具有嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒的制作方法

具有嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒的制作方法
【专利说明】具有嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2013年7月8日提交的欧洲专利申请号13175637.1的权益。上述申请的 全部教导内容通过引用纳入本文。
[0003] 序列表
[0004] -同提交序列表的电子版本，其通过引用纳入本文并形成该提交申请的部分。
[0005] 政府支持
[0006] 本发明是在美国政府支持下由国家卫生研究院（National Institutes of Health)授予的基金号P01-GM062580和AI-89618资助完成。美国政府享有本发明的一定权 利。 发明领域
[0007] 本发明设及轮状病毒颗粒用于展示单独形式或与其它分子的复合物形式的异源 蛋白的应用。本发明还设及采用冷冻电子显微镜(冷冻EM)，利用运些经修饰的轮状病毒颗 粒W快速确定所述异源蛋白或所述复合物的结构的方法。本发明还设及使患者免疫的方 法，其中所述方法包括:给予所述患者本发明的经修饰的轮状病毒颗粒。
[000引背景
[0009] 呼肠病毒科(Reoviridae)家族包括结构相关的一组病毒。该病毒家族的成员可造 成哺乳动物与鸟类的肠胃系统和呼吸道感染。该家族的一些病毒还能感染植物。
[0010] 所述呼肠病毒科是无包膜、双链RN病毒，其由二十面体衣壳形成，该衣壳通常由蛋 白质外层和一个或多个蛋白质内层组成。轮状病毒(Rotavirus)属形成呼肠病毒科家族的 部分。轮状病毒形成Ξ层的病毒颗粒。轮状病毒颗粒的外层由壳蛋白VP7,和纤突蛋白VP4组 成；中层由VP6组成;而内层由VP2组成。所述Ξ层的病毒颗粒在通过膜蛋白酶激活之后是感 染性的。在轮状病毒细胞侵入过程中，所述病毒颗粒的外层经由出芽"脱壳"机制移除，从而 双层颗粒侵入胞质。在细胞侵入过程中，轮状病毒穿透细胞膜，或可能穿透内体膜。所述双 层轮状病毒颗粒具有转录活性。在胞质中，其转录基因组，通过其表面的孔挤出mRNA。新转 录本被用于制备轮状病毒蛋白质和新双链RNA基因组区段，其被包装成新形成的病毒颗粒。
[0011] 对于一些呼肠病毒，脱壳过程可采用纯化的病毒颗粒体外刺激。在轮状病毒的情 况中，巧馨合或热激会造成病毒颗粒的体外脱壳。一旦移除了外部蛋白质层，所得的轮状病 毒双层颗粒能够被重组表达形式的形成外层的蛋白质"再包被"。通过用重组VP4和VP7再包 被，能够形成非常类似成熟病毒粒的感染性的再包被的轮状病毒颗粒。通过用单独的VP7再 包被，能够形成感染性最小的、Ξ层的、无纤突颗粒。通过对外层的个体蛋白质的编码区进 行遗传修饰并使其重组表达，能够在再包被实验中研究形成所述外层的蛋白质的性质，而 不需要产生完全重组病毒。为了描述运些类型的实验，引入术语"再包被遗传学"。
[0012] 对于呼肠孤病毒，感染性的亚病毒颗粒的亚稳态已允许采用冷冻电子显微镜(冷 冻EM)来阐明呼肠孤病毒进入其宿主细胞的潜在机制的结构基础。类似地，已采用冷冻EM， 利用体外再包被的轮状病毒颗粒来研究轮状病毒组装和脱壳的分子相互作用。本发明建立 于通过运些再包被和冷冻EM研究所带来的先进技术。

【发明内容】

[0013] 高分辨率冷冻与再包被遗传学的结合使其能够超越轮状病毒本身的研究而使 轮状病毒模型的应用更加先进。发明人已发现，轮状病毒颗粒可用于对展示在经修饰的轮 状病毒颗粒的表面上的异源性Ξ聚体蛋白质进行快速结构测定。经修饰W在其表面上展示 异源性Ξ聚体蛋白质的轮状病毒颗粒也有利于生产众多的新型疫苗。
