与细胞的抗衰老相关的生物分子群的制作方法_2

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施方式是一种再生医疗用材料,该材料通过培养所述类Muse细胞而得到。另外,另一实施方式是一种损伤组织的治疗方法,该方法包含将所述类Muse细胞或类Muse细胞群导入损伤部位的工艺。另外,另一实施方式是一种用于治疗损伤组织的治疗药,该治疗药含有所述类Muse细胞或类Muse细胞群。另外,另一实施方式是一种抗衰老方法,该方法包含将所述类Muse细胞或类Muse细胞群导入组织的工艺。另外,另一实施方式是用于抗衰老的化妆品,该化妆品含有所述类Muse细胞或类Muse细胞群。
[0045]本发明的一实施方式是一种类Muse细胞诱导剂,其中含有针对ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的抑制剂。如果使用该诱导剂,则可以从细胞中诱导Muse细胞。另外,如果将该类Muse细胞诱导剂应用于恶性肿瘤细胞,则可以治疗恶性肿瘤。另外,通过抑制恶性肿瘤等效果,还可以在用于辅助畜牧业中的动物的饲养的添加剂等中使用。
[0046]本发明的一实施方式是一种损伤组织的治疗方法,该方法包含抑制损伤组织的细胞中的ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的表达或功能的工艺。此时,损伤组织中的细胞转化为Muse细胞,进一步分化,由此修复损伤组织。另外,另一实施方式是一种治疗药,该治疗药中含有针对ELAVL2、TEAD 1、或GATAD2B的抑制剂。
[0047 ]本发明的一实施方式是一种组织的抗衰老方法,该方法包含抑制组织的细胞中的ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的表达或功能的工艺。此时,组织中的细胞转化为Muse细胞,进一步进行分化,由此重建组织。另外,另一实施方式是一种抗衰老剂或用于抗衰老的化妆品,其中含有针对ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的抑制剂。
[0048]本发明的一实施方式是一种延长细胞或细胞群的寿命的方法,该方法包含抑制ELAVL2、TEAD 1、或GATAD2B的表达或功能的工艺。根据该方法,可以延长细胞或细胞群的寿命,因此,可以长期培养研究用的细胞。另外,可以用于抗衰老。另外,另一实施方式是细胞或细胞群的寿命延长剂,其中含有针对ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的抑制剂。延长的期间可以是1、2、3、4、5、10、15、20、25、或30周以上,也可以是这些任意两个值的范围内。延长后的细胞的寿命可以是6、7、8、9、10、15、18、20、25、30、或40周以上,也可以是这些任意两个值的范围内。
[0049]正常细胞通过重复分裂来形成组织。另一方面,分裂的次数存在界限,为人所知的是,通常以存在细胞时为分界线停止分裂为人所知。一般将该细胞分裂面临停止状态的情况称为细胞老化。细胞老化是组织的功能降低和人老化的原因。该细胞老化实际上可以在in vitro实验中观察到,通常,如果重复正常细胞的继代培养,则以存在细胞时为界限,细胞不增殖。这对研究用细胞的可用性设置了界限,是抑制细胞工程学领域的研究的发展的一个原因。另一方面,如果使用所述实施方式所涉及的方法,则可以延长细胞或细胞群的寿命ο
[0050]本发明的一实施方式是一种寿命延长后的细胞或细胞群的生产方法,该方法包含抑制ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的表达或功能的工艺。根据该生产方法,可以简便地生成寿命被延长的细胞或细胞群。所得到的细胞或细胞群的寿命被延长,因此例如在研究或再生医疗等用途中有用。
