为序列同一性），更优选地，与SEQIDNO: 1和/或SEQIDN0:2所示的氨基酸序列至 少约90 %至95 %的同源性，常为96 %、97 %、98 %、99 %同源性的氨基酸序列构成的多肽。
[0047] 在本发明的具体实施方案中，所述P19/Ebi3复合物是具有SEQIDN0:1和/或 SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的蛋白质。
[0048] 通常，已知的是，一个蛋白质中一个或多个氨基酸的修饰不会影响蛋白质的功能。 本领域技术人员会认可改变单个氨基酸或小百分比的氨基酸或对氨基酸序列的个别添加、 缺失、插入、替换是保守修饰，其中蛋白质的改变产生具有相似功能的蛋白质。提供功能相 似的氨基酸的保守替换表是本领域公知的。
[0049] 通过添加一个氨基酸或多个氨基酸残基修饰的蛋白质，只要所得的蛋白保留P19/ Ebi3复合物的生物学活性即可。
[0050] 本发明的P19/Ebi3复合物也包括对SEQIDNO: 1和/或SEQIDNO:2所示的氨 基酸序列的非保守修饰，只要经过修饰的蛋白质仍然能够保留P19/Ebi3复合物的生物学 活性即可。在此类修饰蛋白质中突变的氨基酸数目通常是10个或者更少，例如6个或者更 少，例如3个或者更少。
[0051] 本发明的优点和有益效果：
[0052] 本发明首次发现了P19/Ebi3复合物及其与系统性红斑狼疮的关系，通过检测受 试者中P19/Ebi3复合物的水平，可以判断其是否患有系统性红斑狼疮，从而指导从而指导 临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。
[0053] 本发明发现了P19/Ebi3复合物特异性抗体可以治疗系统性红斑狼疮，相比现有 的治疗手段，该方法准确性高、副作用低，有利于实现治愈系统性红斑狼疮和/或在长期基 础上改善患者的生活品质的病因性治疗。
【附图说明】
[0054] 图1显示IL-12家族分子亚基配对情况；
[0055] 图2显示了人IL-12家族细胞因子亚基P19和Ebi3可组成复合物；
[0056] 图3显示了小鼠IL-12家族细胞因子亚基P19和Ebi3可组成P19/Ebi3复合物； 图4显示了小鼠P19/Ebi3复合物的纯化和质谱鉴定；左图显示了纯化蛋白的考马斯亮蓝染 色；右图显示了纯化蛋白的质谱分析；
[0057] 图5显示了小鼠P19/Ebi3复合物生物活性研究；左图免疫印迹分析了纯化 的Ebi3-Flag/P19-His能刺激B细胞中STATl的磷酸化；右图免疫印迹分析了纯化的 Ebi3-Flag/P19-His能刺激B细胞中STAT3的磷酸化；
[0058] 图6显示了LPS活化的B细胞高表达P19/Ebi3 ;
[0059] 图7显示了LPS活化的B细胞分泌高水平的P19/Ebi3;左图显示了使用ELISA方 法检测LPS刺激的B细胞分泌抗体的情况；右图显示了使用双抗夹心ELISA方法检测LPS 刺激的B细胞分泌抗体的情况；
[0060] 图8显示了向浆细胞分化（GL7+)的B细胞高表达P19/Ebi3 ;
[0061 ] 图9显示了SLE小鼠模型中向浆细胞分化（GL7+)的B细胞和（⑶138+)细胞高表 达P19/Ebi3;
[0062]图10显示了P19/Ebi3多克隆抗体的鉴定；
[0063] 图11显示了抗P19/Ebi3多克隆抗体降低系统性红斑狼疮小鼠尿蛋白；
[0064] 图12显示了抗P19/Ebi3多克隆抗体降低系统性红斑狼疮小鼠脾肿大；
[0065] 图13显示了抗P19/Ebi3多克隆抗体降低系统性红斑狼疮小鼠抗体水平；
[0066] 图14显示了抗P19/Ebi3多克隆抗体降低系统性红斑狼疮小鼠淋巴细胞数目。
[0067] 具体的实施方式
[0068] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。本发明的实施例仅用于解 释本发明而不用于限制本发明的范围。
[0069] 下述实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等 人，分子克隆：实验室手册（NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress, 1989)中所述的 条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0070] 下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0071] 实施例1人IL-12家族细胞因子亚基P19和Ebi3可组成P19/Ebi3复合物
[0072] -、材料