[0014] 本发明提供包含嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒，所述嵌合表面蛋白由连接至异源 蛋白的轮状病毒表面蛋白组成。在本发明的一个方面，所述轮状病毒表面蛋白通过接头序 列连接至所述异源蛋白。在本发明的另一个方面中，所述轮状病毒表面蛋白通过衔接子系 统(adapter system)连接至所述异源蛋白。在本发明的一个优选方面，所述异源蛋白通过 两部分型（two-part)衔接子系统非共价地结合至所述轮状病毒表面蛋白，其中，所述衔接 子系统的一部分连接至所述轮状病毒表面蛋白，并且所述衔接子系统的另一部分连接至所 述异源蛋白，其中所述衔接子系统的运两部分形成稳定的复合物，因此将所述异源蛋白非 共价地连接至所述轮状病毒表面蛋白。所述嵌合表面蛋白可通过对其体外再包被双层轮状 病毒颗粒(DLP)成为所述轮状病毒颗粒的外层。
[0015] 本发明还提供包含如下开放阅读框的第一核酸，该开放阅读框编码含有轮状病毒 表面蛋白、第一衔接多肤和任选的接头序列的经修饰的轮状病毒表面蛋白。本发明还提供 包含如下开放阅读框的第二核酸，该开放阅读框编码包含异源蛋白、第二衔接多肤和任选 的接头序列的融合蛋白。第一衔接多肤和第二衔接多肤能够形成稳定的复合物。通常，本发 明核酸中的开放阅读框操作性地连接至启动子序列。在一些实施方式中，所述衔接多肤包 含屯肤重复序列。还提供包含本发明的核酸的细胞。所述核酸和包含所述核酸的细胞可用 于制备本发明的嵌合表面蛋白。
[0016] 本发明还设及包含本发明的第一和第二核酸序列的试剂盒。在一些实施方式中， 本发明的试剂盒可包含第一核酸和第二核酸，第一核酸编码经修饰的轮状病毒表面蛋白， 所述经修饰的轮状病毒表面蛋白包含轮状病毒表面蛋白和第一衔接多肤，第二核酸包含编 码第二衔接多肤和多克隆位点的核巧酸序列，由此在多克隆位点插入异源蛋白的编码区能 产生编码融合蛋白的开放阅读框，所述融合蛋白包含所述异源蛋白和第二衔接多肤，其中， 第一衔接多肤和第二衔接多肤能够形成稳定的复合物。本发明的试剂盒还可包含轮状病毒 颗粒。所述轮状病毒颗粒可源自轮状病毒的相同物种，所述轮状病毒表面蛋白源自该相同 物种或来自不同物种。例如，恒河猴轮状病毒VP7可用于再包被由牛轮状病毒制备的化P，反 之亦然。
[0017] 包含嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒可通过多种方法制备。本发明的优选方法设 及:在培养基中生长的细胞中繁衍包含外层的天然轮状病毒颗粒，从所述培养基纯化所述 颗粒，从所述颗粒移除外层W获得轮状病毒DLP，和用一种或多种嵌合表面蛋白再包被所述 轮状病毒化P，W形成包含一种或多种所述嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒。天然轮状病毒颗 粒是Ξ层的颗粒，其中，最外侧的第Ξ层形成所述轮状病毒颗粒的外壳。
[0018] 在一个具体方面，本发明设及第一融合蛋白，其包含形成Ξ聚体的轮状病毒表面 蛋白、屯肤重复序列，和任选的接头序列。本发明还提供第二融合蛋白，所述第二融合蛋白 包含形成Ξ聚体的异源蛋白、屯肤重复序列，和任选的接头序列。第一融合蛋白和第二融合 蛋白通过其中各自包含的屯肤重复序列能够形成稳定的复合物。在一些实施方式中，本发 明提供由第一融合蛋白和第二融合蛋白形成的嵌合表面蛋白。所述嵌合表面蛋白可在轮状 病毒颗粒的表面上展示。
