一种新的二萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从天葵的干燥根中分离得到的一种具有治疗 肝癌作用的二萜化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 天葵（Semiaguilegia adoxoides)为毛茛科植物，属天葵被子植物门，高15~40 厘米，块根灰黑色，略呈纺锤形或椭圆形，生于海拔100-1050米间的疏林下、路旁或山谷地 的较阴处，3-4月开花，4-5月结果。在中国分布于四川、贵州、广西北部、江西、江苏、安徽 等地，在日本也有分布。其根入药称为天葵子，为《中国药典》收载的中药品种，味甘、苦，性 寒，有小毒，有清热解毒、消肿止痛、利尿等作用，治乳腺炎、扁桃体炎、痈肿、瘰疬、小便不利 等症；全草又作土农药。
[0003] 天葵中含有多种化学成分，牛峰等人用HPLC方法对天葵中的化学成分做了指纹 图谱；目前从天葵中分离出的主要成分有生物碱、内酯类、氰苷硝基类、酚类、二萜、木脂素 等成分。目前从天葵中分离得到4个生物碱类成分，分别为异喹啉季铵型和原小檗碱类生 物碱。
[0004] 现代药理实验表明，天葵具有良好的抗肿瘤作用。牛锋采用MTT法对天葵子部分 化学成分的细胞毒活性进行实验，结果表明天葵子素A对于宫颈癌、胃癌和乳腺癌三个肿 瘤细胞株的细胞毒活性都要优于紫杉醇，且对白血病和肝癌肿瘤细胞株也有明显的细胞毒 活性；蓝华英的研究表明天葵中的 2_(0 -Dgluoopyranosyloxy)-4_hydroxy-benzeneaeet onitrile具有抗肿瘤活性，其ID 5。为9. 43 y g/mL ;关频对天葵中生物碱成分的抗肿瘤活性 进行了研究，其中的唐松草酚定在高剂量组（l〇〇〇mg/kg)有较好的抗肿瘤作用，抑瘤率为 37. 1%〇
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从天葵的干燥根中分离得到的一种具有治疗肝癌作用 的二萜化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I )的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将天葵的干燥根粉碎， 用85 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用15%乙醇和75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液， 减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依 次用体积比为80:1、50:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d) 步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和5:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤（d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液 减压浓缩得到纯的化合物（I )。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I )和药学上可接受的载体。
[0012] 所述的化合物（I )在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0013] 所述的药物组合物在制备治疗肝癌的药物中的应用。
[0014] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0015] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I )，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0016] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0017]
[0018]图1为化合物（I )结构式；
[0019] 图2为化合物（I )理论E⑶值与实验E⑶值比较；
[0020] 图3为化合物（I)对IfepG2及L02细胞增殖的影响（n = 3)。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0022] 实施例1 :化合物（I )分离制备及结构确证
[0023] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0024] 制备方法：（a)将天葵的干燥根（8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（25LX3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味（3L)，依次用石油醚（3LX 3次）、乙酸乙酯（3LX 3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（355g)和正丁醇萃取 物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，依次用15%乙醇（8L)和75% (12L)乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（136g) ;(c)步骤 (b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (8个柱体积）、50:1 (8个 柱体积）、30:1 (6个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和1:1 (5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；(d)步骤（c)中组分4 (31g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比 为20:1 (8个柱体积）、12:1 (10个柱体积）和5:1 (6个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (llg)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体 积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得 到纯的化合物（I ) (23mg)。
[0025] 结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z 441. 1914,结合核磁特征可得分子 式为C23H3Q07,不饱和度为9。核磁共振氢谱数据S H (ppm，DMS0-d6, 600MHz) :H-1 (4. 84， t，J = 2. 4)，H-2(l. 62, m)，H-2(l. 85, m)，H-3(l. 06, m)，H-3(l. 66, m)，H-6(l. 51，m)， H-6(2.07, m)，H-8 (1.94, m)，H-9 (2.56, td，J = 12.0,1.8)，H-ll (1.34, m)，H-ll (1.97， m)，H-15 (5. 86, s)，H-17 (5. 28, d，J = 1. 8)，H-17 (5. 52, d，J = 1. 8)，H-18 (0? 98, s)， H-19(0.99, s)，H-20 (1.00, s)，l-〇Ac (2.02, s)，12-0CH3 (3.01，s)，5-OH (2.91，br，s);核 磁共振碳谱数据 8c (ppm，DMS0-d6,125Hz) :73. 9 (CH，1-C)，21. 9 (CH2, 2-C)，29. 1 (CH2, 3-C)， 37. 5 (C，4-C)，77. 4 (C，5-C)，34. 8 (CH2，6-C)，208. 3 (C，7-C)，47. 7 (CH，8-C)，36. 4 (CH， 9-C)，42. 4 (C，10-C)，34. 9 (CH2,11-C)，106. 5 (C，12-C)，165. 8 (C，13-C)，140. 1 (C，14-C)， 114. 8(CH，15-C)，168. 3(C，16-C)，113. 9(CH2, 17-C)，27. 2(CH3,18-C)，24. 0(CH3,19-C)， 16. 3(CH3,20-C)，168. 9(C，l-〇Ac)，20. 3(CH3, l-〇Ac)，49. 2(CH3,12-0CH3);碳原子标记参见 图1。IR谱含有羰基（1757cm 1)信号，以及紫外光谱最大吸收波长在212nm处，表明该化 合物含有a，不饱和丁烯酸内酯部分。在烯烃质子信号SH5.86(H_15, s)和位于低 场的碳信号SC165. 8(C-13)，114. 8(C-15)和168. 3(C-16)也证实了存在这样的部分，另 外结合三个甲基信号 SH〇.98(Me-18, s)，0.99(Me-19, s)和 1.00 信号（Me-20, s)，表明 该化合物是一个含有丁烯酸内酯内酯单元四环二萜类化合物。HMBC谱中，H-1(SH4.84， t，J = 2. 4Hz)与-0C0CH3( S C168. 9)，12-0CH3( S H3. 01，s)与 C-12( S C106. 5)的相关 性表明C-l位上连有乙酰氧基，C-12与甲氧基相连。在HSQC和HMBC谱中，质子信号 S H5. 28 (d，J = 1. 8Hz)和 5. 52 (d，J = 1. 8Hz)与碳信号（S C113. 9)直接相连，以及 C-14(SC140. 1)和C-13(SC165. 8)长距离的相关性，表明C-14和C-17之间连有双键。 NOESY 谱中，Me-20( S H1. 00, s)与 H-l( S H4. 84, t，J = 2. 4Hz)，H-2(l. 62, m)，H-2(l. 85， m)，H-8(1. 94，m)，H-llmax( S HI. 97，m)和 Me-19( S HO. 99，s) ;Me-18 与 5-OH( S H2. 91，br， s)和 H-9(2.56，td，J = 12.0，1.8) ;H-9 与 12-0CH3(SH3.01，s)的相关性表明环 A和 B 是 以反式稠合环连接的椅式构象，从而证实了 C-l，C-2, C-4, C-5, C-10, C-12和C-14的相对 构