[0051 ] 本发明的一实施方式是一种⑶105 mRNA高表达细胞的生产方法,该方法包含抑制ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的表达或功能的工艺。根据该生产方法,可以简便地生产⑶105mRNA高表达细胞。另外,所得到的⑶105 mRNA高表达细胞可以用于与上述的类Muse细胞相同的用途。
[0052]本发明的一实施方式是一种成纤维细胞产生细胞的生产方法,该方法包含抑制ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的表达或功能的工艺。根据该生产方法,可以简便地生产成纤维细胞产生细胞。另外,所得到的成纤维细胞产生细胞可以用于与上述的类Muse细胞相同的用途。
[0053]本发明的一实施方式是一种使类Muse细胞活性化的方法,该方法包含抑制ELAVL2、TEAD 1、或GATAD2B的表达或功能的工艺。根据该生产方法,可以简便地使类Muse细胞活性化。在此,“活性化”包含细胞大小变大。此时的细胞大小也可以变大到2、5、或10倍以上。活性化后的类Muse细胞可以用于与上述的类Muse细胞相同的用途。另外,另一实施方式是一种类Muse细胞活性化剂,其中含有针对ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的抑制剂。
[0054]本发明的一实施方式是一种恶性肿瘤的治疗方法,该方法包含抑制ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的表达或功能的工艺。另外,另一实施方式是一种恶性肿瘤的治疗药,其中含有针对ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的抑制剂。由以往的低分子化合物构成的治疗药诱导细胞死亡来治疗恶性肿瘤,本实施方式的治疗方法、治疗药、或诱导剂可以通过将恶性肿瘤细胞向类Muse细胞诱导来发挥治疗效果。
[0055]所述实施方式所涉及的各方法还可以包含(a)对细胞导入针对ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的抑制剂的工艺、或(b )培养或增殖导入有所述抑制剂的细胞的工艺。
[0056]本发明的一实施方式是一种增加细胞群中的类Muse细胞的比例的方法,该方法包含使针对ELAVL2、TEAD1、或GATAD2B的抑制剂与细胞群接触的工艺。另外,另一实施方式是一种类Muse细胞的比例增加后的细胞群的生产方法,该方法包含使针对ELAVL2、TEAD 1、或GATAD2B的抑制剂与细胞群接触的工艺。
[0057]本发明的一实施方式是一种研究用或医疗用试剂盒,其中含有所述抑制剂。该试剂盒例如也可以是一种制成类Muse细胞用、制成人工脏器用、延长细胞或细胞群的寿命用、抗衰老用、或治疗用的试剂盒。该试剂盒例如还可以包含缓冲液、记载有效成分信息的附件、用于收容有效成分的容器、或包装等。
[0058]本发明的一实施方式是一种类Muse细胞诱导剂、细胞或细胞群的寿命延长剂、类Muse细胞活性化剂、抗衰老剂、用于抗衰老的化妆品、或治疗药的筛选方法,并且该方法包含挑选降低ELAVL2、TEAD 1、或GATAD2B的表达或功能的被测物质的工艺。根据该方法,可以得到类Muse细胞诱导剂等。该方法也可以包含向细胞导入被测物质的工艺和测定ELAVL2、TEAD 1、或GATAD2B的表达或功能量的工艺。
[0059]在本发明的一实施方式中使用的“细胞”也可以是体细胞。该体细胞是除了生殖细胞的其他的细胞,因此包含皮肤细胞、或成纤维细胞等。体细胞通常多能性被限定或消失。另外,所述细胞也可以是来自皮肤、心脏、肺、胃、肠、肾脏、子宫、大动脉外膜、或间充质组织的细胞。或者,所述细胞也可以是恶性肿瘤细胞。恶性肿瘤例如包含正常的细胞发生突然变异而产生的肿瘤。恶性肿瘤可能发生在全身的所有的脏器和组织,如果恶性肿瘤细胞增殖,则形成块并侵入破坏周囲的正常的组织。