[0019] 在本发明的一个方面，包含嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒可用于确定形成所述嵌 合表面蛋白的部分的异源蛋白的结构。例如，本发明提供用于获得嵌合表面蛋白的Ξ维模 型的方法，其中，所述方法包括如下步骤：（i)用包含全部或部分异源蛋白的嵌合表面蛋白 再包被轮状病毒化PW产生展示所述嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒的悬液，（ii)冷冻所述 悬液，（iii)采用冷冻EM对所述轮状病毒颗粒成像W获得多张显微照片，和（iv)分析所述多 张显微照片W获得所述嵌合表面蛋白的Ξ维模型。在一些实施方式中，步骤(i)可细分为两 个步骤，即，（a)再包被步骤，其中，所述轮状病毒DLP用轮状病毒表面蛋白再包被，所述轮状 病毒表面蛋白包含第一衔接子W形成轮状病毒颗粒，和(b)结合步骤，其中，所述再包被的 轮状病毒化P在异源蛋白的存在下解育，所述异源蛋白包含第二衔接子，由此形成第一衔接 子和第二衔接子的复合物，从而使嵌合表面蛋白展示在所述轮状病毒颗粒的表面上。在一 些情况中，所述方法可经修改W确定与特异性结合至所述异源蛋白的分子结合的异源蛋白 的结构。所述经修改的方法包括如下步骤：（i)用包含全部或部分异源蛋白的嵌合表面蛋白 再包被轮状病毒化PW产生展示所述嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒的悬液，（ii)向该悬液 添加特异性结合至所述异源蛋白的分子，其中，所述分子与所述嵌合表面蛋白形成复合物， (iii)冷冻所述悬液，（iv)采用冷冻EM对所述轮状病毒颗粒成像W获得多张显微照片，和 (V)分析所述多张显微照片W获得与所述分子复合的嵌合表面蛋白的Ξ维模型。所述分子 可W是蛋白质分子。例如，该蛋白质分子可W是特异性结合所述异源蛋白的受体或抗体的 全部或部分。或者，所述蛋白质分子可W是特异性结合至所述异源蛋白的多肤或肤。在其它 实施方式中，所述分子是非蛋白质分子。例如，所述非蛋白质分子可W是核酸。
[0020] 在另一个方面中，根据本发明制备的轮状病毒颗粒被用作药物。在一个实施方式 中，本发明设及一种免疫原性组合物，其包含含有本发明的嵌合表面蛋白的轮状病毒颗粒。 本发明还设及一种治疗有此需要的患者的方法，所述方法包括给予所述患者本发明的轮状 病毒颗粒，例如W本发明免疫原性组合物的形式给予。
[0021] 通过适应本文所述的方法，本发明的基础概念可拓展成其它(Ξ聚体或非Ξ聚体） 异源蛋白和其它病毒(尤其是呼肠孤病毒)或组装形式(例如病毒样颗粒、铁蛋白笼等）。
[0022] 发明详述
[0023] 病毒颗粒
[0024] 轮状病毒是呼肠病毒科家族中的双链RN病毒的属，其包括五种已知类型(轮状病 毒A-E)。轮状病毒是儿童肠胃炎的主要致病因素。轮状病毒是无包膜、Ξ层的二十面体颗 粒。感染性的Ξ层的颗粒(TLP)或病毒粒由非感染性的双层颗粒(DLP)形成，通过用壳蛋白 VP7和纤突蛋白VP4包被化P形成。VP7是Ξ聚体，而260个此类Ξ聚体修饰经包被的颗粒的外 侦U。所述化P，其由同屯、VP2和VP6二十面体蛋白质层组成，直径为约700 A，并且W壳体包裹 11种双链RNA基因组区段，病毒聚合酶(VP1)和加帽酶(VP3)。在感染细胞的过程中，VP4和 VP7蛋白（其形成所述轮状病毒颗粒的外层），在低巧环境(很可能在内体隔室中）从DLP解 离-该过程称为"脱壳"-并且将包含病毒RNA转录机器的化P递送进入胞质。在那里，DLP合成 帽，并释放11种mRNA物质的拷贝。
