一种同时分离土大黄苷和去氧土大黄苷的工业化生产技术的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，涉及一种能够同时分离土大黄苷和去氧土大黄苷的工业化 生产技术。
【背景技术】
[0002] 土大黄苷的分子结构式如下：
[0003]
[0004] CAS:155-58-8 分子式：C21H2409
[0005] 去氧土大黄苷的分子结构式如下：
[0006]
[0007] CAS:30197-14-9 分子式：C21H2408
[0008] 大黄为寥科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根及根茎，是我国传统 中药，已经有几千年的使用历史，里面所含的大量蒽醌类化合物，具有泻下通便、破积滞、解 毒消痈等作用，《中国药典》里规定不得检出土大黄苷，但国内外研究结果表明土大黄苷和 去氧土大黄苷等二苯乙烯苷类化合物具有抗菌、改善微循环、降血脂、降血压、降血糖、抗肿 瘤、抑制过敏反应、调节机体免疫防御系统、抗血栓及抗氧化等作用，韩国科学家的研究还 表明土大黄苷具有一定的美白作用，作为具有生物活性的天然有机化合物单体，有望将其 开发为创新药物。土大黄、河套大黄、西宁大黄、羊蹄大黄、华北大黄中的土大黄苷和去氧 土大黄苷含量比较高，开发一种适合于工业化生产的技术大量制备土大黄苷和去氧土大黄 苷，将其用于药物研究并最终开发为新药造福人类具有重要的意义。
[0009] 我们对现有工艺技术进行研究后发现，都存在或多或少的不足。其中，专利申请号 为201210139975. 3,发明名称为《一种快速制备高纯度土大黄苷和脱氧土大黄苷的方法》， 由于受设备及工艺的限制，每次只能制备几百毫克的样品，远远不能满足新药研究和生产 的需要。其中，专利申请号为201110212533. 2,发明名称为《从河套大黄中提取土大黄苷 的方法》，制备过程中使用低沸点易燃易爆有机溶剂萃取，不但收率低而且容易发生安全事 故，而且只制备了土大黄苷一种化合物，没有得到去氧土大黄苷，造成资源浪费。其中，专利 申请号为201210166053. 1，发明名称为《一种高效率精准分离纯化去氧土大黄苷的方法》， 由于需要经过两次大孔树脂纯化，工艺冗长，而且只得到去氧土大黄苷一种化合物，没有得 到土大黄苷，也造成资源的浪费。
[0010] 聚酰胺层析分离技术是八十年代发展起来的一种新技术，是分离科学领域的重大 创新，在天然有机化合物的分离纯化中得到广泛应用，尤其是对酚类化合物的分离效果更 好。它具有分离纯化工艺简单、聚酰胺再生处理方便、聚酰胺化学性质稳定、可重复使用数 百次甚至上千次等诸多优点，深受植物活性成分提取行业的青睐。它的分离原理是根据有 机化合物的极性大小以及分子中羟基和羰基等官能团与聚酰胺中的酰胺基团形成氢键的 强弱进行分离，在用水和酒精溶液等强极性溶剂为洗脱溶剂的情况下相当于反相色谱，极 性大的先洗脱下来，弱极性的后洗脱下来；当使用弱极性溶剂如二氯甲烷、石油醚、正己烷 等为洗脱溶剂的情况下相当于正相色谱。在工业化生产过程中，只需食用酒精洗脱和再生 就可以，制备的目标化合物无有毒有害溶剂残留，因此，采用聚酰胺分离纯化天然有机化合 物已经得到天然产物化学、植物提取等领域专家的普遍认可。
[0011] 由于土大黄苷分子和去氧土大黄苷分子的极性差别比较大又属于酸类有机化合 物，因此本发明使用聚酰胺对多种大黄中的土大黄苷和去氧土大黄苷进行分离纯化，充分 利用药材资源大批量生产高纯度土大黄苷和去氧土大黄苷满足药物研究需要。选用聚酰胺 作为分离材料、梯度洗脱用酒精浓度的确定、重结晶方法以及重结晶母液中土大黄苷和去 氧土大黄苷的回收纯化等工艺的选择也得本发明主要改进的地方。
【发明内容】
[0012] 本发明的目的在于提供一种能够同时分离土大黄苷和去氧土大黄苷的生产工艺， 该工艺生产流程简单，操作方便，不使用有毒有害溶剂，只使用食用酒精，而且还具有生产 成本低，产品纯度高，适合于工业化生产等特点。
[0013] 本发明所述的生产工艺，包括以下步骤：
[0014] 1)将大黄粉碎，
[0015] 2)用酒精提取大黄，提取液浓缩至无酒精味，加水得大黄提取液，
