加5倍产物重量的乙醇洗脱5次；乙醇浓度为25% ;
[0050](8)第二次乙醇洗脱:在第一次乙醇洗脱处理后得到的产物再次加入一定浓度的乙醇洗脱3次；乙醇浓度为65% ;
[0051](9)对第二次乙醇洗脱后的产物进行浓缩干燥得到有效儿茶素达48%，有效比85%，咖啡因含量1.6%的粗提物；
[0052](10)粗提物处理:取粗提物，用其重量7倍的15%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤；
[0053](11)聚酰胺柱层析:所溶样品以柱体积8:1上样，以乙醇水溶液梯度洗脱，洗脱液PH值均以冰醋酸调节至PH3 ;
[0054]洗脱液分别为水:(2.5BV)、20 %乙醇(3.5BV)、30 %乙醇(5BV)，分步收集，合并无EGCG临近杂质的的洗脱液，浓缩备用；
[0055](12)自制MCC柱层析:以步骤(11)下的洗脱液浓缩物为原料，以2_3倍体积水稀释，以柱体积30:1上样，洗脱液为7%乙醇水溶液(以冰醋酸调节PH值至3)，分步收集EGCG重量百分比含量为95%以上的溶液；
[0056](13)浓缩干燥:对各段产品浓缩干燥，冷冻保存，得到最终产物儿茶素达60%，有效比96%，咖啡因含量低于0.8%.
[0057]实施例3
[0058](1)选料:将绿茶片放入蒸馏釜中；
[0059](2)水浸提:往蒸馏釜中加入85°C水，在此温度下水浸提40分钟；
[0060](3)将上述得到的产物进行固液分离；
[0061](4)在室温下将分离后的产物冷却到35 °C ;
[0062](5)过滤:用1000目滤网过滤，得到去除固体残渣的过滤产物；
[0063](6)将过滤后的产物用装有树脂的上柱水洗，水流速为7米/小时；吸附树脂采用H103 ；
[0064](7)第一次乙醇洗脱:向水洗过后的产物中加入3倍体积水稀释，再加5倍产物重量的乙醇洗脱5次；乙醇浓度为30% ;
[0065](8)第二次乙醇洗脱:在第一次乙醇洗脱处理后得到的产物再次加入一定浓度的乙醇洗脱3次；乙醇浓度为70% ;
[0066](9)对第二次乙醇洗脱后的产物进行浓缩干燥得到有效儿茶素达50%，有效比88%，咖啡因含量1.5%的粗提物；
[0067](10)粗提物处理:取粗提物，用其重量9倍的15%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤；
[0068](11)聚酰胺柱层析:所溶样品以柱体积9:1上样，以乙醇水溶液梯度洗脱，洗脱液PH值均以冰醋酸调节至PH4 ；
[0069]洗脱液分别为水:(3BV)、20 %乙醇(4BV)、30 %乙醇(6BV)，分步收集，合并无EGCG临近杂质的的洗脱液，浓缩备用；
[0070](12)自制MCC柱层析:以步骤(11)下的洗脱液浓缩物为原料，以3倍体积水稀释，以柱体积35:1上样，洗脱液为7 %乙醇水溶液(以冰醋酸调节PH值至4)，分步收集EGCG重量百分比含量为95%以上的溶液；
[0071](13)浓缩干燥:对各段产品浓缩干燥，冷冻保存，得到最终产物儿茶素达65%，有效比97%，咖啡因含量低于0.7%。
【主权项】
1.一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备提纯工艺，其特征在于，具体包括如下步骤: (1)选料:将绿茶片放入蒸馏釜中； (2)水浸提:往蒸馏釜中加入80-85°C水，在此温度下水浸提30-40分钟； (3)将上述得到的产物进行固液分离； (4)在室温下将分离后的产物冷却到30-35°C ; (5)过滤:用1000目滤网过滤，得到去除固体残渣的过滤产物； (6)将过滤后的产物用装有树脂的上柱水洗，水流速为5-7米/小时； (7)第一次乙醇洗脱:向水洗过后的产物中加入2-3倍体积水稀释，再加4?5倍产物重量的乙醇洗脱4-5次； (8)第二次乙醇洗脱:在第一次乙醇洗脱处理后得到的产物再次加入一定浓度的乙醇洗脱2-3次； (9)对第二次乙醇洗脱后的产物进行浓缩干燥得到粗提物； (10)粗提物处理:取粗提物，用其重量6-9倍的15%乙醇水溶液溶解，有不溶物则过滤； (11)聚酰胺柱层析:所溶样品以柱体积6-9:1上样，以乙醇水溶液梯度洗脱，洗脱液PH值均以冰醋酸调节至PH3-4 ； 洗脱液分别为水:(2-3BV)、20%乙醇(3-4BV)、30%乙醇(4-6BV)，分步收集，合并无EGCG临近杂质的的洗脱液，浓缩备用； (12)自制MCC柱层析:以步骤(11)下的洗脱液浓缩物为原料，以2-3倍体积水稀释，以柱体积25-35:1上样，洗脱液为7 %乙醇水溶液(以冰醋酸调节PH值至3_4)，分步收集EGCG重量百分比含量为95%以上的溶液； (13)浓缩干燥:对各段产品浓缩干燥，冷冻保存。2.如权利要求1所述的一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备提纯工艺，其特征在于，所述步骤(6)中的吸附树脂可采用H103、H1020、NKA-2、NKA-9。3.如权利要求1所述的一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备提纯工艺，其特征在于:所述第一次乙醇洗脱的乙醇浓度为20%?30%。4.如权利要求1所述的一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备提纯工艺，其特征在于:所述第二次乙醇洗脱的乙醇浓度为60?70%。5.如权利要求1所述的一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备提纯工艺，其特征在于:所述粗提物有效儿茶素达40%以上，有效比80%以上，咖啡因含量低于2%。6.如权利要求1所述的一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备提纯工艺，其特征在于:所述步骤(9)、(13)中的浓缩干燥方法为喷雾干燥。7.如权利要求1所述的一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备提纯工艺，其特征在于:所述洗脱后的乙醇废液经浓缩达到浓度70 %之后可回收再利用。
【专利摘要】本发明涉及一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备提纯工艺，具体包括如下步骤：(1)选料：将绿茶片放入蒸馏釜中；(2)水浸提：在80-85℃水浸提30-40分钟；(3)将上述产物固液分离；(4)在室温下将分离产物冷却到30-35℃；(5)过滤：用1000目滤网过滤；(6)将过滤产物用装有树脂的上柱水洗；(7)第一次乙醇洗脱：水洗后的产物中加水稀释，再加乙醇洗脱4-5次；(8)第二次乙醇洗脱：在第一次洗脱处理的产物再加乙醇洗脱2-3次；(9)对第二次乙醇洗脱后的产物浓缩干燥得到粗提物；(10)粗提物处理；(11)聚酰胺柱层析；(12)自制MCC柱层析；(13)浓缩干燥。本发明采用的是一种高EGCG低咖啡因茶叶提取物制备工艺，加工过程无残留、高效，产品特有功效明显。
【IPC分类】C07D311/62
【公开号】CN105367532
【申请号】CN201510653789
【发明人】管爵杉, 胡振长
【申请人】浙江长兴随易茶叶科技有限公司
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年10月10日