[0025] VP4和VP7从轮状病毒颗粒的解离或"脱壳"可通过使轮状病毒颗粒在巧馨合剂例 如邸TA或EGTA的存在下解育，或通过热激来体外进行。所得的DLP可用重组表达的VP4和VP7 体外再包被W形成完全感染性的轮状病毒颗粒。W此方式再包被的颗粒是非常有序的，并 且可给出高分辨率冷冻图像和密度图。采用体外重建的TLP，冷冻已被用于W与X射线 晶体学相当的分辨率研究轮状病毒组装和脱壳的分子相互作用(参见参考文献1和2)。
[0026] 发明人在本文中显示，异源性Ξ聚体蛋白质（例如流感血凝素）能连接至Ξ聚体 VP7蛋白，由此形成能够从合适地再包被的轮状病毒化P的表面突出的嵌合表面蛋白，因此 能够采用相同冷冻EM方法来测定所述异源蛋白的结构，所述冷冻EM方法已于先前提供接近 原子分辨率的轮状病毒及其亚颗粒的结构。所述方法第一次使开发用于确定抗原-抗体复 合物的结构的高通量试验成为可能。运在先前是不可能的，因为X射线晶体学(其已是测定 抗原-抗体复合物的结构的可用方法)的限制条件。
[0027] 原则上，包含内层和外层的任何无包膜的二十面体病毒颗粒均可用于实践本发明 的方法。例如，采用任何二十面体病毒，展示包含全部或部分异源蛋白的嵌合表面蛋白是简 易可行的，为此已建立了用于生成病毒颗粒的反向遗传学系统。基于质粒的，由十种呼肠孤 病毒cDNA构建体组成的反向遗传学系统已被建立用于哺乳动物呼肠孤病毒(参见参考文献 3)。铁蛋白笼的八聚体对称也具有3倍轴对称，并且适合于实践本发明。可组装成颗粒状、常 规结构的具有Ξ倍轴对称的其它蛋白质可适合于实践本发明。
[0028] 理想上，无包膜二十面体病毒的病毒颗粒的外层可被移除或剥去，例如通过蛋白 酶处理或在低巧条件下，W产生仅包含内层且可用重组产生的外层蛋白再包被的亚病毒颗 粒。通过添加重组表达的外层蛋白将亚病毒颗粒体外再组装或再包被成完全病毒颗粒在W 下情况中是特别有利的:所述嵌合表面蛋白的存在会干扰采用反向遗传学方法的细胞培养 物中繁衍的病毒的正确组装。此外，进需要构建用于外层蛋白的表达载体，排除了对适当的 高效的基于质粒的反向遗传学系统的需要。天然病毒可在组织培养细胞中简单繁衍，并且 病毒颗粒可被剥去外层，并用重组表达的外层蛋白体外再组装。因此，采用依赖于将亚病毒 颗粒体外再包被成完全病毒颗粒的方法消除了对转染大量的质粒的需要，并排除了从基于 质粒的反向遗传学系统产生大量的病毒颗粒所通常需要的额外繁衍步骤，运使所述方法更 加适于高通量应用。
[0029] 根据发明人的理解，病毒颗粒的外层可被剥去且亚病毒颗粒可用重组表达的外层 蛋白再包被W形成感染性的病毒颗粒的所有已知的无包膜二十面体病毒均属于呼肠病毒 科家族。该家族被细分为两个亚家族，光滑呼肠孤病毒亚科(Sedoreovirinae)和刺突呼肠 孤病毒亚科(Spinareovirinae)，其分别包含六个和九个属。亚家族光滑呼肠孤病毒亚科包 括卡多呼肠孤病毒(Cardoreovirus)，米莫呼肠孤病毒(Mimoreovirus)、环状病毒（环状病 毒）、植物呼肠弧病毒（Phytoreovirus)、轮状病毒（Rotavirus)和东南亚十二节段RNA病毒 (Seadornavirus)属。亚家族刺突呼肠孤病毒亚科包括水产呼肠孤病毒(Aquareovirus)、科 罗拉多壁蟲热病毒（Col ti virus )、质型多角体病毒（Cypo virus )、迪诺维纳病毒 (Dinovernavirus)、斐济病毒(Fi jivirus)、虫源呼肠孤病毒（Idnoreovirus)、真菌呼肠孤 病毒(Mycoreovirus)、正呼肠孤病毒（(Irthoreovirus)和水稻病毒（Oiyzavirus)属。
