具有诱导抗性活性的细菌及其培养方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物菌株领域，具体涉及一种具有诱导抗性活性的细菌及其培养方法 和应用。
【背景技术】
[0002] 植物寄生线虫在世界上许多国家和地区发生和为害，种类多种多样。在全球范 围内，植物寄生线虫的发生与危害随着农林业的发展和耕作栽培制度的变化日益严重，据 Esser统计，到1990年为止全世界已报道发现植物寄生线虫207属4832种（刘维志，段玉 玺.2000.植物病原线虫学.北京：中国农业出版社，pl-2)。据估计，植物寄生线虫造成世 界主要农作物的年损失率为12. 3%，超过1000亿美元，而实际的损失远远超过估计，理由 是许多线虫造成的危害因没有田间可见症状或专化性特征而未引起注意（王寿华.果树线 虫学.北京：中国农业科技出版社，1994.P. 1-5)，此外，世界范围内对线虫为害的新发现还 在不断增加，而且一些更新的农业栽培体制使线虫问题更加突出，再者，线虫与其它生物相 互作用而对植物产生的直接或间接影响还在急剧增加。从这种意义上说，线虫造成的危害 较其它生物更加隐蔽！目前对植物有害的线虫约有3000多种，在我国主要有胞囊线虫、根 结线虫、松材线虫、甘薯茎线虫等。胞囊线虫是农业上为害最大的一类线虫，病害发生后，一 般减产10 %左右，严重的高达75 %以上，甚至绝收（A.G.Whitehead，1998.PlantNematode Control.ISBN0851991882CABInternational)。目前，植物寄生线虫的防治仍以化学防治 为主，但近年来，化学杀线剂的应用浪费大，污染环境，选择性差，灭生性强，破坏土壤生物 区系等弊端日益为人们所重视（张克勤，何世川，周薇等.1991.细菌和细菌在线虫生防中 的作用及其研究进展.杀虫微生物.3 :55-66)，21世纪称为环保世纪，一些有效的化学杀 线剂的应用逐步受到限制，因此对植物寄生线虫的生物防治研究自然成为热点问题。已报 道的可防治植物寄生线虫的生防细菌主要类群有：Bacillius，Pseudomonas，Acinebacter， Chromobacterium，Enterobacter，Serratia，Burkholderia等，其中以Bacillus和 Pseudomonas中的种类最多。
【发明内容】
[0003] 针对上述问题，本发明通过系统筛选获得通过系统筛选获得一株细菌，利用该菌 或该菌的代谢产物处理大豆种子，可诱导大豆在种子萌发和生长期间产生对大豆胞囊线虫 的抗性，从而解决了大豆根部病害的问题。
[0004] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
[0005] -种具有诱导抗性活性的细菌，所述细菌为EnterobactercloacaeSneb572,保 藏号为CGMCCNo. 10801，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地 址：中国.北京.朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年5月11日；Sneb572是 从大量土壤细菌菌株中筛选出的一株对大豆胞囊线虫具有良好诱导抗性的细菌菌株。
[0006] 上述一种具有诱导抗性活性的细菌的培养方法，包括如下步骤：
[0007] S1、按质量百分比称取酵母浸膏0. 1% -0.2%、蛋白胨0.5% -0.6%、牛肉浸膏 0. 3% -0. 4%、蔗糖1% -2%，余下为蒸馏水混合后，得液体发酵培养基；
[0008] S2、将步骤S1所得的液体培养基按每瓶150mL的比例分装于250mL的三角瓶 内，分装完成后将上述菌株接种于液体培养基上，PH6. 8-7. 0,温度25-28°C，摇床转速 150r?min\ 发酵 2-3d。
[0009] 上述具有诱导抗性活性的细菌可用于植物寄生线虫的生物防治。
[0010] 上述具有诱导抗性活性的细菌可用于制备大豆种子处理剂，所述大豆种子处理剂 包含有效量的阴沟肠杆菌（E.cloacae)或其代谢物。
[0011] 其中，所述的植物寄生线虫为胞囊线虫（Soybeancystnematode)。
[0012] 液体发酵的菌种可以通过大型发酵罐进行规模生产，其产品为发酵液或发酵液的 制成品
[0013] 本发明具有以下有益效果：
[0014] 本发明的阴沟肠杆菌（E.cloacae)Sneb572或其代谢物具有对大豆的诱导活性， 可用于大豆的种子处理，不仅可促进大豆植株和根部的生长，同时对大豆胞囊线虫胞囊的 形成具有很大的抑制作用，解决了大豆胞囊线虫防治的难题。
【具体实施方式】
[0015] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发 明。
[0016] 实施例1
[0017] 将阴沟肠杆菌（E.cloacae)Sneb572的菌株接种到试管培养基上，培养基配方 为牛肉膏蛋白胨培养基，即成分：牛肉浸膏3g，酵母浸膏lg，蛋白胨10g，鹿糖10g，琼脂 17-20g，加蒸馏水至1000mL。28°C培养3d，获得试管种。
