具有稳定的枯草杆菌蛋白酶的液体自动餐具清洗洗涤剂组合物的制作方法_3

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lase?;雷诺酶巧enozyme);怀特酶(Whitezyme)(诺维信公司)、Clazinase?、普拉 达克(Puradax)、普拉达克HA(PuradaxHA)W及普拉达克EG(PuradaxEG)(可从杰能科获 得)W及KAC-SOO(B) ? (花王公司化aoColoration))。
[0064] 过氣化物酶/氣化酶 阳0化]适合的过氧化物酶包括由国际生物化学与分子生物学联合会(IUBMB)命名委员 会陈述的酶分类EC1. 11. 1. 7,或源自其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
[0066] 适合的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白 质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属,例如来自灰盖拟鬼伞 杞Cinerea)的过氧化物酶巧P179, 486),及其变体,如在WO93/24618、W0 95/10602W及 WO98/15257中描述的那些。
[0067] 运些过氧化物酶还包括面代过氧化物酶,例如氯过氧化物酶、漠过氧化物酶W及 展示出氯过氧化物酶或漠过氧化物酶活性的化合物。根据其对面素离子的特异性将面代过 氧化物酶加W分类。氯过氧化物酶化C.1.11.1.10)催化从氯根离子形成次氯酸盐。
[0068] 在一个实施例中,本发明的面代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地,该面代过氧 化物酶是饥面代过氧化物酶,即含饥酸盐的面代过氧化物酶。在本发明的一个优选方法中, 将含饥酸盐的面代过氧化物酶与氯根离子来源组合。 W例 已经从许多不同真菌,特别是从暗色丝抱菌(dematiaceoushyphomycete) 真菌组中分离出了面代过氧化物酶,比如卡尔黑霉属(化Idariomyces)(例如煤卡尔 黑霉(C.fumago))、链格抱属、弯抱属(例如痛枝弯抱(C.verruculosa)和不等弯抱 (C.inaequalis))、内厮蠕抱属、细基格抱属W及葡萄抱属。
[0070] 还已经从细菌,如假单胞菌属(例如,化咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属 (例如,金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了面代过氧化物酶。
[0071] 在一个优选实施方案中,该面代过氧化物酶可源自弯抱属,特别是痛枝弯抱 (Qirvulariaverru州Iosa)和不等弯抱,例如如描述于WO95/27046中的不等弯抱CBS 102. 42或描述于WO97/04102中的痛枝弯抱CBS147. 63或痛枝弯抱CBS444. 70;或可 源自如描述于WO01/79459中的Drechslerahartlebii,如描述于WO01/79458中的盐 沼小树状霉值en化yphiellasalina)、如描述于WO01/79461 中的F^haeotrichoconis crotalarie或如描述于WO01/79460 中的Geni州Iosporiumsp.。
[0072] 适合的氧化酶具体包括由酶分类EC1. 10.3.2囊括的任何漆酶或源自其中 的展示出漆酶活性的任何片段、或展示出类似活性的化合物,例如儿茶酪氧化酶巧C 1. 10. 3. 1)、邻氨基苯酪氧化酶巧C1. 10. 3. 4)或胆红素氧化酶巧C1. 3. 3. 5)。
[0073] 优选的漆酶是微生物来源的酶。运些酶可W源自植物、细菌或真菌(包括丝状真 菌和酵母)。
[0074] 来自真菌的适合实例包括可源自W下项的菌株的漆酶:曲霉属,脉抱菌属(例如, 粗糖脉抱菌),柄抱壳菌属,葡萄抱属,金钱菌属(Collybia),层孔菌属(Fomes),香茹属,侧 耳属,栓菌属(例如,长绒毛栓菌和变色栓菌),丝核菌属(例如,立枯丝核菌巧.SOlani)), 拟鬼伞属(例如,灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞杞coma化S)、弗瑞氏拟鬼伞(C.化iesii)及 C.plicatilis),小脆柄茹属(Psathyrella)(例如,白黄小脆柄茹化condelleana)), 斑權茹属(例如,蝶形斑權茹(P.papilionaceus)),毁丝霉属(例如,嗜热毁丝霉), Schytalidium(例如,S.thermo地ilum),多孔菌属(例如,P.pinsitus),射脉菌属(例如, 射脉侧菌(P.radiata))(WO92/01046)或革盖菌属(例如,毛革盖菌杞hirsuUis))(JP 223888 巧。
