一种用鸭胆汁中提取的鸭胆酸合成鹅去氧胆酸的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种鹅去氧胆酸的制备方法，具体涉及一种用鸭胆汁中提取的鸭胆酸合成鹅去氧胆酸的方法。
【背景技术】
[0002]鹳去氧胆酸(Chenodeoxycholic acid，简称Q)CA)，是一种天然的胆酸，是1848年首次从鹅胆汁中提取得到的。鹅去氧胆酸具有溶解胆结石的能力和其他药学功能，是治疗胆结石的天然良药，同时又是合成熊去氧胆酸和其他留体化合物的原料。
[0003]由于鹅去氧胆酸是鸡、鸭与鹅等家禽胆汁的主要成分，其可直接从禽类的胆汁中提取而来。但是受技术限制，目前市场上的鹅去氧胆酸产品基本是从鸡胆汁中提取得到的。鹅的饲养数量较少，难以应用其胆汁作提取鹅去氧胆酸的原料。鸭的饲养量巨大，与鸡胆汁的组成成分相比，鸭胆汁的成分较复杂，不能应用从鸡胆汁中提取鹅去氧胆酸的方法提取鸭胆汁中的鹅去氧胆酸。
[0004]到目前为止，传统的从鸡、鸭与鹅等的胆汁中提取鹅去氧胆酸工艺包括胆汁皂化、酸化、除醇不溶物、除脂、生成钡盐、脱钡等步骤，工艺过程复杂，收率低，产业化应用困难。或者采用钙盐沉淀法，沉淀速度慢，效率低，且双氧水及活性炭脱色效果也不理想。
【发明内容】
[0005][要解决的技术问题]
[0006]本发明的目的是解决上述现有技术问题，提供一种用鸭胆汁中提取的鸭胆酸合成鹅去氧胆酸的方法。该方法通过从鸭胆汁中提取鸭胆酸粗品，然后将鸭胆酸粗品经甲酯化乙酰化后，利用黄鸣龙还原反应制得鹅去氧胆酸，收率好、纯度高；适于产业化应用。
[0007][技术方案]
[0008]为了达到上述的技术效果，本发明采取以下技术方案:
[0009]—种用鸭胆汁中提取的鸭胆酸合成鹅去氧胆酸的方法，它包括以下步骤:
[0010]I，鸭胆酸的提取
[0011]取新鲜鸭胆汁，皂化、加盐酸调节pH为2?3酸化后得到黑色膏状物；然后加入甲醇完全溶解黑色膏状物并利用石油醚除油脂后，在70°C以下真空浓缩甲醇层得胆汁酸粗品；接着加入乙腈甲醇混合液溶解胆汁酸粗品，并上硅胶柱吸附，梯度洗脱得到所述鸭胆酸粗品;
[0012]II，鹅去氧胆酸的合成
[0013]将步骤I得到的鸭胆酸粗品经甲酯化、乙酰化后得到产物A，再经黄鸣龙还原反应得到所述的鹅去氧胆酸粗品；
[0014]将该步骤得到的鹅去氧胆酸粗品经氯仿结晶，得到所述鹅去氧胆酸。
[0015]根据本发明更进一步的技术方案，在步骤I中，所述皂化是按新鲜鸭胆汁与氢氧化钠的质量比为1:0.3?0.4向新鲜鸭胆汁中加入氢氧化钠，然后密封升温至110?125°C，搅拌反应12?14ho
[0016]根据本发明更进一步的技术方案，在步骤I中，所述利用石油醚除油脂过程重复2?3次。
[0017]根据本发明更进一步的技术方案，在步骤I中，所述乙腈甲醇混合溶液是将乙腈和甲醇按体积比72:25混合均匀；所述梯度洗脱是用乙腈和甲醇体积比范围为72:25?60:40的乙腈甲醇混合溶液梯度洗脱。
[0018]根据本发明更进一步的技术方案，在步骤I中，所述梯度洗脱后用薄层色谱法(TLC)点样确认分段收集洗脱液得到鸭胆酸粗品。
[0019]根据本发明更进一步的技术方案，在步骤II中，所述甲酯化是将鸭胆酸粗品加入甲醇溶解后，缓慢加入鸭胆酸粗品质量0.11?0.13倍的质量分数为98%的硫酸，常温下甲酯化反应4?5h ;然后加入氢氧化钠至反应液pH为6?8，终止甲酯化反应；过滤去除中和产物硫酸钠，浓缩滤液得到鸭胆酸甲酯化物。