[0030] 除了轮状病毒W外，哺乳动物正呼肠孤病毒也有利于实践本发明。对于运些病毒， 用于外衣壳的完全体外组装的合适条件和冷冻EM的应用均已成熟建立(参见参考文献1、2、 4和5)。冷冻EM已经对其应用并且其结构信息已经可得的其它正呼肠孤病毒(例如拂拂或禽 类正呼肠孤病毒)水稻病毒(例如水稻皱缩矮化病毒)和水产呼肠孤病毒(参见参考文献6、7 和8)也可适合于实践本发明。
[0031] 质型多角体病毒和迪诺维纳病毒仅具有等同的内衣壳，并因此通常被认为不适用 于实践本发明，从而被认为是较不优选的。在某些实施方式中，用于本发明的无包膜二十面 体病毒不包括质型多角体病毒和迪诺维纳病毒。在一个优选实施方式中，本发明的病毒可 W生物安全水平2或更低水平制造(参见参考文献9)。
[0032] 优选地，用于实践本发明的病毒颗粒具有Ξ种或更少的外层蛋白。更优选地，所述 病毒颗粒的外层可由单一外层蛋白形成，其为用于制备所述嵌合表面蛋白的外表面蛋白。 小数量的外层蛋白是有利的，因为需要被重组表达W再包被剥离后的亚病毒颗粒的蛋白质 较少。
[0033] 例如，轮状病毒具有两种外层蛋白，VP4和VP7,但形成轮状病毒颗粒的外层仅需要 VP7是壳蛋白。在大多数情况中，仅仅采用一种外层蛋白，VP7,来再包被轮状病毒DLP就足W 实践本发明。
[0034] 嵌合表面蛋白
[0035] -方面，本发明设及包含共价连接至异源蛋白的轮状病毒表面蛋白的嵌合表面蛋 白。所述轮状病毒表面蛋白可通过接头序列连接至所述异源蛋白。在一个特定实施方式中， 所述异源蛋白被插入所述轮状病毒表面蛋白的柔性环，其为外表面暴露部分。在一些情况 中，删去所述轮状病毒表面蛋白的部分W更好地配合所述接头序列和/或异源蛋白。例如， 短N末端和C末端截短体（^ 10氨基酸)通常不影响轮状病毒VP7蛋白再包被轮状病毒化P的 能力。此外，当采用VP7来再包被DLP时，形成从所述病毒颗粒延伸出来的表面环的氨基酸序 列不是必需的。缺失是否会影响VP7蛋白再包被化P的能力可通过使重组表达的VP7蛋白在 DLP的存在下解育，并观察再包被的病毒颗粒的形成来评估。
[0036] 在本发明的另一个方面中，所述轮状病毒表面蛋白通过衔接子系统非共价地连接 至所述异源蛋白。在本发明的一个优选方面，所述异源蛋白通过两部分型衔接子系统非共 价地结合至所述轮状病毒表面蛋白，其中，所述衔接子系统的一部分连接至所述轮状病毒 表面蛋白和所述衔接子系统的另一部分连接至所述异源蛋白，其中所述衔接子系统的运两 部分形成稳定的复合物从而将所述异源蛋白非共价地连接至所述轮状病毒表面蛋白。所述 衔接子系统通常由第一衔接多肤和第二衔接多肤组成。第一衔接多肤融合至所述轮状病毒 表面蛋白，任选地通过接头序列融合。第二衔接多肤融合至所述异源蛋白，任选地通过接头 序列融合。第一和第二衔接多肤彼此相互作用W形成稳定的复合物，由此将所述轮状病毒 表面蛋白非共价地连接至所述异源蛋白，从而形成嵌合表面蛋白。
[0037] 病毒表面蛋白
[0038] 适合于实践本发明的病毒颗粒的外层通常包含数种不同外表面蛋白。主要表面蛋 白特别合适于展示异源蛋白，因为它覆盖病毒颗粒的大部分表面。例如，轮状病毒的外表面 (排除纤突）由780个拷贝的VP7蛋白形成，其形成同源Ξ聚体。选择具有形成同源Ξ聚体的 主要表面蛋白的病毒颗粒是用于实践本发明所特别优选的。
[0039] 在一个特定实施方式中，所述病毒表面蛋白是轮状病毒表面蛋白。在另一个特定 实施方式中，所述病毒表面蛋白是糖蛋白。
[0040] 具有可适合于实践本发明的病毒表面蛋白的其它病毒包括正呼肠孤病毒。例如， 水产呼肠孤病毒的病毒外衣壳由称为VP5的蛋白质的200个Ξ聚体组成。在哺乳动物正呼肠 孤病毒中，感染性的呼肠孤病毒颗粒的外层包含600个拷贝的Ξ聚体膜穿透蛋白μ1，其与蛋 白质伴侣〇3(也W600个拷贝形式存在)联接，从而形成异六聚体。
