Ingelvac"CircoFLEX、 】ngelvac'Circo化EX-Myco化E讶、猪生殖性及呼吸症候群病毒（例如In.g础偽(fPRRS ATP、垃pi帘縱?PRRSVMLV)、猪细小病毒（例如ReproCyc"PRRSV-PLE)、支原体（例如 ingelvac"Myco化E讶等。
[0039] 本领域技术人员将理解，本文中使用之组合物可合并有已知可注射、生理学上可 接受之无菌溶液。对于制备供非经肠注射或输注之即用型溶液，可轻易地使用等张水溶液， 例如生理食盐水或血浆蛋白溶液。此外，本发明之免疫原性及疫苗组合物可包括医药学上 或兽医学可接受之载剂、稀释剂、等张剂、稳定剂或佐剂。
[0040] 本发明之方法亦可包含将本发明之组合物与兽医学上可接受之载剂、佐剂或其组 合混合。本领域技术人员将认识到载剂、佐剂或组合之选择将尤其由递送途径、个人偏好及 动物物种决定。
[0041] 本发明亦提供藉由向动物施用组合物来降低动物中进行性PPV5A感染之严重性 的方法。组合物可包括减毒病毒培养物或一或多种PPV5A肤与可接受之兽医学载剂之组 合。
[0042] 较佳施用途径包括经鼻内、经口（例如于饮用水中）、皮内及肌肉内。较佳为肌肉 内施用，最佳W单次剂量形式。本领域技术人员将认识到，本发明之组合物亦可W两次或两 次W上剂量施用W及藉由其它施用途径施用。举例而言，该等其它途径包括皮下、皮内、静 脉内、血管内、动脉内、腹膜内、銷内、气管内、皮内、屯、内、小叶内、髓内、肺内或阴道内。视治 疗之所需持续时间及有效性而定，本发明之组合物可施用一次或数次，亦可间歇地施用，例 如在数天、数周或数月内每天及W不同剂量施用。
[0043] 本发明亦提供用于对动物进行接种之试剂盒，其包含一组印刷说明书；能够将疫 苗施用动物之施配器；及至少一种来自细胞培养物（包括但不限于细菌、真菌、昆虫或哺乳 动物细胞培养物）之分离株，其有效地使动物对至少一种与PPV5A、其它细小病毒株、其它 病原体及/或其组合相关之疾病免疫。本发明之试剂盒可进一步包含兽医学可接受之载 剂、佐剂或其组合。
[0044] 本发明之试剂盒中之施配器能够将其内含物W液滴形式施配；且当经鼻内、经口、 皮内或肌肉内施用动物时，试剂盒中所包括之分离株能够降低PPV5A感染之至少一种临床 病征之严重性。在一些试剂盒中，分离株亦能够降低PPV5A感染之至少一种临床病征之严 重性。较佳地，与未经治疗之受感染动物相比，临床病征之严重性降低至少10%。
[0045] 本发明之其它目标、特征及优点将由W下详细描述变得显而易见。然而，应理解， 尽管指示本发明之较佳实施例，但详细描述及特定实施例系仅作为说明提供，因为本领域 技术人员将自该详细描述明白本发明之精神及范畴内的各种变化及修改。
【附图说明】
[0046] W下附图形成本说明书之一部分，且包括该等附图W进一步说明本发明之某些方 面。可藉由参考此等附图中之一或多者，组合本文中提供之特定实施例之详细描述更好地 理解本发明。本申请案含有至少一张W彩色制成之图。本专利申请公开案之具有彩色附图 之复本将由事务所在有需要及支付必需费用后提供。
[0047] 图1为PPV5A(沈QIDN0:1)之核酸序列。 W48] 图2为PPV5A复制酶（SEQIDN0:2)之蛋白质序列。
[0049] 图3为PPV5A开放阅读框（0RF)蛋白质（SEQIDN0:3)之蛋白质序列。
[0050] 图4为PPV5A衣壳蛋白（SEQIDN0:4)之蛋白质序列。
[0051] 图5为PPV5A衣壳蛋白之蛋白质序列及许多其它病毒序列之成对氨基酸相同性比 较。 阳052] 关于病毒序列之参考文献列举于表1中：
[0053]表1
[0054]
阳化引
[0056] 图6展示与表1中列举之其它病毒VPl及衣壳蛋白相比，PPV5A之VPl/CAP区域 之系统发生分析（phylogeneticanalysis)。
[0057] 图7展示口口￥54衣壳蛋白669 10^:4之残基55-792)与最密切相关的口口￥4蛋 白（GenBank编号AFM7387USEQIDN0:5))之相同性，其展示40% (310/774)序列相同性。
[0058] 图8展示PPV5A复制酶蛋白（SEQIDN0:2之残基15-516)与最密切相关的PPV4 蛋白（GenBank编号ADB20210(SEQIDNO: 11))之相同性，其展示58% (292/504)序列相同 性。
【具体实施方式】
[0059] 本发明提供与本文中所掲示之新颖猪细小病毒5A及其变体有关之核酸及其片 段、多肤及其免疫学有效片段、疫苗、免疫学有效制剂、抗体、诊断分析法及试剂盒，W及制 造及使用该等组合物及制剂之方法。
