子季铵盐离子液体酶反应器的单体产物。
[0033](2)将单体溶于60mL甲醇做溶剂，EGDMA为交联剂，AIBN为引发剂，在混合后的甲醇液中通入氮气除氧，水浴60°C引发聚合24h后得到白色聚合物，产物用甲醇抽滤洗涤5次，真空干燥24h，得到白色聚季铵盐离子液体。
[0034](3)用ρΗ6.8的Tris-Hcl缓冲液配制0.4mg/mL的胰蛋白酶溶液，投入5mg聚合物材料对胰蛋白酶吸附12h后即得负载胰蛋白酶的聚离子液体材料。吸附后的溶液溶液4000转/分钟离心5?10分钟，弃去上清液，产物用3mL去离子水洗涤3次，得到聚离子季铵盐离子液体酶反应器，即可用于对蛋白的酶解。
[0035]实施例2
[0036]一种聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，步骤如下:
[0037](I)在3mL乙腈溶液中加入1.94mL的三乙胺，常温在磁力搅拌的条件下，逐滴加入2mL的4-乙烯基苄氯(三乙胺与4-乙烯基苄氯的物质的量比为1:1)，反应4小时后结束，接着在反应体系中加入1mL乙酸乙酯即可析出白色产物，溶液抽滤后，产物真空干燥24h后得到白色4-乙烯基苄氯季铵盐离子液体单体。
[0038](2)单体的聚合:采用沉淀聚合方法，40-60mL甲醇做溶剂，EGDMA为交联剂，AIBN为引发剂，水浴80°C引发聚合12h后得到白色聚合物。产物用甲醇抽滤洗涤5次，真空干燥24h，得到白色聚季铵盐离子液体。
[0039](3)用pH6.8的Tris-Hcl缓冲液配制0.4mg/mL的胰蛋白酶溶液，投入5mg聚合物材料对胰蛋白酶吸附24h后即得负载胰蛋白酶的聚离子液体材料。吸附后的溶液4000转/分钟离心5?10分钟，弃去上清液，产物用3mL去离子水洗涤5次，得到聚离子季铵盐离子液体酶反应器，可用于对蛋白的酶解。
[0040]实施例3
[0041]一种聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，步骤如下:
[0042](I)在乙腈溶液中加入三乙胺，随后逐滴加入4-乙烯基苄氯，室温磁力搅拌2-8小时后，向反应体系中加入乙酸乙酯即可析出白色产物，溶液抽滤后，产物真空干燥后，即得到制备聚离子季铵盐离子液体酶反应器的功能单体；
[0043]其中，所述乙腈与三乙胺的体积比为1:1?4:1，三乙胺与4-乙烯基苄氯的物质的量的比为1:1?1.2:1
[0044]⑵将步骤⑴的功能单体溶于甲醇中，甲醇做溶剂，然后加入交联剂、引发剂，功能单体的重量终浓度为1.0%?11.5%，交联剂的重量终浓度3.5%?30%，引发剂的重量终浓度为0.1%?1.5%，在上述混合后的甲醇液中通入氮气除氧；
[0045]⑶水浴50°C?80 °C引发聚合12h?24h后得到固体材料，将固体材料用甲醇洗涤，真空干燥，得到白色聚季铵盐离子液体；
[0046]⑷上述步骤⑶得到聚季钱盐离子液体在Tris-Hcl缓冲液中结合蛋白酶，蛋白酶可以为胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或木瓜蛋白酶，结合完成后的溶液进行离心，离心后的材料用去离子水洗涤后，即得聚季铵盐离子液体酶反应器。
[0047]本发明方法制得的聚季铵盐离子液体酶反应器的相关检测结果:
[0048]所有酶解结果采用M0LD1-T0F质谱检测法进行分析，具体结果见图1和图2:
[0049]从图1中可以看出该聚合物的颗粒较为均匀，从图2可以分析得到，在相同的4小时的酶解条件下，酶反应器酶解蛋白后的序列覆盖度可以达到56%，远远高于传统溶液酶解法的结果。随着酶解时间的增长，两种方法的结果趋于相同，原因在于大部分的蛋白随着时间的增长都已经被酶解，所以两种酶解方法的差别变小。
[0050]同时，经检测，本方法制得的酶反应器生物相容性好，分散性好，酶解效率高，提高酶的利用效率，性能稳定，可以实现重复利用，可以重复利用至少三次，在4°C的环境中放置60天后，仍能用于对蛋白的酶解。
[0051]以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明的技术方案作任何形式上的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
【主权项】