[0020]根据本发明更进一步的技术方案，在步骤II中，所述乙酰化是向所述鸭胆酸甲酯化物中加入醋酸酐后，在135?145°C下乙酰化反应4?5h，反应完全后，在120°C以下真空浓缩得到产物A。
[0021]根据本发明更进一步的技术方案，在步骤II中，所述黄鸣龙还原反应是向产物A中加入乙二醇、质量分数为85%的水合肼溶液和氢氧化钾，然后加热回流4?5h，得到所述鹅去氧胆酸粗品。
[0022]根据本发明更进一步的技术方案，所述产物A、乙二醇、水合肼溶液和氢氧化钾的质量比为1:3:1:5。
[0023]在步骤I中，胆汁酸粗品经上硅胶柱梯度洗脱的过程中，还会洗脱出鹅去氧胆酸粗品，该部分粗品可通过氯仿结晶得鹅去氧胆酸精品。
[0024]下面将详细地说明本发明。
[0025]本发明通过皂化、酸化、除脂反应后，利用乙腈甲醇混合溶液将得到的胆汁酸粗品过硅胶柱分离纯化，通过薄层色谱法(TLC)点样确认分段收集洗脱液得到鸭胆酸粗品。由于硅胶柱分离纯化后，得到的鸭胆酸粗品纯度较高，从而保证后续反应得到的鹅去氧胆酸产物的高纯度。在加入石油醚除油脂时，通过虹吸分去石油醚层，可浓缩石油醚层回收石油醚，浓缩物为油脂，丢弃。
[0026]所述的浓缩甲醇层是指除油脂反应后的甲醇溶液，需在70°C以下真空浓缩甲醇层，因为常压下甲醇难以浓缩完全，且浓缩的温度不易过高，以免破坏反应产物。利用乙腈甲醇混合液梯度洗脱胆汁酸粗品，是根据其粗品中的物质化学极性不同而梯度洗脱得到鸭胆酸粗品和鹅去氧胆酸粗品的。将洗脱后得到的鸭胆酸粗品加入质量分数为98 %的硫酸甲酯化反应3.8?4.2h，反应时间不能过长或过短，反应时间过短，鸭胆酸粗品不能完全甲酯化，过长又可能导致产生过多杂质，影响后续操作从而最终影响鹅去氧胆酸的纯度。
[0027][有益效果]
[0028]本发明与现有技术相比，具有以下的有益效果:
[0029]本发明的制备方法得到的鹅去氧胆酸得率高、纯度高，基本达到95 %左右。并且利用本发明的制备方法，可以废物利用，降低成本，简单有效，并适于产业化应用。
【具体实施方式】
[0030]下面结合本发明的实施例对本发明作进一步的阐述和说明。
[0031]下述实施例中的N倍量是指N倍质量，其中N表示>0的自然数。
[0032]实施例1:
[0033]I，鸭胆酸的提取
[0034]首先取1000g新鲜鸭胆汁投入反应釜，0.35倍量氢氧化钠继续投入，密封保持压力升温至120°C，搅拌反应12小时，静置降至室温，加入稀盐酸调pH值为3得黑色膏状物200g ;向黑色膏状物中加入3倍量甲醇，加热至50°C，搅拌至溶解完全；继续加入3倍量石油醚搅拌30分钟，静置，虹吸分去石油醚层；重复加入石油醚除油脂过程3次后，收集甲醇层，并在70°C以下真空浓缩甲醇层得胆汁酸粗品70g，加入2倍量乙腈、甲醇体积比为75:25的乙腈甲醇混合溶液，常温溶解后上硅胶柱吸附；接着利用乙腈、甲醇体积比为75:25?60:40的乙腈甲醇混合溶液梯度洗脱，通过TLC确认分段收集洗脱液得鸭胆酸粗品32g;
[0035]II，鹅去氧胆酸的合成
[0036]向步骤I得到鸭胆酸粗品中加入2倍量甲醇，常温搅拌至溶解完全，缓慢加入
0.12倍量98%硫酸，常温下进行甲酯化反应4小时；加入适量固体氢氧化钠中和硫酸，使pH值为6?8，过滤除去中和产物硫酸钠，70°C以下真空浓缩滤液，得鸭胆酸甲酯化物；加入鸭胆酸粗品1.5倍量醋酸酐