一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种海蜇糖蛋白的制备方法，尤其是一种经过多级膜系统分离纯化的糖蛋白的方法。
【背景技术】
[0002]海蜇，为海生肛肠动物，产于我国沿海各地。按产地分，有南蜇、东蜇、北蜇等品种，以福建、浙江所产最好。调查显示，21世纪头三年福建沿海海蜇年渔获量都在1000t以上。海蜇营养极为丰富，其体内含有较多的蛋白质及钙、磷、碘、铁等无机盐，素有“水产瑰宝”之美称。海蜇不仅可以食用，还是一味治病良药。《本草纲目》中所述，海蜇有清热解毒、化痰软坚、降压消肿等功效，对气管炎、哮喘、高血压、胃溃疡等症均有疗效。因此，海蜇作为一种医食同源的大型生物，其有着重要的经济和食用价值。
[0003]大量文献资料报道，海蜇活性肽及活性糖蛋白的分离纯化方法，大都采用提取后醇沉、离心的方法，杂质较多，分子量分布广泛，因而存在提取过程繁琐，成本较高，分子量不明确等问题。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种工序简单，易于实现工业化生产的多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，可获得含量> 80.0%，分子量约为26kD，具有明显的抑制ACE酶活性及抑制溶壁微球菌的作用的海蜇糖蛋白。
[0005]为实现上述目的，本发明的解决方案是:
一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其步骤包括:
(1)原料的处理:选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜；
(2)提取:处理后的原料装入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W: V为1:1-1:5，温度控制25-75°C，搅拌提取、离心取上清；
(3)分离纯化:上清液采用多级膜系统处理，除去大分子量及小分子量杂质，得到目标糖蛋白浓缩液；
(4)干燥:对糖蛋白浓缩液进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。
[0006]所述步骤2是搅拌提取2-7h，以4000-14000rpm的转速离心取上清。
[0007]所述步骤4是采用喷雾干燥的方式对糖蛋白浓缩液进行干燥。
[0008]所述步骤3进一步在糖蛋白浓缩液加入乙醇配置成乙醇溶液，冷藏静置，离心，得到分子量约为26kD的糖蛋白固体。
[0009]所述步骤3是加入乙醇配置成50%_75%的乙醇溶液，4_15°C冷藏静置，以转速为8000-10000rpm 离心。
[0010]所述步骤4是采用冷冻干燥的方式对糖蛋白糖蛋白固体进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。
[0011]所述步骤3中多极膜系统包括顺次连接的膜过滤单元，每个膜过滤单元包括一个膜过滤器，沿物料过滤方向，膜过滤器的膜孔径逐级升高或降低；膜过滤器的入口端经栗连接有大物料罐，膜过滤器的出口端为取样口。
[0012]采用上述方案后，本发明可绿色高效的分离纯化海蜇活性糖蛋白，可除去无活性的大分子及小分子杂质，提高了糖蛋白样品的生物活性，为开发高附加值的海蜇产品提供有效方法，为医药、功能性食品、化妆品等方面的应用提供了技术基础。
[0013]本发明制备的海蜇糖蛋白具有明显的抑制ACE酶活性及抑制溶壁微球菌的作用。这种糖蛋白具有明显的降压及抑菌活性。
[0014]本发明采用多级膜系统分离纯化，除去大分子及小分子杂质，锁定活性分子片段，提高了海蜇的生物利用活性，且测定了此片段物质为糖蛋白。并且多级膜系统操作方便、绿色环保、经济高效，利于实现工业化生产。
【具体实施方式】
[0015]下面结合具体实施例对本发明做进一步的阐述。
[0016]本发明揭示了一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，包含以下步骤:
(1)原料的处理:选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜；
(2)提取:处理后的海蜇糜原料装入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W:V为1:1-1:5，温度控制25-75°C，搅拌提取2_7h，4000-14000rmp离心取上清；
(3)分离纯化:上清液采用多级膜系统处理，此多极膜系统包括顺次连接的膜过滤单元，每个膜过滤单元包括一个膜过滤器，沿物料过滤方向，膜过滤器的膜孔径逐级升高或降低；膜过滤器的入口端经栗连接有大物料罐，膜过滤器的出口端为取样口，经过去杂浓缩得到目标糖蛋白浓缩液，加入乙醇配置成75%乙醇溶液，4-15°C冷藏静置，8000-10000rpm离心10-20min，得到分子量约为26kD的糖蛋白固体；
(4)干燥:采用冷冻干燥的方法对糖蛋白固体进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末；所述的冷冻干操作为常规操作，可在任意型号的冻干机中进行。
[0017]当然，如果步骤3中不添加乙醇时，是采用喷雾干燥的方式对糖蛋白溶液进行干燥得到目标糖蛋白粉末。
[0018]经检测糖蛋白粉末含量> 80.0%，糖含量> 15.6%，蛋白质含量> 65.9%，此糖蛋白具有明显的降压活性及抑菌活性，对体外ACE酶具有明显的抑制作用，以及能够有效抑制溶壁微球菌。本发明采用多级膜系统分离纯化活性糖蛋白，操作简单、绿色高效，易于实现规模化生产，产物活性高，提高了海蜇的生物利用率。
[0019]实施例一:
