,加热溶于1000血蒸馈水中，调抑7. 2 + 0. 2,分装后115°C灭菌 30min。
[0041] 细菌菌悬液的制备：
[0042] 用接种环挑取形态相近的菌落3-5个，接种于含有5mLBHI肉汤培养基的试 管中，37°C解育2地。增菌后的菌液用M-H肉汤校正浓度至0. 5麦氏比浊标准，约含有 1-2X104CFU/mL。经M-H肉汤1 :1000稀释后，作为接种用菌悬液。
[004引实验仪器；
[0044] 仪器与试剂分析天平；721-2000型分光光度计（上冻高密彩虹分析仪器有限公 司）；ZHJH-C型豪华型超净工作台（上海智城分析仪器制造有限公司）；LDZX型立式压力 蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；WMK-02型电热恒溫培养箱（湖北省黄石市医疗器械 厂）
[004引实验方案 [004引药品配制：
[0047] 浓度配成2560yg/血：称取2560yg样品后，用1血体积的溶剂溶解。
[004引实验方法
[0049] 在96孔培养板中加100yL培养基，然后加化合物止泻木碱，受试样品设不同浓 度，每浓度均设3复孔，分别加100yL菌悬液，将96孔板放入小盒中，尽量不要接触到板， 培养箱中37°C培养，24h时观察结果。
[0050] W在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。当阳性对照孔（即不含药 物）内细菌明显生长试验才有意义。当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时，应记录抑制 细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔，则不应报告结果，需重复试验。
[0051] 实验结果
[0052] 结果显示，在单药抑菌实验W及联合抑菌试验中生物碱类化合物止泻木碱对选 用的2种细菌菌株均有显著的抑制活性。
[0053] 青霉素、万古霉素抑菌实验结果：青霉素对MSSA菌、MRSA菌的MIC值分别为： 16yg/mL、0. 5yg/mL，万古霉素对MSSA菌、MRSA菌的MIC值分别为：4yg/mL、32yg/血。
[0054] 单药抑菌实验结果：止泻木碱对MSSA菌、MRSA菌的MIC值分别为：128yg/血、 128Jig/mL。
[00巧]联合抑菌实验结果：止泻木碱与青霉素联合用药时对MSSA菌、MRSA菌的MIC值分 别为：1. 100yg/mL、0. 116yg/mU止泻木碱与万古霉素联合用药时对MSSA菌、MRSA菌的 MIC值分别为：0. 127yg/mL、0. 116yg/mL。
[0056] 实验结果表明，止泻木碱单独用药时对MSSAW及MRSA具有较好的抑制活性；止泻 木碱与青霉素、万古霉素联合用药时对MSSAW及MRSA的抑制活性显著增强，止泻木碱与青 霉素联合用药在抑制MRSA菌活性方面具有协同作用、止泻木碱与万古霉素联合用药在抑 制MSSA菌、MRSA菌活性方面均具有协同作用。
[0057] 实施例3:片剂的制备
[0058] 取止泻木碱50g，加入淀粉细粉150g，用等量递增法混匀，加入滑石粉5g，硬脂 酸儀2g，混匀，用85%乙醇制粒，干燥，整粒，压制成1000片，每日3次，每次2片。
[0059] 实施例4:胶囊的制备
[0060] 取止泻木碱50g，加入淀粉细粉200g，滑石粉lOg，硬脂酸儀5g，混匀，制粒，干 燥，装入胶囊，制成1000粒，每日3次，每次2片。
[0061] 实施例5:片剂的制备
[0062] 取ConiminelOOg,加入微晶纤维素250g，交联聚乙締邮咯烧酬50g，混匀，加入 90乙醇制粒，干燥，整粒，加入梭甲基淀粉钢lOg，硬脂酸儀5g，混匀，压制成1000片， 每日服用3次，每次1片。
[0063] 实施例6:注射液的制备
