分离，用缓冲液反复洗涤，直至上清液中检测不到蛋白质。得到的固体颗粒即为羧基改性漂珠固定化漆酶，保存于4°C的冰箱中备用。
[0024]将上述羧基改性漂珠固定化漆酶lg，加入含有150mg/L的活性蓝KN-R或活性蓝X-BR的10mL染料废水中，进行脱色研究，活性蓝KN-R的脱色率达到81 %，而活性蓝X-BR尚达89 %。
[0025]实施例2
[0026]取酸洗漂珠5g放入50mL异丙醇与去离子水的混合溶液(4: I)中，开启磁力搅拌，使之形成悬浮液。在室温条件下滴加15g质量浓度为10%的苯胺基甲基三乙氧基硅烷的醇水溶液(异丙醇:去离子水=4: 1)，滴加完毕后，继续反应15h。反应结束后，过滤分离得到的固体，用醇水混合溶液洗涤颗粒表面3-5次，去掉未反应的胺基硅烷，得到的固体即为胺基改性漂珠。
[0027]在烧瓶中加入10mL DMF、5g胺基改性漂珠，向其中滴加25g马来酸酐的DMF溶液(5mol/L)，滴加结束后，在室温下28h。反应结束后，过滤分离得到的固体，用DMF洗涤颗粒表面，去掉未反应的马来酸酐，得到的固体即为羧基改性漂珠。
[0028]在烧瓶中加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH = 6.0) 50mL，羧基改性漂珠微粒5g、漆酶溶液20mL，在室温条件下搅拌反应24h，反应结束后过滤分离，用缓冲液反复洗涤，直至上清液中检测不到蛋白质。得到的固体颗粒即为羧基改性漂珠固定化漆酶，保存于4°C的冰箱中备用。
[0029]将上述羧基改性漂珠固定化漆酶lg，加入含有150mg/L的活性蓝KN-R或活性蓝X-BR的10mL染料废水中，进行脱色研究，活性蓝KN-R的脱色率达到79 %，而活性蓝X-BR尚达91 %。
[0030]实施例3
[0031]取酸洗漂珠5g放入50mL异丙醇与去离子水的混合溶液(9: I)中，开启磁力搅拌，使之形成悬浮液。在室温条件下滴加15g质量浓度为10%的γ-胺丙基三乙氧基硅烷醇水溶液(异丙醇:去离子水=9: 1)，滴加完毕后，继续反应15h。反应结束后，过滤分离得到的固体，用醇水混合溶液洗涤颗粒表面3-5次，去掉为未应的胺基硅烷，得到的固体即为胺基改性漂珠。
[0032]在烧瓶中加入10mL DMF、5g胺基改性漂珠微粒，向其中滴加35g马来酸酐的DMF溶液(5mol/L)，滴加结束后，在室温下24h。反应结束后，过滤分离得到的固体，用DMF洗涤颗粒表面，去掉未反应的马来酸酐，得到的固体即为羧基改性漂珠。
[0033]在烧瓶中加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH = 6.0) 50mL，羧基改性漂珠5g、漆酶溶液40mL，在室温条件下搅拌反应36h，反应结束后过滤分离，用缓冲液反复洗涤，直至上清液中检测不到蛋白质。得到的固体颗粒即为羧基改性漂珠固定化漆酶，保存于4°C的冰箱中备用。
[0034]将上述羧基改性漂珠固定化漆酶lg，加入含有150mg/L的活性蓝KN-R或活性蓝X-BR的10mL染料废水中，进行脱色研究，活性蓝KN-R的脱色率达到87 %，而活性蓝X-BR尚达93 %。
[0035]实施例4
[0036]取酸洗漂珠5g放入50mL异丙醇与去离子水的混合溶液(9: I)中，开启磁力搅拌，使之形成悬浮液。在室温条件下滴加5g的γ-胺丙基三乙氧基硅烷(质量浓度10% )的醇水溶液(异丙醇:去离子水=9: I)和3g的Ν-(β-氨乙基)-丫_胺丙基三乙氧基硅烷(质量浓度10% )的醇水溶液(异丙醇:去离子水=4: I)，滴加完毕后，继续反应15h。反应结束后，过滤分离得到的固体，用醇水混合溶液洗涤颗粒表面3-5次，去掉未反应的胺基硅烷，得到的固体即为胺基改性漂珠。
[0037]在烧瓶中加入10mL DMF、5g胺基改性漂珠，向其中滴加40g马来酸酐的DMF溶液(5mol/L)，滴加结束后，在室温下48h。反应结束后，过滤分离得到的固体，用DMF洗涤颗粒表面，去掉未反应的马来酸酐，得到的固体即为羧基改性漂珠。
[0038]在烧瓶中加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH = 6.0) 50mL，羧基改性漂珠5g、漆酶溶液50mL，在室温条件下搅拌反应24h，反应结束后过滤分离，用缓冲液反复洗涤，直至上清液中检测不到蛋白质。得到的固体颗粒即为羧基改性漂珠固定化漆酶，保存于4°C的冰箱中备用。
[0039]将上述羧基改性漂珠固定化漆酶lg，加入含有150mg/L的活性蓝KN-R或活性蓝X-BR的10mL染料废水中，进行脱色研究，活性蓝KN-R的脱色率达到92 %，而活性蓝X-BR尚达95 %。
【主权项】
1.一种羧基改性漂珠固定化漆酶及其制备方法，其特征制备方法包括:(1)胺基改性漂珠的制备:酸洗漂珠放入异丙醇与去离子水的混合溶液中，在室温条件下与胺基硅烷反应12-24h，过滤分离得胺基改性漂珠；(2)羧基改性漂珠的制备:胺基改性漂珠与马来酸酐加入DMF溶液，在室温下反应24-48h，过滤分离得羧基改性漂珠；(3)羧基改性漂珠固定化漆酶的制备:在磷酸盐缓冲溶液中，羧基改性漂珠和漆酶溶液，在室温条件下吸附固化24-48h，过滤分离得羧基改性漂珠固定化漆酶。2.根据权利要求1所述的羧基改性漂珠固定化漆酶及其制备方法，其特征在于:(1)中漂珠与胺基硅烷的质量比为(8-2): 1;(2)中胺基改性漂珠与马来酸酐的质量比为1: (5-12); (3)中羧基改性漂珠和漆酶溶液的质量比为1: (2-10)。
【专利摘要】本发明涉及一种羧基改性漂珠固定化漆酶及其制备方法，首先利用漂珠与胺基硅烷反应，在漂珠的表面进行胺基化改性，合成胺基改性漂珠。随后利用漂珠上的胺基与马来酸酐反应，制备羧基改性漂珠。利用漂珠上的羧基与漆酶分子中的胺基形成静电结合，而将漆酶固定在羧基改性漂珠表面，得羧基改性漂珠固定化漆酶。该固定化漆酶用于含有染料的废水中，可以有效的清除染料的颜色。
【IPC分类】C12N9/02, C12N11/14
【公开号】CN105331599
【申请号】CN201510881449
【发明人】孙德帅, 张中一, 方龙, 姜鹏
【申请人】青岛大学
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月26日