养4~5天， 待空白对照（未接种待测菌株，仅接种祀标菌）长满整个培养皿时，测量祀标菌的对照生长 量（W未接种待测菌株的平板中祀标菌的菌落半径表示）和处理生长量（W接种待测菌株 的平板中祀标菌的菌落半径表示），用抑制率表示，选出括抗效果明显的细菌进行促生试验 及温室防病试验。每个处理=个重复，每次重复3个平板。
[0059] 抑制率（％ )=(对照生长量一处理生长量）/对照生长量X 100%
[0060] 3. 2生防相关物质的检测
[0061] 3. 2.1蛋白酶的检测
[0062] 将活化的待测菌株穿刺接种于1%脱脂牛奶琼脂平板上，30°C培养24、48、7化后 观察菌落外围透明圈的产生，出现透明圈表明有蛋白酶的产生。每个处理S个重复（Schwyn etal. , 1987) 〇
[0063] 3. 2. 2几了质酶的检测
[0064] 几了质酶用胶体几了质培养基检测，将活化的待测菌株接种于几了质酶检测培养 基平板上，30°C培养24、48、7化后观察菌落外围透明圈的产生情况，若出现透明圈则表明 有几了质酶的产生，每个处理S个重复化eimmannetal.,1997)。
[00化]3. 2. 3葡聚糖酶检测
[0066] 待测菌株接种于含ABP培养基（ABP培养基：用研鉢将块状巧等研碎成粉状，使其 可通过120目的筛子，取K&PCM6. 8g，K2HPO4? 12&0 17. 9g，酵母提取物6. 7g，巧等粉或 0-1，3-葡聚糖5.〇径，苯胺藍12〇111径，琼脂粉12径，用水定容至比，抑值为6.8)的平板中， 30°C培养48、7化后，观察平板中是否出现消解圈，若有消解圈产生则表明有葡聚糖酶的产 生，每个处理S个重复（Cattelanetal.,1999)。
[0067] 3. 2. 4嗜铁素检测
[0068] 嗜铁素用CAS培养基检测，将活化的待测菌接种于CAS检测培养基平板上，30°C培 养7化后，观察平板中是否产生橘黄色晕圈，若出现橘黄色则表明有嗜铁素的产生，每个处 理S个重复（Schwyn,Neilands, 1987;Machucaetal. , 2003)。
[0069] 结果表明筛选出的编号为LHTYBA的菌株的抑菌谱如表1所示，表明菌株LHTYBA 对立枯丝核菌和尖抱镶刀菌均有抑制作用，将该个菌株作为生防菌进行步骤4的温室生防 效果实验。
[0070] 表1生防菌的抑菌谱
[0071]
[0072] 注；表中的实验数据为S次重复的平均值；"+ "表示有相应的物质产生，表示 无相应的物质产生。
[0073] 4、生防菌菌株的温室生防效果实验
[0074] 菌株LHTYBA，W菌株LHTXYB为对照，一同进行下述实验。
[0075] 生防菌菌液的制备；将菌株LHTYBA和LHTXra分别单独接种至LB液体培养基中于 30°C，16化pm培养60小时，待芽抱生长整齐，300化pm离屯、收集菌体，加入无菌水制成菌液。 用血球计数板计数，计算出浓度。4°C暂存备用。
[0076] 立枯丝核菌麦粒培养物的制备：在500mlS角瓶中加入lOOg麦粒，再倒入200mL 去离子水，混匀后两次灭菌，121°C，20min。取10个5mm的甜菜根腐病菌一立枯丝核菌菌饼 接种到=角瓶中，30°C恒温培养两周，每天振荡=次，得到立枯丝核菌麦粒培养物。
[0077] 实验设S种处理；生防菌LHTYBA处理、生防菌LHTXYB处理和对照。具体实验方 法如下：甜菜甜单302 (中国农业科学院甜菜研究所育成）种子表面消毒6min，无菌水清洗 4次，蒸馈水浸泡2化催芽，分成S组分别进行如下处理；生防菌LHTYBA处理用LHTYBA菌 液（浓度为1. 0X108c化/ml)浸泡种子6min，生防菌LHTXYB处理用LHTXYB菌液（浓度为 1. 0X108c化/ml)浸泡种子6min，对照用自来水浸泡6min;每盆播种一种处理的20-30颗种 子；诱水，一周后统一甜菜数量，每盆8棵；一周后分别进行如下处理；生防菌LHTYBA处理 用LHTYBA菌液（浓度为1. 0X108cfu/ml)灌根，每盆20ml，生防菌LHTXYB处理用LHTXYB 菌液（浓度为l.〇Xl〇8c化/ml)灌根每盆20ml，对照用清水灌根，每盆20ml。两天后各处 理每盆接种立枯丝核菌（立枯丝核菌麦粒培养物惊干，礙碎后与灭菌±按1:10的体积比 混匀，表面覆盖一层后诱15ml自来水保湿）。一个处理设=个重复，每个重复3盆。培养9 天后全部调查死苗数，根据死苗数/实验苗数计算死苗率。结果表明，只接种立枯丝核菌不 接种生防菌的对照的死苗率平均为84. 7%，接种菌株LHTYBA菌液和立枯丝核菌的生防菌 LHTYBA处理的死苗率平均为12. 5%，接种菌株LHTXYB菌液和立枯丝核菌的生防菌LHTXYB 处理的死苗率平均为29. 1 %。说明菌株LHTYBA和LHTXra对立枯丝核菌具有抑制作用，菌 株LHTYBA对立枯丝核菌的抑制作用是LHTXra的2. 3倍。
[007引 5、菌株LHTYBA的分类鉴定
[0079] 5.1Biolog鉴定
[0080] Biolog微生物鉴定系统主要是根据微生物对不同碳源的利用情况，检测微生物细 胞利用不同碳源进行新陈代谢过程中产生的不同物质，对微生物进行快速、准确的分类鉴 定。
[OOW] BUG平板；57g BUG琼脂培养基用水定容至比，煮沸溶解，冷却后调整抑值至7. 3(25°C)，121°C灭菌15分钟，冷却至45-50°C，倒平板。
[0082] 全自动微生物鉴定仪：美国biolog公司。
[0083] (1)单菌落在BUG平板上活化
[0084] (2)无菌棉签薩湿后粘取菌体，不要带上培养基。
[0085] (3)棉签接触管壁转动，使菌体粘附在培养液上方内壁。
[0086] (4)用接种液将菌体从管壁上冲下，分散。
[0087] 妨调整浊度。
[008引 （6)将培养好的培养物倒入加样槽，用八道电动移液枪吸取加入到96孔板中，每 小孔150yL30°C条件下培养16~2化。
[0089] (7)读取结果与数据库中的菌株比较，确定分类地位（程池等，2006)。
[0090] 读数仪根据细菌对碳源的利用情况不同，产生不同的代谢产物引起鉴定板中不同 的颜色反应，通过和数据库中其它细菌的比对，对细菌进行