[0060] 除非另外指示，否则本发明之实践将使用本领域内已知的分子生物学、微生物 学、重组DNA技术、蛋白质化学及免疫学之常规技术。该等技术已在文献中充分说明。参 见例女曰Sambrook,Fritsch及Maniatis,MolecularClonin邑:ALaboratoryManual,第 I、II及III卷，第二版（1989);DNACloning,第I及II卷Φ.N.Glover编 1985);OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait编 1984)；NucleicAcidHybridization(B. D.化mes及S.J.Higgins编 1984);AnimalCellCulture巧.K.Freshney编 1986); ImmobilizedCellsandEnzymes(IRL出版社，1986) ；Perbal,B. ,APracticalGuide toMolecularCloning(1984)；MethodsInEnzymology系列（S.Colowick及N.Kaplan 编，AcademicPress,Inc. ) ；Proteinpurificationmethods-apracticalapproach(E. L.V.Harris及S.Angal编,IRLPress,OxfordUniversityPress)；及Handbookof ExperimentalImmunology,第I-IV卷Φ.M.Weir及C.C.Blackwell编，1986,Blackwell ScientificPublications)。
[OOW] 在详细描述本发明之前，应理解，本发明不限于特定DM、多肤序列或制程参数，因 而该等序列或参数当然可变化。亦应理解，本文中所用之术语系仅出于描述本发明之特定 实施例之目的且不意欲具限制性。必须注意，除非本文明确地另外指示，否则如本说明书及 随附申请专利范围中所使用，单数形式"一（a/an)"及"该（the)"包括复数个指示物。因 此，举例而言，对"一抗原"之提及包括两种或两种W上抗原之混合物，对"一赋形剂"之提 及包括两种或两种w上赋形剂之混合物，及其类似情况。
[0062] k.帝义
[0063] 除非另有定义，否则在提交申请时，本文中使用之所有技术及科学术语具有与本 领域技术人员通常所理解相同之含义。术语之含义及范畴应清楚；然而，若存在任何潜在歧 义，则本文中提供之定义优先于任何词典或非固有定义。此外，除非本文另有要求，否则单 数术语应包括复数形式且复数术语应包括单数形式。本文中，除非另有说明，否则"或"之使 用意谓"及/或"。此外，术语"包括（including)"化及其它形式（诸如"包括（includes)" 及"包括（included)")之使用不具有限制性。本文中提及之所有专利及公开案均W引用 的方式并入本文中。 W64]"针对疾病之保护"、"保护性免疫性"、"功能性免疫性"及类似短语意谓藉由施用一 或多种本发明之治疗性组合物或其组合而产生之针对疾病或病状之反应，其引起的有害作 用与已暴露于疾病或感染之未经免疫之对象中所预期相比较少。亦即，经接种之对象中感 染之有害作用之严重性降低。在经接种之对象中，可降低、减缓或可能完全预防感染。本文 中，当意谓完全预防感染时，其将特定说明。若未说明完全预防，则该术语包括部分预防。 W65] 本文中降低临床病征之发病率及/或严重性"或"减少临床症状"意谓（但不限 于）与野生型感染相比，降低群体中受感染对象之数目、降低或消除呈现感染之临床病征 之对象的数目或降低一或多个对象中存在之任何临床病征之严重性。举例而言，其应指任 何病原体负荷降低、病原体脱落、病原体传播减少或PPV5A感染之任何临床症状性病征减 少。较佳地，与未接受组合物且受到感染之对象相比，一或多个接受本发明之治疗性组合物 之对象中该等临床病征减少至少10%。更佳地，接受本发明之组合物之对象中临床病征减 少至少20%，较佳至少30%，更佳至少40 %且更佳至少50%。
[0066] 术语"增加之保护"在本文中意谓（但不限于）与未经接种之对象对照组相比，经 接种之对象组中与感染物（较佳为PPV5A)感染有关之一或多种临床症状显著减少。术语 "临床症状显著减少"意谓（但不限于）在攻击感染物后，与未经接种之对照组相比，经接种 之对象组中至少一种临床症状之发病频率降低至少10 %，较佳20 %，更佳30 %，更佳50 % 且更佳70%。
[0067] "长效保护"应指"改良之功效"，其持续至少3周，但更佳至少3个月，更佳至少6 个月。在家畜情况下，最佳为长效保护应持续至动物达到出售其肉品之平均年龄。
