1-(2-(碳酰肼取代基团)-1h-吲哚-5-基)-3-取代脲衍生物及制备方法
【技术领域】 W01] 本发明设及脈衍生物，尤其是设及一类1-(2-(碳酷阱取代基团）-lH-吗I 噪-5-基）-3-取代脈衍生物及制备方法。
【背景技术】
[0002] 细胞经过长期进化、发展并建立了一套精密的分子调控机制来维持细胞周期的有 序进行。肿瘤细胞的最基本特征则表现为细胞周期异常和细胞无限增殖。随着分子生物 学深入发展，细胞周期调控的分子机制逐渐为人们所认识。运其中处于核屯、地位的是称 为细胞周期依赖性激酶家族（cyclin-dependentkinases,CDKs)，它是一类丝氨酸/苏氨 酸蛋白激酶。CDKs家族按其在胞内功能不同分为两类：调控细胞周期CDKs和调苄基因转 录的CDKs。作为真核基因转录调控过程中的关键因子，正性转录延伸因子b(positive transcriptionelongationfactorb,P-TE讯）主要是由CDK9及其调节蛋白切cTl组成的 异源二聚体。在调苄基因转录的过程中，CDK9能够憐酸化RNA聚合酶II中CTD区域的Serf W及负性转录延伸因子，促进转录的进行。研究表明，转录调控特别是P-TE讯中CDK9活性 调节是目前疾病如肿瘤等治疗的重要祀点。因此设计合成具有生物利用度高、抗癌活性明 显和毒性低等优点的CDKs抑制剂是目前研究的热点。
[0003] 本申请人在中国专利CN104860866A中公开5-(取代碳酷氨基）-lH-日引噪-2-碳 酷阱衍生物及其制备方法和应用。制备方法：1)合成中间体丙酬酸乙醋对硝基苯腺；2)制 备中间体5-硝基吗I噪-2-簇酸乙醋；3)制备中间体5-氨基-1H-吗I噪-2-簇酸乙醋；4) 制备中间体5-(取代碳酷氨基）-lH-吗I噪-2-簇酸乙醋；5)制备中间体5-(取代碳酷氨 基）-lH-日引噪-2-碳酷阱；6)制备Ν' -取代亚甲基-5-(取代碳酷氨基）-lH-日引噪-2-碳 酷阱衍生物。所述一类Ν' -取代亚甲基-5-(取代碳酷氨基）-lH-日引噪-2-碳酷阱衍生物 可在制备预防或治疗设及CDK9受体相关疾病药物中应用。反应成本低，产率高，反应过程 简单易控制，具有抗癌活性。
[0004] 本申请人还在中国专利CN104829597A中公开1H-日引噪-2-碳酷阱衍生物及其 制备方法和用途。制备方法：1)合成中间体丙酬酸乙醋对硝基苯腺；2)制备中间体5-硝 基吗I噪-2-簇酸乙醋；3)制备中间体5-氨基-1H-吗I噪-2-簇酸乙醋；4)制备5-(4-(化 晚-3-基）喀晚-2-基氨基）-lH-吗I噪-2-簇酸乙醋；5)制备5-(4--(化晚-3-基）喀 晚-2-基）氨基）-lH-日引噪-2-碳酷阱；6)制备Ν'-取代甲基亚基-5-((4-(化晚-3-基） 喀晚-2-基）氨基）-1H-吗I噪-2-碳酷阱衍生物。可在制备预防或治疗设及CDK9受体相 关疾病药物的用途。
【发明内容】
阳0化]本发明的第一目的在于提供具有新结构的一类1-(2-(碳酷阱取代基团）-lH-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物及其制备方法。 W06] 本发明的第二目的在于提供所述一类1-(2-(碳酷阱取代基团）-lH-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0007] 所述1-(2-(碳酷阱取代基团）-lH-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物的结构式为：
[0008]
[0009] 其中，Ri是取代或未取代的芳基、（C2-Cs)烷基；R2是取代或未取代的芳基、（C2-Cs) 烷基。
[0010] 所述1-(2-(碳酷阱取代基团）-lH-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物的制备方法， 包括W下步骤：