[0016] 3)将大黄提取液过滤后，上聚酰胺层析柱吸附，先用纯化水洗脱，后用酒精梯度洗 脱，将含有土大黄苷和去氧土大黄苷的洗脱液分别收集并浓缩至有结晶析出，过滤，干燥， 得到土大黄苷粗品和去氧土大黄苷粗品，
[0017] 4)将两种粗品分别用酒精重结晶，离心，过滤干燥，即得土大黄苷和去氧土大黄 苷，
[0018] 5)将土大黄苷重结晶母液减压回收酒精，加水稀释，上聚酰胺层析柱纯化得土大 黄苷，将去氧土大黄苷重结晶母液减压回收酒精，加水稀释，上聚酰胺树脂纯化得去氧土大 黄苷。
[0019] 其中，步骤1)中大黄是指土大黄、河套大黄、西宁大黄、羊蹄大黄、华北大黄。
[0020] 其中，步骤2)酒精提取是常温提取或加热回流提取，药材与酒精质量体积比为 1:1至1:20,酒精浓度是20% - 95%。
[0021] 其中，步骤4)梯度洗脱用酒精浓度分别是0 - 40%和50% - 95%。
[0022] 其中，步骤4)制备得到的土大黄苷的含量彡98. 5%，去氧土大黄苷的含量 彡 98. 5%〇
[0023] 其中，步骤5)重结晶用酒精浓度是20% - 95%，粗品与酒精的质量体积比为1:1 至 1:20。
[0024] 其中，步骤5)制备得到的土大黄苷，含量为98. 9%，回收率彡90%;制备得到的去 氧土大黄苷，含量为98. 7%，回收率多90%。
[0025] 其中，本发明所述酒精为食用酒精。
[0026] 优选的，本发明的生产工艺，步骤如下：
[0027] 1)将大黄粉碎成粉末，
[0028] 2)按1:1至1:20的质量体积比向大黄粉末中加入浓度为20%-95%的酒精溶液， 加热回流提取1 - 3小时，提取次数为1 - 3次，合并提取液浓缩至无酒精味，加水得大黄提 取液，
[0029] 3)将大黄提取液过滤后上聚酰胺层析柱吸附，先用水洗脱，然后用1 - 3倍柱体积 的浓度为10 - 50 %酒精洗脱，之后再用浓度50 - 95 %的酒精洗脱至目标分子完全洗脱下 来，土大黄苷先被洗脱下来，去氧土大黄苷后被洗脱下来，分别收集土大黄苷和去氧土大黄 苷洗脱液，浓缩至有结晶析出，过滤，干燥，得到土大黄苷粗品和去氧土大黄苷粗品，
[0030] 4)将土大黄苷粗品和去氧土大黄苷粗品分别用1 - 20倍的20 - 95%酒精加热回 流溶解，加活性炭脱色，室温自然结晶过滤，干燥，得到土大黄苷和去氧土大黄苷，
[0031] 5)将土大黄苷重结晶母液减压回收酒精，加水稀释，上聚酰胺层析柱纯化得土大 黄苷，将去氧土大黄苷重结晶母液减压回收酒精，加水稀释，上聚酰胺树脂纯化得去氧土大 黄苷。
[0032] 进一步优选的，本发明所述的生产工艺，包括以下步骤：
[0033] 1)将大黄粉碎成粉末，
[0034] 2)按1:7 - 10的质量体积比向大黄粉末中加入浓度为50% - 85%的酒精溶液，加 热回流提取2小时，提取次数为2次，合并提取液浓缩至无酒精味，加水得大黄提取液，
[0035] 3)将大黄提取液过滤后上聚酰胺层析柱吸附，先用水洗脱，然后用1 - 3倍柱体积 的浓度为20 - 50 %酒精洗脱，之后再用浓度50 - 80 %的酒精洗脱至目标分子完全洗脱下 来，土大黄苷先被洗脱下来，去氧土大黄苷后被洗脱下来，分别收集土大黄苷和去氧土大黄 苷洗脱液，浓缩至有结晶析出，过滤，干燥，得到土大黄苷粗品和去氧土大黄苷粗品，
[0036] 4)将土大黄苷粗品和去氧土大黄苷粗品分别用8 - 12倍的70 - 85%酒精加热回 流溶解，加活性炭脱色，室温自然结晶过滤，干燥，得到土大黄苷和去氧土大黄苷，
[0037] 5)将土大黄苷重结晶母液减压回收酒精，加水稀释，上聚酰胺层析柱纯化得土大 黄苷，将去氧土大黄苷重结晶母液减压回收酒精，加水稀释，上聚酰胺树脂纯化得去氧土大 黄苷。
[0038] 进一步优选的，本发明所述的生产工艺，包括以下步骤：
[0039] 1)将大黄用万能粉碎机粉碎，得到目数为60目的药材粉末，
[0040] 2)按1:10的料液质量体积比向所述药材粗粉中加入浓度为70%的酒精溶液，置 于带搅拌的提取罐中加热回流提取2小时，提取次数为2次，合并提取液浓缩至无酒精味， 加水得大黄提取液，
[0041] 3)将大黄提取液过滤后上聚酰胺层析柱吸附，先用水洗去极性大的水溶性杂质， 然后用两倍柱体积的浓度为30%酒精洗脱，再用60%酒精洗脱至目标分子完全洗脱下来， 土大黄苷先被洗脱下来，去氧土大黄苷后被洗脱下来，分别收集土大黄苷和去氧土