[0018] 再将试管种接种到250mL三角瓶（每瓶装150mL)液体培养基中，培养基配方为： 以重量百分比计，酵母浸膏〇. 1% _〇. 2%、蛋白胨0. 5% -0.6%、牛肉浸膏0. 3% -0.4%、蔗 糖1% -2%，余下为蒸馏水，pH为6. 8-7. 0,发酵温度为25-28°C，摇床转速150r?min\发 酵时间2-3d。形成的发酵液或发酵液的制成品可以直接或间接处理大豆种子。被处理的大 豆种子可以减轻由大豆胞囊线虫病害所造成的危害。
[0019] 实施例2
[0020] 阴沟肠杆菌（E.cloacae)Sneb572发酵产品防治大豆胞囊线虫田间效果试验
[0021] 本试验分别在辽宁省沈阳市沈阳农业大学试验田，辽宁省沈阳市康平市试验田 和黑龙江省大庆市农科院试验田进行田间效果试验。将制备好的发酵液原液，采用液种 1 : 70体积比进行种子包衣处理，在阴凉条件下阴干，将处理过的大豆种子正常播种，大豆 植株在苗期可以产生对大豆胞囊线虫的抗性，并且诱抗效果比较稳定，取得很好的防治效 果。
[0022] 步骤一、制备试验制剂
[0023] 按前述液体发酵培养方法制备阴沟肠杆菌（E.cloacae)Sneb572的发酵液，待备 用。
[0024] 步骤二、制备试验用种子
[0025] 辽豆15,辽宁省农业科学院大豆研究所。
[0026] 步骤三、种子处理方法
[0027] 将大豆种子先用5. 0%次氯酸钠溶液表面消毒5min，再用无菌水冲洗3-5次。将 制备好的发酵液采用液种1 : 70体积比进行种子包衣处理，在阴凉条件下阴燥，备用。
[0028] 步骤四、试验方法
[0029] 本试验分别在辽宁省沈阳市沈阳农业大学试验田，辽宁省沈阳市康平市和黑龙江 省大庆市农科院试验田进行田间效果试验，三处试验田大豆胞囊线虫均很严重，主栽作物 大豆和玉米等。以未经过包衣的大豆种子和察氏液体培养液包衣的大豆种子为对照，在栽 后45d进行调查，将大豆植株连根挖出，保持根系完整，调查大豆根系胞囊数。
[0030] 试验结果
[0031] 使用Sneb572发酵产品处理的大豆，大豆根系胞囊数显著低于对照，在沈阳农业 大学，康平和大庆的田间防效分别为56. 5%，92. 5%和57. 0%，包衣处理后的大显与未处 理的大豆存在显著差异。
[0032] 表1Sneb572发酵产品包衣处理大显种子的田间防效
[0033]
[0034] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种具有诱导抗性活性的细菌，其特征在于，所述细菌为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae)，保藏号为 CGMCC No. 10801。2. 如权利要求1所述的一种具有诱导抗性活性的细菌的培养方法，其特征在于，包括 如下步骤： 51、 按质量百分比称取酵母浸膏0. 1% -0.2%、蛋白胨0.5 % -0.6%、牛肉浸膏 0. 3% -0. 4%、蔗糖1% -2%，余下为蒸馏水混合后，得液体发酵培养基； 52、 将步骤Sl所得的液体培养基按每瓶150mL的比例分装于250mL的三角瓶内，分装 完成后将上述菌株接种于液体培养基上，PH6. 8-7. 0,温度25-28°C，摇床转速150r ? min \ 发酵2-3d，得代谢产物。3. 如权利要求2所述的一种具有诱导抗性活性的细菌的应用，其特征在于，用于植物 寄生线虫的生物防治。4. 如权利要求2所述的一种具有诱导抗性活性的细菌的应用，其特征在于，用于制备 大豆种子处理剂。5. 如权利要求4所述的一种具有诱导抗性活性的细菌的应用，其特征在于，所述大豆 种子处理剂包含有效量的阴沟肠杆菌（E. cloacae)或其代谢物。6. 如权利要求3所述的一种具有诱导抗性活性的细菌的应用，其特征在于，所述的植 物寄生线虫为胞囊线虫（Soybean cyst nematode) 〇
【专利摘要】本发明公开了一种具有诱导抗性活性的细菌及其培养方法和应用，该细菌为阴沟肠杆菌Enterobacter？cloacae，保藏号为CGMCC？No.10801。上述具有诱导抗性活性的细菌或其代谢物可用于制备大豆种子处理剂，用于植物寄生线虫的生物防治。本发明的阴沟肠杆菌(E.cloacae)Sneb572或其代谢物具有对大豆的诱导活性，可用于大豆的种子处理，不仅可促进大豆植株和根部的生长，同时对大豆胞囊线虫胞囊的形成具有很大的抑制作用，解决了大豆胞囊线虫防治的难题。CGMCC No.1080120150511
【IPC分类】A01N63/00, A01N63/02, C12N1/20, C12R1/01, A01P5/00
【公开号】CN105112341
【申请号】CN201510607316
【发明人】王媛媛, 段玉玺, 陈立杰, 朱晓峰, 闫继辰
【申请人】沈阳农业大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月15日