[0011] 1)中间体丙酬酸乙醋对硝基苯腺的合成
[0012] 在反应瓶中依次加入对硝基苯阱和无水乙醇，再在电磁揽拌状态加入丙酬酸乙 醋，升溫加热至回流反应，反应液冷却至室溫，抽滤，收集滤饼，烘干得黄色中间体丙酬酸乙 醋对硝基苯腺；
[0013] 2)中间体5-硝基吗I噪-2-簇酸乙醋的制备
[0014] 在反应瓶中，依次加入丙酬酸乙醋对硝基苯腺和多聚憐酸；再在电磁揽拌状态下 升溫到80~100°C，保溫反应，反应液冷却至室溫，加冰水，抽滤，收集滤饼，烘干得绿色中 间体5-硝基吗I噪-2-簇酸乙醋；
[001引 3)中间体5-氨基-1H-吗I噪-2-簇酸乙醋的制备
[0016] 在反应瓶中，依次加入乙醇、水、乙酸和铁粉；再在揽拌状态升溫到65~78°C后， 加入5-硝基吗I噪-2-簇酸乙醋，保溫反应，反应液热过滤，滤液减压浓缩除去溶剂；浓缩后 滤液里加入水，后在揽拌下加入乙酸乙醋，最后用碳酸氨钢调抑至7~8 ;过滤，分液，有机 相用无水硫酸钢干燥后，过滤，滤液减压浓缩得到的粗产物用硅胶柱层析分离得红色中间 体5-氨基吗I噪-2-簇酸乙醋；
[0017] 4)中间体5-异氯酸基-1H-吗I噪-2-簇酸乙醋的制备
[0018] 在反应瓶中，加入二氯甲烧；再在电磁揽拌状态下加入固体光气溶于其中；然后 将反应瓶置于冰浴条件下，加入5-氨基-1H-吗I噪-2-簇酸乙醋反应，再用硅胶柱层析分 离，减压浓缩，得栋色中间体5-异氯酸基-1H-吗I噪-2-簇酸乙醋；
[0019] W中间体5-(3-(4-甲氧基-2-甲基苯基）脈基）-lH-日引噪-2-簇酸乙醋的制备
[0020] 室溫条件下在反应瓶中，加入甲苯、5-异氯酸基-1H-日引噪-2-簇酸乙醋和4-甲 氧基-2-甲基苯胺，外溫控制在85°C条件下冷凝回流反应，将反应液冷却，过滤，再用甲苯 溶液洗涂滤饼，收集滤饼并将滤饼干燥，得白色中间体5-(3-(4-甲氧基-2-甲基苯基）脈 基）-lH-日引噪-2-簇酸乙醋； W21] 6)中间体1-(2-(碳酷阱基）-lH-吗I噪-5-基）-3-(4-甲氧基-2-甲基苯基）脈 的制备
[0022] 在圆底烧瓶中，依次加入5-(3-(4-甲氧基-2-甲基苯基）脈基）-lH-吗I噪-2-簇 酸乙醋和乙醇，溶解后加入水合阱，外溫控制在80°C条件下回流反应，将反应液抽滤，并用 乙醇溶液洗涂滤饼，收集滤饼得白色中间体1- (2-(碳酷阱基）-1H-吗I噪-5-基）-3- (4-甲 氧基-2-甲基苯基）脈；
[0023] 7) 1-(2-(碳酷阱取代基团）-lH-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物的合成 W24] 在圆底烧瓶中，依次加入1- (2-(碳酷阱基）-1H-吗I噪-5-基）-3- (4-甲氧 基-2-甲基苯基）脈和对甲氧基苯甲醒，再加入无水乙醇作为溶剂，溶解后向反应体系中 滴加1滴Ξ氣乙酸作为催化剂，室溫揽拌过夜，将反应液真空抽滤，取滤饼，干燥得白色 1-(2-(碳酷阱取代基团）-lH-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物。
[0025]在步骤1)中，所述硝基苯阱、无水乙醇和丙酬酸乙醋的摩尔配比可为1:巧~ 15) : 1.2;所述回流反应的时间可为1~2h，收率可达89%~95%。 阳0%] 在步骤2)中，所述丙酬酸乙醋对硝基苯腺和多聚憐酸的摩尔配比可为1 : (10~ 15);所述保溫反应的时间可为1~化，收率可达88%~95%。
[0027] 在步骤3)中，所述5-硝基吗I噪-2-簇酸乙醋、铁粉、乙醇、水、乙酸乙醋的摩尔配 比可为1 : 4 : 40 : 133 : 25;所述保溫反应的时间可为1~化；所述加入水的量可与乙 醇等体积，所述加入乙酸乙醋的量可与乙醇等体积；硅胶柱层析分离的洗脱剂可为石油酸 /乙酸乙醋，石油酸与乙酸乙醋的体积比可为3 : 1，收率可达70%~85%。