[0073] 人Ebi3蛋白购自Origene公司（货号TP723769)、人P19蛋白购自Origene公司 (货号TP309680)、抗Ebi3抗体购自SantaCruzBiotech公司（货号sc-32869)、抗P40抗 体购自SantaCruzBiotech公司（货号sc-7926)、抗P19抗体购自SantaCruzBiotech公司 (货号sc-50303)、抗c-Jun抗体购自SantaCruzBiotech公司（货号sc-44)
[0074] 二、方法
[0075]1、免疫沉淀
[0076]I)Agrose-proteinA/G清洗：取 60yIAgrose-proteinA/G到EP管中（剪枪头）， 加入500y1预冷的PBS，4°C、5000rpm离心2min(洗两遍）。
[0077] 2)抗体和Agrose-proteinA/G预孵育：将Iyg抗Ebi3抗体、抗p40抗体、抗P19 抗体、抗c-Jun抗体分别加入到洗好的15yIAgrose-proteinA/G中，4°C翻转lh。
[0078]3)将5ng/ml人Ebi3蛋白与5ng/ml人P19蛋白在PBS中混匀。
[0079] 4)将Iyg抗Ebi3抗体、抗P40抗体、抗P19抗体、抗c-Jun抗体分别与30y1 proteinA/G-beads加入到步骤3)所述的混合液中，4°C缓慢摇晃孵育过夜。
[0080] 5)抗原抗体孵育：步骤4)后进行离心（5000rpm，2min)，将Ebi3抗体、P40抗体、 P19抗体、c-Jun抗体分别加入到含预孵育好的相应抗体和Agrose-proteinA/G的EP管中， 4°C孵育过夜。
[0081] 6)洗IP复合物：5000rpm，离心2min，吸掉上清，加入IP裂解液（一般不用加抑制 剂）500y1，弹匀后4°C摇转5min，重复6次。
[0082]7)加入SDS60yl检测。
[0083]2、免疫印迹分析
[0084] 1)配胶
[0085] 表1 10%分离胶和4%浓缩胶
[0086]
[0087] 加TEMED后，立即混匀即可灌胶。
[0088] 先用Iml枪头小心铺10%分离胶，上加少许异丙醇，待分离胶干凝后，盗取异丙 醇，用水洗去多余未聚合的胶，滤纸吸干。再铺4%浓缩胶，注意不要产生气泡，斜插上梳子， 待胶干后备用，拔去梳子。
[0089]2)上样
[0090] 取出上样样品至0. 5ml离心管中。加入5XSDS上样缓冲液至终浓度为1XSDS。 (上样总体积一般不超过15y1，加样孔的最大限度为20y1样品）。上样前要将样品于沸 水中煮5min使蛋白变性。
[0091] 加足够的电泳液开始准备上样。用微量加样器贴壁吸取样品，注意不要产生气泡。 将加样器针头插至加样孔缓慢加入样品。加入下一个样品时，进样器需在外槽电泳缓冲液 中洗涤3次，以免交叉污染。
[0092] 3)电泳
[0093] 100V，溴酚兰走到分离胶底部后，约I. 5h后电泳结束。
[0094] 4)转膜
[0095] 小心取下凝胶，把预先在转膜缓冲液中平衡过的滤纸及硝酸纤维素膜切成与凝胶 同样大小，按次序叠放在一起，在4°CUOOV电压转膜lh，取出硝酸纤维素膜，用IX立春红 染液染5min(于脱色摇床上摇）。然后用TBST漂洗至膜发白。
[0096] 5)封闭
[0097] 称取脱脂奶粉lg，用IXTBS溶解到20ml，使脱脂奶粉浓度为5%。将硝酸纤维膜 浸在20ml封闭液中，室温摇2h。
[0098] 6) -抗杂交孵育
[0099] 将一抗用含5%脱脂奶粉的IXTBS溶液稀释，使抗体浓度为1:1000 ;将封闭过的 膜放在一抗稀释液中，4°C过夜；而后吸弃一抗稀释液，用IXTBST洗3次，每次5min。
[0100] 7)二抗杂交孵育
[0101] 将辣根过氧化物酶连接的二抗用含5%脱脂奶粉的IXTBS溶液稀释，使浓度为 1:2000,并加入辣根过氧化物酶连接的抗生物素抗体（浓度为1:1000)，将膜置于二抗稀释 液中，室温振荡孵育Ih;而后吸弃二抗稀释液，用IXTBST洗3次，每次5min。
[0102] 8)显影
[0103] 将膜置入IOmlLumiGLO溶液中（配方：0? 5ml20XLumiGL0、0. 5ml 20XPeroxide、9.OmlMilli-Qwater)，室温轻摇lmin，注意避光操作；在暗室中剪下与膜同 样大小的胶片，压在暗盒中，约Imin;将胶片放在显影液中饭洗l-5min;水冲洗；定影液中 洗2-5min;水冲洗，可在相应位置见到目的条带。
[0104]9)凝胶图像分析
[0105] 将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图像处理系统分析目标带的分子量和净光密度 值。
[0106] 三、结果
[0107] 实验结果如图2所示，免疫印迹分析发现，人IL-12家族细胞因子亚基P19和Ebi3 可组成P19/Ebi3复合物。
[0108] 实施例2小鼠IL-12家族细胞因