一种新的倍半萜类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从蛇床子的干燥成熟果实中分离得到的一种 具有治疗慢性粒细胞白血病作用的倍半萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 植物蛇床子为一年生草本植物，高30~80cm。茎直立，有分枝，表面有纵沟纹，疏 生细柔毛。叶互生，2~3回羽头细裂，最终裂片线状披针形，先端尖锐；基生叶有长柄，柄 基部扩大成鞘状。复伞形花序顶生或腋生；总苞片8~10,线形；花白色，花柱基短圆锥形， 花柱细长，反折。双悬果宽椭圆形，果棱具翅。花期4~7月，果期6~8月。生于原野、田 间、路旁、溪沟边等潮湿处。
[0003] 中药蛇床子为伞形科（Umbelliferae)蛇床属植物蛇床Cnidium monnieri (L.) Cuss.的干燥成熟果实。蛇床子性温，味辛苦，有小毒。外用燥湿杀虫止痒，内服温肾壮阳， 祛风燥湿。用于治疗阳痿，宫冷，寒痹腰痛，外治滴虫性阴道炎，手、足癣感染等。国内外关 于蛇床子药理效应的报道很多，涉及免疫、神经、内分泌、心血管、呼吸及生殖等系统，主要 表现为抗炎、抗过敏、中枢抑制、抗心律失常及抗肿瘤等作用。
[0004] 蛇床子主要含香豆素类化合物，此外还有色原酮类和苯并呋喃类化合物。蛇床子 挥发油中，相对含量较高的组分主要有倍半萜类，此外还有酯类和萜醇类化合物。大量研究 证明蛇床子的有效成分为香豆素类化合物，其中含量最高的两种香豆素类化合物为蛇床子 素（Osthole，Ost)、欧前古月素（Imperatorin，Imp) 〇
[0005] 因此Ost及Imp经常作为评价不同来源地的蛇床子药材的质量及含蛇床子中成药 的质控指标。由于〇st具有许多重要的药理活性包括抗癌、抗增殖等活性，以及Imp具有抑 制癫痫发作、扩张血管、抑制心肌肥大、抑制肿瘤细胞增殖、抗微生物、影响药物代谢酶活性 等多种药理作用，而受到越来越多的关注。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种从蛇床子的干燥成熟果实中分离得到的一种具有治疗 慢性粒细胞白血病作用的倍半萜类化合物及其制备方法。
[0007] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0008] 具有下述结构式的化合物（I )，
[0009]
[0010] 所述的化合物（I )的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将蛇床子的干燥成熟果 实粉碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b) 步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙 醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b) 中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1、45:1、20 :1、12:1和1:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次 用体积比为20:1、12:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中 组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗 脱，收集10~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I )。
[0011]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80 %。
[0013] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0014]所述的化合物（I)在制备治疗慢性粒细胞白血病的药物中的应用。
[0015]所述的药物组合物在制备治疗慢性粒细胞白血病的药物中的应用。
[0016]本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0017] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I )，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0018]所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0019] 图1为化合物（I)结构式；
[0020] 图2为化合物（I )理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0022] 实施例1 :化合物（I )分离制备及结构确证
[0023] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0024] 制备方法：（a)将蛇床子的干燥成熟果实（10kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取 (25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3 次）和水饱和的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（431g) 和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇 洗脱8个柱体积，再用75 %乙醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75% 乙醇洗脱物浸膏（157g) ;(c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积 比为75:1 (8个柱体积）、45:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、12:1 (8个柱体积）和1:1 (5 个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (49g)用正相 硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1 (8个柱体积）、12:1 (10个柱体积）和5:1 (8个柱体 积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (25g)用十八烷基硅 烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集10-12个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I )(35mg)。
[0025] 结构确证：HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z321. 1316,结合核磁特征可得分子式 为C15H2206,不饱和度为5。核磁共振氢谱数据SH(ppm，DMS0-d6,500MHZ) :H-2(1.49，m)， H-2(l. 93，m)，H-3(1. 74，m)，H-3(1. 67，m)，H-5(2. 48，d，J= 8. 8)，H-6(2. 78，d，J= 16. 8)， H-6 (2. 69,ddd，J= 16. 8,8. 8, 2. 0)，H-9 (2. 12,d，J= 13. 8)，H-9 (2. 03,d，J= 13. 8)， H-13(1.65,d，J= 1.92)，H-14(1.01，s)，H-15(1.24,s);核磁共振碳谱数据Sc(ppm， DMS0-d6, 75MHz) :95. 7 (C，1-C)，28. 1 (CH2, 2-C)，39. 3 (CH2, 3-C)，80. 2 (C，4-C)，49. 9 (CH， 5-C)，20. 5 (CH2, 6-C)，162. 0 (C，7-C)，106. 6 (C，8-C)，46. 4 (CH2, 9-C)，76. 3 (C，10-C)， 118. 1 (C，11-C)，173. 8 (C，12-C)，9. 8 (CH3,13-C)，25. 3 (CH3,14-C)，27. 1 (CH3,15-C);碳原子 标记参见图1。红外光谱表明该化合物含有羟基（3452cm 4和羰基（1756cm 4基团，紫外光 谱在215nm处有最大吸收，表明含有a, 不饱和y内酯。虫NMR谱显示三个甲基信号 5 111.01(311，8)，1.24(311，8)和1.65(311，(1，了=1.92抱）。1欠匪1?显示15个碳信号，包括三 个甲基碳原子（SC9.8,25.3,27. 1)，四个亚甲基（SC20.5,28. 1，39.3,46.4)，一个次甲基 (S C49. 9)，以及七个季碳[分别为酯羰基碳（S C173. 8)，两个烯烃碳（S C118. 1，162. 0)和 四个含氧季碳（SC76.3,80.2,95.7，106.6)]。N0ESY 谱中，Me-14 与 H-30，H-60，Me-13 ; Me-15 与 H-9 0，H-2 0，H-2 a ;H_5 与 H-2 a，H-3 a，H-6 a，H-6 0 ;以及 H-6 a 和 H-9 a 的 相关性表明H-5为a-取向，Me-15和Me-14为取向。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY 谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通 过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。
[0026] 实施例2:化合物（I )药理作用试验
[0027] -、材料和仪器
[0028] K562细胞由中科院上海生物细胞所提供。化合物（I)为自制，HPLC归一化纯 度大于98%。RPMI-1640干粉培养基购于Gibco公司。小牛血清购于杭州四季青生物工 程材料研究所。青霉素、链霉素购于华北制药厂。Glutamine、MTT、DMS0购于AMRESC0。 Annexinv-FITC细胞凋亡检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。MOPS，Rnasin、 琼脂糖、嗅乙锭、