一种用于直肠腺癌诊疗的分子标记物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及一种用于直肠腺癌诊疗的分子标记物，所述分子 标记物为SHR00M4。
【背景技术】
[0002] 直肠腺癌是全世界高发的消化系统恶性肿瘤，其发病率逐年上升。在美国，其发病 率和病死率位居恶性肿瘤的第3位。在中国其在男女恶性肿瘤死亡率占第4位，对人类的健 康和生命有着严重的危害。直肠腺癌的发生、发展是一个多基因改变、多阶段致癌的复杂过 程，包括基因的激活、抑癌基因的失活或缺失、错配修复基因的突变等。直肠腺瘤从良性病 变经过癌前病变发展至恶性病变，直至浸润和转移的复杂的演变过程。
[0003]直肠腺癌早期临床症状隐匿，不易发现，大多患者就诊时已到中晚期，失去了最佳 手术时机。有报道表明，早期直肠腺癌患者术后5年生存率约为90%，而晚期患者仅为15%。 因此，早发现、早治疗是降低直肠腺癌患者高死亡率、改善预后的关键。临床上直肠腺癌早 期诊断主要依赖于肠镜、影像学检查和血清学标志物癌胚抗原(CEA)等，肠镜是直肠腺癌诊 断最可靠的方法，但具有侵入性、费用昂贵，患者依从性差;CT和超声检查不易发现较小病 变，对直肠腺癌的早期诊断受到一定限制;CEA是临床广泛应用的血清标志物，其敏感性和 特异性较低，主要用于直肠腺癌患者的治疗监测。
[0004]目前，明确直肠腺癌的组织学诊断主要依靠HE染色切片，还没有一种可以用作独 立组织诊断的标记物，寻找到一种用于直肠腺癌诊断、预后和治疗的新型特异性标记物就 变得非常必要。近年来，随着分子生物学的不断发展，一些新的生物标志物已经出现，不仅 对直肠腺癌的病理诊断提供了很大的帮助，并为其预后判断、治疗方案的选择提供了更全 面的依据，在一定程度上发挥了独特的作用。进一步寻找与直肠腺癌相关的癌基因和抑癌 基因作为评价其生物学行为的辅助指标和作为靶向治疗的靶点对于研究直肠腺癌具有重 要的意义。
【发明内容】
[0005]为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于直肠腺癌诊疗的分 子标记物-SHR00M4基因。相比传统的直肠腺癌的诊断和治疗方法，使用基因标志物来诊断 和治疗直肠腺癌具有及时性、特异性和无创性。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007]本发明提供了SHR00M4基因及其表达产物在制备诊断直肠腺癌的产品中的应用。
[0008]进一步，所述产品包括:通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片检 测SHR00M4基因及其表达产物的表达水平以诊断直肠腺癌的产品。
[0009] 进一步，所述用RT-PCR诊断直肠腺癌的产品至少包括一对特异扩增SHR00M4基因 的引物;所述用实时定量PCR诊断直肠腺癌的产品至少包括一对特异扩增SHR00M4基因的引 物;所述用免疫检测诊断直肠腺癌的产品包括:与SHR00M4蛋白特异性结合的抗体;所述用 原位杂交诊断直肠腺癌的产品包括:与SHR00M4基因的核酸序列杂交的探针;所述用芯片诊 断直肠腺癌的产品包括:蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与SHR00M4蛋白特异性 结合的抗体，基因芯片包括与SHR00M4基因的核酸序列杂交的探针。
[0010] 进一步，所述基因芯片可用于检测包括SHR00M4基因在内的多个基因（例如，与直 肠腺癌相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括SHR00M4蛋白在内的 多个蛋白质(例如与直肠腺癌相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与直肠腺癌的标 志物同时检测，可大大提高直肠腺癌诊断的准确率。
[0011] 本发明提供了一种诊断直肠腺癌的产品，所述产品能够通过检测直肠组织中 SHR00M4基因的表达水平来诊断直肠腺癌。
[0012] 进一步，所述产品包括芯片、或试剂盒；其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯 片;所述试剂盒包括基因检测试剂盒、蛋白免疫检测试剂盒。
[0013] 进一步，所述基因检测试剂盒可用于检测包括SHR00M4基因在内的多个基因（例 如，与直肠腺癌相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白免疫检测试剂盒可用于检测包括 SHR00M4蛋白在内的多个蛋白质（例如与直肠腺癌相关的多个蛋白质）的表达水平。将直肠 腺癌的多个标志物同时进行检测，可大大提高直肠腺癌诊断的准确率。
[0014] 本发明提供了SHR00M4基因及其表达产物在制备治疗直肠腺癌的药物组合物中的 应用。