[0068] "免疫原性或免疫组合物"系指包含至少一种PPV5A蛋白质或多肤或其免疫原性部 分之目标组合物，其引起细胞或抗体介导之针对该组合物之免疫反应之宿主中之免疫学反 应。在本发明之较佳实施例中，免疫原性组合物诱导针对PPV5A感染之一或多种临床病征 之免疫反应且更佳赋予保护性免疫。 W例如本文中所用之"免疫原性"PPV5A多肤或"抗原"系指引起本文中所描述之免疫 学反应之多肤或蛋白质。"免疫原性"PPV5A蛋白质或多肤包括本文中鉴定之任何编码序 列之全长序列或其类似物或免疫原性片段。术语"免疫原性片段"或"免疫原性部分"系指 PPV5A蛋白质之氨基酸序列之片段或经截短及/或经取代形式，其包括一或多个表位且因 此引起本文中所描述之免疫学反应。通常，该等经截短及/或经取代形式或片段将包含或 编码至少六个来自全长蛋白（例如衣壳蛋白）之连续氨基酸。更佳地，经截短或经取代形 式或片段将具有至少10个，更佳至少15个，且更佳至少19个，且更佳30个来自全长蛋白 (例如衣壳蛋白）之连续氨基酸。
[0070] 术语"表位"意谓目标组合物例如蛋白质或多肤之区段或片段，其由免疫系统识 另IJ，特定地由抗体、B细胞或T细胞识别。在本发明中，表位通常为病毒蛋白之多肤序列之 一或多个片段。
[0071] 该等片段可使用现有技术中熟知的多种表位作图技术鉴定。参见例如化itope MappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology,第 66 卷(GlennE.Morris 编，1996)HumanaPress,Totowa,化wJersey。举例而言，线性表位可藉由在固体支撑 物上同时合成大量的肤（该等肤对应于蛋白质分子之某些部分）且在该等肤仍附着至 支撑物时使肤与抗体反应来确定。此项技术已知且描述在现有技术中，参见例如美国 专利第 4, 708, 871 号；G巧sen等人（1984)Proc.化tl.Acad.Sci.USA81:3998-4002; 及Geysen等人（1986)Molec.Immunol. 23:709-715。类似地，可藉由确定氨基酸之空 间构象（诸如藉由例如X射线结晶学及二维核磁共振）而容易地鉴定构象表位。参 见化itopeMappingProtocols,见上文。该定义内亦包括合成抗原，例如多表位、 侧接表位及其它重组或W合成方式衍生之抗原。参见例如Bergmann等人（1993) Eur.J.Immunol. 23:2777-2781 ;Be;r卵ann等人（1996),J.Immunol. 157:3242-3249; Su虹bier,A. (1997),Immunol,andCellBiol. 75:402-408;及Gar化er等人，（1998) 12th WorldAIDSConference,Geneva,Switzerland, 6 月 28 日-7 月 3 日，1998(其教不及内容 均W引用的方式并入本文中）。
[0072]"免疫反应"或"免疫学反应"意谓（但不限于）发展细胞及/或抗体介导之针对 相关组合物或疫苗之免疫反应。通常，免疫或免疫学反应包括（但不限于）W下作用中之 一或多者：抗体、B细胞、辅助T细胞、抑制T细胞及/或细胞毒性T细胞之产生或活化，其 特定地针对相关组合物或感兴趣疫苗中所包括之抗原。较佳地，宿主将显示治疗性或保护 性免疫学（记忆）反应，使得对新型感染之抗性将增强及/或疾病之临床严重性降低。该 保护将由症状数目、症状严重性降低；或不存在与病原体感染有关之一或多种症状；病毒 血症发作延迟；病毒续存性降低；总体病毒负荷降低及/或病毒排出降低证明。 阳073] 本文中，"特定免疫反应性"系指免疫反应性蛋白质或多肤，其识别PPV5A感染之抗 原特征，但不与严格攻击对照物之抗原特征反应。为确定潜在PPV5A免疫反应性蛋白质或 其它多肤之特异性，将针对含有遗传上类似病毒之动物血清使用多种免疫分析法巧LISA、 IFA、西方墨点法（WesternBlot))测试蛋白质。亦将针对含有与表达方法相关之蛋白质的 物质（杆状病毒、S巧细胞等）在多种免疫分析法中测试蛋白质。
[0074]如本文中所用医药学上或兽医学上可接受之载剂"或"赋形剂"包括任何及所有 溶剂、分散介质、包衣、佐剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗细菌剂及抗真菌剂、等张剂、吸收延 迟剂及其类似物。在一些较佳实施例中且尤其在包括冻干免疫原性组合物之实施例中，用 于本发明之