[0041] 异源蛋白
[0042] 采用Ξ聚体轮状病毒表面蛋白可展示许多异源蛋白，前提条件是选择何时长度的 接头和/或表面蛋白中的合适插入位点，W避免单体组装成Ξ聚体过程中发生位阻现象。对 于所述异源蛋白，没有尺寸上限，只要所述异源蛋白形成的体积不与相邻的其它固定的异 源蛋白的体积重叠即可。优选地，采用衔接子系统来在Ξ聚体轮状病毒表面蛋白上展示所 述异源蛋白。不具溶解性、形成高级寡聚体或聚集体的异源蛋白通常被认为不适于实践本 发明。
[0043] 考虑到位阻现象的任何尺寸约束条件均可通过选择合适的接头或衔接子系统来 克服。
[0044] 对于所述异源蛋白，术语"异源性"通常指，所述蛋白质不是轮状病毒蛋白质。在一 些实施方式中，表述"异源蛋白"可W指所述蛋白质不源自与展示所述蛋白质所用相同的轮 状病毒毒株。
[0045] Ξ聚体表面蛋白特别合适于展示Ξ聚体异源蛋白。Ξ聚体异源蛋白的示例包括Ξ 聚体病毒细胞侵入蛋白和其它Ξ聚体病毒表面蛋白，具体是被中和抗体祀向的那些。具体 的示例有，流感血凝素化Α)、人免疫缺陷型病毒化IV)gpl40、埃博拉病毒糖蛋白、狂犬病病 毒糖蛋白（RVG)，山羊关节炎-脑炎病毒的化V蛋白，呼吸道合胞病毒(RSV)的F蛋白，人单纯 性瘤疹病毒和人巨细胞病毒化CMV)中发现的浊蛋白及其复合物，等。
[0046] 在一些实施方式中，所述轮状病毒表面蛋白和/或所述异源蛋白包含Ξ聚化标签， W协助由Ξ聚体轮状病毒表面蛋白和Ξ聚体异源蛋白形成的异六聚体复合物的组装。所述 Ξ聚化标签，尤其是基于卷曲螺旋的Ξ聚化标签(例如GCN4, [10])，也可作为结构模块W延 伸异源蛋白的可用空间，所述异源蛋白在用经修饰的轮状病毒VP7蛋白再包被的轮状病毒 颗粒的表面上展示。另一种合适的Ξ聚化标签可源自细菌隧菌体T4隧菌体次要纤维蛋白 (Fibritin)[ll]。
[0047] 在某些实施方式中，非Ξ聚体形式的异源蛋白可与所述轮状病毒表面蛋白上存在 的Ξ聚化标签相互作用。举例来说，如果所述异源蛋白具有能够与基于卷曲螺旋的Ξ聚化 标签的α螺旋相互作用的可及的α螺旋，则异源蛋白能够结合该Ξ聚化标签。若没有位阻现 象，至多Ξ个所述异源蛋白能够同时结合所述Ξ聚化标签，形成六螺旋束状物。如果结合了 少于Ξ个所述异源蛋白，则该六螺旋束状物将会是不完整的，其包含轮状病毒蛋白质上存 在的Ξ聚化标签造成的内部Ξ螺旋，但仅包含所述束状物的一个或两个外螺旋。所述非Ξ 聚体异源蛋白可具有1、2、4或更多个亚基（即，是单体、二聚体、四聚体或其它寡聚体），前提 条件是所述亚基中至少一个具有能够与所述轮状病毒表面蛋白上存在的Ξ聚化标签相互 作用的α螺旋。
[0048] 在某些实施方式中，单体异源蛋白可包括排列的多个α螺旋，从而，多于一个螺旋 能够与所述轮状病毒表面蛋白上存在的Ξ聚化标签的α螺旋相互作用，形成完整或局部六 螺旋束状物。在某些实施方式中，其中至少Ξ个所述单体包含合适排列的α螺旋的四聚体 (或更高级结构)可与连接至所述轮状病毒表面蛋白的Ξ聚化标签联合，W形成六螺旋束状 物。在某些实施方式中，其中至少Ξ个所述单体包含合适排列的α螺旋的四聚体(或更高级 结构)可与和所述轮状病毒表面蛋白相联的Ξ聚化标签联合，W形成局部六螺旋束状物，其 缺失所述外螺旋之一。所述异源蛋白的亚基可W是相同的（即，同二聚体、同Ξ聚体、同四聚 体等)或可W是不相同的（即，异二聚体、异Ξ聚体、异四聚体等）。
[0049] 如果所述轮状病毒表面蛋白上存在的Ξ聚化标签不是α螺旋卷曲螺旋，则所述异 源蛋白上的相互作用性结构元件可具有与Ξ聚化标签而非α螺旋结合的二级结构。
[0050] 优选地，所述异源蛋白不是特异