[0075] 来自细菌的适合实例包括可源自芽抱杆菌属的菌株的漆酶。优选的是源自拟鬼伞 属或毁丝霉属的漆酶;特别是源自灰盖拟鬼伞的漆酶,如披露于WO97/08325中;或源自嗜 热毁丝霉,如披露于WO95/33836中。
[0076] 过水解酶
[0077] 适合的过水解酶能够催化过水解反应,该反应导致在过氧化物源(例如,过氧化 氨)的存在下从簇酸醋(酷)底物产生过酸。虽然许多酶W低水平进行该反应,过水解酶 展示出高的过水解:水解比率,通常大于1。适合的过水解酶可W是植物、细菌或真菌来源 的。包括化学修饰的或蛋白质工程化的突变体。
[0078] 有用的过水解酶的实例包括天然存在的分枝杆菌属过水解酶或其变体。一种示例 性酶来源于耻垢分枝杆菌。运种酶,其酶特性、其结构及其变体描述于WO2005/056782、W0 2008/063400、US2008/145353W及US2007167344 中。 W79]抑制剂
[0080] 在本发明的液体组合物中使用的抑制剂是一种肤醒、其亚硫酸氨盐加合物、或一 种肤甲基酬。该甲基可任选地被面素取代,并且该肤可任选地具有一个N端保护基团。
[0081] 酪或酉同 阳0間该抑制剂可W具有式:P-(A)yA-@)x-B°-R*其中: 阳〇8引 R*是H(氨)、邸3、CX3、CHXz或CH2X。优选地,R* =H从而该抑制剂是一种具有式 P-(A)yA-Wx-B°-H的肤醒;
[0084]X是面素原子,特别是F(氣);
[0085] B诣具有式-NH-CH(R)-"=0)-的k或D-构型的单一氨基酸残基;
[0086] X是 1、2 或 3;
[0087] Bx独立地是各自经由其C端连接到下一个B或B°上的单一氨基酸残基; W88] L不存在或独立地是具有式-C( = 0)-、-C( = 0)-C( = 0)-、-C(=巧-、-C(= S)-C(=巧-或-C( =S)-C( = 0)-的连接基团;
[0089]A不存在(如果L不存在)或独立地是经由氨基酸的N端连接到L上的单一氨基 酸残基;
[0090] P选自下组,该组由W下各项组成:氨或(如果L不存在)一种N端保护基团; 阳0川 y是0、1或2,
[0092] R独立地选自下组,该组由W下各项组成:任选地被一个或多个相同或不同的取 代基R'取代的Cl6烷基、C61。芳基或C71。芳烷基;
[0093] R'独立地选自下组,该组由W下各项组成:面素、-OH、-0R"、-SH、-SR"、-NH2、-NHR" 、-NR"2、-CO2H、-CONH2、-C0NHR"、-C0NR"2、-NHC ( = N)畑2;并且
[0094] R"是一个Cl6烷基。
[0095] X可W是1、2或3并且因此B对应地可W是1、2或3个氨基酸残基。因此,B可W 表示Bi、b2-b1或B3-b2-b1,其中b3、b2和BI各自表示一个氨基酸残基。y可W是O、I或2并 且因此A可W不存在,或是对应地具有式心或A2-心的1个或2个氨基酸残基,其中A2和A1 各自表示一个氨基酸残基。
[0096] B°可W是具有k或D-构型的单一氨基酸残基,它经由氨基酸的C端被连接到H 上。B°具有式-NH-CH(R)-C( = 0)-,其中R是C1e烷基、C61。芳基或C71。芳烷基侧链,如甲 基、乙基、丙基、异丙基、下基、异下基、苯基或苄基,并且其中R可W任选地被一个或多个相 同或不同的取代基R'取代。B°的具体实例是D或L形式的精氨酸(Arg)、3, 4-二径基苯丙 氨酸、异亮氨酸(lie)、亮氨酸化eu)、甲硫氨酸(Met)、正亮氨酸(Nle)、正鄉氨酸(Nva)、苯 丙氨酸(Phe)、间酪氨酸、对酪氨酸灯yr)W及鄉氨酸(Val)。一个具体实施例是当B°是亮 氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、对酪氨酸W及鄉氨酸时。
[0097] 经由氨基酸的C端连接到B°上的B可W是脂肪族、疏水性和/或中性氨基酸。B 1 的实例是丙氨酸(Ala)、半脫氨酸(切S)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(lie)、亮氨酸化eu)、正亮 氨酸(Nle)、正鄉氨酸(Nva)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸灯虹)W及鄉氨酸(Val)。 Bi的具体实例是丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸W及鄉氨酸。一个具体实施例是当B 1是 丙氨酸、甘氨酸或鄉氨酸时。