[0064] 取止泻木碱50g，甘露醇150g，加注射用水2000ml，揽拌使溶解，用IM化OH溶 液调抑至9. 60-10. 0,揽拌使溶解，滤过，滤液按1 %溶液体积量加入活性炭，在70~ 80°C下加热30分钟，粗滤过，管道及容器用400血注射用水洗涂，加水到2500ml,药液 经0.22pm无菌过滤器过滤，灌装，冻干，压塞，社盖，制成1000瓶，即得。
[006引 实施例5 :
[0066] 止泻木碱的制备方法：称取止泻木子20Kg，用10倍量体积分数为75 %的乙醇-水 溶液加热回流提取3次，每次比，提取液经过滤，减压回收乙醇得浸膏。浸膏经水分散后，用 正下醇萃取，所得萃取液经减压回收得正下醇萃取物566g。取300g正下醇萃取物，经反复 硅胶吸附柱色谱，W二氯甲烧一甲醇（100:1-1:100)系统进行梯度洗脱得流分49-68,合并 为A;将A流分经Se地adexLH-20柱色谱W二氯甲烧-甲醇（5:1-1:1)进行梯度洗脱得流 分A8-A18,合并为H;再经HPLCW甲醇一水巧:95-95:5)系统进行梯度洗脱，同时结合重 结晶等手段分离纯化，得化合物结晶6.Img，经理化性质和波谱数据鉴定为止泻木碱。
【主权项】
1. 止泻木碱，其特征在于具有以下结构：2. 根据权利要求1所述化合物的制备方法，其步骤为： (1) 止泻木子药材粉碎后，采用体积分数50%-100%的乙醇或甲醇浸泡后回流提取，提 取2-3次，合并提取液，减压回收提取液至醇浓度低于5%，所含生药浓度20-40g/mL，滤 过后取滤液或离心后取上清液； (2) 步骤（1)中所得滤液或上清液或止泻木子工业尾料浸膏经非极性大孔树脂柱色谱 处理，依次用水和醇梯度洗脱，得到体积分数为60%-100%醇洗脱部位，减压回收溶剂； (3) 步骤（2)所得醇洗物经硅胶柱色谱法分离，以二氯甲烷、甲醇或甲醇、乙酸乙酯梯 度洗脱即得。3. 根据权利要求1所述化合物的制备方法，其步骤为： (1) 止泻木子药材粉碎后，经溶剂提取法，采用体积分数为50%-100%的乙醇或甲醇浸 泡后回流提取，提取2-3次，合并提取液，减压回收提取液至醇浓度低于5%，所含生药浓 度20-40g/mL，滤过后取滤液或离心后取上清液； (2) 步骤（1)中所得滤液或上清液（或止泻木子工业尾料浸膏）经以体积比1:1~1:2 的乙酸乙酯、正丁醇分别萃取2-4次，减压回收溶剂得到乙酸乙酯、正丁醇萃取部位； (3) 步骤（2)所得正丁醇萃取物经硅胶柱色谱法分离，以甲醇、乙酸乙酯或二氯甲烷、 甲醇梯度洗脱，即得。4. 根据权利要求1所述的化合物在制备抑菌药物方面的应用。5. -种药物组合物，包括止泻木碱和药学上可以接受的载体。6. 根据权利要求5所述的组合物，其可制成口服给药制剂。7. 根据权利要求5所述的组合物，其可制成肌肉或静脉给药制剂。8. 根据权利要求6所述的口服给药制剂，包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、缓释制剂、滴丸。
【专利摘要】本发明属于医药技术领域,公开了一种化合物止泻木碱、制备方法及其在制备抑菌药物方面的应用。试验结果证明止泻木碱在单药抑菌试验中对选用的两种细菌菌株具有较好的抑制活性；在联合抑菌试验中与青霉素或万古霉素联合用药的体外抗菌活性作用显著。本发明能有效解决细菌对多种抗生素的耐药问题，组合物成分之间具有显著的协同增效作用，可减少抗生素的用量，从而相应降低抗生素产生的副作用和不良反应。
【IPC分类】C07J71/00, A61K31/58, A61P31/04
【公开号】CN105294813
【申请号】CN201510590447
【发明人】孙博航, 晋敦青, 金颖, 董婷婷, 方娅韵, 徐怀双
【申请人】沈阳药科大学
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年9月17日