⑦海藻糖、蔗糖和乳糖，实验结果如图19所示。
[0329]⑧海藻糖、蔗糖和半乳糖，实验结果如图20所示。
[0331]⑨海藻糖、蔗糖和果糖，实验结果如图21所示。
[0333 ]⑩海藻糖、葡萄糖和乳糖，实验结果如图22所示。
[0335] 3.样本处理方法
[0337]上述结果表明，在将本发明的荧光定量核酸诊断试剂体系冻干后，常温放置后再 进行临床样本检测，与对比产品进行比较，不论在检出准确率上，还是在CT值的变化上面， 都没有显著性差异，而且灵敏度也比较好。本发明研究出的一种可以冻干的检测DNA的荧光 定量核酸诊断试剂体系，能实现冷冻干燥，和上市的同类产品相比较，检测时操作简单，只 需一步水化就可以实现检测目的，而且能达到现阶段核酸诊断试剂无法达到的常温运输和 保存的目的。
[0338]所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这种新产品 和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改，以实现类似的执行情 况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。
【主权项】
1. 一种核酸扩增体系，其特征在于，包括:缓冲液、酶混合液、核酸扩增反应液，和，低温 冻干保护剂。2. 根据权利要求1所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述缓冲液进一步包括以下组份 中的一种或多种:脱氧核糖核苷三磷酸、氯化镁、Tris-盐酸缓冲液、氯化钾。3. 根据权利要求1所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述酶混合液进一步包括以下组 份中的一种或多种:RNA逆转录酶、RAN抑制剂、DNA聚合酶。4. 根据权利要求1所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述核酸扩增反应液进一步包括 以下组份中的一种或多种:上游引物、下游引物、探针。5. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂，包 括:海藻糖。6. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂中 海藻糖使用的终浓度为1~10_〇 1 /L。7. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂中 海藻糖使用的终浓度为1.2~5mmol/L。8. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂中 海藻糖使用的终浓度为1.5~2.5mmo1 /L。9. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂进 一步包括以下糖类/多元醇中的一种或多种:蔗糖、甘油醛、阿拉伯糖、来苏糖、戊糖、核糖、 木糖、半乳糖、葡萄糖、己糖、甘露糖、塔罗糖、庚糖、葡萄糖、果糖、葡糖酸、山梨醇、乳糖、甲 基α吡喃糖苷、麦芽糖、异抗坏血酸、抗坏血酸、内酯、山梨糖、葡糖二酸、赤藓糖、苏糖、阿拉 伯糖、阿洛糖、阿卓糖、蔗糖、古罗糖、艾杜糖、塔罗糖、赤藓酮糖、核酮糖、阿洛酮糖、塔格糖、 右旋糖酐40。10. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂进 一步包括以下聚合物中的一种或多种:羟乙基磺酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、葡聚糖、白 蛋白、聚维酮Κ24。11. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂进 一步包括以下溶剂中的一种或多种：乙烯乙二醇、甘油、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。12. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂进 一步包括表面活性剂。13. 根据权利要求12所述冻干保护剂，其特征在于，所述表面活性剂为Tween80。14. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂进 一步包括氨基酸类化合物。15. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述冻干保护剂进 一步包括以下盐类中的一种或多种:磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐。16. 根据权利要求1~4中任一项所述的核酸扩增体系，其特征在于，所述核酸扩增体系 的冻干保护剂不包括甘露醇。17. -种应用于核酸扩增体系的冻干保护剂，其特征在于，包括:海藻糖。18. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中海藻糖使用的终 浓度为1~10mm〇l/L。19. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中海藻糖使用的终 浓度为1 · 2~5mmol/L〇20. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中海藻糖使用的终 浓度为 1.5~2.5mmol/L。21. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，进一步包括以下糖类/多元醇中的 一种或多种:蔗糖、甘油醛、阿拉伯糖、来苏糖、戊糖、核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、己糖、甘露 糖、塔罗糖、庚糖、葡萄糖、果糖、葡糖酸、山梨醇、乳糖、甲基α吡喃糖苷、麦芽糖、异抗坏血 酸、抗坏血酸、内酯、山梨糖、葡糖二酸、赤藓糖、苏糖、阿拉伯糖、阿洛糖、阿卓糖、鹿糖、古罗 糖、艾杜糖、塔罗糖、赤藓酮糖、核酮糖、阿洛酮糖、塔格糖、右旋糖酐40。22. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，进一步包括以下聚合物中的一种或 多种:羟乙基磺酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白、聚维酮Κ24。23. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，进一步包括以下溶剂中的一种或多 种：乙烯乙二醇、甘油、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。24. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，进一步包括表面活性剂。25. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，所述表面活性剂为Tween80。26. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，进一步包括氨基酸类化合物。27. 根据权利要求17所述冻干保护剂，其特征在于，进一步包括以下盐类中的一种或多 种:磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐。28. 根据权利要求17~27中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂，其特征在 于，所述核酸扩增体系的冻干保护剂不包括甘露醇。29. -种如权利要求17~28中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方 法，其特征在于，包括以下步骤:将所述组份按照使用的浓度比混匀，即得到冻干保护剂。30. -种如权利要求17~28中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方 法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将所述组份按照使用的浓度比混匀； 步骤2:冷冻干燥，即得到冻干保护剂。31. 根据权利要求30所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方法，其特征在于， 所述冷冻干燥的步骤，进一步包括以下子步骤： 子步骤1:干燥的步骤； 子步骤2:冻干的步骤； 所述子步骤1中，冻干剂和核酸扩增反应试剂的体积比为3.6-6.8:13.2-16.3，所述核 酸扩增反应试剂为RNA或DNA实时荧光定量PCR反应试剂； 所述子步骤1中，所述干燥的步骤采用冷冻真空干燥； 所述步骤2中，所述冻干的方法包括以下阶段： 预冻阶段:隔板温度下降到_45°C- _55°C，保持时间3-5h; 一次升华阶段:保持2-4h; 二次升华阶段:保持2-4h; 终干燥阶段:保持2_3h。32. -种如权利要求17~28中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的使用方 法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将用于核酸扩增体系的酶混合液、核酸扩增反应液、低温冻干保护液将按照对 应的浓度比混匀，即得到用于核酸扩增体系的组合物； 步骤2:冷冻干燥，即得到冻干状态的用于核酸扩增体系的组合物。33. 根据权利要求32所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的使用方法，其特征在于， 所述冷冻干燥的步骤，进一步包括以下子步骤： 子步骤1:干燥的步骤； 子步骤2:冻干的步骤； 所述子步骤1中，冻干剂和核酸扩增反应试剂的体积比为3.7-6.7:13.5-16.1，所述核 酸扩增反应试剂为RNA或DNA实时荧光定量PCR反应试剂； 所述子步骤1中，所述干燥的步骤采用冷冻真空干燥； 所述步骤2中，所述冻干的方法包括以下阶段： 预冻阶段:隔板温度下降到_45°C- _55°C，保持时间3-5h; 一次升华阶段:保持2-4h; 二次升华阶段:保持2-4h; 终干燥阶段:保持2_3h。34. -种包括如权利要求17~28中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的检 测试剂盒，其特征在于:所述检测试剂盒能够在常温下运输和/或保存。35. -种如权利要求17~28中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂在核酸扩 增体系的制备及使用中的应用。36. -种如权利要求29~31中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方 法在核酸扩增体系的制备及使用中的应用。37. -种如权利要求32~33中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的使用方 法，在核酸扩增体系的制备及使用中的应用。38. -种如权利要求17~28中任一项所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的使用方 法，其步骤为:所述冻干保护剂制备好放入PCR管中冻干保存;在使用时取出冻干保存的PCR 管，直接加入样本4~10ul、去RNA酶水10~20ul，混匀即可上机测试。
【专利摘要】本发明公开了一种核酸扩增体系及其冻干保护剂。核酸扩增体系，包括：缓冲液、酶混合液、核酸扩增反应液，和，低温冻干保护剂。所述缓冲液进一步包括以下组份中的一种或多种：dNTP、Mgcl2、Thris-Hcl、KCl。所述酶混合液进一步包括以下组份中的一种或多种：RNA逆转录酶、RAN抑制剂、DNA聚合酶。所述应用于核酸扩增体系的冻干保护剂的制备方法，包括以下步骤：将所述组份按照使用的浓度比混匀，即得到冻干保护剂。本发明可以冻干的检测RNA/DNA的荧光定量核酸诊断试剂体系，能实现冷冻干燥，只需一步水化就可以实现检测目的，而且能达到现阶段核酸诊断试剂无法达到的常温运输和保存的目的。
【IPC分类】C12Q1/68
【公开号】CN105463125
【申请号】CN201610074303
【发明人】吴凯, 李丹, 程亮, 张琳, 王宝中
【申请人】江苏正大天创生物工程有限公司
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2016年2月2日