1.一种聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，其特征在于:步骤如下: ⑴在乙腈溶液中加入三乙胺，随后逐滴加入4-乙烯基苄氯，室温磁力搅拌2-8小时后，向反应体系中加入乙酸乙酯即可析出白色产物，溶液抽滤后，产物真空干燥后，即得到制备聚离子季铵盐离子液体酶反应器的功能单体； 其中，所述乙腈溶液与三乙胺的体积比为1:1?4:1，三乙胺与4-乙烯基苄氯的物质的量的比为1:1?1.2:1，所述乙腈溶液与乙酸乙酯的体积比为1:1?1:4 ; ⑵将步骤(I)的功能单体溶于甲醇中，甲醇做溶剂，然后加入交联剂、引发剂，功能单体的重量终浓度为1.0%?11.5%，交联剂的重量终浓度3.5%?30%，引发剂的重量终浓度为0.1 %?1.5%，在上述混合后的甲醇液中通入氮气除氧； ⑶水浴50°C?80°C引发聚合12h?24h后得到固体材料，将固体材料用甲醇洗涤，真空干燥，得到白色聚季铵盐离子液体； ⑷上述步骤⑶得到聚季铵盐离子液体在Tris-HCl缓冲液中结合蛋白酶，结合完成后的溶液进行离心，离心后的材料用去离子水洗涤后，即得聚季铵盐离子液体酶反应器。2.根据权利要求1中所述的聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，其特征在于:所述步骤⑴或⑵的功能单体为N-4-乙烯基苄三乙氨基氯盐；或者，所述真空干燥的时间为24h03.根据权利要求1中所述的聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，其特征在于:所述步骤⑵的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯，引发剂为偶氮二异丁腈。4.根据权利要求1中所述的聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，其特征在于:所述步骤⑶的甲醇洗涤次数为5次；或者，所述真空干燥的时间为24h。5.根据权利要求1中所述的聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，其特征在于:所述步骤⑷的Tris-HCl缓冲液的pH为6?8。6.根据权利要求1中所述的聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，其特征在于:所述步骤⑷的蛋白酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或木瓜蛋白酶。7.根据权利要求1中所述的聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，其特征在于:所述步骤⑷的去离子水洗涤的次数为3?5次。8.根据权利要求1至7任一项中所述的聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，其特征在于:所述步骤⑷的具体步骤如下: 用Tris-HCl缓冲液配制0.4mg/mL的蛋白酶溶液，投入白色聚季铵盐离子液体对蛋白酶吸附12h?24h后，得负载蛋白酶的聚离子液体材料，吸附后的溶液4000转/分钟离心5?10分钟，弃去上清液，产物用去离子水洗涤，即得聚离子季铵盐离子液体酶反应器。
【专利摘要】本发明涉及一种聚季铵盐离子液体酶反应器的制备方法，步骤如下：在乙腈溶液中加入三乙胺，随后逐滴加入4-乙烯基苄氯，搅拌加入乙酸乙酯，抽滤、干燥；将功能单体溶于甲醇中，然后加入交联剂、引发剂；水浴50℃～80℃引发聚合、洗涤、真空干燥；在Tris-HCl缓冲液中结合蛋白酶，结合完成后的溶液进行离心，离心后的材料用去离子水洗涤后，即得聚季铵盐离子液体酶反应器。本方法制得的酶反应器生物相容性好，分散性好，酶解效率高，提高酶的利用效率，性能稳定，可以实现重复利用，可以重复利用至少三次，在4℃的环境中放置60天后，仍能用于对蛋白的酶解。
【IPC分类】C08F226/02, C12N9/76, C12N9/50, C12N11/08
【公开号】CN105112397
【申请号】CN201510519164
【发明人】邓启良, 苏日娜, 李燕丽
【申请人】天津科技大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年8月20日