[0015] 进一步，所述药物组合物包括增加SHR00M4基因表达、增强SHR00M4表达功能、和/ 或增强SHR00M4表达产物活性的试剂。
[0016] 进一步，所述试剂包括:含有能编码功能性SHR00M4蛋白的核酸的试剂、SHR00M4蛋 白的激活剂、含有SHR00M4蛋白质的试剂。
[0017]其中，所述含有能编码功能性SHR00M4蛋白的核酸的试剂可以是在有利条件下翻 译成活性形式的SHR00M4蛋白的单链核酸(如mRNA)或双链核酸(如DNA)，所述的核酸可以连 接在表达载体上或重组到宿主细胞里，只要能编码成活性SHR00M4蛋白，任何一种SHR00M4 基因的携带方式均可。所述的SHR00M4蛋白激活剂是指刺激SHR00M4蛋白活性、增加SHR00M4 蛋白活性、促进SHR00M4蛋白活性、增强SHR00M4蛋白激活、使SHR00M4蛋白活性敏感化或上 调SHR00M4蛋白活性的试剂，如去甲基化试剂、SHR00M4启动子和/或增强子特异性的转录激 活剂、SHR00M4蛋白的激动剂(如激活抗体)等。
[0018]进一步，上述药物组合物还包括药学上可接受的载体，所述载体可以是一种也可 以是多种，所述载体包括但不限于稀释剂如乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;粘合剂 如淀粉、预胶化淀粉、糊精、麦芽糖糊精、鹿糖、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、 乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯比咯烷酮、海藻酸及海藻酸盐、黄原胶、羟丙基纤 维素和羟丙基甲基纤维素等;表面活性剂如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸 钠、硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等;致湿剂如甘油、淀粉等;吸附载体如淀粉、乳糖、斑脱土、 硅胶、高岭土和皂粘土等；润滑剂如硬脂酸锌、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇、滑石粉、硬脂酸 钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末、氢化植物油、硬脂富马酸钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、单月桂蔗 糖酸酯、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、十二烷基硫酸镁等;填充剂如甘露醇(粒状或粉状）、 木糖醇、山梨醇、麦芽糖、赤藓糖、微晶纤维素、聚合糖、偶合糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀 粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸钙和碳酸氢钠等；崩解剂如交联乙烯吡咯烷 酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基甲基、交联羧甲基纤维素钠、大豆多糖等。
[0019] 所述的药物组合物可以使用不同的添加剂进行制备，例如稳定剂、杀菌剂、缓冲 剂、等渗剂、螯合剂、pH控制剂及表面活性剂。
[0020] 稳定剂包括人类血清蛋白、L-氨基酸、糖及纤维素衍生物。L-氨基酸还可以包括甘 氨酸、半胱氨酸及谷氨酸中的任意一个。糖类包括单糖，例如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖 等;糖醇，例如甘露醇、纤维醇、木糖醇等;二糖，例如蔗糖、麦芽糖、乳糖等;多聚糖，例如葡 聚糖、羟丙基淀粉、硫化软骨素、透明质酸等及它们的衍生物。纤维素衍生物包括甲基纤维 素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素及羟甲基纤维素钠。
[0021] 表面活性剂包括离子或非离子表面活性剂，例如聚氧化乙烯烷基酯、山梨聚糖单 酰基酯、脂肪酸甘油酯。
[0022] 添加剂缓冲剂可以包括硼酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、谷氨酸及相应的盐(它们的碱金 属或碱性稀土金属盐，例如钠盐、钾盐、钙盐及镁盐）。等渗剂包括氯化钾、氯化钠、糖及甘 油。螯合剂包括乙二胺四乙酸钠及柠檬酸。
[0023] 本发明还提供了一种治疗直肠腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括增加 SHR00M4基因表达、增强SHR00M4表达功能、和/或增强SH