0血管式鼓泡反应器，培养温度23~ 27°C，光强110~150umol.m2s 1，光暗比为14h ;1化，通气速率0. 16~0. 24vvm，培养7天 收获藻细胞。取50mL藻液离必（400化pm, 5min)，弃上清液，沉淀用0. 5mol/L的碳酸氨倭洗 两遍，60°C烘至恒重，测定藻细胞干重（g/L);剩余的藻液离必（40(Κ)巧m，5min)后，用少量 去离子水清洗沉淀除盐，冻干备用，测定藻细胞的油脂含量，并采用气质联用方法对金藻脂 肪酸成分进行测定。
[003引实施例4 ;氮限制培养体系和氮丰富培养体系
[0036] 限氮培养体系；实施例3培养的营养条件，即培养基浓度为3倍实施例1所述F/2 培养基，即氮源、磯源、金属元素、微量元素各添加常规F/2营养盐的3倍。
[0037] 补氮培养体系；在限氮培养体系的基础上，培养第3天（指数生长期）起每天向 500mL培养体系补加0. 5mL实施例2中所述氮源（母液）。
[003引实施例5 ;通气中％的比例
[0039] 4. 0% 0)2的空气：光照阶段通入的空气中含4. 0% 0)2 ;
[0040] 空气；光照阶段仅通空气培养；
[00川 4. 0% C02+空气；反应器培养的前3天（0~72h)，光照阶段通含4. 0% %空气培 养；3天起（7化~16化），光照阶段仅同空气培养；
[00化|实施例6 ;氮限巧赠养体系通含4. 0% %的空气
[0043] 操作按实例4的限氮培养体系及实例5的4. 0%的C〇2培养体系；
[0044] 培养体系对应于表中的ML;培养至7天（平台期），ML培养体系获得的干重为 1. 75g/l，油脂含量为22. 7%，油脂产量为382. 7mg/l，多不饱和脂肪酸含量36. 2% (%总脂 肪酸），产量为135. 3mg/l，（表1、表2、表3)。
[004引实施例7 ;补氮培养体系通含4. 0% %的空气
[0046] 操作按实例4的补氮培养体系及实例5的4. 0%的(?培养体系；
[0047] 培养体系对应于表中的MR;培养至7天（平台期），MR培养体系获得的干重为 1. 62g/l，油脂含量为27. 8%，油脂产量为434. 9mg/l，多不饱和脂肪酸含量51. 6% (%总脂 肪酸），产量为224.9mg/l，（表1、表2、表3)。
[004引实施例8 ;氮限制培养体系通空气
[0049] 操作按实例3、实例4的限氮培养体系及实例5的空气培养体系；
[0050] 培养体系对应于表中的监L ;培养至7天（平台期），监L培养体系获得的干重为 0. 62g/l，油脂含量为28. 6 %，油脂产量为158. 7mg/l，多不饱和脂肪酸含量44. 6 % (%总脂 肪酸），产量为69. 2mg/L,(表1、表2、表3)。
[005。 实施例9 ;氮限巧赠养体系通含4. 0% %空气和空气培养
[0052] 操作按实例3、实例4的限氮培养体系及实例5的4. 0% C〇2+空气培养体系；
[0053] 培养体系对应于表中的HTL ;培养至7天（平台期），HTL培养体系获得的干重为 0. 91g/L，油脂含量为26. 1 %，油脂产量为218. 9mg/L，多不饱和脂肪酸含量39. 3% (%总脂 肪酸），产量为83. 7mg/L，（表1、表2、表3)。
[0054] 实施例10 ;补氮培养体系通空气
[0055] 操作按实例4的补氮培养体系及实例5的空气培养体系；
[0056] 培养体系对应于表中的监R ;培养至7天（平台期），监R培养体系获得的干重为 1. 28g/l，油脂含量为37. 1 %，油脂产量为458. 2mg/l，多不饱和脂肪酸含量44% (%总脂肪 酸），产量为200.1 mg/l，（表1、表2、表3)。
[0057] 实施例11 ;补氮培养体系通含4. 0% 0)2空气和空气培养
[005引操作按实例4的补氮培养体系及实例5的4. 0% C02+空气培养体系；
[0059] 培养体系对应于表中的HTR ;培养至7天（平台期），HTR培养体系获得的干重为 0. 94g/l，油脂含量为32. 0%，油脂产量为284. 4mg/l，多不饱和脂肪酸含量52. 3% (%总脂 肪酸），产量为148mg/l，（表1、表2、表3)。
[0060] 表1.金藻藻细胞脂肪酸数据表
[0061]
[0062] 表2金藻藻细胞脂肪酸成分分析表（％总脂肪酸）
[0063]
【主权项】
1. 一种提高金藻油脂含量与多不饱和脂肪酸产量的培养方法，其特征在于：藻细胞接 种于添加氮源的F/2培养基中，于反应器培养过程中通空气培养；平台期将藻细胞收获。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：添加氮源的F/2培养基是以F/2培养基 基础上，调整初始氮元素浓度至30~40mg/L (以硝酸钠计），而磷源、金属元素、微量元素各 添加常规F/2的2~3倍。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：添加氮源的F/2培养基是指接种时使用 3x F/2培养基，即氮源、磷源、金属元素、微量元素各添加常规F/2的3倍。4. 根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于： F/2营养盐母液配制： (1)氮源：称取75g NaN03溶于1L去离子水； ⑵磷源：称取5g NaH2P04 · H20溶于1L去离子水； (3) 金属元素：分别称取 3. 15g FeCl3 · 6H20, 4. 36g Na2EDTA，0· 0098g CuS04 · 5H20, 0. 0063g Na2Mo04 · 2HzO, 0. 022g ZnS04 · 7H20, 0.0 lg CoCl2 · 6H20, 0. 18g MnCl2 · 4H20溶于1L去离子水； (4) 维生素：0.001g vitamin B12,0.2g vitamin BuO.OOlg D-生物素，溶于 1L 去离子 水； 常规F/2培养基的制备： 天然海水经过滤灭菌后备用；向海水中添加上述（1)，（2)，（3)，（4)制得的无硅酸盐的 F/2营养盐，其中氮源、磷源、金属元素各lmL/L，维生素0. 5mL/L。5. 根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于：在指数生长期，每天向培养体系补 加12. 5mg/L的氮元素（以硝酸钠计），即培养第3天起每天补加12. 5mg/V(500mL培养体 系）的氮元素（以硝酸钠计）。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的反应过程中仅通常规的空气培养， 通气速率为〇. lvvm~0. 3vvm。7. 根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于：所述空气为常规的空气，无额外任何 浓度的C02通入。8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的反应器为光生物反应器。9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：金藻培养过程是指金藻由指数生长期培 养至平台期时收获生物质。10. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：培养温度23~27 °C，光强110~ 150 μ mol. m 2s \ 光暗比为 14h :10h。
【专利摘要】本发明公开了一种提高金藻油脂含量与多不饱和脂肪酸产量的培养方法，是将藻细胞接种于添加氮源的F/2培养基的光生物反应器中，通空气培养。最终该培养体系获得的藻细胞油脂产量、多不饱和脂肪酸含量及产量，与额外通CO2的培养体系达到相当的水平，其中油脂含量提高30％以上。培养过程中无额外的CO2通入，降低成本的同时具有环境友好性。
【IPC分类】C12R1/89, C12P7/64
【公开号】CN105543299
【申请号】CN201410597477
【发明人】薛松, 王茜, 曹旭鹏, 陆洪斌
【申请人】中国科学院大连化学物理研究所
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2014年10月29日