[0028] 在步骤4)中，所述5-氨基-1H-吗I噪-2-簇酸乙醋、二氯甲烧、固体光气的摩尔配 比可为1 : (10~20) : 3;所述加入5-氨基-1H-日引噪-2-簇酸乙醋反应的时间可为化； 所述用硅胶柱层析分离的洗脱剂可为石油酸/乙酸乙醋，石油酸与乙酸乙醋的体积比可为 10 : 1或8 : 1;收率可达70%~80%。
[0029] 在步骤W中，所述5-异氯酸基-1H-日引噪-2-簇酸乙醋、4-甲氧基-2-甲基苯胺、 甲苯的摩尔配比可为1 : 2 : (10~20);所述冷凝回流反应的时间可为化；所述干燥的条 件可在45°C的真空干燥箱中干燥4~化；收率可达87%。 W30] 在步骤6)中，所述5-(3-(4-甲氧基-2-甲基苯基）脈基）-lH-日引噪-2-簇酸乙 醋、乙醇、水合阱的摩尔配比可为1 : (20~30) : 65;所述回流反应的时间可为化；收率 可达70%。 W31] 在步骤7)中，所述1-(2-(碳酷阱基）-1H-吗I噪-5-基）-3-(4-甲氧基-2-甲基 苯基）脈、对甲氧基苯甲醒、乙醇、Ξ氣乙酸的摩尔配比可为1 : 1.2 : 20 : 0.01;收率可 达 71%。
[0032] 所述1- (2-(碳酷阱取代基团）-1H-吗I噪-5-基）-3-取代脈衍生物可在制备抗肿 瘤药物中应用。
[0033] 利用Μ?Τ法对化合物进行体外抗肿瘤活性测试：首先，通过测定一定浓度下各化 合物对不同肿瘤细胞的生长抑制率，确定敏感细胞；再测定9个预选化合物细胞毒活性，发 现在20UM/L的浓度下，除其中一个化合物外，其余化合物对肿瘤细胞的抑制率均超过60%; 最后，测定其中细胞毒活性较高的Ξ个化合物在不同浓度下对肿瘤细胞的抑制率，计算出 细胞对化合物的ICs。值（表1)，所述肿瘤细胞包括子宫颈癌化la细胞，HepG2细胞，肺 腺癌H460细胞。细胞毒活性测试发现，专利化合物对肿瘤细胞生长的抑制呈浓度依赖性， 并具有一定的选择性（专利化合物对子宫颈癌化la细胞具有较高的活性），专利化合物 1- (2- (2-碳酷阱苯亚甲基）-1H-吗I噪-5-基）-3-正下基脈、1-正下基-3- (2- (2- (4-对 甲氧苯亚甲基）碳酷阱基-1H-日引噪-5-基）脈和1-(2-(2-(4-对甲氧苯亚甲基）碳酷阱 基）-1H-吗I噪-5-基）-3-苯脈对Hela细胞的ICs。值分别是 5. 3uM/L、6. 6uM/L、5. 3uM/L。
[0034] 本发明提供了一类具有新结构的1-(2-(碳酷阱取代基团）-lH-吗I 噪-5-基）-3-取代脈衍生物，新结构除具备了【背景技术】中所提及的专利中共有N取代基团 夕F，另外引入了活性较高的脈衍生物基团，结构上具有较高的创新性，同时也有较高的抗肿 瘤活性。
[0035] 本发明所提供的制备方法，反应成本低，产率高，反应过程简单易控制，适用于工 业化生产，且该类衍生物具有一定的抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物和研究该类化合 物的构效关系。
【具体实施方式】
[0036] 为了便于理解本发明，现结合【具体实施方式】对本发明进一步说明，W进一步i全释 本发明，但不构成对本发明的任何方式的限制。
[0037] 实施例1 : 1-(2-(2-苯亚甲基碳酷阱基）-lH-吗I噪-5-基）-3-正下基脈 W38] 在干燥的25血圆底烧瓶中，依次加入1-正下基-3-(2-(碳酷阱基）-lH-吗I 噪-5-基）脈（100mg，0. 35mmol)，苯甲醒（36. 68mg，0. 35mmol)，无水乙醇巧血）作为溶剂， 揽拌使其充分溶解。再于室溫下向反应体系中滴加1滴Ξ氣乙酸作为催化剂。室溫揽拌过 夜，TLC检测反应完全后，结束反应。将