称取新鲜海蜇绞碎液5kg，加入0.3% NaCl溶液10L，搅拌机再次绞碎匀浆至无明显颗粒感，装入50L反应釜中，再次加入0.3% NaCl溶液15L，控温35°C，搅拌提取4h，取出送入离心机中，1000rmp离心取上清液；上清液采用多级膜系统除杂浓缩，得到目标糖蛋白溶液，加入乙醇配置成75%的乙醇溶液，4-15°C冷藏静置，8000rpm离心lOmin，冷冻干燥得到分子量约为26kD的糖蛋白粉末。
[0020]实施例二: 称取新鲜海蜇绞碎液5kg，加入0.5%的NaCl溶液10L，搅拌机再次绞碎匀浆成糜，装入50L反应釜中，再次加入0.5% NaCl溶液15L，控温35°C，搅拌提取4h，取出送入离心机中，1000rmp离心取上清液；上清液采用多级膜系统除杂浓缩，得到目标糖蛋白浓缩液，加入95%乙醇至乙醇含量达到75%，4-15°C冷藏静置2h，1000rmp离心取沉淀，采用冷冻干燥的方式干燥沉淀，得到分子量约为26kD的糖蛋白粉末。
[0021]实施例三:
称取新鲜海蜇绞碎液5kg，加入0.5%的NaCl溶液10L，搅拌机再次绞碎匀浆至细度Imm以下，装入50L反应釜中，再次加入0.5% NaCl溶液15L，室温25°C搅拌提取7h，取出送入离心机中，1000rmp离心取上清液；上清液采用多级膜系统除杂浓缩，得到分子量约为26kD的糖蛋白溶液，采用喷雾干燥的方式得到目标糖蛋白粉末。
[0022]实施例四:
盐渍海蜇脱盐后，称取匀浆液5kg，加入0.9% NaCl溶液30L，装入50L反应釜中，控温40°C，搅拌提取5h，取出送入离心机中，1000rmp离心取上清液；上清液采用多级膜系统除杂浓缩，得到分子量约为26KD的糖蛋白浓缩液，加入乙醇至乙醇含量达到85%，4-15°C冷藏静置2h，1000rmp离心取沉淀，采用冷冻干燥的方式干燥沉淀，得到分子量约为26kD的糖蛋白O
[0023]以上所述，仅是本发明实施例而已，并非对本发明的技术范围作任何限制，故凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
【主权项】
1.一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其包括以下步骤: (1)原料的处理:选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜； (2)提取:处理后的原料装入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W: V为1:1-1:5，温度控制25-75°C，搅拌提取、离心取上清； (3)分离纯化:上清液采用多级膜系统处理，除去大分子量及小分子量杂质，得到目标糖蛋白浓缩液； (4)干燥:对糖蛋白浓缩液进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。2.如权利要求1所述的一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其特征在于:所述步骤2是搅拌提取2-7h，以4000-14000rpm的转速离心取上清。3.如权利要求1或2所述的一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其特征在于:所述步骤4是采用喷雾干燥的方式对糖蛋白浓缩液进行干燥。4.如权利要求1或2所述的一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其特征在于:所述步骤3进一步在糖蛋白浓缩液加入乙醇配置成乙醇溶液，冷藏静置，离心，得到分子量约为26kD的糖蛋白固体。5.如权利要求3所述的一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其特征在于:所述步骤3是加入乙醇配置成50%-75%的乙醇溶液，4-15°C冷藏静置，以转速为8000-10000rpm 离心。6.如权利要求3所述的一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其特征在于:所述步骤4是采用冷冻干燥的方式对糖蛋白糖蛋白固体进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。7.如权利要求1所述的一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其特征在于:所述步骤3中多极膜系统包括顺次连接的膜过滤单元，每个膜过滤单元包括一个膜过滤器，沿物料过滤方向，膜过滤器的膜孔径逐级升高或降低；膜过滤器的入口端经栗连接有大物料罐，膜过滤器的出口端为取样口。
【专利摘要】本发明公开了一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，取新鲜海蜇或盐渍海蜇组织捣碎，匀浆机搅拌成糜，加入NaCl溶液搅拌提取数小时，离心取上清，上清液经过多级膜系统处理，得到目标糖蛋白浓缩液，加入乙醇配置成乙醇溶液，冷藏静置，离心得到沉淀，冷冻干燥沉淀，得到分子量约为26kD的糖蛋白粉末。经检测糖蛋白含量＞80.0%，糖含量＞15.6%，蛋白质含量＞65.9%。此糖蛋白具有明显的降压活性及抑菌活性，对体外ACE酶具有明显的抑制作用，并且能够有效抑制溶壁微球菌。本发明采用多级膜系统分离纯化活性糖蛋白，操作简单、绿色高效，易于实现规模化生产，产物活性高，提高了海蜇的生物利用率。
【IPC分类】C07K1/14, C07K1/34
【公开号】CN105037486
【申请号】CN201510479968
【发明人】黄文文, 易瑞灶, 洪碧红, 孙继鹏
【申请人】国家海洋局第三海洋研究所
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年8月7日