该恶性肿瘤例如包含恶性上皮肿瘤、肉瘤、血液恶性肿瘤、肺癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、肾癌、肾上腺癌、胆道癌、乳癌、大肠癌、小肠癌、宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌、尿管癌、肾盂癌、尿管癌、阴经癌、精巢癌、脑癌、中枢神经系统的癌、末梢神经系统的癌、头颈癌(口腔癌、鼻咽癌、咽喉癌、鼻腔.鼻窦癌、唾液腺癌、甲状腺癌等)、胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤、皮肤癌、恶性黑色素瘤、甲状腺癌、唾液腺癌、或恶性淋巴等。
[0060]在本发明的一实施方式中,所谓“内源性”表示被测物质从细胞的内部的机制而来而存在的。例如,在细胞内持续地表达的蛋白质仅限于表达出来的蛋白质属于内源性。
[0061]在本发明的一实施方式中,“抑制基因的表达”例如包含抑制从基因向mRNA的转录机制、或抑制从mRNA向蛋白质或多肽翻译的机制。另外,例如包含通过诱导基因、mRNA、蛋白质的分解来抑制。另外,在生物化学领域中,基因的作用例如有生成来自该基因的mRNA、生成来自该基因的蛋白质、以及使来自该基因的蛋白质发挥活性。因此,在本发明的一实施方式中,“抑制基因的功能”包含抑制基因的表达的结果,mRNA或蛋白质的生成量减少。或者,“抑制基因的功能”包含降低来自该基因的mRNA、或来自该基因的蛋白质所具有的活性。
[0062]在本发明的一实施方式中,“表达被抑制的状态”包含表达量与正常时相比较,显著地减少的状态。所述“显著地减少”例如可以是表达量减少到0.35、0.3、0.2、0.1、0.05、
0.01、或0倍以下的状态,也可以是减少到这些任意两个值的范围内的状态。从稳定地诱导类Muse细胞的观点、或更稳定地延长细胞或细胞群的寿命的观点出发,优选为0.2倍以下,更优选0.1倍以下。另外,表达量也可以以mRNA量、或蛋白质量为指标。另外,在本发明的一实施方式中,“显著地”例如也可以是使用学者的t检测(单侧或两侧)来评估统计学上的显著性差异,结果P〈0.05时的情况。或者,包括实质上产生差异的状态。另外,针对“功能被抑制的状态”的抑制强度,可以说与表达抑制的抑制强度的实施方式相同。
[0063]在本发明的一实施方式中,“抑制剂的形态”没有特别地限定,例如,也可以是RNA链、DNA链、低分子有机化合物、抗体、或多肽。所述RNA链例如可以使用对ELAVL2、TEAD 1、或GATAD2B具有RNAi作用的RNA链(例如,s i RNA、shRNA、或sma 11 RNA等)。作为所述DNA链,可以使用对所述RNA链进行编码的DNA链。该DNA链的形态例如也可以是载体。所述低分子有机化合物可以通过活用组合化学或HTS(高通量筛选)来得到。在组合化学中,例如也可以使用自动合成装置L-C0S系列(昭光科学公司)。在HTS中,例如也可以使用Octet系统(ForteB1公司)。所述抗体可以通过公知的抗体制备法(例如,Clackson et al., Nature.1991 Aug15; 352(6336):624-628.所记载的方法)来制备,也可以从受托公司(例如,EVEC,Inc.)购买。此时,优选制备抗体库,选择抑制活性高的抗体。所述多肽可以从受托公司(例如,WakoPure Chemical Industries , Ltd.)购买。另外,抑制剂包含抑制对象的表达的物质、或抑制功能的物质。抑制剂优选为细胞毒性低、或实质上不具有细胞毒性的物质。此时,当将抑制剂投入到生物体内时,可以抑制副作用。从抑制细胞毒性或副作用、且稳定地诱导类Muse细胞的观点、或抑制细胞毒性或副作用、且更稳定地延长细胞或细胞群的寿命的观点出发,抑制剂优选为具有RNAi作用的RNA链、或具有对该RNA链进行编码的DNA序列的DNA链。另外,当特别地指定时,根据抑制剂的形态也可以除去hsa-miR-520
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