[009引如果存在,经由氨基酸的C端连接到Bi上的B2可W是脂肪族、疏水性、中性和/或 极性氨基酸。B2的实例是丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、卷须霉晚(Cpd)、半脫氨酸(切S)、 甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(lie)、亮氨酸化eu)、正亮氨酸(Nle)、正鄉氨酸(Nva)、苯丙氨酸 (Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)W及鄉氨酸(Val)。B2的具体实例是丙 氨酸、精氨酸、卷须霉晚、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸W及鄉氨酸。一个具体实施例 是当B2是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或鄉氨酸时。
[0099] 经由氨基酸的C端连接到B2上的B3(如果存在)可W是大型、脂肪族、芳香族、疏 水性和/或中性氨基酸。B3的实例是异亮氨酸(lie)、亮氨酸化eu)、正亮氨酸(Nle)、正鄉 氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苯基甘氨酸、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)W及鄉氨酸(Val)C B3的具体实例是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸W及色氨酸。
[0100] 连接基团L可W不存在或选自下组,该组由W下各项组成:-C( =0)-、-c(= o)-c( = 〇)-、-c(=巧-、-c(=巧-c(=巧-或-c(=巧-c( = 0)-。本发明的具体实施 例是当L不存在或L是幾基-C( =0)-时。 阳101] 经由氨基酸的N端连接到L上的心(如果存在)可W是脂肪族、芳香族、疏水性、 中性和/或极性氨基酸。心的实例是丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、卷须霉晚(Cpd)、甘氨酸 (Gly)、异亮氨酸(lie)、亮氨酸化eu)、正亮氨酸(Nle)、正鄉氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苏 氨酸灯虹)、酪氨酸灯yr)、色氨酸灯rp)W及鄉氨酸(Val)。Al的具体实例是丙氨酸、精氨 酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸W及鄉氨酸。一个具体实施例是当B2是亮氨 酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸时。
[0102] 经由氨基酸的N端连接到心上的A2残基(如果存在)可W是大型、脂肪族、芳香 族、疏水性和/或中性氨基酸。A2的实例是精氨酸(Arg)、异亮氨酸(lie)、亮氨酸化eu)、 正亮氨酸(Nle)、正鄉氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苯基甘氨酸、酪氨酸灯yr)、色氨酸灯巧) W及鄉氨酸(Val)。A2的具体实例是苯丙氨酸和酪氨酸。 阳103] N端保护基团P(如果存在)可W选自甲酯基、乙酷基(Ac)、节酷基度z)、S氣乙酷 基、甲氧基下二酷基、芳香族和脂肪族氨基甲酸醋保护基团,如巧基甲氧幾基(Fmoc)、甲氧 幾基(Moc)、(氣甲氧基)幾基、节氧幾基(Cbz)、叔下氧幾基度OC)W及金刚烧氧幾基;对 甲氧基苄基幾基、苄基度n)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲氧基乙酷基、甲 氨基幾基、甲基横酷基、乙基横酷基、苄基横酷基、甲基憐酷胺基(MeOP(OH) ( = 0))W及节 基憐酷胺基(PhCHzOP(OH) ( = 0))。
[0104] 在含保护基团的;肤醒(即X= 2,L不存在并且A不存在)的情况下,P优选地是 乙酷基、甲氧幾基、节氧幾基、甲氨基幾基、甲基横酷基、苄基横酷基W及苄基憐酷胺基。在 含保护基团的四肤醒(即X= 3,L不存在并且A不存在)的情况下,P优选地是乙酷基、甲 氧幾基、甲基横酷基、乙基横酷基W及甲基憐酷胺基。 阳105]适合的肤醒描述在WO94/04651、WO95/25791、WO98/13458、WO98/13459、WO98/13460、WO98/13461、WO98/13462、WO07/141736、WO07/145963
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